Farelerde Katarakt Cerrahisinin Modellenmesi

Özet

Bu yöntem, katarakt ameliyatını modeller: in vivo yetişkin farelerden lens lifi hücrelerini çıkararak ve bağlı lens epitel hücreleri (LEC'ler) ile kapsül torbasını geride bırakarak. Yaralanma yanıtı daha sonra cerrahi sonrası moleküler ve morfolojik kriterler kullanılarak çeşitli zamanlarda değerlendirilir.

Özet

Katarakt cerrahisi (CS), dünya çapında görme bozukluğunun önemli bir nedeni olan katarakt için etkili bir tedavi yöntemidir. Bununla birlikte, CS oküler inflamasyona yol açar ve uzun vadede, lens epitel hücrelerinin (LEC'ler) cerrahi sonrası aşırı büyümesi ve bunların miyofibroblastlara ve/veya anormal lif hücrelerine dönüşümü nedeniyle posterior kapsüler opaklaşma (PCO) ve/veya lens çıkığı ile sonuçlanabilir. Bununla birlikte, CS'nin inflamasyon ve PCO ile sonuçlandığı moleküler mekanizmalar hala belirsizdir, çünkü çoğu in vitro model, in vivo olarak görülen LEC'lerin yara iyileşme tepkisini özetlemezken, tavşanlar gibi geleneksel katarakt cerrahisi hayvan modelleri, gen ekspresyonunun genetik manipülasyonuna izin vermez. Son zamanlarda, laboratuvarımız ve diğerleri, proinflamatuar sinyalleme ve LEC epitelinden mezenkimal geçişe indüksiyonu yönlendiren moleküler mekanizmaları incelemek için genetik olarak değiştirilmiş fareleri başarıyla kullandı ve bu da PCO patogenezine yeni bir bakış açısı getirdi. Burada, farelerde katarakt cerrahisinin modellenmesi için yerleşik protokolü rapor ediyoruz, bu da LEC'lerin RNAseq yoluyla lens lifi hücresinin çıkarılmasına verdiği yanıtın sağlam transkripsiyonel profillenmesine, yarı kantitatif immünofloresan ile protein ekspresyonunun değerlendirilmesine ve inflamasyon gibi akut sekellerin patogenezine katıldığı varsayılan genlerin işlevini test etmek için modern fare genetiği araçlarının kullanılmasına ve ayrıca LEC'lerin daha sonra miyofibroblastlara dönüştürülmesine izin veriyor ve/veya anormal lens fiber hücreleri.

Giriş

Lens, retina ^1,2,3 üzerine net bir şekilde odaklanmış bir görüntü üretmek için ışığı kıran oldukça organize, şeffaf bir dokudur. Bu özel organ, lensi gözün diğer kısımlarından izole eden kesintisiz bir bazal membran (kapsül) ile çevrilidir. Kapsülün iç ön yüzeyi, daha sonra lens ekvatorunda lens^3'ün büyük çoğunluğunu oluşturan lens fiber hücrelerine farklılaşan tek katmanlı bir lens epitel hücresi (LEC'ler) oluşturur. Yaşlanma, genetik mutasyon, UV radyasyonu, oksidatif stres ve oküler travma gibi faktörler nedeniyle l....

Protokol

Aşağıdaki protokol, Delaware Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından #1039-2021-1 protokolü kapsamında onaylanmıştır. Görme ve Görme Araştırmaları Derneği (ARVO) Oftalmik ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımı^{için 24} uyarınca, tüm oküler sağkalım ameliyatları sadece bir gözde yapılabilir. Bu protokolde kullanılan reaktifler ve aletler hakkında ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın. Lens liflerinin çıkarılması ve dikilmesi için alternatif yaklaşımlar Şekil 2 ve Şekil 3'te gösterilmiştir.

Tartışmalar

Bu cerrahi teknik, geliştirmek için pratik gerektiren gelişmiş fare kullanımı ve mikro cerrahi beceriler gerektirir. Ustalaşması en zor olanı, yarayı kapatmak için korneaya ince dikişlerin yerleştirilmesidir. Deneycinin dikiş atma konusunda tamamen acemi olduğunu varsayalım. Bu durumda, önce ip ve bez kullanarak pratik yapmanız, ardından cerrahi kare düğümler yapmak için gerekli el hareketlerinde ustalaşmak için küçük meyveler üzerinde büyük çaplı dikişl.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.5% Erythryomycin opthalmic ointment USP	Baush Lomb	24208-910-55
1% Atropine sulfate ophthalmic solution	Amneal	60219-1748-2
1% Tropicamide opthalmic solution USP	Akorn	17478-102-12
10-0 Nylon suture	Ethicon	7707G
2.5% Phenylephrine hydrochloride ophtahlmic solution USP	Akorn	17478-200-12
26 G 1/2 Needles - straight	BD PrecisionGlide	5111
27 G 45° bent dispensing tip 1"	Harfington
Balanced saline solution	Phoenix	57319-555-06
Bupranorphine (0.1 mg/kg)	APP Pharmaceticals	401730D
Chlorhexidine solution
Needle holder 2-110	Duckworth & Kent	2-110-3E
Noyes scissors, straight	Fine Science Tools	12060-02
SMZ800 Nikon model microscope	Nikon
Sterile disposable scalpel No.11	Feather	2975#11
Tweezers #5 Dumont	Electron Microscopy Sciences	72700-D
Xylazine/Ketamine/Acepromazine (35 mg/kg, 80 mg/kg, 0.5 mg/kg) solution	APP Pharmaceticals	401730D