Metabolik Disfonksiyonla İlişkili Steatotik Karaciğer Hastalığında Yağ Birikiminin İn Vitro Modellenmesi

Özet

Bu makale, metabolik disfonksiyonla ilişkili steatotik karaciğer hastalığı için bir model olarak oleik asit kaynaklı HepG2 hücrelerinin kullanımını açıklamaktadır.

Özet

Metabolik disfonksiyonla ilişkili steatotik karaciğer hastalığının (MASLD) prevalansı, ekonomik ve yaşam tarzı modellerindeki değişiklikler nedeniyle artmış ve önemli sağlık sorunlarına yol açmıştır. Önceki raporlar, MASLD için hayvan ve hücresel modellerin kurulmasını incelemiş ve aralarındaki farkları vurgulamıştır. Bu çalışmada, MASLD'de yağ birikimi indüklenerek hücresel bir model oluşturulmuştur. HepG2 hücreleri, MASLD'yi taklit etmek için çeşitli konsantrasyonlarda (0.125 mM, 0.25 mM, 0.5 mM, 1 mM) doymamış yağ asidi oleik asit ile uyarıldı. Modelin etkinliği, hücre sayma kiti-8 testleri, Yağ Kırmızısı O boyaması ve lipid içerik analizi kullanılarak değerlendirildi. Bu çalışma, MASLD hücreleri için kullanımı basit bir hücresel model oluşturmayı amaçlamıştır. Hücre sayma kiti-8 testlerinden elde edilen sonuçlar, HepG2 hücrelerinin hayatta kalmasının, 1.875 mM'lik bir GI₅₀ ile oleik asit konsantrasyonuna bağlı olduğunu gösterdi. 0.5 mM ve 1 mM gruplarındaki hücre canlılığı, kontrol grubundakilerden anlamlı derecede düşüktü (P < 0.05). Ayrıca, Yağ Kırmızısı O boyama ve lipit içerik analizi, HepG2 hücrelerinde değişen oleik asit konsantrasyonlarında (0.125 mM, 0.25 mM, 0.5 mM, 1 mM) yağ birikimini inceledi. 0.25 mM, 0.5 mM ve 1 mM gruplarının lipid içeriği kontrol grubundan anlamlı derecede yüksekti (P < 0.05). Ek olarak, OA gruplarındaki trigliserit düzeyleri kontrol grubundakilere göre anlamlı olarak yüksekti (P < 0.05).

Giriş

Metabolik disfonksiyonla ilişkili steatotik karaciğer hastalığı (MASLD), basit steatoz, alkolsüz steatohepatit (NASH), siroz ve hepatosellüler karsinom ^1,2,3,4,5,6 dahil olmak üzere bir dizi durumu kapsar ve bunların tümü alkol tüketimi dışındaki faktörlere atfedilir ⁷. MASLD, metabolik karaciğer hasarının neden olduğu en yaygın karaciğer hastalığıdır ve küresel nüfusun yaklaşık dörtte birini etkiler 8,9,10,11,12.<....

Protokol

NOT: Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, aletler ve reaktiflerle ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.

1. Hücre kültürü

1. Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium'unu (DMEM) (% 10 fetal sığır serumu [FBS], 100 birim / mL penisilin ve 100 μg / mL streptomisin içeren) içeren kültür şişelerinde kültür HepG2 hücrelerinin kültürü. Kültür şişelerini %5'lik bir CO₂ inkübatörde 37 ° C'de tutun.

2. Oleik asidin hücre sayma kiti-8 ile ölçülen hücre canlılığı üzerindeki etkisi

1. 200 mM'lik bir konsantrasyon elde etmek için belirli b....

Tartışmalar

MASLD, alkol ve diğer yerleşik karaciğere zarar veren ajanların dışındaki faktörlere bağlı olarak hepatositlerde aşırı hücre içi yağ birikimi ile karakterize klinikopatolojik bir sendromdur¹⁸. MASLD, özellikle insülin direnci ve genetik yatkınlık ile ilişkili olan edinilmiş metabolik stres karaciğer hasarı ile karmaşık bir şekilde bağlantılıdır. MASLD için ilaçları etkili bir şekilde incelemek ve taramak için uygun bir deneysel model seçmek çok önemlidir. Bir.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 µm filter	Millex
0.25% Trypsin-EDTA (1x) Trypsin-EDTA	Gibco	25200-056
0.45 µm filter	Millex
2 mL Crygenic Vials	CORNING	430659
25 cm2 Cell Culture Flask	CORNING	430639
6-well cell culture plate	CORNING	3516
96-well cell culture plate	CORNING	3599
Blood Count Plate	Shanghai Jing Jing Biochemical Reagent & Instrument Co.	02270113
Cell Counting Kit-8 assays	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	CA1210-1000T
CO2 incubator	NUAIRE	NU-5710E
DMSO Dimethyl sulfoxide	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	D8371
Dulbecco's Modified Eagle Medium	Gibco	8122691
Enzyme Labeling Equipment	Tecan	Spark
Fetal Bovine Serum, Qualified	Gibco	10099141
HepG2 cells line	Beijing North China Chuanglian Biotechnology Research Institute (BNCC)	221031
Human Triglyceride (TG) ELISA instruction	Nanjing Jiacheng Bioengineering Institute	20170301
Inverted Microscope for Cell Culture	Leica	DMi1
Isopropanol	Tianjin Zhiyuan Chemical Reagent Co.	2021030141
Oil Red Stain Kit, For Cultured Cells	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	G1262
Oleic acid	Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	A502071
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140122
SPSS 24.0		Statistics software