Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Burada, mikropipet kılavuzluğunda ilaç uygulamasını (MDA), araştırma hayvanını minimum stres ve rahatsızlıkla tedavileri kolayca yutmaya teşvik eden oral gavaja alternatif bir yöntem olarak tanımlıyoruz.
Bir şırıngaya bağlı bir kanül kullanılarak yapılan oral gavaj (OG), araştırma hayvanlarının midesine bileşiklerin hassas dozunu sağlamak için kullanılan en yaygın yöntemlerden biridir. Ne yazık ki, bu yöntem hem operatör hem de araştırma hayvanı için zorluklarla birlikte gelir. Çalışmalar, OG'nin özofajit, yemek borusu perforasyonu ve yanlışlıkla trakeal ilaç uygulaması gibi komplikasyonlara yol açabileceğini göstermiştir. Ek olarak, OG, artmış plazma ve fekal kortikosteron seviyeleri (stres nedeniyle), değişmiş kan basıncı ve artmış kalp atış hızı ile ilişkilidir, bu da çalışma sonuçlarını olumsuz yönde etkileyebilir veya önyargılı olabilir. Mikropipet kılavuzluğunda ilaç uygulaması (MDA) olarak adlandırılan daha önce geliştirilmiş alternatif bir yöntem, hayvanı minimal invaziv bir şekilde tedavileri kolayca tüketmeye teşvik eder. Burada, MDA tekniğinin farklı araçlarda yeniden oluşturulan tedavilerle kullanımına ilişkin örnekler sunuyoruz ve çeşitli tedavilerin birden fazla farklı fare suşuna etkili bir şekilde uygulandığını gösteriyoruz. Ayrıca, MDA'nın ilaç uygulamasının zamanlamasını ve invazivliğini azaltan ve çekirdek bağırsak mikrobiyal türlerinin kantitatif analizi ile değerlendirildiği gibi bağırsak mikrobiyom bileşimini etkilemeyen bir teknik olduğunu gösteriyoruz. Genel olarak, MDA, OG'ye daha az stresli ve etkili bir alternatif sunabilir.
Kemirgen modellerine ilaç uygulaması yaygın olarak, çözeltiyi içeren bir şırıngaya bağlı bir kanül kullanılarak doğrudan mideye sıvı bir preparatın uygulanmasından oluşan oral gavaj (OG) yoluyla gerçekleştirilir. Bu teknik, tedavinin hayvana tutarlı ve kesin bir şekilde dozlanmasına neden olur, ancak aynı zamanda birçok dezavantaj da taşır. OG, insan diyeti maruziyetlerini yeterince modellemediği için incelenmiştir 1,2. Ayrıca, OG, üst sindirim sisteminde kasıtsız yaralanmalar (yemek borusu ve mide delinmesi), uygulanan tedavinin aspirasyonu ve solunum yolu lezyonları riskini ....
Tüm hayvan çalışmaları, kurumsal yönergelere uygun olarak ve Johns Hopkins Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) onaylı M021M197 ve M023M195 protokolleri kapsamında gerçekleştirilmiştir. Kullanılan fare suşları (erkek fareler, 7 haftalık) Malzeme Tablosunda açıklanmıştır. Erkek farelerin kullanımı, devam eden prostat kanseri çalışmalarında kullanılmalarından kaynaklanıyordu. MDA yönteminin daha önce dişi farelerde de etkili olduğu gösterilmiştir 7,17. Fareler kendi kafeslerine / tedavi gruplarına randomize edildi. Fareler kafeslerde....
MDA, fare modellerinde bakteri suşlarının oral yoldan verilmesinde kullanılabilir. C57BL / 6J fareleri, MDA eğitim seansına başlamadan önce kommensal mikrobiyal toplulukları temizlemek için 2 gün boyunca antibiyotiklerle (içme suyunda sefoxitin) tedavi edildi. Şekerli yoğunlaştırılmış süt / su çözeltisi, tedavi uygulamasından önce 3 gün boyunca günde bir kez ardışık olarak uygulandı. Fareler, MDA tedavisi uygulaması sırasında hafif bir t?.......
OG, daha önce birden fazla çalışmadadeğerlendirildiği gibi kafa karıştırıcı bir değişken oluşturabilen araştırma hayvanlarında önemli bir stres kaynağı olabilir 7,9,11,12,13,14,15,23. OG'nin invazivliği.......
Hiç kimse.
Savunma Bakanlığı Prostat Kanseri Araştırma Programı Ödülü W81XWH-20-1-0274 ve Prostat Kanseri Vakfı Yarışma Ödülü 16CHAL13'ten araştırma desteğini kabul etmek isteriz. Johns Hopkins'teki Analitik Farmakoloji Ortak Kaynağı'ndan Dr. Michelle Rudek, Dr. Noushin Rastkari, Dr. Nicole Anders ve Linping Xu'ya equol LC/MS/MS ile ilgili yardımları için teşekkür eder ve teşekkür ederiz.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
200 µL pipette tips | Mettler Toledo | 17005860 | |
AB SCIEX Triple QTRAP 5500 mass-spectrometric detector | Sciex | N/A | |
Akkermansia muciniphila strain muc genomic DNA | American Type Culture Collection | BAA-835D-5 | |
Ammonium acetate | Sigma–Aldrich | 5.43834 | |
C57BL/6J mice | Jackson Laboratories | Strain# 000664 | |
C. scindens strain 35704 | American Type Culture Collection | 35704 | |
Cefoxitin | Sagent | NDC25021-109-10 | |
Corn oil | MedChemExpress | HY-Y1888 | |
DMSO | Sigma-Aldrich | D2650 | |
ethanol | Fisher Scientific | AC611050040 | |
Formic acid | Sigma–Aldrich | 5.33002 | |
FVB/NJ mice | Jackson Laboratories | Strain# 001800 | |
Glycerol | Sigma–Aldrich | G5516 | |
Hexane | Fisher Scientific | 02-002-996 | |
LC-MS grade water | Fisher Scientific | 14-650-357 | |
Methanol | Fisher Scientific | 02-003-340 | |
Microtainer serum separator tube | Becton Dickinson | 02-675-185 | |
Molecular biology grade water | Corning | 46-000-CI | |
NSG mice | Jackson Laboratories | Strain# 005557 | |
PBS | Corning | 21-031-CV | |
Qubit DNA HS kit | Invitrogen | Q32851 | |
Racemic equol-d4 | Santa Cruz Biotechnology | sc-219827 | |
Reinforced Clostridial agar | Anaerobe Systems | AS-6061 | |
Reinforced Clostridial broth | Anaerobe Systems | AS-606 | |
S-equol | MedChemExpress | HY-100583 | |
S-equol reference standard for LC-MS | Cayman Chemical | 10010173 | |
Single channel pipette | Rainin | 17008652 | |
Streptococcus salivarius genomic DNA | American Type Culture Collection | BAA-1024D-5 | |
Sweetened condensed milk | California Farms | B09TGQ7WV8 | |
VSL#3 | VSL#3 | B07WX1LVHL | |
β-glucuronidase from Helix pomatia | Sigma–Aldrich | G7017 |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır