Bir maske, saç örtüsü ve temiz laboratuvar önlüğü veya önlüğü giyerek başlayın. Daha sonra, anestezi uygulanmış fareyi ameliyat alanından ayrılmış temiz bir yüzeye yerleştirin ve %21 oksijen ile %1.5 izofluran sağlayan bir burun konisi ile takın. Daha sonra buprenorfini deri altından dorsal servikal torasik bölgeye enjekte edin.
Ayrıca oklüzyon döneminde trombüs oluşumunu önlemek için intraperitoneal olarak heparin enjekte edin. Kornea hasarını önlemek için gözlere oftalmik merhem sürün ve makas kullanarak ventral karındaki tüyleri alın. Fareyi ameliyat alanındaki ısıtılmış su battaniyesine taşıyın.
Yine, izofluran veren bir burun konisi ile takın. Ardından, fareyi sırt yaslanma pozisyonuna getirin ve uzuvları cerrahi bantla masaya sabitleyin. Kemirgenlere özgü bir rektal termometre kullanarak hayvanın vücut ısısını izleyin.
Karnı iyice dezenfekte ettikten sonra, hayvanın tamamen uyuşturulduğundan emin olmak için bir ayak parmağı sıkışma testi yapın. Son olarak, steril eldiven giyin ve ameliyat bölgesini aseptik olarak örtün. İlk olarak, 15 numaralı bir neşter bıçağı kullanarak deride üç ila beş santimetrelik ventral orta hat abdominal kesi yapın.
Daha sonra zımba yerleştirmeye izin vermek için cilt kenarının 0,5 santimetresini alttaki kas fasyasından ayırın. Daha sonra yaylı mikro makas kullanarak lineer alba boyunca karın duvarı boyunca insizyona devam edin ve bir ekartör yerleştirin. Ameliyat alanının etrafına ılık steril tuzlu su ile nemlendirilmiş steril gazlı bez pedleri yerleştirin.
İnce bağırsağı karın boşluğundan çıkarın. Kraniyal olarak ve hayvanın soluna çevirin ve nemli pedlerin üzerine yerleştirin. Kurumasını önlemek için dokuların üzerine başka bir nemli gazlı bez yerleştirin.
Superior mezenterik arteri veya SMA'yı, ventralden inferior vena kava'ya, çölyak artere kaudal ve renal artere kraniyal olarak bulun. Çevreleyen bağ dokusundan uzakta inceleyin. Abdominal aorttan dallandığı SMA'nın tabanı boyunca atravmatik bir mikrovasküler klips yerleştirin.
Pembeden soluk beyaza renk değişikliğine dikkat ederek ince bağırsağın iskemisini doğrulayın. İç organları iskemik dönem boyunca karın boşluğu içindeki orijinal konumuna getirin. Ekartörü çıkarın ve insizyonu nemli gazlı bezle örtün.
45 dakikalık bir iskemi döneminden sonra, tıkayıcı klipsi çıkarın. Mezenterik nabız ve kızarmış bir renk gözlemleyerek kan akışının restorasyonunu doğrulayın. Uygun hidrasyonu sağlamak için intraperitoneal olarak ılık steril salin uygulayın.
Daha sonra karın kaslarını 6-0 poliglaktin 910 dikiş ile kapatın. Ağrıyı hafifletmek için bupivakaini kas insizyon hattı boyunca topikal olarak uygulayın. Cildi cerrahi zımba veya yara klipsleri ile kapatın.
Fareyi dolaşan bir su battaniyesi üzerinde ılık bir odaya geri koyun. Farenin 90 dakika boyunca iyileşmesine izin verin ve fareyi ağrı veya sıkıntı belirtileri açısından izleyin. İnsancıl ötenazi yaptıktan sonra, sol lateral, sol medyan ve sağ medyan loblar dahil olmak üzere karaciğer lobları gibi istenen dokuları toplayın.
Sonra her iki böbreği de toplayın. Sol böbreği uzunlamasına ve sağ böbreği enine kesit olarak kesin. Son olarak, ince ve kalın bağırsağın tüm uzunluğunu toplayın.
İnce bağırsak segmentlerini eşit uzunlukta bölümlere ayırmak için, ince bağırsakları üst çizginin duodenum, orta çizginin jejunum ve alt çizginin ileum olduğu bir Z şeklinde katlayın. Bağırsağın kalan kısmı kolondur. 20 gauge anjiyokateter ile yapıştırılmış 10 mililitrelik bir şırınga kullanarak bağırsak segmentlerinin lümenini salinle yıkayın.
Daha sonra, mikro diseksiyon makası kullanarak bağırsakların uzunluğunu kesin ve her bir bağırsak segmentini lümen tarafı yukarı bakacak şekilde düz bir şekilde yerleştirin. 27 gauge iğne ile yapıştırılmış üç mililitrelik bir şırınga kullanarak, mukozanın tüm uzunluğunu kaplamak için% 10 tamponlu formalini damla damla uygulayın. Ardından, proksimal kısmın rulonun iç kısmını oluşturduğundan ve lümenin içeriye baktığından emin olarak her bir parçayı bir kürdan etrafında dairesel olarak yuvarlayın.
Yuvarlandıktan sonra, bağırsak bir İsviçre rulosu gibi görünmelidir. Tek tek İsviçre rulosunun spiral yüzü yukarı bakacak şekilde ayrı etiketli doku kasetlerinin içine yerleştirin. Son olarak, dokuları oda sıcaklığında sabitlemek için% 10 tamponlu formalin ile doldurulmuş etiketli şişelere yerleştirin.
Bağırsak IRI'sinden sonra, sham grubundaki farelerden jejunum ve ileumun H&E boyaması, distorsiyon olmaksızın uzun ve ince villuslar gösterdi. IRI grubundaki farelerden alınan kesitler, kalan villusların küntleşmesi ve bozulması ile nekroz ve kanama alanları gösterdi. Ayrıca, IRI uygulanan hayvanlar için üç ince bağırsak segmentinin tümündeki mikroskobik hasar, sahte laparotomi uygulananlara kıyasla önemli ölçüde artmıştır.
