Steril cerrahi aletleri çalışma tezgahına yerleştirerek başlayın. Anestezi uygulanmış fareyi stereotaksik çerçeveye sabitlemek için, üst kesici dişleri bir burun kelepçesi ile karıştırın ve kafayı iki kulak çubuğu ile sabitleyin. Göz makası kullanarak, kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisinde 0,5 santimetrelik bir kesi yapın.
% 3 hidrojen peroksit içine batırılmış bir pamuklu çubukla, periosteuumu çıkarmak için açıkta kalan kafatasını ovalayın. Kafatasının kurumasını bekleyin. Matkabı stereotaksik alete takın ve stereotaksik kolun düğmelerini ayarlayın.
Bir büyüteç yardımıyla, matkap ucunu tam olarak bregma'ya yerleştirin. LCD dijital ekranı kullanarak bregmadaki Z ekseni değerini kaydedin. Şimdi, matkap ucunu lambdaya yerleştirin ve Z ekseni değerini kaydedin.
İki Z değeri arasındaki farkı en aza indirmek için burun kelepçesini ayarlayın. Dorsal ventral yönde Z ekseni değerini ölçmek için matkabı X için eksi 5.2 ve Y için artı 0.8 koordinatlarına yerleştirin. Matkabı X için eksi 5,2, Y için eksi 0,8 koordinatlarında yeniden konumlandırın ve Z ekseni değerini tekrar ölçün.
Kulak çubuklarını belirli bir ölçeğe ayarlayın. Matkabı bregmaya yerleştirin ve LCD dijital ekrandaki üç koordinatı sıfıra ayarlayın. Referans koordinatlarını kullanarak matkabı ilgilenilen bölgenin üzerine konumlandırın.
Matkabı başlatın ve matkap kafatasına nüfuz edene kadar dikey kolu kullanarak kademeli olarak indirin. Pamuklu çubuklar kullanarak kalıntıları ve kanı temizleyin. 200 mikrolitrelik bir tüpe bromofenol mavisi içeren 25 mikrolitre SDS-PAGE yükleme tamponu ve 50 mikrolitre çift damıtılmış su ekleyin.
Kraniyal pencereyi tuzlu suyla nemlendirilmiş bir pamuklu ped ile örtün. Mikro şırıngaya 0,3 mikrolitre boya yükleyin. Şırıngayı ve motorlu stereotaksik mikro enjektörü stereotaksik kola takın.
Şırınga ucunu bregma'ya yerleştirin ve LCD dijital ekranda koordinatları sıfıra ayarlayın. Referans koordinatlarına göre iğneyi ilgilenilen bölgeye göre ayarlayın. Enjektör hızını dakikada 0,1 mikrolitreye ayarlayın ve motorlu mikro enjektörü çalıştırarak hedef bölgeye 0,3 mikrolitre boya verin.
10 dakika sonra enjektörü yavaşça geri çekin.
