1. Cerrahi Yapmadan Önce, Araştırma ve Öğretim Hayvanlar Kullanım yaklaşık Yasal ve Etik Gereksinimleri var olduğunun farkında olun. <ol><li> Tüm cerrahi işlemler, yerel etik ya da yasal bir yetkilisi (IACUC ya da etik kurul ya da Home Office, vb.) Tarafından onaylanmış olması gerekir. </li><li> Bu onay başlamadan önce yerinde olduğundan emin olun. </li><li> , Cerrahi ya da hayvanların kullanımı için onay için onay herhangi bir soru varsa, devam etmeyin. </li></ol> 2. Aseptik teknik Anlamak <ol><li> Bir kavram olarak Sterilite <ol><li> Aseptik tekniğin amacı, hayvan ve çevre normal bakteri yükü ameliyat başlamadan önce mümkünse azaltmak veya ortadan kaldırmak için. Bu aletleri sterilize edildiği anlamına gelir, cerrahi çalışma yüzeyi dezenfekte ve hayvan ve cerrahın elleri dezenfekte edilmektedir. </li><li> Cerrahi, düzgün bir şekilde gerçekleştirilir, ağrının başka profilaktik antibiyotik veya herhangi bir diğer tedaviler gerek değildir. </li><li> Bile mükemmel aseptik teknik, cerrahi konu kaynaklanan bakteri halen cerrahi olarak oluşturulan bir yara haline getirilen olabilir. Uygun aseptik teknik cerrahi siteleri, enfeksiyöz ajanlar, öncelikle bakteri giriş risk limitleri. </li></ol></li><li> Steril alanda <ol><li> Steril alan, cerrahi alanı, hayvan hazırlanan alan ve cerrahın ön kapsar. </li></ol></li><li> Kısırlık içinde kopmalarında <ol><li> Cerrah, steril alan dışında bir şey dokunduğunda kısırlık içinde Sonları meydana gelir. Bu yüzünü, bir ışık fikstür, hayvan hazırlıksız bir alana, veya steril olmayan bir araç olabilir. </li><li> Bu nedenle profilaktik antibiyotikler kullanılıyor olabilir. </li><li> Unutmayın, özel bir etkinlik yer alıyor. , Sakin, düşünceli ve hassas olun. </li></ol></li></ol> 3. Cerrahi hazırlık <ol><li> Kemirgen ameliyat özel bir cerrahi seti gerektirmez. İdeal olarak, böyle bir başlık veya laminar flow kabini gibi ameliyatlar, bir laboratuar içinde ayrı bir alanda yürütülen olmalıdır. Ne olursa olsun, seçilen alan trafik akışını düzenli, iyi aydınlatılmış ve dışarı alınmalıdır. Kemirgen ameliyatlar genellikle bir laboratuvar masa üstü üzerinde yapılmaktadır. Cerrahi alanının düzenlenmesinden önce, benchtop iyi bir dezenfektan ile temizleyin. </li><li> Bu bir asistan cerrah için yararlı olur. Bunun üzerine, asistan, hayvanlar ve izleme kurtarma hazırlanması, anestezi ile yardımcı olabilir. Bu hayvanlar hazırlanır cerrah, böylece hayvanın anestezi altında süresini kısaltarak, kendilerini hazırlamak için izin verir ve belki de yapılacak ameliyatlar için izin. </li><li> : Hazırlanması, ameliyat, ve iyileşme üç farklı bölgeleri vardır ve böylece cerrahi alanında düzenleyin. </li><li> Hazırlık alanı için, ihtiyaç duyulan malzemeleri birleştirmek için: <ol><li> Yağlama Oftalmik merhem </li><li> Clippers veya jilet </li><li> Gazlı bez </li><li> Cerrahi fırçalayın çözümleri <ol><li> Yaygın olarak kullanılan cerrahi fırçalayın çözümleri / iyodoforlar veya klorheksidin </li><li> % 70 izopropil alkol de çoktu parçası olarak kullanılır. </li></ol></li></ol></li><li> Cerrahi alan için, montaj ve malzemeleri ihtiyaç düzenlemek. <ol><li> Kemirgen sıcak tutmak için ısı kaynağı <ol><li> Ideal ısı kaynağı bir sirkülasyon su ısıtma yastığı. Elektrikli ısıtma pedleri, ameliyat için kabul edilebilir değildir. Sıcak su ya da kimyasal el ısıtıcıları ile dolu Cerrahi eldiven de kullanılıyor olabilir. Son iki ya da kullanılması durumunda, nesnenin sıcaklık ameliyat sırasında dikkatle izlenmelidir. </li></ol></li><li> Cerrahi platformu <ol><li> Bu ısı kaynağı üzerine yerleştirilen steril su geçirmez tuş takımı olabilir. </li></ol></li><li> Tek kullanımlık malzemeleri <ol><li> Bunlar: steril cerrahi örtüler, gazlı bez, pamuk aplikatörler, kemirgen, doku sulama çözümü için yönetim için sıvıları. </li></ol></li><li> Steril aletler <ol><li> Araçların tamamlayıcı ameliyat bağlı olarak değişebilir ancak genellikle neşter, doku retraktörlere, forseps, hemostat ve makas içerir. </li><li> Enstrüman sterilizatör veya birden fazla cerrahi konu hakkında aynı aletleri kullanılmak üzere eğer çözüm sterilizasyon <ol><li> Hayvanlar arasındaki aletleri sterilize etmek için sıcak bir boncuk sterilizatör kullanımı yaygındır. </li></ol></li></ol></li><li> Malzeme cerrahi kesi kapatmak için. <ol><li> Kullanılan malzemeler, cerrahi, site ve uygulama bağlıdır ama şunlar olabilir: Sütür ve iğne, zımba ve zımba aplikatör ya da doku yapıştırıcısı </li></ol></li><li> Gereken başka bir özel ekipman (stereotaksik aparat, implantlar, operasyon mikroskobu) </li></ol></li></ol> 4. Cerrahi Aletler hazırlanması <ol><li> Araçların temiz olmalı vecerrahi başında steril. Bu genellikle, otoklavlanırlar tam cerrahi paketleri oluşturarak gerçekleştirilir. </li><li> Belgeleri otoklav ve yeniden paketleme olmadan birden fazla kemirgen cerrahi için kullanılan olabilir, ama kemirgenler arasında temizlenmeli ve sterilize edilmelidir. <ol><li> Sıcak bir boncuk sterilizatör kullanılması durumunda, sterilizasyon sonra soğumaya enstrümanlar için zaman tanımak için emin olun. Aletleri steril su daldırma ile soğutmalı olabilir. </li><li> Kimyasal sterilan da kullanılabilir, ancak daha uzun bir temas süresi (~ 10 dakika durulama gerektirmeyen, 30-60 dakika) gerektirir olabilir. Alkol sterilan değildir. </li></ol></li><li> Kullanılan olacağı için steril su geçirmez asmak aletleri düzenleyin. </li></ol> 5. Hayvan Cerrahisi hazırlanması <ol><li> Üç şey ameliyattan önce uygulanan anestezi, analjezik ve antibiyotik. <ol><li> Anestezi, ameliyat için gerekli. Anestezikler, inhalasyon veya enjeksiyon yoluyla uygulanan olabilir. <ol><li> En yaygın kullanım uçucu anestezik izofluran. </li><li> En yaygın enjektabl anestezi, muhtemelen başka bir sedatif eklendi, ketamin ve ksilizin bir kombinasyonudur. </li><li> Uygun dozlarda için tesis veteriner kadrosu danışın. </li></ol></li><li> Pre-emptive analjezikler önerilir ve cerrahi başlamadan önce verilmelidir. <ol><li> Yaygın olarak kullanılan non-steroid anti-enflamatuar flunixin ve carprofen içerir. </li><li> Mevcut opioidler buprenorfin, morfin veya fentanil içerebilir. </li><li> Uygun dozlarda ve uygulama yolları için tesis veteriner kadrosu danışın. </li></ol></li><li> Düzgün şekilde yapılan cerrahi, antibiyotikler, bazı yüksek riskli gastrointestinal ameliyatlar için dışında gerekli değildir. <ol><li> Antibiyotik kullanılması durumunda, kullanılan (ilk insizyondan önce) peri-operatif sağlamak. </li><li> Uygun antibiyotikler, dozajlar, uygulama yolları için tesis veteriner kadrosu danışın. </li></ol></li></ol></li><li> Kesi sitesi Cerrahi hazırlık <ol><li> Kesi sitesi Tıraş. Genellikle önerilen kesi yaklaşık 3 katı büyüklüğünde bir alan tıraş. Traş ve hazırlanan alanın büyüklüğü, hayvan veya hayvan alanının büyüklüğü ile sınırlı olabilir. </li><li> Traş alanı çoktu çözüm ve izopropil alkol çoklu uygulamalar kullanılarak dezenfekte edilir. Uygulama alkol sonra, ilk genellikle cerrahi fırçalayın. Sona fırçalayın çözümün nihai bir uygulama ile. </li><li> Cerrahi ovma merkezinde başlayan ve dışa doğru, ya da daha küçük hayvanlar, tek yönlü bir şekilde helezonik, dairesel bir kalıp yapılır. <ol><li> Tek yönlü ovma, hayvan saç kaplama, traş alanı crainial marjı steril gazlı bez yerleştirin. Hayvan steril gazlı bez ile hafifçe kavrayın ve stabilize. Tek yönlü uzakta, steril gazlı bez çözüm ve alkol fırçalayın uygulayın. </li></ol></li></ol></li><li> Cerrahi alanda hayvan taşıma <ol><li> Yukarı ve hazırlanan sitede irtibat kurmadan hazırlanan cerrahi sitesi ile hayvan hareket ettirin. </li><li> Cerrahi alan cerrah bakan yukarı doğru, bu yüzden cerrahi alanda hayvan yerleştirin. </li></ol></li><li> Hayvan draping <ol><li> Hayvan asistan tarafından bol dökümlü ise, asistan örtüyü dış yüzeyi steril alanının parçası olarak kabul edilir ve asistan tarafından ele alınması gerektiğini unutmamalıyız. Draping cerrah genellikle sol ve asmak cerrahi paketine dahil. </li><li> Standart bir su geçirmez tek kullanımlık kağıt asmak genellikle tavsiye edilir. </li></ol></li></ol> 6. Cerrahi Cerrah hazırlanması <ol><li> Cerrah hazırlanması özel bir aktivite, cerrah, steril alan içinde ve dışında onların her hareketini farkında olması gereken bir yer alıyor olacak vurgulamak gerekir. </li><li> Saç ve yüz genellikle sırasıyla, bir kap ve maske ile kaplıdır. Bunlar cerrahi oturumun başında yeni olmalı, ama hayvanlar arasında değiştirilmesi gerekmez. </li><li> Cerrahlar, bir tek kullanımlık cerrahi önlük, temiz tek laboratuvar önlüğü veya en azından temiz bir laboratuvar önlüğü giymeli. Bu hayvanlar arasında değiştirilmesi gerekmez, ancak cerrahi oturumları arasında değişmiş olmalıdır. </li><li> Eller, ameliyat öncesi iyi temizlenmesi gerekir. Cerrahi eldiven veya sınav eldiven kullanılmalıdır. Sınav eldiven kullanılması durumunda, kullanılmadan önce cerrahi bir dezenfektan ile yıkanmalıdır. Eldiven hayvanlar arasındaki değiştirilmesi gerekir. </li></ol> 7. Cerrahisinde <ol><li> Steril alanın Bakım. <ol><li> Ellerinizi steril ve çalışma alanı steril sonra, dikkatlice hareket ve kısırlık kırmak için değil hatırlamak zorunda. Bu includes burnunuzu çizmemeye hatırlayarak, araçların aşağı olan steril bir alana sahip ve sadece steril drape ile cerrahi hasta teslim. </li></ol></li><li> Doku taşıma <ol><li> Nazikçe dokuların taşıyınız. Cerrahi uzun süreli olması durumunda, dokuların nemli tutun. Doku cepler ve gereksiz diseksiyon oluşturma en aza indirin. </li><li> Uygun doku işleme fırsat ve post-op enfeksiyon hızları şifa riskini azaltır, ve post-operatif ağrıyı azaltır. </li></ol></li><li> Sıvı kaybı değiştirin <ol><li> Kemirgenler akışkan yönetiminin olağan yolları subkutan veya intraperitoneal. Örneğin, farelerde küçük hayvanlar-1-2 ml intraperitoneal için küçük birimler kullanın. </li><li> Sıcaklaşır sıvılar, vücut ısısında bir düşüş önlemeye yardımcı olabilir. Fare ve sıçan vücut ısısı insanlarda daha yüksek, dolayısıyla sıvıları sıcak olmalıdır. </li></ol></li><li> Sıcaklığını koruyun <ol><li> Ameliyat sırasında hayvanın altında bir ısıtma yastığı ve kurtarma sırasında kafes yerleştirilmesi bir hayvanın vücut ısısını korumak için standart bir yol. <ol><li> Ameliyat için işaretli olanlar sadece pedleri kullanımı ısıtma dikkatli. Diğerleri termal yaralanmaya neden olabilir. </li></ol></li><li> Sıcaklaşır sıvıları, intraperitoneal verilen, aynı zamanda sıcak hayvanlar yardımcı olabilir. </li></ol></li><li> Mikroskop-bazı prosedürleri kolaylaştırmak işletme (mikrovasküler cerrahi, eski cerrahlar, vb loupes gibi büyüteçler kullanımı, vb tarafından elde edilebilir) </li></ol> 8. Post-operatif Kurtarma Hususlar <ol><li> Hayvanlar düz bir kağıt yataklar (steril kağıt havlu, vb.) Yerine standart hayvancılık yataklar kurtarmak gerekir. </li><li> Hayvan sıcak tutun. Sıcaklık acil şifalar yardımcı olacaktır. Bu genellikle kurtarma kafes yerleştirerek yarım bir ısıtma yastığı onlar kurtarmak gibi hayvanların tercih ettikleri sıcaklıkları tarafından gerçekleştirilir </li><li> Bütün hayvanların normal görünür kadar, hayvan veya hayvan bekletme alanı kafesleri iade etmeyin. Ameliyatı geçirmiş olan herhangi bir hayvanın sağ kendisini kafese yeteneği kazanmış ve holding alan iade edilmeden önce normal hareket etmek gerekir. </li><li> Beklenmeyen bir hastalık veya enfeksiyon belirtileri için ameliyat sonrası hayvanların izleyin. Hayvanlar, genellikle ameliyattan sonra küçük bir miktar kilo kaybedersiniz, ancak uygun analjezi ve gıda sağlanması, onlar hızlı ağırlık kazanmak gerekir. </li></ol> 9 - Post-operatif İzleme Başarılı Cerrahi Final Bölümü <ol><li> Ameliyattan sonra 5-7 gün boyunca hayvanın genel durumunu izler. <ol><li> Ameliyat sonrasında, hayvanlar, parlak, tetikte ve aktif olmalıdır. Onlar cagemates ile yeme ve içme, normalde etkileşim ve normal türe özgü bir duruş elde etmek mümkün olmalıdır. </li><li> Depresif, anorektik veya cansız olan hayvanlar, bu değişimin nedeni olarak muayene edilmelidir. Tedavi edilmezse ağrı ya da enfeksiyon olasılığını düşünün. </li></ol></li><li> Yiyecek / sıvı alımı ayrıca kurtarma önemlidir. <ol><li> Ameliyattan sonra bazı tüketim drop-off olacak. Bu yiyecek ve su kolay erişim yaparak azalabilir. <ol><li> Daha uzun sipper tüpler, faydalı olabilir. </li><li> Kafesinin altındaki ıslak gıda Günlük hüküm aynı zamanda yemek için hayvanların ikna olabilir. </li></ol></li><li> Pika fareler bazı analjezikler, bu yüzden hayvanların yaralanma uygunsuz öğeleri (örneğin yataklar gibi) yiyebilirsiniz farkında olmak. </li></ol></li><li> Kesi enfeksiyon belirtileri için hayvan izleyin. Tehlikesi döneminin ilk 7 gün ve hayvanların günlük olarak kontrol edilmelidir. <ol><li> Enfeksiyon belirtileri kızarıklık, şişlik, akıntı (pürülan veya seröz), ağrı ya da kesi açılması (açılması) içerir. </li></ol></li></ol> 10 Cerrahi Biten sonra, Final Adım Sizin Cerrahi Başarı Ölçme <ol><li> / Işlevselliği modeli indüklenen / part restore kaldırılır mıydı? </li><li> Mümkün olduğunca az ağrı var mıydı? </li><li> Herhangi bir enfeksiyon var mıydı? </li><li> Başarı! </li></ol>

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> American College of Laboratory Animal Medicine Position on Rodent Surgery. , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Animal Welfare, 9 CFR, Parts 1, 2, and 3. , .</li><li>Bradfield, J. F., Schachtman, T. R., McLaughlin, R. M., Steffen, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+physiologic+effects+of+inapparent+wound+infection+in+rats.">Behavioral and physiologic effects of inapparent wound infection in rats.</a> Lab Anim Sci. 42, 572-578 (1992).</li><li>Brown, M. J., Pearson, P. T., Tomson, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+animal+surgery+in+research+and+teaching.+AVMA+Panel+on+Animal+Surgery+in+Research+and+Teaching,+and+the+ASLAP+(American+Society+of+Laboratory+Animal+Practitioners).">Guidelines for animal surgery in research and teaching. AVMA Panel on Animal Surgery in Research and Teaching, and the ASLAP (American Society of Laboratory Animal Practitioners).</a> Am J Vet Res. 54, 1544-1559 (1993).</li><li>Brown, P. A., Hoogstraten-Miller, S., Reuter, J. D., Suckow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+Aseptic+Rodent+Survival+Surgery:+Parts+I+&#38;+2.">Principles of Aseptic Rodent Survival Surgery: Parts I &#38; 2.</a> Laboratory Animal Medicine and Management. , (2004).</li><li>Institute of Laboratory Animal Resources, National Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 556-570 (1996).</li><li>Popp, M. B., Brennan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+vascular+access+in+the+rat:+importance+of+asepsis.">Long-term vascular access in the rat: importance of asepsis.</a> Am J Physiol. 241, H606-H612 (1981).</li><li>Rutala, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=APIC+guideline+for+selection+and+use+of+disinfectants.">APIC guideline for selection and use of disinfectants.</a> Am J Infect Control. 24, 313-342 (1996).</li></ol>

Tüm yazarlar Charles River, araştırma için cerrahi olarak değiştirilmiş hayvanların önemli bir tedarikçi için çalışır.

Kemirgenler Deneysel cerrahi nadiren veteriner hekim ya da hekimler tarafından yürütülmektedir. Bunun yerine, genellikle cerrahi prensipleri ve aseptik teknik, az ya da hiç örgün eğitim ile biyomedikal araştırmacılar tarafından yapılır. Bir araştırma, cerrahi genellikle meslektaşlarının öğrenilen, kendilerini genellikle resmi veya eğitim almamış. Araştırma laboratuvarında yapılan Cerrahi işlem de, öncelikle bir çalışma için bir dizi hayvan üretme hedefi ile bir hayvan modeli hazırlama bir yöntem olarak görülebilir. Herhangi bir özellikle cerrahi genellikle uygulama aracılığı ile sadece kazanılmış olması değil. Aseptik teknik kavram (ve böylece enfeksiyon olmadan cerrahi) ile ilgili uygulamada, ilkeleri ve becerileri ile elde edilen ve olması. Her ikisi de el-göz koordinasyonu ve teknik beceri bir madde,. Ederken araştırmacıların çoğu zaman tam iletilir değildir. Cerrahi prensiplere örgün eğitim yokluğu, teknik olarak doğru cerrahi ve hayvanların pre-ve post-operatif bakım hem de eşit önemi bir anlayış eksikliği neden olabilir. Cerrahi kendisi ve hayvan peri-operatif bakım dikkate alınarak, hayvan refahı ve cerrahi modelden elde edilen veriler kaliteli bir artış neden olacaktır. Örneğin, subklinik ameliyat sonrası enfeksiyon, ağrı ile görülen davranış ve fizyolojisi değişiklikleri, sonuçlar bulandırabilir yapabilirsiniz. Yırtıcı türler olduğu gibi, çoğu kemirgenler şaşırtıcı stoacı ve ameliyat sonrası ağrı ya da enfeksiyon muzdarip olmasına rağmen birkaç klinik belirtiler gösterebilir. Kemirgenler ağrı veya sıkıntı ince işaretler kemirgenler bu tür belirtileri tanıma biyomedikal araştırmacıların eğitim genel bir eksikliği daha gizliyor. Ayrıca, personel genellikle cerrahi sonrası ağrı, klinik ve davranışsal belirtileri mevcut değildir kemirgenler, karanlık döngüsü sırasında en aktif. Bu video hands-on ve kendi kurumu tarafından sağlanan her iki ideal olacaktır, uygun cerrahi eğitim için yerine gelmez, fakat araştırmacılar, bir ortak endişeler bakış ve kabul edilen aseptik usul ve minimal bir yetkinlik geliştirmek için gerekli teknikler görsel gösteri vermek için tasarlanmıştır. kemirgenler sağkalım cerrahi performans.

A correction to author list has been made for article Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.

Erratum: Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.

principles of rodent surgery for the new surgeon

Cerrahi temel kavramları ve teknikleri konusunda eğitim, bilimsel hem de hayvan sosyal nedenlerden dolayı, hiç bir kemirgen ameliyat gerçekleştirmek için istemeden önce yapılmalıdır. Öğrenciler, post-doktora bilim adamları, bir araştırma protokolünün bir parçası olarak kemirgenler ameliyat yapmak isteyen diğerleri, onların gerekli kurs bir parçası olarak resmi bir cerrahi eğitimi almış değil. Cerrahi kendisi bir teknik beceri ve uygulama ile artıracaktır. Ancak, aseptik tekniğin ilkeleri genellikle açıklanamayan veya doğuştan kalır. En yeni cerrahlar için, bu önemli bilgileri parça parça moda ya da ikisi de ideal bir iş öğrendim. Aynı zamanda, yeni cerrah, aynı zamanda bir cerrahi teknik ve asepsi ilkelerine öğrenme zor, belli bir cerrahi gerçekleştirmek için öğrenmek yapabilir. Bu makale, temel cerrahi beceri ve başarılı bir kemirgen cerrahi için gerekli teknikleri için öneriler özetler ve yapar. Bu makale, kullanıcı kurum tarafından eğitim-elleri tamamlamak için tasarlanmıştır.

Watch this Scientific Journal Video about Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon at JoVE.com

Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon

Cerrahi denemeden önce, yeni bir cerrah cerrahi teknikler ve kavramlar temel eğitim olmalıdır. Bu makale, kemirgenler bir vurgu ile temel cerrahi değerlendirmeler sunacaktır.

Yeni Cerrah Kemirgen Cerrahisi İlkeleri

For both scientific and animal welfare reasons, training in basic surgical concepts and techniques should be undertaken before ever seeking to perform ...

principles-of-rodent-surgery-for-the-new-surgeon

Research

JoVE Journal

Biology

112.2K Görüntüleme.  Research Models and Services. Cerrahi denemeden önce, yeni bir cerrah cerrahi teknikler ve kavramlar temel eğitim olmalıdır. Bu makale, kemirgenler bir vurgu ile temel cerrahi değerlendirmeler sunacaktır.

Video: Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon

Ole Isacson: Development of New Therapies for Parkinson's Disease

Ole Isacson gives a concise overview of Parkinsons's disease, its causes, therapeutic strategies, and advances in Parkinson's research.

Ole Isacson: Parkinson Hastalığı İçin Yeni Tedaviler

Biyoloji

Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology

Site-specific recombinase (SSR) technology allows the manipulation of gene structure to explore gene function and has become an integral tool of molecular biology. Site-specific recombinases are proteins that bind to distinct DNA target sequences. The Cre/lox system was first described in bacteriophages during the 1980's. Cre recombinase is a Type I topoisomerase that catalyzes site-specific recombination of DNA between two loxP (locus of X-over P1) sites. The Cre/lox system does not require any cofactors. LoxP sequences contain distinct binding sites for Cre recombinases that surround a directional core sequence where recombination and rearrangement takes place. When cells contain loxP sites and express the Cre recombinase, a recombination event occurs. Double-stranded DNA is cut at both loxP sites by the Cre recombinase, rearranged, and ligated ("scissors and glue"). Products of the recombination event depend on the relative orientation of the asymmetric sequences.
SSR technology is frequently used as a tool to explore gene function. Here the gene of interest is flanked with Cre target sites loxP ("floxed"). Animals are then crossed with animals expressing the Cre recombinase under the control of a tissue-specific promoter. In tissues that express the Cre recombinase it binds to target sequences and excises the floxed gene. Controlled gene deletion allows the investigation of gene function in specific tissues and at distinct time points. Analysis of gene function employing SSR technology --- conditional mutagenesis -- has significant advantages over traditional knock-outs where gene deletion is frequently lethal.

Principles of Site-Specific Recombinase SSR Technology

The advent of site-specific recombinase (SSR) technology and the Cre/lox system has led to numerous advances in molecular biology, and has proven itself as a valuable tool for assessing gene function in transgenic animals. This interview discusses the mechanism of site specific recombination by Cyclization recombinase (Cre) and how the use of this enzyme has led to the development of conditional mutagenesis, which has significant advantages over traditional knock out strategies.

Site Özel Recombinase (SSR) Teknoloji İlkeleri

Site-specific recombinase (SSR) technology allows the manipulation of gene structure to explore gene function and has become an integral tool of molecular ...

Supported Planar Bilayers for the Formation of Study of Immunological Synapses and Kinapse

Supported planar bilayers are powerful tools that can be used to model the molecular interactions in an immunological synapse.   To mimic the interactions between lymphocytes and antigen presenting cells, we use Ni2+-chelating lipids to anchor recombinant cell adhesion and MHC proteins to the upper leaflet of a bilayer with poly-histidine tags. Planar bilayers are generated by preparing lipid, treating the glass surfaces where the bilayer will form, and then forming the bilayer in a specialized chamber containing a flow-cell where the lymphocytes will be added.  Then, bilayers are charged with Ni and his-tagged recombinant proteins are added.  Finally,  lymphocytes are injected into the flow cell and TIRF microscopy can be used to image synapse formation and the mechanisms that control T cell locomotion, sites of receptor sorting,  and sites of receptor degradation.

Supported planar bilayers are powerful tools that can be used to model the molecular interactions in an immunological synapse. Here, we show methods for anchoring cell adhesion proteins known to modulate synapse formation to the upper leaflet of the lipid bilyer and visualize synapse formation using TIRF microscopy.

İmmünolojik Sinapslar ve Kinapse Eğitim Oluşumu için desteklenen Düzlemsel Bilayers

Supported planar bilayers are powerful tools that can be used to model the molecular interactions in an immunological synapse.   To mimic the interactions ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

The morphogenesis of the Drosophila embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell shape changes during embryonic development. One of the challenges faced in studying this structure is that the lumen of the heart tube, as well as the membrane features that are crucial to heart tube formation, are difficult to visualize in whole mount embryos, due to the small size of the heart tube and intra-lumenal space relative to the embryo. The use of transmission electron microscopy allows for higher magnification of these structures and gives the advantage of examining the embryos in cross section, which easily reveals the size and shape of the lumen. In this video, we detail the process for reliable fixation, embedding, and sectioning of late stage Drosophila embryos in order to visualize the heart tube lumen as well as important cellular structures including cell-cell junctions and the basement membrane.

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

We describe a process for fixation, embedding, sectioning, and imaging of late stage Drosophila embryos for Trasmission Electron Microscopy of the embryonic heart tube. This technique allows for the visualization of the heart tube lumen as well as the basement membrane, which lines the lumen of the heart.

Elektron Mikroskobu için embriyo Hazırlık Drosophila Embriyonik kalp tüpü

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development and growth of mammalian embryos are critically dependent on the function of the placenta, WEC technique allows us to culture mouse and rat embryos ex vivo condition during limited periods corresponding to midgestation stages during embryonic day (E) 6.5-E12.5 in the mouse or E8.5-E14.5 in the rat 2, 3, 4. In WEC, we can directly target desired areas of embryos using fine glass capillaries because embryos can be manipulated under the microscope. Therefore, rodent WEC is very useful technique when we want to study dynamic developmental processes of postimplanted mammalian embryos. Up to date, several types of WEC systems have been developed 1. Among those, the rotator-type bottle culture system is most popular and suitable for long-term culture of embryos at midgestation, i.e., after E9.5 and E11.5 in the mouse and rat, respectively 1. In this video protocol, we demonstrate our standard procedures of rat WEC after E12.5 using a refined model of the original rotator system, which was designed by New and Cockroft 5, 6, and introduce various applications of WEC technique for studies in mammalian developmental biology.

Whole embryo culture technique allows us to culture mouse and rat embryos ex vivo condition during limited periods corresponding to midgestation stages. In this video protocol, we demonstrate our standard procedures of rat whole embryo culture after E12.5 using the rotator-type bottle culture system.

Rotator-tipi Şişe Kültür Sistemi kullanılarak Kemirgen Tüm Embriyo Kültürü Yöntemi

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role in a variety of physiologic and disease processes, including early embryogenesis, wound healing 1, inflammation 2, 3, and host defense 4. PGRN also functions as a neurotrophic factor 5, and mutations in the PGRN gene resulting in partial loss of the PGRN protein cause frontotemporal dementia 6, 7. Our recent studies have led to the isolation of PGRN as an important regulator of cartilage development and degradation 8-11. Although PGRN, discovered nearly two decades ago, plays crucial roles in multiple physiological and pathological conditions, efforts to exploit the actions of PGRN and understand the mechanisms involved have been significantly hampered by our inability to identify its binding receptor(s). To address this issue, we developed a modified yeast two-hybrid (MY2H) approach based on the most commonly used GAL4 based 2-hybrid system. Compared with the conventional yeast two-hybrid screen, MY2H dramatically shortens the screen process and reduces the number of false positive clones. In addition, this approach is reproducible and reliable, and we have successfully employed this system in isolating the binding proteins of various baits, including ion channel 12, extracellular matrix protein 10, 13, and growth factor14. In this paper, we describe this MY2H experimental procedure in detail using PGRN as an example that led to the identification of TNFR2 as the first known PGRN-associated receptor 14, 15.

We have modified the conventional yeast two-hybrid screening, an effective genetic tool in identifying protein interaction. This modification markedly shortens the process, reduces the workload, and most importantly, reduces the number of false positives. In addition, this approach is reproducible and reliable.

Büyüme Faktörü Progranulin ile etkileşimde Proteinler tanımlamak Modifiye Maya-İki Hybrid Sistemi

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems including plants, invertebrates and vertebrates. There are various methods to achieve RNAi in vivo4,5. For example, the target gene may be transformed into an RNAi vector, and then either permanently or transiently transformed into cell lines or primary cells to achieve gene knockdown effects; alternatively synthesized double-strand oligonucleotides from specific target genes (RNAi oligos) may be transiently transformed into cell lines or primary cells to silence target genes; or synthesized double-strand RNA molecules may be microinjected into an organism. Since the nematode C. elegans uses bacteria as a food source, feeding the animals with bacteria expressing double-strand RNA against target genes provides a viable strategy6. Here we present an RNAi feeding method to score body size phenotype. Body size in C. elegans is regulated primarily by the TGF- &beta; - like ligand DBL-1, so this assay is appropriate for identification of TGF-&beta; signaling components7. We used different strains including two RNAi hypersensitive strains to repeat the RNAi feeding experiments. Our results showed that rrf-3 strain gave us the best expected RNAi phenotype. The method is easy to perform, reproducible, and easily quantified. Furthermore, our protocol minimizes the use of specialized equipment, so it is suitable for smaller laboratories or those at predominantly undergraduate institutions.

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

We demonstrate how to use the RNAi feeding technique to knock down target genes and score body size phenotype in C. elegans. This method could be used for a large scale screen to identify potential genetic components of interest, such as those involved in body size regulation by DBL-1/TGF-&beta; signaling.

Nematod Vücut büyüklüğü Yönetmelik ilgilendim Genler için Ekran RNA-aracılı Girişim Besleme Strateji Kullanımı<em&gt; C. elegans</em

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems ...

The Use of Chemostats in Microbial Systems Biology

Cells regulate their rate of growth in response to signals from the external world. As the cell grows, diverse cellular processes must be coordinated including macromolecular synthesis, metabolism and ultimately, commitment to the cell division cycle. The chemostat, a method of experimentally controlling cell growth rate, provides a powerful means of systematically studying how growth rate impacts cellular processes - including gene expression and metabolism - and the regulatory networks that control the rate of cell growth. When maintained for hundreds of generations chemostats can be used to study adaptive evolution of microbes in environmental conditions that limit cell growth. We describe the principle of chemostat cultures, demonstrate their operation and provide examples of their various applications. Following a period of disuse after their introduction in the middle of the twentieth century, the convergence of genome-scale methodologies with a renewed interest in the regulation of cell growth and the molecular basis of adaptive evolution is stimulating a renaissance in the use of chemostats in biological research.

Cell growth rate is a regulated process and a primary determinant of cell physiology. Continuous culturing using chemostats enables extrinsic control of cell growth rate by nutrient limitation facilitating the study of molecular networks that control cell growth and how those networks evolve to optimize cell growth.

Mikrobiyal Systems Biyoloji Chemostats Kullanımı

Cells regulate their rate of growth in response to signals from the external world. As the cell grows, diverse cellular processes must be coordinated ...

Intravital Microscopy of the Microcirculation in the Mouse Cremaster Muscle for the Analysis of Peripheral Stem Cell Migration

In the era of intravascular cell application protocols in the context of regenerative cell therapy, the underlying mechanisms of stem cell migration to nonmarrow tissue have not been completely clarified. We describe here the technique of intravital microscopy applied to the mouse cremaster microcirculation for analysis of peripheral bone marrow stem cell migration in vivo. Intravital microscopy of the M. cremaster has been previously introduced in the field of inflammatory research for direct observation of leucocyte interaction with the vascular endothelium. Since sufficient peripheral stem and progenitor cell migration includes similar initial steps of rolling along and firm adhesion at the endothelial lining it is conceivable to apply the M. cremaster model for the observation and quantification of the interaction of intravasculary administered stem cells with the endothelium. As various chemical components can be selectively applied to the target tissue by simple superfusion techniques, it is possible to establish essential microenvironmental preconditions, for initial stem cell recruitment to take place in a living organism outside the bone marrow.

Intravital microscopy of the mouse M. cremaster microcirculation offers a unique and well-standardized in vivo model for the analysis of peripheral bone marrow stem cell migration.

Periferik Kök Hücre Göç Analizi Fare Cremaster Muscle Mikrosirkülasyon Intravital Mikroskopi

In the era of intravascular cell application protocols in the context of regenerative cell therapy, the underlying mechanisms of stem cell migration to ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to large-scale screening formats in every step of a drug screen, including large-scale image analysis. Currently there is no ready-to-use and free image analysis software to meet this large-scale format. Most existing methods involve manually drawing the length and width of the imaged 3D spheroids, which is a tedious and time-consuming process. This study presents a high-throughput image analysis software application &#8211; SpheroidSizer, which measures the major and minor axial length of the imaged 3D tumor spheroids automatically and accurately; calculates the volume of each individual 3D tumor spheroid; then outputs the results in two different forms in spreadsheets for easy manipulations in the subsequent data analysis. The main advantage of this software is its powerful image analysis application that is adapted for large numbers of images. It provides high-throughput computation and quality-control workflow. The estimated time to process 1,000 images is about 15 min&#160;on a minimally configured laptop, or around 1 min&#160;on a multi-core performance workstation. The graphical user interface (GUI) is also designed for easy quality control, and users can manually override the computer results. The key method used in this software is adapted from the active contour algorithm, also known as Snakes, which is especially suitable for images with uneven illumination and noisy background that often plagues automated imaging processing in high-throughput screens. The complimentary &#8220;Manual Initialize&#8221; and &#8220;Hand Draw&#8221; tools provide the flexibility to SpheroidSizer in dealing with various types of spheroids and diverse quality images. This high-throughput image analysis software remarkably reduces labor and speeds up the analysis process. Implementing this software is beneficial for 3D tumor spheroids to become a routine in vitro model for drug screens in industry and academia.

We present a high-throughput image analysis software application to measure the size of three-dimensional tumor spheroids imaged with bright-field microscopy. This application provides a fast and effective way to examine the effects of therapeutic drugs on spheroids, which is beneficial for researchers who wish to use spheroids in drug screens.

Tümör sferoidlerin Yüksek throughput Görüntü Analizi: Otomatik ve Doğru küremsiler boyutunu ölçmek için kullanıcı-dostu Yazılım Uygulama

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...