Yazar Robert Holdcraft teknik destek için teşekkür eder. Bu çalışmada, USDA CSREES Özel Grant (2009-34155-19957) ve hatch fonları (NJ08192) tarafından kısmen finanse edildi.

1. Uçucu Yerel indüksiyon: otobur zarar <ol><li> Yaban mersini bitkilerin iki şubesi spun polyester kol ile Torbalı. </li><li> Altı çingene güvesi tırtıllar (2. -3 üncü instars) çanta içine yerleştirilen ve uçucu toplama öncesinde 2 gün boyunca bitkiler üzerinde beslemek için izin verilir. Kontrol bitkiler herhangi bir tırtıllar almıyorsunuz. </li><li> Uçucu emisyonları gün 3 (Şekil 1) (protokol # 7) aşağıda anlatıldığı gibi toplanır. Polyester kollu kaçan böcekleri önlemek için bitkiler üzerinde kalır. </li></ol> 2. Uçucu Yerel indüksiyon: mekanik hasar <ol><li> Bitkilere mekanik hasar, yaprak alanı miktarını çingene güvesi tarafından kaldırılan taklit etmek için delik delme verdirdiler. </li><li> Başına beş bitki yaprakları, 1 ve 2 gün sonunda taban ve yaprakların üst kısmı bulunan iki adet 7 mm delik kişi yaralandı. Kontrol tedavisi mekanik hasar almaz. </li><li&gt; Uçucu emisyonları, aşağıda açıklandığı gibi 3. günde toplanır. </li></ol> 3. Uçucu Yerel indüksiyon: Meja <ol><li> 10 ml% 0.1 Tween-20 çözüm Meja ya 1 ya da 1.5 mM çözüm Blueberry bitkiler ile tedavi edilir. </li><li> Meja 2-oz sprey şişesi ile uygulanır. Kontrol bitkiler 10 ml% 0.1 Tween-20 çözüm ile püskürtülür. </li><li> Bitkiler saat 16:00 tedavi, sera ve 17 cm çapında ve uçucu koleksiyonları önce 35 cm yüksekliğinde pleksiglas odasının içinde 15 saat süreyle tutulur. </li><li> Uçucu emisyonları, aşağıda açıklandığı gibi toplanır. </li></ol> 4. Uçucu maddelerin sistemik indüksiyon: iç sinyalizasyon <ol><li> Yaban mersini bitkisinin bir alt dalı, bir spun polyester kol ile Torbalı ve altı (2. -3 üncü instars) çingene güvesi tırtıllar poşet içine koyarak zarar görmüştür . </li><li> Hasar şube, uçucu toplama haznesi dışında kalırken dalıs hasarlı şube üzerinde odasının içine yerleştirilir (Şekil 2). </li><li> Tırtıllar, 2 gün boyunca alt dalı beslemek için izin verilir. </li><li> 3. gününde başlayarak, uçucu zarar görmüş bitkilerin hasarsız kısmı tahsil edilir. </li><li> Uçucu, 7 gün boyunca toplanır. Kontrol bitkiler benzer bir şekilde tedavi edilmektedir ama otobur hasar almadı. </li></ol> 5. Vasküler bağlantısı <ol><li> Bu çalışmada, yaban mersini bir tesis içinde farklı dalları arasında damar bağlantısı derecesi belirlenir. </li><li> Bir bitkinin bir alt dalı uç kısmı Orians ark açıklanan rodamin-B (Sigma-Aldrich) boya (0.25% w / v), 6 ml solüsyon içeren bir çiçek su seçim desteklemek için kesilir. 11 </li><li> Tesisimiz ile boya Hareketi, 7 gün boyunca günlük olarak takip edilmektedir. </li><li> 7 gün sonra, kırmızı boyama miktarı bitkinin farklı pozisyonlarda görsel olarak değerlendirildi. </li></ol> 6. HIPVs Pozlama: harici sinyal <ol><li> Bir bitki içinde şube ya bir komşu şube HIPVs maruz veya HIPVs için poz aldı. </li><li> HIPVs dalları ortaya çıkarmak için, bir alt dalı polyester kol ve altı (2. -3 üncü instars) çingene güvesi tırtıllar çanta içine yerleştirilir (Şekil 3) ile Torbalı. </li><li> Yukarıda açıklanan Pleksiglas odasına benzer bir bitki içinde kafesli. Böcekler, yan dalları kaynaklı şube yayılan uçucu maruz kaldığı gibi, 2 gün boyunca bitkiler üzerinde beslemek için izin verilir. </li><li> Maruz kalınması sonrasında (günde 3), maruz dalları böcek yaralı dalı (Şekil 2&#39;de görüldüğü gibi) dışarıda bırakarak, uçucu toplama haznesi içine yerleştirilir. </li><li> HIPV maruz kalan dallarından uçucu aşağıda anlatıldığı gibi toplanır ve Filiz Görüntü Softwa kullanarak yaprak alanının alt dalı tüketilen miktarı ölçülüryeniden. </li></ol> 7. HIPVs için Pozlama: Dolgudan <ol><li> Bitkiler HIPV maruz kaldıktan sonra &quot;astarlanmalıdır&quot; olup olmadığını belirlemek için, bitkiler Protokol # 5 olarak kabul edilir. </li><li> Bitkilerin yarısı kaynaklı bir komşu şube HIPVs maruz kalan diğer yarısı hasarsız dallarına maruz kalmaktadır. </li><li> 3. gün, dört erken 2. instar çingene güvesi tırtıllar her bitkinin yerleştirilir ve aşağıda açıklandığı gibi uçucu toplanır (Şekil 4). </li><li> Uçucu koleksiyonları sonra, başlangıçta, çingene güvesi tırtılların yanı sıra 3 gün hasar gören bu hasar bırakır eksize ve yaprak alanı, tüketilen miktarı ölçülür. </li></ol> 8. Uçucu maddelerin toplanması <ol><li> HIPV emisyonları, bir itme-çekme sistemi kullanılarak sera örneklenmiş. Otobur hasar tedavisinde tırtıllar da dahil olmak üzere saksı bitkileri yerüstü bölümü (kök, dallar ve yapraklar), 4 L vola içine yerleştirilir.kiremit toplama haznesi. 2-parçalı bir giyotin, bitkilerin temel destekler. Saflaştırılmış hava, 2 L / dak hızında her odasının üst girer. </li><li> Uçucu Alltech Super-Q 1 L / dak hızında odaları hava çekerek tarafından adsorban 30 mg ile dolu tuzakları toplanan. </li><li> Uçucu toplama cihazı aynı anda dört farklı bitki (Şekil 1) uçucu koleksiyonları için izin dört odacıktan oluşur. </li><li> Koleksiyonlar 09:00 ile 17:00 saat için gündüz yapılan </li><li> Toplandıktan sonra, bitkilerden tüm yaprakları hasat edilerek, ° C, 60 kurutulmuş fırın, ve tartılır ve odaları, musluk suyu ve% 70 etanol ile durulanır. </li></ol> 9 - Uçucu maddelerin analizi <ol><li> Super-Q tuzakları toplanan uçucu diklorometan (150 ul) ve n-oktan 400 ng dahili standart olarak eklenir ile yıkandı. </li><li> Hewlett Packard 6890 Serisi bileşiklerin ayrılması ve miktar yapılırGaz Kromatografi (GC), alev iyonizasyon dedektörü (FID) ve ile donatılmıştır (Şekil 5), Agilent HP-1 kolon (10 mx 0.53 mm x 2.65 mm) ve taşıyıcı gaz olarak O (sabit akış = 5 ml / dak , hız = 39 cm / sn). Sıcaklık programı başladı 40 ° C 14 artış, 1 dakika boyunca muhafaza ° C / dak - 180 ° C (2 dakika), daha sonra 40 ° C / dak - 200 ° C ve 200 ° C&#39;de muhafaza 2 dk . </li><li> Bileşiklerin Geçici kimlik taşıyıcı gaz olarak Supelco MDN-5S kolon (30 mx 0.32 mm x 0.25 mm) ile donatılmış bir Finnigan MAT 8230 kütle spektrometresi (MS) ile birleştiğinde bir Varian 3400 GC, ve O ile yürütülmektedir. MS 250 elektron iyonizasyon (EI) ve toplam iyon kromatogram (TIC) modu işletilmektedir ° C (kaynak sıcaklığı). Programı 35 ° C (1 dak), 4 ° C / dak 170 ° C, 15 ° C / dak - 280 ° C artış başladı </li><li> Bileşikler, geçici olarak, NIST kütüphane ve b ile spektral veri karşılaştırması tarafından belirleneny GC tutma indeksi ve piyasada bulunan bileşikler ile retansiyon zamanlarını karşılaştırarak. </li></ol> 10. Temsilcisi Sonuçlar: Yirmi iki uçucu yaban mersini yaprakları (Şekil 6) tespit edildi. Şekil 7 hasarsız yaban mersini yapraklarından bir temsilcisi kromatograf gösterir ve çingene güvesi tarafından beslenme hasar bırakır. Çingene güvesi tırtıllar tarafından mekanik hasar ve besleme denetimleri (Şekil 8) göre, yaban mersini yaprakları yerel uçucu salınımını da artırmıştır . Tırtıl beslenme ile karşılaştırıldığında, Meja tedavi çingene güvesi (Şekil 9) tarafından uyarılan 17 bileşiklerin 11 uyarılan. Ancak uçucu sistemik indüksiyon hasarsız ilk besleme hasar (yani, iç sinyalizasyon eksikliği) (Şekil 10) yedi gün sonra çingene güvesi zarar gören bitkilerin yapraklarından elde hiçbir kanıt vardı. Buna ek olarak, bir hafta sonra, çok yavaş hareketkırmızı boya-yaban mersini bitkilerin dalları arasında (Şekil 11) gözlenmiştir. Tek dal içinde yapraklar arasında yüksek vasküler bağlantı vardı. Ancak, iki dikey dalları, bir ateş içinde uyumlu ve düşük bir ateş ters tarafta iki dalı arasındaki bağlantı arasında orta-düşük bağlantı vardı. HIPVs (Şekil 12) maruz karşı HIPVs maruz dallarından yayılan uçucu miktarları arasında fark yoktu. Ancak, HIPVs yaban mersini dış savunma sinyalleri olarak hareket ederler. Çingene güve tırtıllar yapraklar üzerinde beslenen, daha önce maruz bırakılmayan kontrol yapraklar (Şekil 13) beslenenlere kıyasla% 71 daha az yaprak malzeme tüketilen HIPVs maruz . Ayrıca, yaprak alanı HIPV maruz dalları tüketilen miktarı başına yayılan uçucu miktarlarda gösteren, Pozlanmamış dalları (Şekil 14) ile karşılaştırıldığında 4 kat daha yüksektir HIPV-ex yaprak<html> yarattığı dalları herbivory (yani onlar astarlanmalıdır) daha duyarlı. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig1.jpg" alt="Şekil 1"/> Şekil 1 A itme-çekme sistemi, yaban mersini bitkilerden uçucu toplamak için kullanılır . Bitkiler cam odaları içine yerleştirilir ve temiz hava onlara geçti. Adsorban bir madde içeren bir filtre, bitkinin yayılan tuzak uçucu her odasının yan bağlanmıştır. Vakum filtre yoluyla odanın içindeki havayı çekmek için kullanılır. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig2.jpg" alt="Şekil 2"/> Şekil 2. yaban mersini bitkilerden uçucu sistemik yanıt çalışmak için, daha düşük yaban mersini dalları ya çingene güvesi tırtıllar (sağ kamara) veya sol (sol hasarsız odası) tarafından hasar gördü . 2 gün (3 gün) sonra, hasarlı ve hasarsız bitkileri hasarsız üst dallarından uçucu toplanmıştır. <html> ontent &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig3.jpg" alt="Şekil 3"/> Şekil 3 hasarsız dalları yaprakları hasarlı dallarından HIPVs cevap olup olmadığını sınamak için, yaban mersini bitkileri her bir şube torbalı. Daha sonra bitkilerin yarısının çanta içinde çingene güvesi tırtıllar yerleştirilir. Ben içeriden çanta dışında uçucu hareketi izin çantalar. Bitkiler HIPVs hasarsız dalları ortaya çıkarmak için Pleksiglas odaları içine yerleştirildi. Uçucu sonra maruz şubesi toplandı. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig4.jpg" alt="Şekil 4"/> Şekil 4 hasarsız dallarından yapraklar HIPVs için maruz kaldıktan sonra &quot;astarlanmalıdır&quot; olup olmadığını test etmek için deneyler Şekil 3&#39;te anlatıldığı gibi ama çingene güvesi tırtıllar her uçucu toplama haznesi içinde HIPV maruz kalan ve maruz kalmamış dalları yerleştirildi tekrarlandı . g &quot;alt =&quot; Şekil 5 &quot;/&gt; Şekil 5 uçucu koleksiyonları sonra, örnekler, yaban mersini bitkileri yayılan uçucu tanımlamak ve ölçmek için gaz kromatografisi (GC) üzerine enjekte edilir . <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig6.jpg" alt="Şekil 6"/> Şekil 6: en az 22 bileşikleri, yaban mersini yapraklarından yayılan. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig7.jpg" alt="Şekil 7"/> Şekil 7 hasarsız yaban mersini Tipik Kromatograflar yaprakları ve çingene güvesi tırtıllar tarafından hasar bırakır. Uçucu hasarsız yaban mersini yapraklarından çok düşük miktarda yayılır. Ancak, yapraklar, çingene güvesi tırtıllar zarar gördüğünde, uçucu emisyonu önemli ölçüde artmıştır. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig8.jpg" alt="Şekil 8"/> Şekil 8 grafik hasarsız yaprakları, m yayılan her 22 uçucu tutarları gösteriryaprakları echanically hasar ve çingene güvesi tırtıllar tarafından hasar bırakır. Tırtıllar tarafından kaldırılan yaprak alanı miktarını taklit Yapay hasar yaban mersini yapraklarından uçucu emisyonu artmış ancak yanıt çingene güvesi besleme yaprak uçucu tepkisi farklı oldu. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig9.jpg" alt="Şekil 9"/> Şekil 9 JA yolu yaban mersini yapraklarında uçucu emisyon düzenler olup olmadığını test edilmiştir . Bitkiler, Meja farklı miktarlarda püskürtülür. Eksojen olarak uygulanan Meja artan konsantrasyonlarda yaban mersini yapraklarından uçucu emisyonlarının arttığı bulundu. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig10.jpg" alt="Şekil 10"/> Şekil 10 grafik kontrol yaban mersini dalları ve çingene güvesi zarar görmüş bitkiler (sistemik yanıt) zarar görmemiş dallarından yayılan uçucu toplam tutarı gösterir. Uçucu bir toplandı7 gün üst üste tal. Ben bitkilerin alt dalları ilk hasarından sonra bile uçucu 7 gün sistemik indüksiyon bulundu. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig11.jpg" alt="Şekil 11"/> Şekil 11 yaban mersini bitkileri içinde şube arasında damar bağlantısı derecesini belirlemek için rodamin-B (kırmızı boya). Ben yaklaşık bulundu. % 80,% 20,% 5 ve% 0 boya içeren dalları yaprakları, boya, şube, şube genelinde içeren boya ve böğürtlenli bir tesis içinde farklı bir ateş bulunan şubesi içeren doğrudan şube yukarıda dalları sırasıyla; tam boya ile boyandı. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig12.jpg" alt="Şekil 12"/> Şekil 12 grafik HIPVs ve Pozlanmamış dalları maruz dallarından yayılan uçucu miktarını gösterir. HIPVs için maruz neigh uçucu emisyonu etkileyebilir olmadığını bulunduhasarsız yaban mersini dalları sıkıcı. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig13.jpg" alt="Şekil 13"/> Şekil 13 grafik, çingene güvesi HIPVs ve Pozlanmamış dalları maruz kalan yaban mersini dalları üzerinde tırtıllar tarafından beslenme miktarını gösterir . Tırtıllar HIPV maruz dalları Pozlanmamış dalları ile karşılaştırıldığında, daha az miktarda bitki örtüsü tüketilmektedir. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig14.jpg" alt="Şekil 14"/> Şekil 14 tüketilen alan başına emisyon oranı hesaplanır, HIPV-maruz dalları Pozlanmamış dalları ile karşılaştırıldığında artan bir uçucu yanıt yaban mersini dalları yaprakları astarlanmalıdır HIPVs maruz kalmanın belirten Uçucu maddelerin emisyon oranları artmış olduğu bulundu.

<ol>
	<li>Dicke, M., Van Loon, J. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multitrophic+effects+of+herbivore-induced+plant+volatiles+in+an+evolutionary+context.">Multitrophic effects of herbivore-induced plant volatiles in an evolutionary context.</a> Entomol. Exp. Appl. 97, 237-237 (2000).</li><li>Mumm, R., Dicke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+natural+plant+products+and+the+attraction+of+bodyguards+involved+in+indirect+plant+defense.">Variation in natural plant products and the attraction of bodyguards involved in indirect plant defense.</a> Can. J. Zool. 88, 628-628 (2010).</li><li>Hopke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbivore-induced+volatiles:+the+emission+of+acyclic+homoterpenes+from+leaves+of+Phaseolus+lunatus+and+Zea+mays+can+be+triggered+by+a+&#946;-glucosidase+and+jasmonic+acid.">Herbivore-induced volatiles: the emission of acyclic homoterpenes from leaves of Phaseolus lunatus and Zea mays can be triggered by a &#946;-glucosidase and jasmonic acid.</a> FEBS Lett. 352, 146-146 (1994).</li><li>Rodriguez-Saona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+electrophysiological+responses+of+the+emerald+ash+borer,+Agrilus+planipennis,+to+induced+volatiles+of+Manchurian+ash,+Fraxinus+mandshurica.">Behavioral and electrophysiological responses of the emerald ash borer, Agrilus planipennis, to induced volatiles of Manchurian ash, Fraxinus mandshurica.</a> Chemoecology. 16, 75-75 (2006).</li><li>Rodriguez-Saona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbivore+induced+volatiles+in+the+perennial+shrub,+Vaccinium+corymbosum,+and+their+role+in+inter-branch+signaling.">Herbivore induced volatiles in the perennial shrub, Vaccinium corymbosum, and their role in inter-branch signaling.</a> J. Chem. Ecol. 35, 163-163 (2009).</li><li>Karban, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage-induced+resistance+in+sagebrush:+volatiles+are+key+to+intra-+and+interplant+communication.">Damage-induced resistance in sagebrush: volatiles are key to intra- and interplant communication.</a> Ecology. 87, 922-922 (2006).</li><li>Frost, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Within-plant+signalling+by+volatiles+overcomes+vascular+constraints+on+systemic+signalling+and+primes+responses+against+herbivores.">Within-plant signalling by volatiles overcomes vascular constraints on systemic signalling and primes responses against herbivores.</a> Ecol. Lett. 10, 490-490 (2007).</li><li>Heil, M., Bueno Silva, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Within-plant+signaling+by+volatiles+leads+to+induction+and+priming+of+an+indirect+plant+defense+in+nature.">Within-plant signaling by volatiles leads to induction and priming of an indirect plant defense in nature.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 5467-5467 (2007).</li><li>Turlings, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploitation+of+herbivore-induced+plant+odors+by+host-seeking+parasitic+wasps.">Exploitation of herbivore-induced plant odors by host-seeking parasitic wasps.</a> Science. 250, 1251-1251 (1990).</li><li>Makovic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volatiles+involved+in+the+nonhost+rejection+of+Fraxinus+pennsylvanica+by+Lymantria+dispar+larvae.">Volatiles involved in the nonhost rejection of Fraxinus pennsylvanica by Lymantria dispar larvae.</a> J. Agric. Food Chem. 44, 929-929 (1996).</li></ol>

Ifşa etmek için hiçbir şey var

Burada anlatılan, itme-çekme uçucu toplama cihazı bitki uçucu headspace koleksiyonları için standart bir yöntem temsil. Bu cihaz herbivory çingene güvesi tırtıllar tarafından yaban mersini yapraklarından uçucu yanıt belirlemek için kullanılan ve aynı zamanda tesis içi sinyalizasyon HIPVs rolü için yeni kanıtlar sunmak için bana izin verildi. Sonuçları bu tırtıl beslenme, Eksojen olarak uygulanan Meja burada sunulan ve mekanik yaralama farklı olsa da, hasar yerind...

<table border="1"><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Uçucu toplama odaları </td><td> Analitik Araştırma Systems, Inc. </td><td> VCC-G6X12DT-1P </td><td> Gainesville, FL </td></tr><tr><td> Hava kompresörü, 20 gal, yağsız, 2 hp </td><td> Batıya doğru </td><td> 3JR71 </td><td> Grainger, Inc. Satılıyor </td></tr><tr><td> Hava dağıtım sistemi </td><td> Analitik Araştırma Systems, Inc. </td><td> VCS-ADS-4AFM4C </td><td> Gainesville, FL </td></tr><tr><td> Hava toplama sistemi </td><td> Analitik Araştırma Systems, Inc. </td><td> VCS-motorlu taşıt kazaları-4CX1P </td><td> Gainesville, FL </td></tr><tr><td> Vakum pompası 100-150V, ¼ hp </td><td> Gast Manufacturing, Inc. </td><td> <a href="http://www.grainger.com/Grainger/GAST-Vacuum-Pump-4F740">4F740</a> </td><td> Grainger, Inc. Satılıyor </td></tr><tr><td> Metil jasmonate </td><td> Sigma-Aldrich &lt;/ Td&gt; <td> J2500 </td><td> St Louis, MO </td></tr><tr><td> Tween-20 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 93773 </td><td> St Louis, MO </td></tr><tr><td> Rodamin-B </td><td> Sigma-Aldrich </td><td></td><td> St Louis, MO </td></tr><tr><td> Plastik sprey şişeleri, 2 oz </td><td> Setco Inc. </td><td></td><td> Cranbury, NJ </td></tr><tr><td> Spun polyester kolları </td><td> Rockingham Olanakları Corp. </td><td></td><td> Reidsville, NC </td></tr><tr><td> Super-Q uçucu toplama tuzakları </td><td> Analitik Araştırma Systems, Inc. </td><td> VCT-1/4X3-SPQ </td><td> Gainesville, FL </td></tr><tr><td> Filiz Resim Yazılımı </td><td> Filiz Corporation&#39;ın </td><td></td><td> Frederick, MD </td></tr><tr><td> Diklorometan </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 270997 </td><td> St Louis, MO </td></tr><tr><td> Gaz kromatograf HP 6890 </td><td> Hewlett Packard </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gaz kromatograf Varian 3400 </td><td> Varian </td><td&gt; </td><td></td></tr><tr><td> n-oktan </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 296988 </td><td> St Louis, MO </td></tr><tr><td> Kütle spektrometresi MAT 8230 </td><td> Finnigan </td><td></td><td> San Jose, CA </td></tr><tr><td> HP-1 GC sütun </td><td> Agilent Technologies </td><td></td><td> Palo Alto, CA </td></tr><tr><td> MDN-5S GC sütun </td><td> Supelco, Inc. </td><td></td><td> Bellefonte, PA </td></tr></table>

herbivore-induced blueberry volatiles and intra-plant signaling

Otobur kaynaklı bitki uçucu (HIPVs) yaygın otobur saldırı 1,2 sonra bitkilerden yayılan. Bu HIPVs ağırlıklı olarak savunma bitki hormonu Jasmonik asit (JA) ve uçucu türev metil jasmonate (Meja) 3,4,5 tarafından düzenlenir. Son 3 yılda araştırmacılar içinde püskürtmek veya HIPVs çekmek otobur, otçul doğal düşmanları çekmek ve bazı durumlarda otobur saldırı öncesinde tetikleyebilir ya da asal bitki savunma olduğunun belgelenmesi var. Son bir kağıt 6, çingene güvesi tırtıllar, eksojen Meja uygulama, ve mekanik hasar farklı olsa da, yaban mersini bitkiler uçucu emisyon neden bu besleme bildirdi . Buna ek olarak, yaban mersini dalları, JA ve otobur (yani, doğrudan bitki savunması) direnç seviyelerini artırarak komşu aynı bitki dalları yayılan HIPVs ve priming uçucu emisyon (yani, dolaylı bitki savunmaları). Bulmak Benzerbulgular adaçayı 7, kavak 8 ve lima fasulye 9 bildirilmiştir .. Burada, otobur (çingene güvesi) beslenme, eksojen Meja uygulaması ve mekanik hasarlara yol açtığı yaban mersini uçucu toplamak için bir itme-çekme yöntemi açıklar. Uçucu toplama ünitesi, 4 L uçucu toplama odası, 2-parçalı giyotin gelen hava arındırır bir hava dağıtım sistemi ve uçucu 5,6,10 toplamak için Super-Q adsorban ile dolu bir tuzak bağlı bir vakum sistemi oluşur . Super-Q tuzakları toplanan uçucu diklorometan ile yıkandı ve sonra ayrılmış ve Gaz Kromatografisi (GC) kullanılarak kantitatif. Bu uçucu toplama yöntemi, yaban mersini bitkileri içinde hasarlı dalları otobur hasarsız şube uçucu için maruz uçucu yanıt araştırmak için kullanılır n benim çalışma 6 oldu . Bu yöntemler aşağıda açıklanmıştır. Kısaca, hasarsız yaban mersini dalları fro HIPVs maruzm aynı tesis içinde komşu dalları. Yukarıda açıklanan aynı teknikleri kullanarak, HIPVs için maruz kaldıktan sonra dallarından yayılan uçucu toplanır ve analiz edilir.

Watch this Scientific Journal Video about Herbivore-induced Blueberry Volatiles and Intra-plant Signaling at JoVE.com

Herbivore-induced Blueberry Volatiles and Intra-plant Signaling

Bitki uçucu toplamak için bir itme-çekme yöntemi açıklanmıştır. Bu yöntem, otçul beslenme, eksojen metil jasmonate ve mekanik hasar kaynaklanan uçucu bir karşılaştırma için sağlar. Bu teknik aynı zamanda yaban mersini bitkileri içinde hasarlı dalları otobur uçucu için maruz hasarsız şube uçucu yanıtını araştırmak için kullanılır.

Otobur bağlı Blueberry uçucu ve Intra-bitki Sinyalleşme

Herbivore-induced plant volatiles (HIPVs) are commonly emitted from plants after herbivore attack1,2.  These HIPVs are mainly regulated by the defensive ...

herbivore-induced-blueberry-volatiles-and-intra-plant-signaling

Research

JoVE Journal

Biology

16.3K Görüntüleme.  Rutgers University. Bitki uçucu toplamak için bir itme-çekme yöntemi açıklanmıştır. Bu yöntem, otçul beslenme, eksojen metil jasmonate ve mekanik hasar kaynaklanan uçucu bir karşılaştırma için sağlar. Bu teknik aynı zamanda yaban mersini bitkileri içinde hasarlı dalları otobur uçucu için maruz hasarsız şube uçucu yanıtını araştırmak için kullanılır.

Video: Herbivore-induced Blueberry Volatiles and Intra-plant Signaling

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in live cells. Here we describe the method used in our laboratories for loading suspensions of human sperm with Ca2+-reporting dyes and measuring the fluorescence signal during physiological stimulation. Motile cells are isolated by direct swim-up and incubated under capacitating conditions for 0-24 h, depending upon the experiment. The cell-permeant AM (acetoxy methyl ester) ester form of the Ca2+-reporting dye is then added to a cell aliquot and a period of 1 h is allowed for loading of the dye into the cytoplasm. We use visible wavelength dyes to minimize photo-damage to the cells, but this means that ratiometric recording is not possible. Advantages and disadvantages of this approach are discussed. During the loading period cells are introduced into an imaging chamber and allowed to adhere to a poly-D-lysine coated coverslip. At the end of the loading period excess dye and loose cells are removed by connection of the chamber to the perfusion apparatus. The chamber is perfused continuously, stimuli and modified salines are then added to the perfusion header. Experiments are recorded by time-lapse acquisition of fluorescence images and analyzed in detail offline, by manually drawing regions of interest. Data are normalized to pre-stimulus levels such that, for each cell (or part of a cell), a graph showing the Ca2+ response as % change in fluorescence is obtained.

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Stimulus-evoked [Ca2+]i signals of individual human sperm are assessed. Motile cells are loaded with Ca2+-sensitive fluorescent dye (AM-ester method) and immobilised in a perfusable chamber. Cells are imaged by time-lapse fluorescence microscopy and stimulated via the perfusing medium. Responses of single cells (or regions) are analysed offline using Excel.

Görüntüleme Ca Teknikleri 2 + İnsan Sperm sinyal

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Biyoloji

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of muscle specification, formation and function in model systems has provided valuable insight into muscle physiology. Therefore, identifying and characterizing molecular mechanisms that underlie muscle damage is critical. The structure of adult Drosophila multi-fiber muscles resemble vertebrate striated muscles 1 and the genetic tractability of Drosophila has made it a great system to analyze dystrophic muscle morphology and characterize the processes affecting muscular function in ageing adult flies 2. Here we present the histological technique for preparing paraffin-embedded and frozen sections of Drosophila thoracic muscles. These preparations allow for the tissue to be stained with classical histological stains and labeled with protein detecting dyes, and specifically cryosections are ideal for immunohistochemical detection of proteins in intact muscles. This allows for analysis of muscle tissue structure, identification of morphological defects, and detection of the expression pattern for muscle/neuron-specific proteins in Drosophila adult muscles. These techniques can also be slightly modified for sectioning of other body parts.

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Identification of mechanisms underlying muscle damage is crucial. Here we present the histological technique for preparing paraffin-embedded and frozen sections of Drosophila thoracic muscles. This allows analysis of muscle morphology and localization of protein and other muscle cell components.

Parafin ve Dondurulmuş Bölüm Drosophila Yetişkin Kaslar

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of ...

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Cell polarity is a fundamental property of eukaryotic cells that is dynamically regulated by both intrinsic and extrinsic factors during embryonic development 1, 2. One of the signaling pathways involved in this regulation is the Wnt pathway, which is used many times during embryogenesis and critical for human disease3, 4, 5. Multiple molecular components of this pathway coordinately regulate signaling in a spatially-restricted manner, but the underlying mechanisms are not fully understood. Xenopus embryonic epithelial cells is an excellent system to study subcellular localization of various signaling proteins. Fluorescent fusion proteins are expressed in Xenopus embryos by RNA microinjection, ectodermal explants are prepared and protein localization is evaluated by epifluorescence. In this experimental protocol we describe how subcellular localization of Diversin, a cytoplasmic protein that has been implicated in signaling and cell polarity determination6, 7 is visualized in Xenopus ectodermal cells to study Wnt signal transduction8. Coexpression of a Wnt ligand or a Frizzled receptor alters the distribution of Diversin fused with red fluorescent protein, RFP, and recruits it to the cell membrane in a polarized fashion 8, 9. This ex vivo protocol should be a useful addition to in vitro studies of cultured mammalian cells, in which spatial control of signaling differs from that of the intact tissue and is much more difficult to analyze.

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Xenopus embryonic ectoderm has become an attractive model for studies of cell polarity. An assay is described, in which subcellular distribution of fluorescent proteins is assessed in ectoderm cells. This protocol will help address questions related to spatial control of signaling.

Floresan Proteinleri Polarize Translokasyon Xenopus Wnt Sinyalizasyonu Cevabı Ektoderm

Cell polarity is a fundamental property of eukaryotic cells that is dynamically regulated by both intrinsic and extrinsic factors during embryonic ...

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Oxidative stress has been implicated in a number of pathologic conditions including ischemia/reperfusion damage and sepsis. The concept of oxidative stress refers to the aberrant formation of ROS (reactive oxygen species), which include O2&bull;-, H2O2, and hydroxyl radicals. Reactive oxygen species influences a multitude of cellular processes including signal transduction, cell proliferation and cell death1-6. ROS have the potential to damage vascular and organ cells directly, and can initiate secondary chemical reactions and genetic alterations that ultimately result in an amplification of the initial ROS-mediated tissue damage. A key component of the amplification cascade that exacerbates irreversible tissue damage is the recruitment and activation of circulating inflammatory cells. During inflammation, inflammatory cells produce cytokines such as tumor necrosis factor-&alpha; (TNF&alpha;) and IL-1 that activate endothelial cells (EC) and epithelial cells and further augment the inflammatory response7. Vascular endothelial dysfunction is an established feature of acute inflammation. Macrophages contribute to endothelial dysfunction during inflammation by mechanisms that remain unclear. Activation of macrophages results in the extracellular release of O2&bull;- and various pro-inflammatory cytokines, which triggers pathologic signaling in adjacent cells8. NADPH oxidases are the major and primary source of ROS in most of the cell types. Recently, it is shown by us and others9,10 that ROS produced by NADPH oxidases induce the mitochondrial ROS production during many pathophysiological conditions. Hence measuring the mitochondrial ROS production is equally important in addition to measuring cytosolic ROS. Macrophages produce ROS by the flavoprotein enzyme NADPH oxidase which plays a primary role in inflammation. Once activated, phagocytic NADPH oxidase produces copious amounts of O2&bull;- that are important in the host defense mechanism11,12. Although paracrine-derived O2&bull;- plays an important role in the pathogenesis of vascular diseases, visualization of paracrine ROS-induced intracellular signaling including Ca2+ mobilization is still hypothesis. We have developed a model in which activated macrophages are used as a source of O2&bull;- to transduce a signal to adjacent endothelial cells. Using this model we demonstrate that macrophage-derived O2&bull;- lead to calcium signaling in adjacent endothelial cells.

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

An efficient method to gain insights into visualizing the paracrine-derived ROS induction of endothelial Ca2+ signaling is described. This method takes advantage of measuring paracrine derived ROS triggered Ca2+ mobilization in vascular endothelial cells in a co-culture model.

Vasküler Ca Görselleştirme 2 + Parakrin Türetilmiş ROS tarafından tetiklenmiş Sinyal

Oxidative stress has been implicated in a number of pathologic conditions including ischemia/reperfusion damage and sepsis. The concept of oxidative ...

Electroantennographic Bioassay as a Screening Tool for Host Plant Volatiles

Plant volatiles play an important role in plant-insect interactions. Herbivorous insects use plant volatiles, known as kairomones, to locate their host plant.1,2 When a host plant is an important agronomic commodity feeding damage by insect pests can inflict serious economic losses to growers. Accordingly, kairomones can be used as attractants to lure or confuse these insects and, thus, offer an environmentally friendly alternative to pesticides for insect control.3 Unfortunately, plants can emit a vast number volatiles with varying compositions and ratios of emissions dependent upon the phenology of the commodity or the time of day. This makes identification of biologically active components or blends of volatile components an arduous process. To help identify the bioactive components of host plant volatile emissions we employ the laboratory-based screening bioassay electroantennography (EAG). EAG is an effective tool to evaluate and record electrophysiologically the olfactory responses of an insect via their antennal receptors. The EAG screening process can help reduce the number of volatiles tested to identify promising bioactive components. However, EAG bioassays only provide information about activation of receptors. It does not provide information about the type of insect behavior the compound elicits; which could be as an attractant, repellent or other type of behavioral response. Volatiles eliciting a significant response by EAG, relative to an appropriate positive control, are typically taken on to further testing of behavioral responses of the insect pest. The experimental design presented will detail the methodology employed to screen almond-based host plant volatiles4,5 by measurement of the electrophysiological antennal responses of an adult insect pest navel orangeworm (Amyelois transitella) to single components and simple blends of components via EAG bioassay. The method utilizes two excised antennae placed across a "fork" electrode holder. The protocol demonstrated here presents a rapid, high-throughput standardized method for screening volatiles. Each volatile is at a set, constant amount as to standardize the stimulus level and thus allow antennal responses to be indicative of the relative chemoreceptivity. The negative control helps eliminate the electrophysiological response to both residual solvent and mechanical force of the puff. The positive control (in this instance acetophenone) is a single compound that has elicited a consistent response from male and female navel orangeworm (NOW) moth. An additional semiochemical standard that provides consistent response and is used for bioassay studies with the male NOW moth is (Z,Z)-11,13-hexdecadienal, an aldehyde component from the female-produced sex pheromone.6-8

A method to rapidly screen host plant volatiles by measurement of the electrophysiological response of adult navel orangeworm (Amyelois transitella) antennae to single components and blends via electroantennographic analysis is demonstrated.

Konak Bitki uçucu için bir tarama aracı olarak Electroantennographic Biyoassay

Plant volatiles play an important role in plant-insect interactions. Herbivorous insects use plant volatiles, known as kairomones, to locate their host ...

Mechanical Stimulation-induced Calcium Wave Propagation in Cell Monolayers: The Example of Bovine Corneal Endothelial Cells

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the brain, liver, retina, cochlea and vasculature. In experimental settings, intercellular Ca2+-waves can be elicited by applying a mechanical stimulus to a single cell. This leads to the release of the intracellular signaling molecules IP3 and Ca2+ that initiate the propagation of the Ca2+-wave concentrically from the mechanically stimulated cell to the neighboring cells. The main molecular pathways that control intercellular Ca2+-wave propagation are provided by gap junction channels through the direct transfer of IP3 and by hemichannels through the release of ATP. Identification and characterization of the properties and regulation of different connexin and pannexin isoforms as gap junction channels and hemichannels are allowed by the quantification of the spread of the intercellular Ca2+-wave, siRNA, and the use of inhibitors of gap junction channels and hemichannels. Here, we describe a method to measure intercellular Ca2+-wave in monolayers of primary corneal endothelial cells loaded with Fluo4-AM in response to a controlled and localized mechanical stimulus provoked by an acute, short-lasting deformation of the cell as a result of touching the cell membrane with a micromanipulator-controlled glass micropipette with a tip diameter of less than 1 &mu;m. We also describe the isolation of primary bovine corneal endothelial cells and its use as model system to assess Cx43-hemichannel activity as the driven force for intercellular Ca2+-waves through the release of ATP. Finally, we discuss the use, advantages, limitations and alternatives of this method in the context of gap junction channel and hemichannel research.

Intercellular Ca2+-waves are driven by gap junction channels and hemichannels. Here, we describe a method to measure intercellular Ca2+-waves in cell monolayers in response to a local single-cell mechanical stimulus and its application to investigate the properties and regulation of gap junction channels and hemichannels.

Hücre Tek katmanlar mekanik uyarılması bağlı Kalsiyum Dalga Yayılım: Sığır Kornea Endotel Hücreleri Örneği

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the ...

Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

Plasma membrane microdomains are features based on the physical properties of the lipid and sterol environment and have particular roles in signaling processes. Extracting sterol-enriched membrane microdomains from plant cells for proteomic analysis is a difficult task mainly due to multiple preparation steps and sources for contaminations from other cellular compartments. The plasma membrane constitutes only about 5-20% of all the membranes in a plant cell, and therefore isolation of highly purified plasma membrane fraction is challenging. A frequently used method involves aqueous two-phase partitioning in polyethylene glycol and dextran, which yields plasma membrane vesicles with a purity of 95% 1. Sterol-rich membrane microdomains within the plasma membrane are insoluble upon treatment with cold nonionic detergents at alkaline pH. This detergent-resistant membrane fraction can be separated from the bulk plasma membrane by ultracentrifugation in a sucrose gradient 2. Subsequently, proteins can be extracted from the low density band of the sucrose gradient by methanol/chloroform precipitation. Extracted protein will then be trypsin digested, desalted and finally analyzed by LC-MS/MS. Our extraction protocol for sterol-rich microdomains is optimized for the preparation of clean detergent-resistant membrane fractions from Arabidopsis thaliana cell cultures.
We use full metabolic labeling of Arabidopsis thaliana suspension cell cultures with K15NO3 as the only nitrogen source for quantitative comparative proteomic studies following biological treatment of interest 3. By mixing equal ratios of labeled and unlabeled cell cultures for joint protein extraction the influence of preparation steps on final quantitative result is kept at a minimum. Also loss of material during extraction will affect both control and treatment samples in the same way, and therefore the ratio of light and heave peptide will remain constant. In the proposed method either labeled or unlabeled cell culture undergoes a biological treatment, while the other serves as control 4.

Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

Here we describe a robust method for the fractionation of plant plasma membranes into detergent resistant and detergent soluble membranes based on a mixture of unlabeled and in vivo fully 15N labeled Arabidopsis thaliana cell cultures. The procedure is applied for comparative proteomic studies to understand signaling processes.

Mukayeseli Proteomik Analizi Metabolik Etiketleme ve Membran Fraksiyonasyon<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Süspansiyon Hücre Kültürleri

Plasma membrane microdomains are features based on the physical properties of the lipid and sterol environment and have particular roles in signaling ...

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

Technological advances have made genetically modified mice, including transgenic and gene knockout mice, an essential tool in many research fields. Adult cardiomyocytes are widely accepted as a good model for cardiac cellular physiology and pathophysiology, as well as for pharmaceutical intervention. Genetically modified mice preclude the need for complicated cardiomyocyte infection processes to generate the desired genotype, which are inefficient due to cardiomyocytes&#8217; terminal differentiation. Isolation and culture of high quantity and quality functional cardiomyocytes will dramatically benefit cardiovascular research and provide an important tool for cell signaling transduction research and drug development. Here, we describe a well-established method for isolation of adult mouse cardiomyocytes that can be implemented with little training. The mouse heart is excised and cannulated to an isolated heart system, then perfused with a calcium-free and high potassium buffer followed by type II collagenase digestion in Langendorff retrograde perfusion mode. This protocol yields a consistent result for the collection of functional adult mouse cardiomyocytes from a variety of genetically modified mice.

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

We describe a reliable method for isolation of adult mouse cardiomyocytes. This protocol yields a consistent result for the culture of functional adult cardiomyocytes from a variety of genetically modified mice.

İzolasyon ve Kültür Yetişkin Fare Hücre Sinyal için kardiyomiyositlerin ve<em&gt; In vitro</em&gt; Kalp hipertrofisi

Technological advances have made genetically modified mice, including transgenic and gene knockout mice, an essential tool in many research fields. Adult ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial scientific task. Many disease causing genes in humans have a fly homologue, making Drosophila a good model to study signaling pathways involved in the development of different disorders. Additionally, the tractability of Drosophila simplifies genetic screens to aid in identifying novel therapeutic targets that may regulate metabolism. In order to perform such a screen a simple and fast method to identify changes in the metabolic state of flies is necessary. In general, carbon dioxide production is a good indicator of substrate oxidation and energy expenditure providing information about metabolic state. In this protocol we introduce a simple method to measure CO2 output from flies. This technique can potentially aid in the identification of genetic perturbations affecting metabolic rate.

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolic disorders are among one of the most common diseases in humans. The genetically tractable model organism D. melanogaster can be used to identify novel genes that regulate metabolism. This paper describes a relatively simple method which allows studying the metabolic rate in flies by measuring their CO2 production.

Metabolik Oranı Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Respirometrik kullanarak

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

LED Thermo Flow &#8212; Combining Optogenetics with Flow Cytometry

Optogenetic tools allow isolated, functional investigations of almost any signaling molecule within complex signaling pathways. A major obstacle is the controlled delivery of light to the cell sample and hence the most popular tools for optogenetic studies are microscopy-based cell analyses and in vitro experiments. The flow cytometer has major advantages over a microscope, including the ability to rapidly measure thousands of cells at single cell resolution. However, it is not yet widely used in optogenetics. Here, we present a device that combines the power of optogenetics and flow cytometry: the LED Thermo Flow. This device illuminates cells at specific wavelengths, light intensities and temperatures during flow cytometric measurements. It can be built at low cost and be used with most common flow cytometers. To demonstrate its utility, we characterized the photoswitching kinetics of Dronpa proteins in vivo and in real time. This protocol can be adapted to almost all optically controlled substances and substantially expands the set of possible experiments. More importantly, it will greatly simplify the discovery and development of new optogenetic tools.

Optically controlled substances are powerful tools to study signaling pathways. To expand the spectrum of possible experiments, we developed a device for studying optically controlled substances in real time using flow cytometry: the LED Thermo Flow.

LED Thermo Akışı - Akım Sitometrisi ile optogenetics birleştiren

Optogenetic tools allow isolated, functional investigations of almost any signaling molecule within complex signaling pathways. A major obstacle is the ...