Narenciye Araştırma ve Geliştirme Vakfı finansman sağlamak için kabul edilmektedir. Biyoanalizlere yürütmek için Melek Hoyte ve Michael Flores sayesinde.

<ol><li> Montajı bir, iki bağlantı noktası bölünmüş, özel olarak tasarlanmış T-salgılanan önceden Mann ve ark içinde tanımlanmıştır. 10, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Salgılanan bir T-labirent oluşturan bir Teflon şerit ile iki ayrı portu içine çatal bir 30 cm cam tüp oluşur. Her yarım denek iki potansiyel koku alanları arasında seçim sağlayan bir 2-seçim tarzı salgılanan bir kola benzer. <ol><li> Montaj ve sonraki deneyler sıcaklık kontrollü bir oda ya da çevre bölmesi içinde yer almalıdır. </li><li> Montaj cam T-labirent salgılanan dikey olarak Şekil 1&#39;de gösterildiği gibi ve bir floresan 900 lüks ampul altında yerleştirin. </li><li> Optimum ışık dağılımı için, montaj x 0,6 m opak konteyner muntazam ışık difüzyon maksimize etmek için bir 1.0 x 0.6 içinde monte edilmelidir. </li><li> Katı faz mikro ekstraksiyon tutma / koku kaynağı chamb muhafaza edilecektir koku kaynaklarına salgılanan kolları takın-cam tüp konnektörleri; teflon aracılığıyla er (SPMEC) (ARS, Inc, Gainesville, FL). Her SPMEC gelen ve giden hava akışı (Şekil 1) için bir giriş ve çıkış vanası ile desteklenen düz bir cam tüp (x 3,5 cm genişliğinde 17,5 cm uzunluğunda) oluşmaktadır. </li><li> Sabit basınç (harici kaynaklardan doluysa hava dağıtım sistemi nemlendirme için hava temizleme için dahili bir karbon filtre ve hava bubbler ikisi var) altında nemlendirilmesi ve karbon-saflaştırılmış hava harici bir kaynak için hava dağıtım sistemi bağlayın. </li><li> Böyle bir pamuk fitil (Petty John Ambalaj A.Ş., Concord, NC) olarak yavaş salınımlı yüzeye uygun seyreltici (çözücü) ve pipet içinde istenen kimyasal örnekler çözülür. Kontrol tedavi sadece çözücü emdirilmiş bir pamuk fitil oluşmalıdır. </li><li> Cam önemli kirlenmesini önlemek için, laboratuar dokusunda tedavi ve kontrol pamuk fitilleri (Kimwipes, Kimberly-Clark, Roswell zarfın, GA) ve iki SPMEC silah (ARS, Inc, Gainesville, FL) içine yerleştirin. Canlı bitki örnekleri durumunda, bir giyotin uçucu toplama haznesi SPMEC yerine (Şekil 1) ihtiva eden tedaviler salgılanan eklenebilir. </li><li> Saflaştırıldı ve bir hava dağıtım sistemi (bkz. Şekil 1) bağlı iki pompa vasıtasıyla SPMEC (ya da giyotin uçucu oda) ile nemlendirilmiş hava sunun. 0,1 L / salgılanan kolları hem aracılığıyla dk hava akımı hızı koruyun. </li></ol></li><li> Varsayılan kovucular da artropod cevabı test etmek için salgılanan istihdam. Mevcut tarifte, bir böcek hemipteran, Asya narenciye psyllid, Diaphorina citri, bir test artropod olarak kullanılmıştır. Tepki narenciye uçucular tek veya kombine olarak bir kovucu (dimetil disülfür) ve koku kaynağı olarak temiz hava ile karşı test edilmiştir. <ol><li> Standart sıcaklık ve bağıl nem tüm deneyler yürütmek. </li><li> Önce tüm testleri, t maruzest konular konumsal sapma veya denek davranışları üzerinde çözücü bir etki olmaması doğrulamak için T-labirent salgılanan hava karşı temiz hava veya solvent karşısında temiz hava temizlemek için. </li><li> Rasgele her bir bioassay başında salgılanan ve bir kolu için bir koku kaynağı atama. Her 10 denek test sonrası pozisyonel yanlılık potansiyelini ortadan kaldırmak için, en azından, bu pozisyon Ters. </li><li> En az 30 (ve üstü 120) tedavi kombinasyonu başına deneklerin tepkisi sınayın. </li><li> Denekler 100-300 sn önce kurulmuş yanıt (gecikme) aralığına dayalı bir davranışsal tepki göstermeye izin ver. </li><li> Rekor eğer konu tedavi kolunda, kontrol kolu girer veya serbest liman veya T-labirent bölümü aşağıda kalır. </li><li> Bir denek T-labirent ve ya salgılanan kolda içine hamle bölümü geçtiğinde bir tedavi veya kontrol kolu seçim Atar. </li><li> Ne zaman bir test s çıkarma kolu seçim Atarubject serbest liman veya T-labirent bölümü aşağıda kalır. </li><li> % 2 sabun solüsyonu ile iyice salgılanan ve bağlantı boruları temizleyin ve farklı koku tedavilerin kullanımı arasında 200 ° F &#39;de cam parçaları pişirin. </li><li> Varsayılan kovucu tedavileri ile veya temiz hava karşısında kimyasal arıtma olmaksızın T-labirent salgılanan sunulmuştur hangi testlerde, serbest noktada kalan deneklerin sayısını karşılaştırın ve tedaviler arasında salgılanan tek yönlü varyans analizi ile girmemek ( ANOVA) Tukey HSD testi (α &lt;0.05) izledi. Denekler serbest kolu terk ettiği durumlarda, Ki-kare (χ 2) α &lt;0.05 analizi ile tedavi kolunda karşı kontrol koldan numarasını karşılaştırın. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Resh, R. H., Card&#233;, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Encyclopedia of Insects. , (2003).</li><li>Aluja, M., Lesky, T. C., Vincent, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biorational tree-fruit pest management. , (2009).</li><li>Rodriquez-Saona, C., Stelinski, L. L., Peshin, R., Dhawan, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior-modifying+strategies+in+IPM:+Theory+and+Practice.">Behavior-modifying strategies in IPM: Theory and Practice.</a> Integrated Pest Management: Innovation - Development Process. , 261-311 (2009).</li><li>Card&#233;, R. T., Millar, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advances in insect chemical ecology. , (2004).</li><li>Knight, A. L., Stelinski, L. L., Hebert, V., Gut, L., Light, D., Brunner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+dispensers+simultaneously+releasing+pear+ester+and+sex+pheromone+for+disruption+of+codling+moth+(Lepidoptera:+Tortricidae).">Novel dispensers simultaneously releasing pear ester and sex pheromone for disruption of codling moth (Lepidoptera: Tortricidae).</a> Journal of Applied Entomology. 136 (1-2), 79-86 (2012).</li><li>Mann, R. S., Tiwari, S., Smoot, J. M., Rouseff, R. L., Stelinski, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repellency+and+toxicity+of+plant-based+essential+oils+and+their+constituents+against+Diaphorina+citri+Kuwayama+(Hemiptera:+Psyllidae).">Repellency and toxicity of plant-based essential oils and their constituents against Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae).</a> Journal of Applied Entomology. 136 (1-2), 87-96 (2012).</li><li>Forbes, A. A., Powell, H. Q., Stelinski, L. L., Smith, J. J., Feder, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequential+sympatric+speciation+across+trophic+levels.">Sequential sympatric speciation across trophic levels.</a> Science. 323 (5915), 776-779 (2009).</li><li>Kennedy, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visual+responses+of+flying+mosquitos.">The visual responses of flying mosquitos.</a> Proceedings of the Zoological Society of London A. 109 (4), 221-242 (1940).</li><li>Miller, J. R., Roelofs, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained-flight+tunnel+for+measuring+insect+responses+to+wind-borne+sex+pheromones.">Sustained-flight tunnel for measuring insect responses to wind-borne sex pheromones.</a> Journal of Chemical Ecology. 4 (2), 187-198 (1978).</li><li>Mann, R. S., Rouseff, R. L., Smoot, J. M., Castle, W. S., Stelinski, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulfur+volatiles+from+Allium+spp.+affect+Asian+citrus+psyllid,+Diaphorina+citri+Kuwayama+(Hemiptera:+Psyllidae),+response+to+citrus+volatiles.">Sulfur volatiles from Allium spp. affect Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae), response to citrus volatiles.</a> Bulletin of Entomological Research. 101 (1), 89-97 (2011).</li><li>Onagbola, E. O., Rouseff, R. L., Smoot, J. M., Stelinski, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guava+leaf+volatiles+and+dimethyl+disulfide+inhibit+response+of+Diaphorina+citri+Kuwayama+to+host+plant+volatiles.">Guava leaf volatiles and dimethyl disulfide inhibit response of Diaphorina citri Kuwayama to host plant volatiles.</a> Journal of Applied Entomology. 135 (6), 404-414 (2011).</li><li>Baker, T. C., Linn, C. E., Hummel, H., Miller, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wind+tunnels+in+pheromone+research.">Wind tunnels in pheromone research.</a> Techniques in Pheromone Research. , 75-110 (1984).</li><li>Stelinski, L. L., Rodriguez-Saona, C., Meyer, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+foreign+oviposition+marking+pheromone+in+a+multitrophic+context.">Recognition of foreign oviposition marking pheromone in a multitrophic context.</a> Naturwissenschaften. 96 (5), 585-592 (2009).</li><li>G&#246;k&#231;e, A., Stelinski, L. L., Whalon, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+electrophysiological+responses+of+leafroller+moths+to+selected+plant+extracts.">Behavioral and electrophysiological responses of leafroller moths to selected plant extracts.</a> Environmental Entomology. 34 (6), 1426-1432 (2005).</li><li>Ali, J. G., Alborn, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=herbivore-induced+plant+volatile+increases+biological+control+activity+of+multiple+beneficial+nematode+species+in+distinct+habitats.">herbivore-induced plant volatile increases biological control activity of multiple beneficial nematode species in distinct habitats.</a> PLoS ONE. 7 (6), e38146 (2012).</li><li>Mann, R. S., Ali, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+release+of+a+plant+defense+volatile+'deceptively'+attracts+insect+vectors+to+plants+infected+with+a+bacterial+pathogen.">Induced release of a plant defense volatile 'deceptively' attracts insect vectors to plants infected with a bacterial pathogen.</a> PLoS Pathogens. 8 (3), e1002610 (2012).</li></ol>

Yazar Narenciye Araştırma ve Geliştirme Vakfı tarafından sağlanan fon aldı.

Koku için yazıda, bir test cihazı ve protokol küçük eklembacaklılar (Psyllidae: Hemiptera Insecta) yanıtı ölçmek için tarif edilmiştir. Bu yöntem, bir böcek varsayılan cezbedici değerlendirmek testlerin durumunda iki odorant alanları arasında bir seçim yapmak için izin veren bir seçim testi içerir. Bundan başka, test konusu geçirmezliğini testlerin halinde, serbest kol serbest bırakma kolu ve iki potansiyel koku alanlar ya da bir girme, ya da geri kalan göre davranışları üç tip gösterebilir. Bu negatif geotactic (yukarı doğru hareket etme eğilimi) ve pozitif phototactic (ışığa doğru hareket etme eğilimi) birçok eklembacaklıların doğal davranışsal tepkisi yararlanır nedeniyle salgılanan yüksek verimlilik veri toplama için izin verir. Bugünkü gösterinin psyllid böcek testi örnek kullanmasına rağmen, tahlil kolayca, genel eklembacaklılar uçuş kullananlar veya ulaşım baskın modları olarak yürüyüş hem adapte edilebilir. 12 durulaştırmada önemli bir rol oynamıştır. Bu tür olfactometers ve özel tasarımlar geniş ölçüde değişiklik gösterir, ancak, iki tercih tahlil genel teması üzerine varyasyonlar benzer Y tüp testlerinin genellikle kimyasal artropod yanıtı ölçmek için kullanılmaktadır ve aynı zamanda, burada tarif. Böcekler 9 destekli uçuş neden olabilir Büyük uçuş tüneller de haşere kontrol araçları pratik kullanımı bilgilendirilmesi temel yarı-kimyasallara Böcek uçuş ve yönlendirme mekanizmaları yanı sıra, veri durulaştırmada çığır veri toplama sonuçlandı. Bu terzi tasarım genellikle belirli bir eklembacaklı denek biyolojisi için salgılanan ve bunlarla ilgili cihaz gereklidir. Olanlar spec göre bir böcek genel grup içinde de kullanılabilir O olfactometers daha yararlıdırküçük bir grup IFIC, ancak bazen böcekler küçük bir grup ekonomik önemi çok özel salgılanan ve tahlil tekniğinin geliştirilmesi gerekliliğini belirler. Şu anda açıklanan tasarım, önceden aşina eklembacaklı teknikleri üzerine inşa edilmiştir. Bu deneysel arena ya da seçim testi Y-şekilli bir cam cihaz 7 biçimini aldığı Y tüp biyodeneyler daha fazla standart iki seçenek tahlil için olanak sağlar. Diğer 13 boş kalır iken Tipik olarak, bu gibi bir Y-tüpün bir kol, bir tedavi odorant alır. Bu tür olfactometers üzerinde varyasyonlar birden fazla ışıma kollar 14, ek ve hatta toprak ile 15 arasında hareket eden organizmaların davranışlarını test edilmesi için bir toprak ortam ilave içerebilir. Böyle olfactometers ve ilgili testlerin geliştirilmesi, bu doğal koşullar denekler &#39;biyoloji açısından değerlendirilen davranışsal tepkilerin doğru alaka çoğaltılır ve böylece ne kadar yakından dikkate almak önemlidir. A la içinrge derecesi, toplanan verilerin sadece organizmanın davranışsal ekolojik 16 ile ilgili davranış biyoassay uygunluğu olarak yararlı olacaktır. Şu anda açıklanan salgılanan ve davranışsal biyoassay özellikle kısa &quot;atlar&quot; 16 olarak uçuş başlatmak eğilimindedir hemipteran böcek için tasarlanmıştır. Salgılanan bir dikey yönlendirme ve ışık kaynağı düzenleme böcek hareketi başlatma kolaylaştırmak ve böylece daha sonraki kimyasal aracılığında oryantasyon davranış verimli bir şekilde ve yüksek bir verimlilik ile test edilebilir. Bu davranış düzenleme tahlil muhtemel uçan veya artropod takson yürüme ya da kolayca olmayan artropod organizmaların ihtiyacı uyacak şekilde modifiye edilebilir, geniş bir dizi için de kullanılabilir.

Onlar da tarım veya kentsel ortamlarda insan tüketimi ile rekabet veya hastalık 1 nedensel patojenleri çünkü Eklembacaklılar (böcekler ve örümcekler gibi) sık sık, zararlıları olarak tanımlanır. Yatırımın büyük bir miktarı gibi zararlıların kontrol araçlarının geliştirilmesine yönelik yapılır. Bu araçlar büyük ölçüde değişebilir ve önemli ilerleme ya değiştirmek veya davranışsal çekiciler veya kovucular 2,3 kullanımı ile zararlıların doğal davranış istismar biorational araçları geliştirilmesi konusunda ilerleme kaydedilmiştir. Arthropod zararlılar genellikle eşini ve / veya konak yeri 4 koku sinyalleri veya ipuçları güveniyor. Bu nedenle zararlıları için etkili cezbedicilerde veya kovucular keşif sıklıkla kontrol araçlarının gelişmesine yol açabilir. Bu keşif sürecinde çeşitli adımlar içerir. Birincisi, test konu doğal davranışı anlaşılmalıdır. Örneğin, belirli bir tür bir cinsiyet ters çeken olmadığını anlamak gerekirdostum konum için seks. Eğer öyleyse, bir bu cazibe bir kimyasal aracılık etmektedir ve nerede olduğu kimyasal üretti olup olmadığını belirlemek gerekir. Ayrıntılı adımlar kimyasal üretilir zaman belirleme ve nihai tanımlama içerir. Bu prosedür boyunca, koku için test öznenin (böcek veya akarı) davranışsal tepkisi test edilmelidir. İlk olarak, test konusu davranışını doğal malzeme ile test edilir. Örneğin, bir erkek güve yanıtın onun dişi conspecific feromon bezinin özü ki için test edilebilir. Alternatif olarak, bu bitkinin doğal kokular için bir otçulun tepkisini test edilebilir. Bu araştırmaların çoğu yönetim araçları 5,6 gelişimine pratik bir odak var, onlar da böyle bir türleşme 7 gibi daha temel sorular, adresleri araştırma uygulanabilir. Sonraki adımları tespit doğal ürünler sentetik sürümleri için eklembacaklı tepkisini test etmeyi gerektirir. Ueklembacaklılar kimyasallar nasıl tepki nderstanding uygun araçlar geliştirme davranışlarını ölçmek için gerektirir. Bu tür araçlar tarafından oluşturulan veriler araştırmacı kontrollü bir ortamda doğal davranışları ölçebilir ne kadar iyi bağlıdır. Fazla altı yıl önce, sürekli uçuş olfactometers ve tüneller koku 8,9 böcek yanıtı ölçmek amacıyla geliştirilmiştir. Olfactometers tasarım önemli ölçüde değişebilir ve genellikle araştırılan belirli böcek veya probleme tasarlandı. Bu makalenin amacı, koku (Şekil 1) böcek tepkisini ölçmek için bir dikey odaklı, T-labirent salgılanan tasarım ve kullanımını tarif etmektir. Salgılanan dikey yönlendirme birçok böcekler tarafından sergilenen olumsuz geotaxis (yukarı taşımak eğilimi) yararlanır. Doğrudan salgılanan üzerine yerleştirilmiş bir ışık kaynağı birçok böcekler tarafından sergilenen olumlu phototaxis (ışık kaynağına doğru hareket eğilimi) yararlanır. Olfactometre yatay odaklı olfactometers içinde kolaylıkla hareket sergilemeye ve yoğun yönelimi açısından ışık yoğunluğu etkili olduğunu değil eğilimindedir hemipteran böcekler için özellikle yararlıdır. Bununla birlikte, bu cihaz uçan böceklerin ve tarama gibi örümcekler, geniş bir aralığı için de kullanılabilir. Cezbedici salgılanan ve geri püskürtme ajanları değerlendirmek için kullanılabilmektedir. Cezbedici durumunda, çatallı koku alanı (Şekil 1) karşı tarafında serbest temiz hava karşı bir tarafında serbest farzedilen cezbedici ile elde edilir. Salgılanan tabanında serbest böcek iki koku alanlarından birini seçtiği zaman bir seçim kaydedilir. Kovucular durumunda, üçüncü bir davranış mümkündür. İki koku alan, yukarı hareketi eksikliği ya duyarlı olmayan uyarana gösteren veya koku alanların birinden uyaran kovucu kayıt edilebilir içine yukarı hareketi dışında.

<table border="1"><tbody><tr><td> Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> İki port T-salgılanan bölünmüş </td><td> Analitik Araştırma Sistemleri (ARS), Inc Gainesville, FL </td><td> Hiçbiri (Özel yapım) </td><td> ARS adlı kullanılamaz ise, Güney Bilimsel (Gainesville, FL) da şu anda oluşturur ve bu tür malzemeleri dağıtmaktadır. </td></tr><tr><td> -Cam tüp konnektörleri; Teflon Katı faz mikro ekstraksiyon tutma / koku kaynağı odası. </td><td> Analitik Araştırma Sistemleri (ARS), Inc Gainesville, FL </td><td> RV-R3 </td><td> Yorum See above </td></tr><tr><td> Hava dağıtım sistemi </td><td> Analitik Araştırma Sistemleri (ARS), Inc Gainesville, FL </td><td> HADÖ-2AFM2C.4 </td><td> Yorum See above </td></tr><tr><td> Giyotin odası </td><td> Analitik Resekemer Sistemleri (ARS), Inc Gainesville, FL </td><td> L3GP3 </td><td> Yorum See above </td></tr></tbody></table>

vertical t-maze choice assay for arthropod response to odorants

Tarım ürünleri, kentsel ortamlarda veya bitki ve insan hastalıkların vektörleri olarak zararlıları böcekler ve arachnids ekonomik önemi göz önüne alındığında, çeşitli teknolojiler kontrol araçları olarak geliştirilmektedir. Bu araçların bir alt kümesi çekim ya da itme tarafından eklembacaklıların davranışını değiştirerek odaklanır. Bu nedenle, eklembacaklılar genellikle davranışsal araştırmaların odak vardır. Çeşitli araçları rüzgar tünelleri, uçuş fabrikaları, servospheres ve olfactometers çeşitli türleri de dahil olmak eklembacaklı davranışı ölçmek için geliştirilmiştir. Bu araçların amacı, koku daha sık görsel veya ipuçları için böcek veya örümcek yanıtı ölçmektir. Burada açıklanan dikey T-labirent oflactometer cezbedicilerde veya kovucular yanıt olarak böcekler tarafından gerçekleştirilen seçimler ölçer. Bu olumlu phototaxis (ışık cazibe) ve birçok eklembacaklılar tarafından sergilenen olumsuz geotaxis (yürümek ya da yukarı uçmak eğilimi) yararlanır yüksek verimlilik test cihazıdır. Olfactometer bir T-labirent oluşturan bir Teflon şerit ile ikiye bölünmüş olan bir 30 cm cam tüp oluşur. Her yarım denek Cezbedici içeren testler iki potansiyel koku alanlar arasında bir seçim yapmak sağlayan salgılanan bir kolu olarak hizmet vermektedir. Iticiler içeren analizlerde, cezbediciler bilinen normal tepki olmaması, aynı zamanda, üçüncü bir değişkenin olarak ölçülebilir.

Kendi doğum konukçu bitki uçucu (turunçgil) ve kokulara Asya narenciye psyllid (Diaphorina citri) yetişkin Atraksiyon Şekil 2A tasvir edilir. Boş (temiz hava) kontrol ile karşılaştırıldığında istatistiksel olarak (α &lt;0.05) fazla yetişkin yaşayan turunçgiller kokuları alan T-labirent salgılanan bir kol seçti. Itme bir örnek, Şekil 2B&#39;de gösterilmiştir. Ikinci kol bilinen itici, dimetil disulfide 11 ile muamele edilmiş, bir narenciye bitki uçucular, alınan Bu durumda, böcekler, T-alıcı labirent narenciye uçucu bir kol maruz bırakıldı. Bu durumda, üç tip davranış gözlendi. Serbest kol tutuklandı ve yalnız turunçgiller (Şekil 2B) kokuları alma kolu giren sayısını istatistiksel fark yoktu yanıt vermiyor psyllids sayısı. Bununla birlikte, psyllids t ihtiva eden kol girdi(Şekil 2B) kovucu ile birlikte sunulduğunda o uçucu bitki barındırabilir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50229/50229fig1.jpg" /> Şekil 1. Dikey yönelimli T-labirent salgılanan şematik diyagramı hava dağıtım sistemi ve koku önleyici işlem sürüm cihazları katıldı. Diyagramı Mann ve ark Şekil 1 bir uyarlamasıdır. 10. Bir test tabi 2-port bölünmüş T-salgılanan serbest odasına ayrı ayrı yerleştirilir. Bu salgılanan içine kontrol yukarı doğru hareketi sağlar ve bırakma noktası alanına geri taramasını böcek engelleyen bir kapı vana aracılığıyla kokuları doğru hareket eder. Tüp geçit değerden sonra 10 cm ikiye bölen. Böcek bölümü belirli bir yan içine 0,5 cm hareket kez bir koku için bir olumlu yanıt kaydedilir. Giyotin uçucu toplama haznesi bir katı faza ayrılmış yerine kullanılabilirlerbir koku kaynağı olarak e mikro-ekstraksiyon tutma / koku kaynağı odası (SPMEC). <img alt="Şekil 2," fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50229/50229fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50229/50229fig2.jpg" /> Şekil 2.. (B), dikey T turunçgil konukçuları karşı temiz hava kontrol (A) veya narenciye uçucu karşı narenciye uçucu maddelerden kaynaklanan uçucu bir kovucu (dimetil disülfür) ile birlikte yayımlanan için Asya narenciye psyllid (Diaphorina citri) yetişkin Tepki -labirent salgılanan Şekil 2A:. Tukey HSD testi (α &lt;0.05) izledi varyans tek yönlü analizi (ANOVA) psyllid ya kolu (2 tedaviler, n = 120) arasında bir seçim yapma sayısını karşılaştırmak için yapıldı. Farklı harflerle gösterilir Kolon başka (α &lt;0.05), bir önemli ölçüde farklı Şekil 2B:. Tek yönlü analizi çalışanTukey HSD testi (α &lt;0.05) izledi varyans (ANOVA) olan psyllid bırakma noktası ya kol veya kalan (3 tedaviler, n = 120) arasında bir seçim yapma sayısını karşılaştırmak için yapıldı. Farklı harflerle gösterilir Kolon Bir diğeri (α &lt;0.05) önemli ölçüde farklı.

Watch this Scientific Journal Video about Vertical T-maze Choice Assay for Arthropod Response to Odorants at JoVE.com

Vertical T-maze Choice Assay for Arthropod Response to Odorants

Dikey bir T-labirent salgılanan eklembacaklıların davranışsal tepki içlin tarif edilmektedir. Salgılanan iki potansiyel koku alanlara maruz kaldığında deneyci denekler tarafından gerçekleştirilen seçimler ölçmek için sağlar. Her ikisi için çekim ve koku maddesi arasından itme bu cihaz ile ölçülebilir.

Koku için Arthropod Tepki için Dikey T-labirent Seçim Testi

Given the economic importance of insects and arachnids as pests of agricultural crops, urban environments or as vectors of plant and human diseases, ...

vertical-t-maze-choice-assay-for-arthropod-response-to-odorants

Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.6K Görüntüleme.  University of Florida. Dikey bir T-labirent salgılanan eklembacaklıların davranışsal tepki içlin tarif edilmektedir. Salgılanan iki potansiyel koku alanlara maruz kaldığında deneyci denekler tarafından gerçekleştirilen seçimler ölçmek için sağlar. Her ikisi için çekim ve koku maddesi arasından itme bu cihaz ile ölçülebilir.

Video: Vertical T-maze Choice Assay for Arthropod Response to Odorants

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in rodents. In our laboratory, we evaluated the two types of memory in more than 30 strains of genetically engineered mice using the automated version of this apparatus. Here, we present the modified T-maze apparatus operated by a computer with a video-tracking system and our protocols in a movie format. The T-maze apparatus consists of runways partitioned off by sliding doors that can automatically open downward, each with a start box, a T-shaped alley, two boxes with automatic pellet dispensers at one side of the box, and two L-shaped alleys. Each L-shaped alley is connected to the start box so that mice can return to the start box, which excludes the effects of experimenter handling on mouse behavior. This apparatus also has an advantage that in vivo microdialysis, in vivo electrophysiology, and optogenetics techniques can be performed during T-maze performance because the doors are designed to go down into the floor. In this movie article, we describe T-maze tasks using the automated apparatus and the T-maze performance of &alpha;-CaMKII+/- mice, which are reported to show working memory deficits in the eight-arm radial maze task. Our data indicated that &alpha;-CaMKII+/- mice showed a working memory deficit, but no impairment of reference memory, and are consistent with previous findings using the eight-arm radial maze task, which supports the validity of our protocol. In addition, our data indicate that mutants tended to exhibit reversal learning deficits, suggesting that &alpha;-CaMKII deficiency causes reduced behavioral flexibility. Thus, the T-maze test using the modified automatic apparatus is useful for assessing working and reference memory and behavioral flexibility in mice.

This article presents the protocol of T-maze tests using a modified automated apparatus for assessing the learning and memory functions in mice.

T-labirent Zorla Değişim ve Çalışma ve Fareler Referans Bellek değerlendirilmesi için sağ-sol Ayrımcılık Görevler

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Nörobilim

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Proboscis Extension Response Protocol for Investigating Behavioral Plasticity in Insects: Application to Basic, Biomedical, and Agricultural Research

Insects modify their responses to stimuli through experience of associating those stimuli with events important for survival (e.g., food, mates, threats). There are several behavioral mechanisms through which an insect learns salient associations and relates them to these events. It is important to understand this behavioral plasticity for programs aimed toward assisting insects that are beneficial for agriculture. This understanding can also be used for discovering solutions to biomedical and agricultural problems created by insects that act as disease vectors and pests. The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol was developed for honey bees (Apis mellifera) over 50 years ago to study how they perceive and learn about floral odors, which signal the nectar and pollen resources a colony needs for survival. The PER procedure provides a robust and easy-to-employ framework for studying several different ecologically relevant mechanisms of behavioral plasticity. It is easily adaptable for use with several other insect species and other behavioral reflexes. These protocols can be readily employed in conjunction with various means for monitoring neural activity in the CNS via electrophysiology or bioimaging, or for manipulating targeted neuromodulatory pathways. It is a robust assay for rapidly detecting sub-lethal effects on behavior caused by environmental stressors, toxins or pesticides.
We show how the PER protocol is straightforward to implement using two procedures. One is suitable as a laboratory exercise for students or for quick assays of the effect of an experimental treatment. The other provides more thorough control of variables, which is important for studies of behavioral conditioning. We show how several measures for the behavioral response ranging from binary yes/no to more continuous variable like latency and duration of proboscis extension can be used to test hypotheses. And, we discuss some pitfalls that researchers commonly encounter when they use the procedure for the first time.

The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol, developed for the honey bee (Apis mellifera), provides an ecologically-relevant and easily quantifiable means for studying several different mechanisms of learning in many insect species.

Bir burnumun Extension Tepki Böcekler Davranış Plastisitesi incelenmesi için protokol: Basic, Biyomedikal Uygulama ve Tarımsal Araştırma

Insects modify their responses to stimuli through experience of associating those stimuli with events important for survival (e.g., food, mates, threats). ...

Radio Frequency Identification and Motion-sensitive Video Efficiently Automate Recording of Unrewarded Choice Behavior by Bumblebees

We present two methods for observing bumblebee choice behavior in an enclosed testing space. The first method consists of Radio Frequency Identification (RFID) readers built into artificial flowers that display various visual cues, and RFID tags (i.e., passive transponders) glued to the thorax of bumblebee workers. The novelty in our implementation is that RFID readers are built directly into artificial flowers that are capable of displaying several distinct visual properties such as color, pattern type, spatial frequency (i.e., &#8220;busyness&#8221; of the pattern), and symmetry (spatial frequency and symmetry were not manipulated in this experiment). Additionally, these visual displays in conjunction with the automated systems are capable of recording unrewarded and untrained choice behavior. The second method consists of recording choice behavior at artificial flowers using motion-sensitive high-definition camcorders. Bumblebees have number tags glued to their thoraces for unique identification. The advantage in this implementation over RFID is that in addition to observing landing behavior, alternate measures of preference such as hovering and antennation may also be observed. Both automation methods increase experimental control, and internal validity by allowing larger scale studies that take into account individual differences. External validity is also improved because bees can freely enter and exit the testing environment without constraints such as the availability of a research assistant on-site. Compared to human observation in real time, the automated methods are more cost-effective and possibly less error-prone.

This video describes Radio-Frequency Identification (RFID) and motion-sensitive video recording methods to monitor choice behavior by bumblebees.

Radyo Frekansı ile Tanımlama ve Verimli Hareket duyarlı video Bumblebees tarafından karşılıksız seçim davranışının Kayıt otomatikleştirin

We present two methods for observing bumblebee choice behavior in an enclosed testing space. The first method consists of Radio Frequency Identification ...

Time-dependent Increase in the Network Response to the Stimulation of Neuronal Cell Cultures on Micro-electrode Arrays

Micro-electrode arrays (MEAs) can be used to investigate drug toxicity, design paradigms for next-generation personalized medicine, and study network dynamics in neuronal cultures. In contrast with more traditional methods, such as patch-clamping, which can only record activity from a single cell, MEAs can record simultaneously from multiple sites in a network, without requiring the arduous task of placing each electrode individually. Moreover, numerous control and stimulation configurations can be easily applied within the same experimental setup, allowing for a broad range of dynamics to be explored. One of the key dynamics of interest in these in vitro studies has been the extent to which cultured networks display properties indicative of learning. Mouse neuronal cells cultured on MEAs display an increase in response following training induced by electrical stimulation. This protocol demonstrates how to culture neuronal cells on MEAs; successfully record from over 95% of the plated dishes; establish a protocol to train the networks to respond to patterns of stimulation; and sort, plot, and interpret the results from such experiments. The use of a proprietary system for stimulating and recording neuronal cultures is demonstrated. Software packages are also used to sort neuronal units. A custom-designed graphical user interface is used to visualize post-stimulus time histograms, inter-burst intervals, and burst duration, as well as to compare the cellular response to stimulation before and after a training protocol. Finally, representative results and future directions of this research effort are discussed.

Mouse neuronal cells cultured on multi-electrode arrays display an increase in response following electrical stimulation. This protocol demonstrates how to culture neurons, how to record activity, and how to establish a protocol to train the networks to respond to patterns of stimulation.

Mikro Elektrod Dizilerinde Nöronal Hücre Kültürlerinin Uyarılmasına Ağ Yanıtına Zamana Bağlı Artış

Micro-electrode arrays (MEAs) can be used to investigate drug toxicity, design paradigms for next-generation personalized medicine, and study network ...

Electrophysiological Recording from Drosophila Trichoid Sensilla in Response to Odorants of Low Volatility

Insects rely on their sense of smell to guide a wide range of behaviors that are critical for their survival, such as food-seeking, predator avoidance, oviposition, and mating. Myriad chemicals of varying volatilities have been identified as natural odorants that activate insect Olfactory Receptor Neurons (ORNs). However, studying the olfactory responses to low-volatility odorants has been hampered by an inability to effectively present such stimuli using conventional odor-delivery methods. Here, we describe a procedure that permits the effective presentation of low-volatility odorants for in vivo Single-Sensillum Recording (SSR). By minimizing the distance between the odor source and the target tissue, this method allows for the application of biologically salient but hitherto inaccessible odorants, including palmitoleic acid, a stimulatory pheromone with a demonstrated effect on ORNs involved in courtship and mating behavior1. Our procedure thus affords a new avenue to assay a host of low-volatility odorants for the study of insect olfaction and pheromone communication.

Electrophysiological Recording from Drosophila Trichoid Sensilla in Response to Odorants of Low Volatility

The overall goal of this protocol is to demonstrate how to present odorants of low volatility for single-sensillum recording from Drosophila olfactory receptor neurons that respond to long-chain cuticular pheromones.

Elektrofizyolojik Kayıt<em&gt; Drosophila</em&gt; Düşük Volatilite Kokularına Karşı Trikoid Sensilla

Insects rely on their sense of smell to guide a wide range of behaviors that are critical for their survival, such as food-seeking, predator avoidance, ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc superoxide dismutase 1 (SOD1). The structural instability of SOD1 and the detection of SOD1-positive inclusions in familial-ALS patients supports a potential causal role for misfolded and/or aggregated SOD1 in ALS pathology. In this study, we describe the development of a cell-based assay designed to quantify the dynamics of SOD1 aggregation in living cells by high content screening approaches. Using lentiviral vectors, we generated stable cell lines expressing wild-type and mutant A4V SOD1 tagged with yellow fluorescent protein and found that both proteins were expressed in the cytosol without any sign of aggregation. Interestingly, only SOD1 A4V stably expressed in HEK-293, but not in U2OS or SH-SY5Y cell lines, formed aggregates upon proteasome inhibitor treatment. We show that it is possible to quantify aggregation based on dose-response analysis of various proteasome inhibitors, and to track aggregate-formation kinetics by time-lapse microscopy. Our approach introduces the possibility of quantifying the effect of ALS mutations on the role of SOD1 in aggregate formation as well as screening for small molecules that prevent SOD1 A4V aggregation.

We describe a method to quantify the aggregation of misfolded proteins. Our protocol details lentiviral induced stable cell line generation, automated confocal imaging, and image analysis of protein aggregates. As an illustrative application, we studied the effect of small molecules in promoting SOD1 aggregation in a time- and dose-dependent manner.

Yüksek içerik miktar Sod1 canlı hücreler Mutant Protein toplama oluşumu için tahlil geliştirme

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

A High-throughput Calcium-flux Assay to Study NMDA-receptors with Sensitivity to Glycine/D-serine and Glutamate

N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors (NMDAR) are classified as ionotropic glutamate receptors and have critical roles in learning and memory. NMDAR malfunction, expressed as either over- or under-activity caused by mutations, altered expression, trafficking, or localization, can contribute to numerous diseases, especially in the central nervous system. Therefore, understanding the receptor&#39;s biology as well as facilitating the discovery of compounds and small molecules is crucial in ongoing efforts to combat neurological diseases. Current approaches to studying the receptor have limitations including low throughput, high cost, and the inability to study its functional abilities due to the necessary presence of channel blockers to prevent NMDAR-mediated excitotoxicity. Additionally, the existing assay systems are sensitive to stimulation by glutamate only and lack sensitivity to stimulation by glycine, the other co-ligand of the NMDAR. Here, we present the first plate-based assay with high-throughput power to study an NMDA receptor with sensitivity to both co-ligands, glutamate and D-serine/glycine. This approach allows the study of different NMDAR subunit compositions and allows functional studies of the receptor in glycine- and/or glutamate-sensitive modes. Additionally, the method does not require the presence of inhibitors during measurements. The effects of positive and negative allosteric modulators can be detected with this assay and the known pharmacology of NMDAR has been replicated in our system. This technique overcomes the limitations of existing methods and is cost-effective. We believe that this novel technique will accelerate the discovery of therapies for NMDAR-mediated pathologies.

The goal of this protocol is to facilitate the study of NMDA-receptors (NMDAR) at a larger scale and allow the examination of modulatory effects of small molecules and their therapeutic applications.

NMDA reseptörleri glisin/D-serin ve glutamat duyarlılık ile çalışmak için bir yüksek-den geçerek kalsiyum-flux tahlil

N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors (NMDAR) are classified as ionotropic glutamate receptors and have critical roles in learning and memory. NMDAR ...

Data Acquisition and Analysis In Brainstem Evoked Response Audiometry In Mice

Brainstem evoked response audiometry (BERA) is of central relevance in the clinical neurophysiology. As other evoked potential (EP) techniques, such as visually evoked potentials (VEPs) or somatosensory evoked potentials (SEPs), the auditory evoked potentials (AEPs) are triggered by the repetitive presentation of identical stimuli, the electroencephalographic (EEG) response of which is subsequently averaged resulting in distinct positive (p) and negative (n) deflections. In humans, both the amplitude and the latency of individual peaks can be used to characterize alterations in synchronization and conduction velocity in the underlying neuronal circuitries. Importantly, AEPs are also applied in basic and preclinical science to identify and characterize the auditory function in pharmacological and genetic animal models. Even more, animal models in combination with pharmacological testing are utilized to investigate for potential benefits in the treatment of sensorineural hearing loss (e.g., age- or noise-induced hearing deficits). Here we provide a detailed and integrative description of how to record auditory brainstem-evoked responses (ABRs) in mice using click and tone-burst application. A specific focus of this protocol is on pre-experimental animal housing, anesthesia, ABR recording, ABR filtering processes, automated wavelet-based amplitude growth function analysis, and latency detection.

Brainstem evoked response audiometry is an important tool in clinical neurophysiology. Nowadays, brainstem evoked response audiometry is also applied in the basic science and preclinical studies involving both pharmacological and genetic animal models. Here we provide a detailed description of how auditory brainstem responses can be successfully recorded and analyzed in mice.

Farelerde beyin sapı uyarılmış yanıt odyometrisi veri edinme ve Analizi

Brainstem evoked response audiometry (BERA) is of central relevance in the clinical neurophysiology. As other evoked potential (EP) techniques, such as ...

Systems Analysis of the Neuroinflammatory and Hemodynamic Response to Traumatic Brain Injury

Mild traumatic brain injuries (mTBIs) are a significant public health problem. Repeated exposure to mTBI can lead to cumulative, long-lasting functional deficits. Numerous studies by our group and others have shown that mTBI stimulates cytokine expression and activates microglia, decreases cerebral blood flow and metabolism, and impairs cerebrovascular reactivity. Moreover, several works have reported an association between derangements in these neuroinflammatory and hemodynamic markers and cognitive impairments. Herein we detail methods to characterize the neuroinflammatory and hemodynamic tissue response to mTBI in mice. Specifically, we describe how to perform a weight-drop model of mTBI, how to longitudinally measure cerebral blood flow using a non-invasive optical technique called diffuse correlation spectroscopy, and how to perform a Luminex multiplexed immunoassay on brain tissue samples to quantify cytokines and immunomodulatory phospho-proteins (e.g., within the MAPK and NF&#954;B pathways) that respond to and regulate activity of microglia and other neural immune cells. Finally, we detail how to integrate these data using a multivariate systems analysis approach to understand the relationships between all of these variables. Understanding the relationships between these physiologic and molecular variables will ultimately enable us to identify mechanisms responsible for mTBI.

This protocol presents methods to characterize the neuroinflammatory and hemodynamic response to mild traumatic brain injury and to integrate these data as part of a multivariate systems analysis using partial least squares regression.

Travmatik Beyin Hasarına Nöroinflamatuar ve Hemodinamik Yanıtın Sistem Analizi

Mild traumatic brain injuries (mTBIs) are a significant public health problem. Repeated exposure to mTBI can lead to cumulative, long-lasting functional ...