Biz onun parçaları &quot;Havaalanı Lounge&quot;, &quot;Duvar&quot; ve &quot;Akşam Melodram (görünüş sırasına göre) dahil olmak üzere, ilgili video onun Creative Commons lisanslı müzik kullanımı için Kevin Macleod kabul ediyorum.&quot; Biz de ameliyat video ile onların yardım için Ndubisi Okeke ve Frederick Torstrick kabul etmek istiyorum.

1. Spinotrapezius Yem Arter Ligasyonu Cerrahisi <ol><li> Intraperitoneal enjeksiyonu ile fare uyuştur. , 0.5 ml şırınga içinde, formüle: 100 mg / ml 0.06 ml ketamin 20.0 mg / ml, 0.03 ml Xylazine 0.4 mg / ml, 0.01 ml Atropin % 0.9 Saline 0.30 ml. Doz: 0.01 ml * gram vücut ağırlığı başına, ip </li></ol> Fare zorlanma ve stok üzerine * Doz değişken indüksiyon bir saat içinde bu kadar fare kurtarma olduğunu buna göre ayarlayın. <ol start="2"><li> Kornea kuruma önlemek için standart oftalmik merhem uygulayın. </li><li> Tüy dökücü krem ​​kısa uygulaması takip kırpma makası kullanarak arka saç çıkarın. </li><li> Klorheksidin veya povidon-iyot ile cerrahi alanında dezenfekte edin. Povidon-iyot ile biten etanol üç kez Alternatif povidon-iyot,. </li><li> Isıtıcı ped ve steril örtü ile, önceden hazırlanmış cerrahi çalışma yüzeyi fare aktarınyerde. </li><li> Tenting ile doku iris makas ve standart desen forseps (örneğin FST, 11271-30) kullanarak ve paralel kesme kürek kemikli öne kaudal yaklaşık 5 mm dorsal deri yoluyla doğrusal bir kesi (3-5 mm) oluşturma omurga. Hedef kesi yeri deri pigmentasyonu veriyorsa dorsal yağ yastığı transdermal görselleştirme tarafından tespit edilebilir; yağ pedinin kaudal sınırında kesti. Gerektiği gibi kesi genişletin ve yay makas kullanılarak sekonder deri katmanları aracılığıyla genişletmek. <ol><li> Anatomik notu - spinotrapezius kas dorsal yatıyor ve omurganın her iki tarafında L3 T4 uzanır. Ön sınırından yaklaşık omuz bıçak yanal olarak uzanır. Kası en posterior sınır anterior sınırına medial yatıyor ve omurga ile aynı hizada koyabilir böylece kaudal yönde tapers. İki yağ yastıkları spinotrapezius doğrudan dorsal ve ventral döşeme de dikkat etmek önemlidirkranial yarısına doğru kas. </li><li> Insizyon nedeniyle iltihap sham ligasyon ameliyatı spinotrapezius vaskülatürün biçimlenme hiçbir değişiklik gösterdiği gibi, vasküler remodeling cevabı üzerinde herhangi bir etkiye sahip olduğu gösterilmiştir. İki mekansal faktörlerin bu sonuca katkıda bulunmaktadır. İlk olarak kesik kas vasküler response tipik olarak incelenmiştir ilgi bölgesi gelen kafatası yönde 5 mm ile uzaklaştırılır. Buna ek olarak, dorsal deri üzerinde kesi spinotrapezius kas kafatası üçüncü tepesinde yer alan bir ventral yağ ped ile damar ligasyon yer ayrılır. </li></ol></li><li> Kas kuruma önlemek için ısıtılmış Ringer solüsyonu ile kesi sulayın. Böyle papaverin gibi vazodilatörlerin Uygulama ligasyonu için hedef arter görselleştirmek yardımcı olacaktır. </li><li> Diseksiyon mikroskobu altında yatan musc (kaldırmasını değil ama) teşrih künt ve ayırmak için dorsal beyaz yağ yastığı forseps kullanıngirer ve onun yan kenarında spinotrapezius yapraklar gibi damarsal görselleştirmek amacıyla ular doku. </li><li> Bir ya da iki ikili damarları ile birlikte, kas yanal kenarına kendi yolu üzerinde spinotrapezius ventral bir yağ yastığı içinden geçen hedef arter, Yerleştirme. Bu arter yansıtan ve kas içinde arter yol izlemek için kas değiştirilmesi ile teyit edilebilir kas, kuyruk yarım önemli bir kısmını besler. Ligasyon için hedef konumu arter ventral yağ yastığı çıkma ve kas girme segmentinde olduğunu ve bu bölgede oldukça erişilebilir. Arter damar çift yavaşça bu bölgedeki yağ ventral ped ayrılması gerekebilir. Spinotrapezius transvers dorsal ve ventral yağ yastıkları ya o gemiler de dahil olmak üzere, birden fazla arter-ven çiftleri beslenmektedir unutmayın. Bu gemilerin bozmaya dikkat edin. <ol><li> Çoklu göstergeler arter ayırt etmek için kullanılabilirvenden. En iyi yöntemlerden biri yavaşça mikroprob ile kan akışını engelleyebilir ve kas uzak yukarı taşımak için; tıkanıklık serbest bırakılıncaya kadar ak arter devam etmeyecektir. Ven duvarlarının arterler eksikliği bağ dokusu bir beyazımsı kılıf içerdiğinden Renkli da kullanılabilir. Damarlar genellikle büyük boyutta olduğu gibi Ayrıca, bir vazodilatör uygulamasından önce çapı düşünebilirsiniz. </li></ol></li><li> Arter ile eşleştirilmiş damar yakın olarak, tipik olarak, arter arkasında mikroprob geçen, ve doğal olarak daha geniş bir boşluk sağlamak için ucunu kullanarak, bir mikroprob ve yaklaşık olarak 5 mm kademeli bir izole etmek için 5. forseps ile diseksiyon kullanmak arter ve ven arasındaki yarık. Bu dikiş dişli olacak hangi aracılığıyla boşluğudur. </li><li> 10-0 tek iplik dikiş ve iğne tutucu bir yer cerrahın düğüm kullanarak disseke segmentinin proksimal sonuna doğru yem arter (~ 70 mikron çapında) etrafında bir ligasyon kullanma. Plaarter kesisi izin vermek için ligatür arasında yeterli ayırma işlemi ile parçalanmış arter kademeli bir mafsaldan uzak ucuna doğru ce ek bir ligasyon. <ol><li> Spinotrapezius besleme arter ile ilişkili küçük ölçekte; femoral arter gibi daha büyük bir kap ligasyonu ile karşılaştırıldığında, artan cerrahi zorluk yol açar. Deneyimsiz cerrahlar özellikle avulsiyonu, yanlışlıkla kanama ve diğer cerrahi komplikasyon oranları yüksek olacaktır. Özellikle kaygı belirlenmesi ve akış sadece kesim öncesi engellemiştir sonra renksiz arter kesme güçlüktür. Cerrah arter hem de ligatür 2 arasında kolayca gözlemlenebilir ayırma ile kesilmiş bir onay transeksiyonu için burada yerini görsel bir kılavuz olduğu gibi bu nedenlerden dolayı, 2 ligatür yerleştirilmesi prosedür alışık için tavsiye edilir. Ancak, daha deneyimli bir cerrah sürece onlar açıkça mümkün olduğu gibi, tek bir bağ yeterli bulabilirbelirlemek ve bağ ve arter aşağı kesti. Bu tekniğin istemeden keskin ligasyonu sütür ile yakındaki bir gemi nicklemek riskini azaltır iken, bu arterlerde kesmiş olduğu teyit artan güçlüğü gibi sakıncaları olmadan değildir. </li></ol></li><li> Kan akımının azalmasına (tıkalı RBC sütun) ligasyon sitenin mansap (kas doğru yani) gözlemleyerek ligasyon doğrulayın. </li><li> Kullanılması kesme makasları iki bitişik harfler arasında bağlanan arter transect. Sadece tek bir bağ yerleştirilmiş olur (11a) aşağı doğrultuda son derece dikkatli bir kesti. </li><li> Düz film yüklü İlaç (1 mm) deneysel işlemin bir parçası olarak (kaudal) aşağı konabilir. </li><li> Özgün yönüne yerinden fasya ve adipoz doku konumlandırın. </li><li> 8-0 rezorbe olmayanlar sütürler kullanılarak cilt insizyonu kapatın. Sonra gözlem altında hazırlanmış bir ısıtmalı kurtarma kafesteki fare yerleştirin ve ap yönetmekBöyle bupivakain, 0,02-0,05 ml% 0.25 lokal infiltrasyon olarak analjezik de temin. </li></ol> 2. In situ Spinotrapezius intravital Mikroskopi, <ol><li> % 3-4 izofluran 3-4 L&#39;lik bir akış hızı-dk -1% 100 oksijen, buharlaşmış olan bir indüksiyon odasında fare anestetize. <ol><li> Enjekte edilebilir anestetiklerin ile daha az kardiyovasküler depresyon olduğundan, uçucu madde anestezi kullanılması, fonksiyonel ölçümleri için tercih edilir. Örneğin sodyum pentobarbital olarak mevcut değildir, uzun etkili enjektabl anestezikler, uçucu madde anestezi hayvan konumlandırılmış edildikten sonra tekrar enjeksiyonları önlemek için tercih edilir ise. </li></ol></li><li> Bir kez anestezi, sürekli bakım konsantrasyonları (genelde ~% 2) ve 0.5-1 L · dk -1 akış hızında bir anestezi maskesi (aka burun konisi) aracılığıyla izofluran teslim. <ol><li> Fare çoğunlukla kendi burun yoluyla havalandırılması, bu yüzden sadece başka yerde sınıflandırılmamış olanAnestezi maskesi diyafram ile burunlarını kapatmak için Gerekli veri. </li></ol></li><li> Gerekiyorsa, kırpma makası ve tüy dökücü krem ​​kullanarak arkasından saç kaldırmak. </li><li> Isı pad hayvan taşıyın. <ol><li> Soğuk-bağlı vazokonstrüksiyon önlemek için euthermic durumda fareler korumak için önemli olduğunu, bu lambalar aracılığıyla gerçekleştirilebilir, su ısı pedleri dolaşan, mikrodalga yastıkları, vb ısıtır </li></ol></li><li> Rektal ısı probu yerleştirin ve 35 termo-kontrolörü set ° C. </li><li> Iris makas ve standart desen forseps kullanarak spinotrapezius en kaudal sonunda cilt kesi olun. </li><li> , Yağ yastığı için kraniyale kesi uzatın bir at nalı kesi oluşturma ve kuruma önlemek için plastik wrap ile flep kapsamaktadır. </li><li> Görünürlüğünü maksimize etmek için forseps ve yaylı makas ile cilt altı bağ dokusu teşrih Blunt. </li><li> Yakın toge gibi uyarıcı elektrotlar yerleştirinmümkün gibi termik olarak, mevcut alanın boyutunu küçültmek ve omurga için sadece yanal maruz kas kuyruk sonunda yerleştirmek için. </li><li> 1 Hz teslim 200 μsec süresi, 2 mA amplitüdlü, kare dalgalar ile, bir elektrot veri toplama sistemi, elektrot uyaran izolatör ve bilgisayar denetleyicisi kullanarak elektrot yerleşimini doğrulamak için bir test stimülasyonu gerçekleştirin. </li><li> Kuruma önlemek için maruz kası üzerinde plastik wrap yerleştirin. </li><li> Damar çapları muvazene alacağı bir 30 dakika süre zamanlama başlayın. </li><li> Vasküler mimari görüntülemek için spinotrapezius kası üzerinde intravital mikroskop yerleştirin. <ol><li> Immersiyon objektif kullanıyorsanız, objektif ve plastik wrap ile PBS bir damla yerleştirin. </li></ol></li><li> Ana arteriyol (büyük damar görünür) Yukarıdaki başlayan faiz gemi bulmak için XY düzleminde sahne işlemek. <ol><li> Küçük arteriol görselleştirmeyansıyan ışık mikroskobu ile es-kırmızı hücre sütun tarafından sağlanan daha fazla kontrast gerektirir. Biz öncelikle mikrovasküler kontrastı arttırmak için bir yan-akım karanlık alan mikroskobu görüntüleme kullanabilirsiniz, ancak kontrast da yüksek molekül ağırlıklı floresan dekstran intravenöz enjeksiyonundan sonra bir yansıyan ışık floresan mikroskop ile geliştirilebilir. </li></ol></li><li> 30 dakika dengelenme sonra, ilgilenilen damarın bir görüntü / video yakalama. </li><li> 90 saniye için 8 Hz, teslim 200 μsec süresi, 2 mA genlik, yukarıda tanımlandığı gibi, bir kare dalgalar ile kas teşvik. </li><li> Başka bir görüntü / video hemen sonrası stimülasyon Yakalama ve damar dinlenme çapı dönene kadar her dakika yakalamak için devam ediyor, 10 dk ~. </li><li> Kontralateral kas kullanarak adımları 6-18 tekrarlayın. </li><li> Veri analizi görüntü analiz yazılımı ile video kaliperler veya off-line ile gerçek zamanlı olarak yapılabilmektedir. </li><li> Fareyi takip Euthanizeing IACUC protokolü. </li></ol> 3. Spinotrapezius Doku Hasat ve Fiksasyon <ol><li> Spinotrapezius Besleme ligasyonu adım 1 &#39;deki gibi formülasyon; intraperitonal enjeksiyon yoluyla fareler anestetize. </li><li> Iris makas ve standart desen forseps kullanarak fare kürek kemikli öne kranial bir kesi birkaç milimetre olun. Her iki yanal tarafta kaudal ve ensizyon genişletir. </li><li> Cildi nazikçe yansıtan ve yüzeysel fasya keserek dorsal gövdesinden cildi serbest bırakın. </li><li> Standart forseps kullanarak dorsal adipoz doku kaldırmak ve sonra kas yansıtacak ve benzer ventral adipoz doku teşrih künt diseksiyon kullanın. </li><li> Forseps ve yaylı makas kullanılarak kas örten fasya çıkarın. Bu adım, zor ve zaman alıcı olabilir, ama immünofloresan boyama ve görüntüleme artırmak için önemli olabilir. Doku sulu tutulması fasya kaldırılmasını kolaylaştırabilir. </li><li> YerleştirmekLateral kas sınır ve ventral yatıyor yağ yastığı gelen spinotrapezius kas ayırmak için künt diseksiyon kullanabilirsiniz. </li><li> Kaudal yönde bir Kranyal künt diseksiyon devam edin. Birçok kan damarları bu durum kas ventral yüzeyi girip terk unutmayın; perfüzyon gerekli ise, bu kapların transecting önce yapılmalıdır. Bu kas kaudal yarısında, lateral sınır ekler ventral yalan kas içine unutmayın. Bazı kesim tamamen kenar tanımlamak ve serbest bırakmak için bu sınır boyunca gerekli olabilir. </li><li> Tüketim spinotrapezius kas. Bunu yapmak için: <ol><li> Serbest yukarıda tarif edildiği gibi kas yanal kenarı. </li><li> Kas en kranial ölçüde boyunca enine kesin. </li><li> Sagital planda, medial sınır (omurga boyunca) boyunca kesin. </li></ol></li><li> Tekrar prosedürü kontralateral kas 4-9 adımları yineleyin ve sonra m euthanizeBir IACUC onaylanmış yöntemi ile ouse. </li><li> Soğutulmuş metanol (4 ° C) ya da 20 dakika için% 4 paraformaldehit / oda sıcaklığında deiyonize su çözeltisi ile daldırma yoluyla jelatin kaplı cam slaytlar üzerine doku düzeltildi. <ol><li> Alternatif olarak, perfüzyon fiksasyon istihdam edilebilir. 2. adıma önce, 1, 5 ml × 4 5 ml ardından, 0.1 mM CaCl2 ve sol ventrikül ile% 2 heparin ile salin Tris tamponlu ile sağ atrium bir kesi yapmak, bir torakotomi gerçekleştirmek ve perfuse damar % damar tespiti için paraformaldehit ve 1 sonunda 5 ml x 0.1 mM CaCl2 ile 7 Tris-tamponlu salin. </li></ol></li><li> Hemen sonra fiksasyonu, dört kez, 20 dakika boyunca numune yıkama her biri% 0.1 saponin ile, 0.01 M fosfat-tamponlu salin (PBS) ile. </li></ol>

<ol>
	<li>Bailey, A. M., O'Neill, T. J., Morris, C. E., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arteriolar+Remodeling+Following+Ischemic+Injury+Extends+from+Capillary+to+Large+Arteriole+in+the+Microcirculation.">Arteriolar Remodeling Following Ischemic Injury Extends from Capillary to Large Arteriole in the Microcirculation.</a> Microcirculation. 15, 389-404 (2010).</li><li>Bruce, A. C., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exogenous+Thrombin+Delivery+Promotes+Collateral+Capillary+Arterialization+and+Tissue+Reperfusion+in+the+Murine+Spinotrapezius+Muscle+Ischemia+Model.">Exogenous Thrombin Delivery Promotes Collateral Capillary Arterialization and Tissue Reperfusion in the Murine Spinotrapezius Muscle Ischemia Model.</a> Microcirculation. 19, 143-154 (2012).</li><li>Mac Gabhann, F., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collateral+capillary+arterialization+following+arteriolar+ligation+in+murine+skeletal+muscle.">Collateral capillary arterialization following arteriolar ligation in murine skeletal muscle.</a> Microcirculation. 17, 333-347 (2010).</li><li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Model+of+Hindlimb+Ischemia.">Murine Model of Hindlimb Ischemia.</a> J. Vis. Exp. (23), e1035 (2009).</li><li>Madeddu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+myocardial+and+limb+ischemia:+diagnostic+end-points+and+relevance+to+clinical+problems.">Murine models of myocardial and limb ischemia: diagnostic end-points and relevance to clinical problems.</a> Vascul. Pharmacol. 45, 281-301 (2006).</li><li>Cardinal, T. R., Kurjiaka, D. T., Hoying, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+hindlimb+ischemia+impairs+functional+vasodilation+and+vascular+reactivity+in+mouse+feed+arteries.">Chronic hindlimb ischemia impairs functional vasodilation and vascular reactivity in mouse feed arteries.</a> Front. Physio. 2, 91 (2011).</li><li>Sefcik, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+Activation+of+Sphingosine+1-Phosphate+Receptors+1+and+3+Promotes+Local+Microvascular+Network+Growth.">Selective Activation of Sphingosine 1-Phosphate Receptors 1 and 3 Promotes Local Microvascular Network Growth.</a> Tissue Eng. Part A. 17, 617-629 (2011).</li><li>Deindl, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Ischemia+and+of+Hypoxia-Inducible+Genes+in+Arteriogenesis+After+Femoral+Artery+Occlusion+in+the+Rabbit.">Role of Ischemia and of Hypoxia-Inducible Genes in Arteriogenesis After Femoral Artery Occlusion in the Rabbit.</a> Circulation Research. 89, 779-786 (2001).</li><li>Chalothorn, D., Zhang, H., Smith, J. E., Edwards, J. C., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chloride+Intracellular+Channel-4+Is+a+Determinant+of+Native+Collateral+Formation+in+Skeletal+Muscle+and+Brain.">Chloride Intracellular Channel-4 Is a Determinant of Native Collateral Formation in Skeletal Muscle and Brain.</a> Circulation Research. 105, 89-98 (2009).</li><li>Scholz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+Arteriogenesis+and+Angiogenesis+to+Postocclusive+Hindlimb+Perfusion+in+Mice.">Contribution of Arteriogenesis and Angiogenesis to Postocclusive Hindlimb Perfusion in Mice.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 34, 775-787 (2002).</li><li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle-specific+genetic+determinants+contribute+to+the+differential+strain-dependent+effects+of+hindlimb+ischemia+in+mice.">Skeletal muscle-specific genetic determinants contribute to the differential strain-dependent effects of hindlimb ischemia in mice.</a> Am. J. Pathol. 180, 2156-2169 (2012).</li><li>Dokun, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+trait+locus+(LSq-1)+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia.">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li><li>Faber, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+causes+collateral+rarefaction+and+increased+severity+of+ischemic+injury+in+multiple+tissues.">Aging causes collateral rarefaction and increased severity of ischemic injury in multiple tissues.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 31, 1748-1756 (2011).</li><li>Peng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+affect+blood+flow+recovery+in+a+mouse+model+of+hindlimb+ischemia.">Gender differences affect blood flow recovery in a mouse model of hindlimb ischemia.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 300, 2027-2034 (2011).</li><li>Li, Y., Guan, H., Hazarika, S., Liu, C., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+angiogenesis+following+hind-limb+ischemia+in+diabetes+mellitus+mice.">Impaired angiogenesis following hind-limb ischemia in diabetes mellitus mice.</a> Chin. Med. Sci. J. 22, 232-237 (2007).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları var beyan.

Burada sunulan murin spinotrapezius ligasyonu modeli arteriyel oklüzyon gelen yapısal ve işlevsel uyarlamalar bu sonucu incelemek için etkin bir küçük hayvan modelidir. Bu model yaygın olarak kullanılan bacak iskemisi modelinde 4 tamamlayıcı olduğunu, bunda yüksek uzaysal çözünürlüğü ile sağlam mikrovasküler ağların bir bütün kas görünümü sağlar. Bu kas sadece dorsal cilt altında yer almaktadır çünkü Ayrıca, bu intravital mikroskopi ile seri görüntüleme ve superfusion veya ince film implantasyon 2 aracılığıyla yerel ilaç dağıtım için erişilebilir. Bu özellikler, arteriyel oklüzyon sonrası vasküler remodeling ve fonksiyonel vazodilatasyon üzerine yeni terapötik hedeflerin etkilerini incelemek için cazip bir küçük hayvan modeli yapmak. Nedeniyle birkaç anahtar d Bacak ligasyon modeli Elde edilen verilere spinotrapezius ligasyon modeli edinilen verilerin karşılaştırılmasında ki dikkatli kullanılması gerektiğini unutmayınifferences. İlk olarak, spinotrapezius kaslar kasları stabilize edilir ve fonksiyon ve lif türü dağılımı içinde bacak kaslarının farklıdır. Grubumuz önce spinotrapezius kas arterioler ligasyonu gibi bacak modeli 1,8 olarak femoral arter ligasyonu sonrası arka ayak gözlenen hipoksi ile karşılaştırıldığında iyi gelişmiş kollateral arterioler ağları ile suşları daha az veya önemsiz hipoksi oluşturur olduğunu göstermiştir - 10. Ayrıca spinotrapezius ligasyon modelinde, mevcut Arteriyollerde bağlantıları 3 büyümesi yoluyla kılcal kollateralizasyonu ve C57BL / 6 yeniden şekillenmesi ile Balb / c fareleri ağlar ile yeniden C57BL / 6 fareler ile karşılaştırıldığında, Balb / c farelerinde, farklı bir yeniden tepki verdiğini göstermiştir. Bu gözlemlere ve bacak ligasyon modelinde yapılmış olanlar arasında bir ilginç paralel vardır, ki burada Balb / c fareleri C57BL / 6 fareleri ile karşılaştırıldığında 9,11,12 ligasyonu sonrası uzun bir perfüzyon iyileşmektedir &lt;/&gt; Sup. Henüz spinotrapezius ligasyon modelinde bu değişkenlerin test edilmiş olmasına rağmen doku iskemisi, fare 13 yaşında cinsiyet 14 ve 15 hastalık varlığı başka modellerinde de, Arteriyollerde oklüzyon için dokular tepkilerini etkileyebilecek. İkinci olarak, spinotrapezius modelinde ligate edilir arter büyüklüğü femoral arter göre önemli ölçüde daha küçük olan, ve bu nedenle, ligasyon spinotrapezius, dolaşım ağacının daha düşük bir seviyede, yani, daha aşağıda olan daha küçük bir doku hacim etkileri Bacak 3 ile karşılaştırıldığında. Bu müdahale konusu fizyolojik tepkiler (örneğin vasküler remodeling) karşılaştırırken Dolayısıyla, bu iki modelde ligasyon konumda anatomik farklılığı dikkate alınmalıdır. Üçüncü olarak, spinotrapezius inceliği oksijen komşu doku unperfused kısmı ulaşmak için izin verebilir3, yukarıda belirtildiği gibi, arka ayakların modelinde kombine iskemi ve hipoksi ile karşılaştırıldığında doku. Dördüncü, ligasyon spinotrapezius aşağı kısmına akış kurtarma bacak ligasyon daha hızlıdır. Spinotrapezius ligasyonu modeli eşsiz bir kronik bir modeldir ve iskemi reperfüzyon hasarı geçici arteriyel oklüzyon veya modellerin diğer modelleri ile karıştırılmamalıdır. Bu koşullar, bu tür yerleştirmek için bu model uyum sağlanmasına olanak düşünün, ama bu burada sunulan çalışmalar kapsamı dışındadır. Son olarak, biz genç ve fareler sağlıklı ve böyle yüksek kalp hızı 5 sıra doğal fizyolojik sınırlar nedeniyle kullanarak özellikle doğrudan insanlarda iskemik hastalığın klinik bu modelde ön klinik gözlemler ile karşı dikkatli olun. Bununla birlikte, biz ligasyonu doku yanıtları temel mekanizmalarını ortaya çıkarılması ve potansiyel belirlenmesi için değerli bir araç olarak bu yeni model kabulbir in vivo ortamda rapeutic hedefler. Spinotrapezius besleme ligasyonu prosedürü (anatomik ven (9a) dan arter ayırt Not (6a), ve bir tek bağ (11a) kullanımı) &#39;de verilmiştir cerrahi notlar, işlem yararı, birkaç diğer yönleri ek olarak, tartışma. İlk olarak, dorsal yağ yastığı sınır (ya da transdermal görselleştirme mümkün değilse omuz bıçak kaudal birkaç mm) üzerinde yapılan ilk kesi ideal cerrahın rahat olduğu kadar küçük yapılır ve gerekirse işlem sırasında genişletilir. Bu uygulama, cerrah için uygun insizyon kapatmak için gerekli sütür minimize işlem süresini azaltır ve aynı zamanda kurtarma sırasında hayvana daha az tahriş edicidir. Kas genişletilmiş bir alan ile bulmak daha kolay olabilir çünkü Alternatif olarak, büyük bir cilt kesisi, cerrahın tercihine göre uygun olabilir. Bu durumda, kesik olabiliromurganın doğru katlayarak izin medial açık yüzü ile bir at nalı şeklinde yarar. Cilt insizyonu yapma ve bir yüzey geminin hasar ve kanama neden ise, sekonder deri katmanları boyunca uzanan iken, steril gazlı bez ile hafif basınç uygulayın ve hemostaz için zaman verin. Ayrıca şunu da unutmayın, bu gerekli minimum kuvvet ile doku işlemek için önemlidir ve mümkün olduğunca yakın kasın lateral sınırı ve uzak amaçlanan iskemik bölgeden forseps ile tutun. Bu uygulama arter ligasyonu ile uyarılmış vasküler remodeling yanıtı yanıltabilecek ek inflamatuar aracılı doku yanıtları yol açabilir ezilme yaralanması, önlemeye yardımcı olur. Sonuç olarak, Arteriyollerde ligasyon için damar ve doku tepkileri incelenmesi için bir cerrahi örnek olarak murin spinotrapezius kas kullanımını ortaya koymuştur. Bu model için (vasküler değişikliklerin intravital değerlendirilmesi için uygundurÖrneğin, fonksiyonel vazodilatasyon), ve damar değişiklikleri ex vivo değerlendirilmesi (örneğin, damar ağlar immünofloresan görüntüleme ve kantitatif) için. Hem klinik öncesi ve klinik çalışmalar arterioler obstrüksiyonu (insanlarda fareler veya aterosklerotik plakların ligasyonu yoluyla örneğin) bir bireyin tepkisi yaşlarına bağlı olduğunu göstermiştir hastalığın varlığı veya yokluğu (örneğin diyabet) tıkalı arter çapı , bireysel ve doku 11-15 metabolik talep genetik. Böyle Burada sunulan biri olarak sıçan modellerinde, bu karmaşık ilişkiler soruşturma kolaylaştırır zorlanma özgü anatomik ve genetik farklılıkları ve hastalığa özgü fenotipleri, araştırmacı boşuna.

Kronik iskemi Hayvan modelleri, periferik arter hastalığı, koroner arter hastalığı ve serebrovasküler hastalık gibi iskemik hastalıkların patofizyolojisi araştırmak için değerli araçlardır. Kemirgenlerde, insanlarda olduğu gibi, arteriyel oklüzyon arteriogenesis ve anjiyojenez dahil olmak üzere, damar ağının yapısal yeniden yol açar. Sağlıklı ve genç hastalarda bu biçimlenme iskemiye bağlı yaralanma doku kurtarmak için yeterli olabilir, ancak diyabet gibi komorbiditeler ciddi biçimlenme ve kurtarma bozabilir. Vasküler remodeling olayların altında yatan mekanizmaların anlaşılması bu endojen revaskülarizasyon işlemlerini teşvik tedavilerin geliştirilmesi için esastır. Şu anda, bacak femoral arter ligasyonu veya rezeksiyon 4,5 küçük hayvanlar kronik iskemiye bağlı vasküler yeniden incelemek için standart bir tekniktir. Çapı, bağlantı ve reaktivite AnaliziBağlanmış femoral arter damar ağı alt-oluşturan mikrodamar kas kalınlığı nedeniyle güçtür. Bu istikrar dorsal kas 1&#39;de yanal yem arterin tek taraflı ligasyonu: Biz fare spinotrapezius kasında bir arteriolar ligasyonu modeli geliştirdik. Nispeten ince spinotrapezius (60-200 mikron) tüm doku boyunca vasküler remodeling olayların ayrıntılı bir incelemesini sağlayan tek hücreli çözünürlüğü ile tüm ağ topolojisi değerlendirilmesi için en face immun mükellef olduğunu. Spinotrapezius da yüzeysel ve erişilebilir ve böylece damarlar kolayca vasküler reaktivite üzerinde şekillenmesi ve arterioler ligasyon etkisinin etkin karakterizasyonu için, intravital mikroskop ile gözlemlenebilir. Bu yazıda ayrıntılı olarak açıklamak ve fare spinotrapezius arterioler ligasyonu modeli göstermektedir. Vivo ve ex vivo bana ikideğerlendirme cerrahi ve thods iskemik durumlar altında 6 bozulduğu görülmüştür fonksiyonel vazodilatasyon ve bütün kas mikrovasküler ağların immünofloresan görüntüleme ölçüm dahil olmak üzere, tarif edilmektedir. Ayrıca modelin yararlılığını ortaya iki ayrı pilot çalışmaların sonuçları içermektedir. Öncelikle, biz C57BL / 6 fareler (Şekil 2B) damar kıvrımlarında istatistiksel olarak anlamlı bir artış teşvik etmek için arteryel ligasyon modeli kullanılmıştır. Arteriyol teminatlar içinde arteriogenesis sırasında eğrilik artar. Diğer fare suşları ise, bu teminat arteriyoller yokluğunda (örneğin Balb / c) nedeniyle iskemi karşı daha savunmasız olan, kılcal arterleştirilmelerine 10 görülmektedir. Kapiler arterleştirilmelerine artan çap ve α-düz kas aktin reaktivite gelişim tarafından tespit edilir. İkincisi, kas fonksiyonel elektriksel stimülasyon spinotrapezi terminal arteriyollerde vazodilatasyona yol açarbize (Şekil 3B).

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Iris makas </td><td> FST </td><td> 14090-09 </td><td> Türü: Aracı </td></tr><tr><td> Boyutu 7 forseps </td><td> FST </td><td> 11271-30 </td><td> Türü: Aracı </td></tr><tr><td> Boyut 5 forseps </td><td> FST </td><td> 11251-20 </td><td> Türü: Aracı </td></tr><tr><td> Bahar makas </td><td> Roboz </td><td> RS5671 </td><td> Türü: Aracı </td></tr><tr><td> Mikroprop </td><td> FST </td><td> 10140-03 </td><td> Türü: Aracı Düz prob ile ikame edilebilir; </td></tr><tr><td> İğne tutucu </td><td> FST </td><td> 12500-12 </td><td> Türü: Aracı </td></tr><tr><td> İndüksiyon odası </td><td> Dist JD Medical. A.Ş. </td><td> IC-1086 </td><td>Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Göz Jeli </td><td> Dechra </td><td> NDC 17033-211-38 </td><td> Türü: Reaktif </td></tr><tr><td> Isı pedi </td><td> FST </td><td> 21060-01 </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Rektal sıcaklık probu </td><td> FST </td><td> 21060-01 </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Uyarıcı elektrotlar </td><td> FHC </td><td> UEWSGCSE0N1M </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> En Artisan Polimer Kil </td><td> Polyform </td><td> N / A </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> PowerLab veri toplama sistemi </td><td> ADInstruments </td><td> ML 845 </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Stimulus izolatörü </td><td> ADInstruments </td><td> FE 180 </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> LabChart </td><td> ADInstruments </td><td> ML S060 / 7 </td><td> Türü: Yazılım </td></tr&gt; <tr><td> Yansıyan ışık floresan mikroskop </td><td> Olimpos </td><td> BFXM </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Yüksek MW floresan dekstran </td><td> Sigma </td><td> FD250S-100mg </td><td> Türü: Reaktif </td></tr><tr><td> Video kaliperler </td><td> Colorado video </td><td> 308 </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Otomatik Damar Analizi (AVA) </td><td> Microvision Tıp </td><td></td><td> Türü: Yazılım </td></tr><tr><td> Anti-αSMA Konjuge florofor </td><td> Sigma </td><td> 1A4-Cy3 </td><td> Türü: Reaktif Klonal, 1:100 </td></tr><tr><td> Floresan Mikroskop </td><td> Olimpos </td><td> BFXM </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Yüksek molekül ağırlığı floresan dekstran </td><td> Sigma </td><td> FD250S-100mg </td><td> Türü: Reaktif </td></tr></tbody></table>

murine spinotrapezius model to assess the impact of arteriolar ligation on microvascular function and remodeling

Murin spinotrapezius T3 L4 uzanan ince, yüzeysel iskelet destek kas, ve dorsal cilt insizyonu yoluyla kolayca ulaşılabilir. Eşsiz anatomisi iskemik yaralanma ve sonraki mikrovasküler remodeling soruşturma spinotrapezius kullanışlı hale getirir. Burada, bizim araştırma ekibi tarafından geliştirilen ve daha önce 1-3 yayımlandı murin spinotrapezius kasında bir arteriolar ligasyon modeli göstermektedir. Gibi Balb / c fare gibi bazı hassas fare suşları için, bu ligasyon ameliyatı güvenilir iskelet kası iskemi oluşturur ve revaskülarizasyon teşvik tedavileri araştırmak için bir platform olarak hizmet vermektedir. Ölçme ve değerlendirme yöntemleri de intravital ve konfokal mikroskop kullanımı dahil, gösterilmiştir. Spinotrapezius de onun erişilebilirlik (yüzeyel dorsal anatomi) ve göreli inceliği (60-200 mikron) nedeniyle bu tür görüntüleme çalışmaları için uygundur. Spinotrapezius kas kolaylaştırılması, cepheden monte edilebilirhistolojik kesit olmadan bütün kas mikrovasküler ağların görüntüleme. Bir işlevsel vazodilatasyon prosedür takip ölçümleri elde etmek için intravital mikroskobu kullanılmasını tarif eder ve özellikle, kas kasılma bir sonucu olarak arterilar çapı artar. Biz de dokuları ve sabitleme için prosedürler, çalışmalar ve konfokal mikroskop kullanımı immünboyama için gerekli bir öncül göstermektedir.

Ligasyon uğrar spinotrapezius kas besleme ana arter bir cerrahi bakış ilgi alanlarını gösteren etiket ile, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Ligasyon Şekil 2A&#39;da gösterilmiştir sonra doğrudan alt-ligate arter bir hafta ile yer kas hasat edilmiş ve immunohistokimyasal bölge bir örnek konfokal görüntü. Düz kas hücreleri (kırmızı) ifade düz kas alfa-aktin içeren Genişletilmiş teminat arteriol ligasyonu sonrası karakteristik kıvrımlarında gösterilecek. Bağlanan kas damar yolu uzunluğu ve kablo mesafesi (yani, aynı geminin yolunu uç noktalarda uzanan çizgi) arasındaki oran olarak bildirilen Gemi kıvrımlarında, (sağ) (n = 8 Şekil 2B) unligated kontralateral kas göre geliştirilmiştir . Şekil 3, kutup vazodilatasyona arteriole fonksiyonel intravital mikroskopi kullanılarak ölçüldüğü bir pilot çalışmanın sonuçlarını gösterir. Beklendiği gibi, Arteriyollerde di<html> Seçilmiş olan disk çapından anlamlı elektriksel stimülasyon ile indüklenen kas kasılması sonrasında artar. <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1highres.jpg"/> Şekil 1. Yansıyan spinotrapezius kas ve yem arter Cerrahi alanında. Yem arter A0 ile gösterilen iki noktada bağlandı edilir. Bu bitişik harfler arasında ve kan tıkanması sonra, arter belirtilen sitede, D tarafından ana hatlarıyla, spinotrapezius kas içine, A. C tarafından özetlenen ventral yağ yastığı, gelen arter geçişlerin hedefli segmenti belirtilen sitede ma- ok B. Akış yönü kesik ok E. ile belirtilir ile ghres.jpg &quot;/&gt; Şekil 2. Kıvrımlar pilot çalışma için spinotrapezius kas mikrovasküler ağ Konfokal görüntü. (A) Hasat ve tam monte kas konfokal mikroskopi kullanılarak düz kas alfa-aktin ve görüntülü için immunohistokimyasal edildi. Görüş alanına kas bölgesi doğrudan doğruya aşağı bağlanan arteriole 1 hafta sonrası ligasyon yer göstermektedir. Dolambaçlı damar ligasyon sonucu olarak kas belirgindir (B), pilot çalışmanın sonuçları önemli ölçüde (p = 0.035; 1 kuyruklu Student t-testi) artış gösterirler. Eğrilik için damar yol uzunluğu ile ölçülen bağlanan kas içinde kılcal tarafından sergilenen C57BL / 6 fareler bir deneme için kordon mesafe oranı (n = 8), kontralateral kontrol ile karşılaştırılmıştır. <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3.jpg" alt="Şekil 3" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3highres.jpg"/> Figu3. yeniden. In vivo spinotrapezius arteriyollerde fonksiyonel vazodilatasyon intravital mikroskobu görüntüleme. Istirahatte (A) Temsilcisi kalanı (solda) spinotrapezius terminali arteriyollerin fotomikrografı ve derhal 8 Hz kas kasılması (sağda) bırakılmasını takiben. (B) Terminal arteriyol çapı ( 8.5 ± 0.5 mikron, sol) ve hemen ardından (11 ± 1 mikron, orta) belirgin arterioler çapı (artmış kas kontraksiyonu 90 sn, p = 0.032; 1-tailed) Balb / C farelerde t-testi eşleştirilmiş (n = 6). Yüzde değişim (sağ) gösterilir.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling at JoVE.com

Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling

Biz bir adım-adım prosedürü ve gerekli enstrümantasyon açıklaması dahil murin spinotrapezius kas bir roman arter ligasyonu modeli göstermektedir. Biz cerrahi ve intravital ve konfokal mikroskopi kullanılarak vasküler ağ şekillenmesi ve fonksiyonel vazodilatasyon ile ilgili, sonuç ölçümleri açıklayacağız.

Mikrovasküler Fonksiyon ve Tadilat üzerine Arteriolar Ligasyonu etkisini değerlendirmek için mürin Spinotrapezius Modeli

The murine spinotrapezius is a thin, superficial skeletal support muscle that extends from T3 to L4, and is easily accessible via dorsal skin incision. ...

murine-spinotrapezius-model-to-assess-impact-arteriolar-ligation-on

Research

JoVE Journal

Medicine

12.0K Görüntüleme.  University of Virginia. Biz bir adım-adım prosedürü ve gerekli enstrümantasyon açıklaması dahil murin spinotrapezius kas bir roman arter ligasyonu modeli göstermektedir. Biz cerrahi ve intravital ve konfokal mikroskopi kullanılarak vasküler ağ şekillenmesi ve fonksiyonel vazodilatasyon ile ilgili, sonuç ölçümleri açıklayacağız.

Video: Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo. With the advent of genetic modifications to the whole organism or the myocardium and an array of biological and/or synthetic materials, there is great potential for any combination of these to assuage the extent of acute ischemic injury and impede the onset of heart failure pursuant to myocardial remodeling. 
Here we present the methods and materials used to reliably perform this microsurgery and the modifications involved for temporary (with reperfusion) or permanent coronary artery occlusion studies as well as intramyocardial injections. The effects on the heart that can be seen during the procedure and at the termination of the experiment in addition to histological evaluation will verify efficacy. 
Briefly, surgical preparation involves anesthetizing the mice, removing the fur on the chest, and then disinfecting the surgical area. Intratracheal intubation is achieved by transesophageal illumination using a fiber optic light. The tubing is then connected to a ventilator. An incision made on the chest exposes the pectoral muscles which will be cut to view the ribs. For ischemia/reperfusion studies, a 1 cm piece of PE tubing placed over the heart is used to tie the ligature to so that occlusion/reperfusion can be customized. For intramyocardial injections, a Hamilton syringe with sterile 30gauge beveled needle is used. When the myocardial manipulations are complete, the rib cage, the pectoral muscles, and the skin are closed sequentially. Line block analgesia is effected by 0.25% marcaine in sterile saline which is applied to muscle layer prior to closure of the skin. The mice are given a subcutaneous injection of saline and placed in a warming chamber until they are sternally recumbent. They are then returned to the vivarium and housed under standard conditions until the time of tissue collection. At the time of sacrifice, the mice are anesthetized, the heart is arrested in diastole with KCl or BDM, rinsed with saline, and immersed in fixative. Subsequently, routine procedures for processing, embedding, sectioning, and histological staining are performed. 
Nonsurgical intubation of a mouse and the microsurgical manipulations described make this a technically challenging model to learn and achieve reproducibility. These procedures, combined with the difficulty in performing consistent manipulations of the ligature for timed occlusion(s) and reperfusion or intramyocardial injections, can also affect the survival rate so optimization and consistency are critical.

Numerous genetic manipulations and/or intramyocardial injections of genes, proteins, cells, and/or biomaterials are superimposed upon the dimension of time in studies of acute ischemia/ reperfusion injury and chronic remodeling in mice. This video illustrates the microsurgical procedures for ischemia/reperfusion, permanent coronary artery ligation, and intramyocardial injection studies.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Tıp

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

Mikrovasküler ve Endotel Fonksiyonu Noninvaziv Değerlendirilmesi

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is also a valuable model system to test, and to evaluate therapeutics and drugs that negate maladaptive remodeling in the vessel. The injury, or barotrauma, in the vessel lumen caused by an inflated balloon via an inserted catheter induces subsequent neointimal growth, often leading to hyperplasia or thickening of the vessel wall that narrows, or obstructs the lumen. The method described here is sufficiently sensitive, and the results can be obtained in relatively short time (2 weeks after the surgery). The efficacy of the drug or therapeutic against the induced-remodeling can be evaluated either by the post-mortem pathological and histomorphological analysis, or by ultrasound sonography in live animals. In addition, this model system has also been used to determine the therapeutic window or the time course of the administered drug. These studies can leadto the development of a better administrative strategy and a better therapeutic outcome. The procedure described here provides a tool for translational studies that bring drug and therapeutic candidates from bench research to clinical applications.

The rat carotid balloon injury model described below allows researchers to evaluate drugs or therapeutics that negate injury-induced arterial hyperplasia. Detailed pre-surgical preparation, surgical procedure, and post-surgical cares of the animal are described.

Rat Karotis Balon Yaralanma Modeli Anti-vasküler Tadilat Therapeutics Test

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by reduced blood supply to the heart, resulting in the loss of oxygen to and the ensuing necrosis of the heart muscle. The MI model has gained popularity for its use as a short-term ischemia-reperfusion model and a long-term permanent ligation model. Below, we describe a reliable method for the permanent ligation of the LAD. With mouse genetic engineering technology becoming more advanced, and with an increasing availability of quality murine surgical instruments, the mouse has become a popular model for MI surgeries. Our surgical model incorporates the use of an easily reversible anesthetic for the rapid recovery of the mouse; a minimally invasive endotracheal intubation without involving a tracheotomy; and a thoracentesis through the original thoracotomy site without creating an additional incision in the chest, as is done in some other methods, to effectively remove excess blood and air from the chest cavity. This method is comparatively less invasive than other methods, which dramatically reduces surgical and post-surgical complications and mortality and improves reproducibility.

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

We provide a reliable method for left anterior descending artery (LAD) ligation in a mouse model. This method is comparatively less invasive than other methods, involving endotracheal intubation, a left-sided thoracotomy approach, and thoracentesis. This method can be used as a model for both acute and chronic myocardial infarction (MI).

Kemirgen Sol Ön İnen (LAD) koroner arter ligasyonu: Miyokard İnfarktüsü Yönelik Gelişmiş ve Basitleştirilmiş Modeli

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

İnsan yağ dokusu mikrovasküler işlevini kullanarak Videomicroscopy değerlendirilmesi

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine models of MI with permanent ligation of left-anterior descending (LAD) coronary artery closely mimics MI in humans. Murine models benefit from the extensive genetic engineering available nowadays. Here we propose a reproducible murine surgical model of myocardial infarction by permanent LAD coronary ligation. Our technique comprises anesthesia with ketamine/xylazine that can be rapidly reversed by administration of an antagonist, intubation without tracheotomy for mechanical-assisted ventilation, ventilation with application of extrinsic positive end-expiratory pressure (PEEP) to avoid alveolar collapse, a thoracotomy method limiting to the minimum surgical lesions made to skeletal muscles, and lung inflation without thoracentesis. This method is sparsely invasive, reproducible and reduces post-surgery mortality and complications.

Herein we describe a surgical procedure showing how to achieve permanent ligation of the left-anterior descending coronary artery in mice. This model is of high relevance to investigate the pathophysiology of myocardial infarction and the concomitant biological processes.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely correlated with a history of articular cartilage damage and ligament avulsion. Surgical animal models of OA of the knee play an important role in understanding the onset and progression of post-traumatic OA and aid in the development of novel therapies for this disease. However, non-surgical models have been recently considered to avoid traumatic inflammation that could affect the evaluation of the intervention. 
In this study, an intra-articular cartilage lesion rat model induced by in vivo cyclic compressive loading was developed, which allowed researchers to (1) determine the optimal magnitude, speed, and duration of load that could cause focal cartilage damage; (2) assess post-traumatic spatiotemporal pathological changes in chondrocyte vitality; and (3) evaluate the histological expression of destructive or protective molecules that are involved in the adaptation and repair mechanisms against joint compressive loads. This report describes the experimental protocol for this novel cartilage lesion in a rat model.

Here, we present the cyclic loading-induced intra-articular cartilage lesion model of the rat knee, generated by 60 cyclic compressions over 20 N, resulting in damage to the femoral condylar cartilage in rats.

Sıçan Dizinin Döngüsel Yüklemeye Bağlı Eklem İçi Kıkırdak Lezyon Modelini Oluşturmak için Non-İnvaziv Bir Yöntem

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...

Left Coronary Artery Ligation: A Surgical Murine Model of Myocardial Infarction

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In order to explore the pathophysiological changes after myocardial infarction and design future treatments, research models of MI are required. Permanent ligation of the left coronary artery (LCA) in mice is a popular model to investigate cardiac function and ventricular remodeling post MI. Here we describe a less invasive, reliable, and reproducible surgical murine MI model by permanent ligation of the LCA. Our surgical model comprises of an easily reversible general anesthesia, endotracheal intubation that does not require a tracheotomy, and a thoracotomy. Electrocardiography and troponin measurement should be performed to ensure MI. Echocardiography at day 28 after MI will discern heart function and heart failure parameters. The degree of cardiac fibrosis can be evaluated by Masson's trichrome staining and cardiac MRI. This MI model is useful for studying the pathophysiological and immunological alterations after MI.

Presented here is a surgical procedure for permanent ligation of the left coronary artery in mice. This model can be used to investigate the pathophysiology and associated inflammatory response after myocardial infarction.

Sol Koroner Arter Ligasyonu: Miyokard Enfarktüsünün Cerrahi Murin Modeli

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In ...