Bugün tanıttığımız şey, ApoE farelerinde arka ekstre iskemi kurmak için basitleştirilmiş modifiye edilmiş ve cerrahi olarak verimli bir yöntemdir. Bu yöntem herhangi bir hayvan tesisinde uygulanabilir. Sinovyal yöntemin ana avantajı, beş milimetreden daha az bir kesi kullanarak düşük bir invazivliktir.
Yöntemin bir öğrenme hof'una sahiptir. Bu nedenle, son analize dahil edilecek hayvanlar üzerinde çalışmadan önce mikrocerrahi modeller üzerinde pratik yapmanızı tavsiye ediyoruz. Yöntem kaixuan Yan tarafından gösterilecek, bir tıp doktoru ve laboratuvarımdan öğrenci.
Ameliyat için gerekli ekipman ve aletleri hazırlayarak başlayın. Anesteziyi fareye uyguladıktan sonra, kuruluğu önlemek için bu merhemi gözlere uygulayın. Ardından, çekirdek vücut sıcaklığını yaklaşık 37 santigrat derecede tutmak için fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin.
Pamuklu çubuk ve epilasyon kremi kullanarak, sağ taraftaki arka uzuv derisinden saçları dikkatlice çıkarın. Fareyi, bir diseksiyon mikroskobu altında ısıtma yastığı üzerindeki supine konumuna yerleştirin. Cildi dezenfekte etmek için alkol kullanın ve pamukla kesiğin bitki tarafından silin.
Sivri uçlu ve cerrahi makas kullanarak kasık bölgesinin ortasında yaklaşık üç ila dört milimetrelik bir kesi yapar. Proksimal femoral nörovasküler demetini ortaya çıkarmak için ince sivri tokmaklar yardımıyla deri altı yağ dokusunu dikkatlice çıkarın. Salin ile nemlendirilmiş bir pamuklu çubuk kullanarak, femoral arteri femoral sinir ve femoral damardan dikkatlice uzaklaştırın.
Daha sonra 7.0 dikişinin ucunu kullanarak, femoral kılıfın zarını dikkatlice delin. Daha sonra proksimal femoral arterden 7-0 emilebilir dikişe geçin ve yay makasını kullanarak çift düğüm yapın. Daha sonra iki bağ arasındaki femoral arteri transekte edin.
6-0 emilebilir dikişi kesiğin alt kenarından geçirin ve distal femoral arteri ortaya çıkarmak için kesiği arka uzvun dizininin sağ tarafının bölgesine hafifçe sürükleyin. Nörovasküler demeti açığa çıkarmak için deri altı dokusunu dikkatlice bir kenara hareket ettirin. Femoral arteri femoral damar ve femoral sinirden parçalara ayrıştırın ve siniri korumak için pamuk kullanın.
Daha sonra 7.0 dikişinin ucunu kullanarak, femoral kılıfın zarını delin. Distal femoral arterden iki adet 7-0 emilebilir dikiş geçirin ve iki bağ arasındaki uyluk atardamarını transkripsiyon için yay makasını kullanarak çift düğüm yapın. Daha sonra, 6-0 emilebilir dikişleri kullanarak kesiği dikin.
Fareyi temiz bir kafeste bir ısıtma yastığına yerleştirin ve iyileşene kadar hayati parametrelerini izlemeye devam edin. Ertesi gün MRI ile femoral arter veya DLFA'nın çift ligasyon başarısını belirleyin. DLFA prosedüründen önce, farelerin ağırlıkları 29.6 ila 38.0 gram arasında değişmektedir.
DLFA ameliyatından yedi gün sonra, ağırlıklar 26,5 ila 34,1 gram arasında değişmekte dır, DLFA öncesi ağırlıklardan önemli ölçüde daha düşüktür. Sağ SK'nın proksimal ve distal bölgelerinde perfüzyon saptanmamıştır. Tarlov ölçeği sonuçları ameliyattan bir gün sonra önemli ölçüde azaldı.
İlerleyen günlerde yavaş yavaş artsalar da, yedinci güne kadar taban çizgisine göre hala daha düşüktüler. Yedi faredeki iskemik arka bacakların pençeleri, kontralteral tarafa kıyasla doğal olarak esneyemedi. Ek olarak, farelerden dördü, karşıt tarafa kıyasla pençelerin hafif renk değişikliği gösterdi.
Sağ GM kasının H&E lekesi, çoğalan uydu hücrelerinin nekrotik miyoberlerin yerini aldığı ve bir kütle içinde veya düzenli bir dağılımla dağıtıldığı düzensiz iskemik nekroz sergileyen miyoberleri ortaya çıkardı. Çok sayıda makrofajla enflamatuar infiltrasyon sergileyen miyofiberler normal morfolojik özelliklerini kaybetmiş, çok az sayıda yenilenmiş miyofiber mevcuttu. Bu yenilenmiş miyofiberlerin enine bölümleri yuvarlaktı.
Sitoplazm kırmızıya boyanmış ve merkezde küçük bir çekirdek veya birden fazla çekirdek bulunuyordu. Ancak sol GM'de bu tür inflamatuar örüntü gözlenmedi. Mikrovasküler yoğunluğu gözlemlemek için yapılan CD31 antikor lekeleme, iskemik arka uzuvların iskemik olmayan tarafa göre önemli ölçüde daha fazla mikrovasküler yoğunluk gösterdiğini gösterdi. En önemli şey femoral arterin diseksiyonudur.
Operatörün mikrocerrahi tekniklerde deneyimli olması ve fare arka plan anatomisine aşina olması gerekir. Prensip olarak, bu yöntem bacaktaki iskemi-reperfüzyon yaralanmasını incelemek için de kullanılabilir. Bu nedenle, arter reperfüzyona izin vermeden önce yumuşak bir damar kelepçesi ile tıkanabilir.
