Biz Viroloji Enstitüsü hayvan tesis kullanma izni için yükseltme ve MCMV-Luc ve Thomas Baumert (INSERM U748, Strasbourg) titre için Lee Tuddenham (IBMC, Strasbourg) teşekkür ederim. INSERM, Université de Strasbourg ve Agence Nationale de la Recherche (ANR-08-MIEN-005-01) maddi destek kabul edilmektedir. Yüksek lisans proje süresince Sonia Beroud ve Laetitia Lelieur ilk katılımı da kabul edilmektedir.

1. Viral Süspansiyon hazırlanması <ol><li> Ulrich Koszninowski en laboratuvardan MCMV ifade Lusiferaz en Smith suşu (MCMV-Luc 15) edinin. Bu rekombinant olarak, lusiferaz geninin MCMV genomun IE2 lokusunda eklenir. </li><li> MCMV-Luc yükseltmek için, enfeksiyon çokluğu farklı (İB, 0,001-1) 16 MCMV bir fare kemik iliği stromal hücre hattı (M2-10B4, ATCC # CRL-1972), Infect. Bunun için, 37 serumsuz ortamda kültürlenmiş hücrelere virüs eklemek ° C Bir saat sonra, süpernatant kaldırmak ve DMEM,% 10 fetal buzağı serumu (FCS) ile takviye ile değiştirin. Beş gün sonra, daha sonra kullanmak kadar -80 kültür ortamı ve mağaza alikotları ° C hasat. </li><li> Plak yöntemi ile viral süspansiyon Titrasyon. <ol><li> DMEM 40,000 hücre, bir 24 yuvalı plaka 3T3 hücreleri (ATCC # CRL-1658) split / oyuk içinde 1 ml penisilin (200 IU / ml) ve steptomycin (200 mg / ml ihtiva eden% 10 FCS ile desteklenmiş) Ve 37 &#39;de 24 saat inkübe ° C </li><li> DMEM MCMV süspansiyonun bir alikotu seri dilüsyonları (10 -1 10 -8) hazırlanması ve hücre kültürü ortamı çıkarıldıktan sonra 200 ul seyreltme ile hedef hücreler (3T3) Infect. 1 saat 37 ° C&#39;de inkübe Üst orta 1 ml (DMEM% 3 FCS,% 2 (v / v) gentamisin, 200 IU / ml penisilin, 200 mg / ml streptomisin, 8 g / L, karboksimetil selüloz) ekleyin ve 37 ° 5 gün inkübe ° C </li><li> Her kuyuya 200 ul% 10 formaldehit (su formaldehid ile seyreltme toksik inhalasyon önlemek için kimyasal bir kaput yapılmalıdır) eklenmesi ve oda sıcaklığında 6 saat inkübe edilmesiyle hücreleri saptamak. Pipetleme ile kültür ortamı + fiksatör çıkarın ve 200 ul hücre boyama çözeltisi (% 20 etanol içinde% 1 kristal viyole (w / v)) ekleyin. Kullanımdan önce, 9 kısım Milli-Q su ile 1 kısım seyreltin. Oda sıcaklığında 2 dakika inkübe, suyla ıslatılarak 3-4x plakasını yıkayın, gözlü olan plakların sayısını saymak ve kuru sağlar. </li></ol></li> &lt;li&gt; 50 ul 50 PFUs almak ve daha sonra kullanmak kadar buz üzerinde bırakmak DMEM MCMV-Luc seyreltilir. Yenidoğanların yaş 2-3 hafta ulaşmadan yüksek viral mikroorganizma kullanarak ölümcül neden olur. Bizim tecrübelerimize göre, 500 PFUs enjeksiyon sonrası her yenidoğanda 5 ila 7 gün içinde öldürücü neden. </li></ol> 2. Yenidoğan enjeksiyon <ol><li> Yenidoğanlarda (4 ila 20 saat-farelerden) mevcut olduğunda, anne stres ve yavruların reddedilmesi neden olur &quot;yabancı&quot; kokuları ile kirlenmesini önlemek için dikkatli bir şekilde yavrular kullanmadan önce çöp ve eldiven ile kafesin dışkı işlemek . </li><li> Şekil 1A &#39;de gösterildiği gibi bir insülin şırıngası (29 g) kullanılarak, bir intraperitoneal gerçekleştirin. Dorsal deri ile yenidoğan tutun. Ventral tarafı yukarı gelecek şekilde, ön ayak altında iğne tanıtmak ve yavaşça periton boşluğuna (göbek biraz altında) elde etmek için cilt altına itin. Şu anda DPBS seyreltilmiş 1% metilen mavisi enjekte ve p hayatta kalma izlemekviral enfeksiyonlar gerçekleştirmeden önce ractice tekniği. Metilen mavisi enjeksiyon işlemi sırasında açıkça görünür olduğu için, biz intraperitoneal boşluğunda viral süspansiyon uygun teslim edilmesini sağlamak için önce bu &quot;eğitim&quot; enjeksiyon performans öneririz. </li><li> Ortaya çıkan ve yenidoğan geri kafesin içine yerleştirebilir küçük kan damlaları ortadan kaldırın. </li></ol> 3. In vivo Görüntüleme <ol><li> 7. günde, aynı daha önce belirtildiği gibi dikkat ile yenidoğan ele. Intraperitoneal anestetik madde (4 mg / ml ketamin, 0.8 mg / ml &#39;ksilazin) ve her hayvan 50 ul içinde luciferase (0.15 mg / g vücut ağırlığı) oluşan bir karışım enjekte edilir. Hayvanların ortalama vücut ağırlığı 1-2 g ve anestezik hayvan başına doz olduğunu: luciferase emisyonunun maksimum ulaşıncaya kadar ketamin 40 mg, ksilazin 8 mikrogram 12-15 dk bekleyin. Bu önceden belirlenmelidir ve luciferase sağlayıcı ve kullanılan görüntüleme sistemine bağlıdır. </li><li> Yavrular anestheti olsa dazed, gelecek tanımlama için onları etiketlemek ve mutant hayvanlar kullanıldığında daha sonra gelecek genotipleme için kullanılabilir doku küçük bir parça hasat. </li><li> Görüntüleme sisteminde yavrular yerleştirin ve tüm vücudunun yaydığı ışığın satın gerçekleştirin. Enfeksiyondan sonra yedi gün, virüs hedef karaciğer gibi organlar, böbrek, akciğer ve tükürük bezleri çok sayıda kopya içine çoğaltıldıktan, bu nedenle, maruz kalma süresi kısa olmalıdır. Bizim durumda, 10-20 saniye (Şekil 1B) için toplama yerine getirir. Görüntüleme cihazı satın odasındaki platformun anestezi hayvanların vücut sıcaklığının aşırı soğutma önlemek için ısıtılması gerekmektedir. Buna ek olarak, bu satın alma bir tur içinde birkaç hayvan düşük çözünürlüklü görüntüler elde etmek ve daha sonra, diseksiyon sonra belirli bir hayvan ya da izole organ bir parçası odaklanmak için platform yakın kamera lensi için yukarı taşımak için yararlıdır. Yazılım hızlı değişimler etkinleştirmeniz gerekirilgi ve anlık görüntülerin gelecekteki ihracat tanımlanan bölgelerin parametrelerin (maruz kalma süresi, mesafe örnek / lens, hassasiyet), miktar. </li><li> Sadece baş ışık sinyali elde etmek için, yüksek viral replikasyon oluşur organların düzeyi (karaciğer, akciğer, tükrük bezleri) de yayılan fotonlar maske ve gerçekleştirecek bir kalın, koyu kağıt ile yanal yatan yenidoğanların vücudu kaplar 5 ila 10 dakika (Şekil 1C) için satın alma. Aynı koşullar altında, hayvanın karşılıklı yan edinimi yapın. </li><li> Kafesin içine yavrular reintroduce ve anestezi yenidoğanların aşırı soğutma önlemek için üzerine bir ısıtma lambası yerleştirin. Düzenli sonrası anestezi kurtarma izlemek. Sözü edilen doz ile, anestezi anda 30 dakika sürer. </li><li> Gün 9, 11 ve 14 aynı işlemi tekrarlayın. Gün 11 ve 14 üzerinde, anestezik (6 mg / ml ketamin, 1.2 mg / ml &#39;ksilazin)&#39; in dozu değiştirin. </li></ol>

<ol>
	<li>Loewendorf, A., Benedict, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+host+innate+and+adaptive+immune+defenses+by+cytomegalovirus:+timing+is+everything.">Modulation of host innate and adaptive immune defenses by cytomegalovirus: timing is everything.</a> J. Intern. Med. 267, 483-501 (2010).</li><li>Lischka, P., Zimmermann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiviral+strategies+to+combat+cytomegalovirus+infections+in+transplant+recipients.">Antiviral strategies to combat cytomegalovirus infections in transplant recipients.</a> Curr. Opin. Pharmacol. 8, 541-548 (2008).</li><li>Johnsen, J. I., Baryawno, N., Soderberg-Naucler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+human+cytomegalovirus+a+target+in+cancer+therapy?.">Is human cytomegalovirus a target in cancer therapy?.</a> Oncotarget. 2, 1329-1338 (2011).</li><li>Morein, B., Abusugra, I., Blomqvist, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+in+neonates.">Immunity in neonates.</a> Vet. Immunol. Immunopathol. 87, 207-213 (2002).</li><li>Zaghouani, H., Hoeman, C. M., Adkins, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+immunity:+faulty+T-helpers+and+the+shortcomings+of+dendritic+cells.">Neonatal immunity: faulty T-helpers and the shortcomings of dendritic cells.</a> Trends Immunol. 30, 585-591 (2009).</li><li>Morein, B., Blomqvist, G., Hu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+responsiveness+in+the+neonatal+period.">Immune responsiveness in the neonatal period.</a> J. Comp. Pathol. 137, 27-31 (2007).</li><li>Cheeran, M. C., Lokensgard, J. R., Schleiss, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathogenesis+of+congenital+cytomegalovirus+infection:+disease+mechanisms+and+prospects+for+intervention.">Neuropathogenesis of congenital cytomegalovirus infection: disease mechanisms and prospects for intervention.</a> Clin. Microbiol. Rev. 22, 99-126 (2009).</li><li>Tsutsui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cytomegalovirus+infection+on+embryogenesis+and+brain+development.">Effects of cytomegalovirus infection on embryogenesis and brain development.</a> Congenit. Anom. (Kyoto). 49, 47-55 (2009).</li><li>Sancho-Shimizu, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+susceptibility+to+herpes+simplex+virus+1+encephalitis+in+mice+and+humans.">Genetic susceptibility to herpes simplex virus 1 encephalitis in mice and humans.</a> Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 7, 495-505 (2007).</li><li>Crozat, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+MCMV+resistome+by+ENU+mutagenesis.">Analysis of the MCMV resistome by ENU mutagenesis.</a> Mamm. Genome. 17, 398-406 (2006).</li><li>Juanjuan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+for+congenital+CMV+infection+and+hearing+impairment.">Murine model for congenital CMV infection and hearing impairment.</a> Virol. J. 8, 70 (2011).</li><li>Koontz, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+development+of+the+brain+after+focal+herpesvirus+infection+of+the+central+nervous+system.">Altered development of the brain after focal herpesvirus infection of the central nervous system.</a> J. Exp. Med. 205, 423-435 (2008).</li><li>Bantug, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+lymphocytes+control+murine+cytomegalovirus+replication+in+the+central+nervous+system+of+newborn+animals.">CD8+ T lymphocytes control murine cytomegalovirus replication in the central nervous system of newborn animals.</a> J. Immunol. 181, 2111-2123 (2008).</li><li>Wells, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+welfare+and+the+3Rs+in+European+biomedical+research.">Animal welfare and the 3Rs in European biomedical research.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1245, 14-16 (2011).</li><li>Sacher, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+cell+types+in+cytomegalovirus+infection+in+vivo.">The role of cell types in cytomegalovirus infection in vivo.</a> Eur. J. Cell Biol. 91, 70-77 (2012).</li><li>Lutarewych, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+and+titration+of+murine+cytomegalovirus+in+a+continuous+bone+marrow-derived+stromal+cell+line+(M2-10B4).">Propagation and titration of murine cytomegalovirus in a continuous bone marrow-derived stromal cell line (M2-10B4).</a> J. Virol. Methods. 68, 193-198 (1997).</li></ol>

Yazarlar herhangi bir mali çıkar beyan ederim. Etik açıklama Hayvanlar Institut d&#39;İmmunolojik et d&#39;hematologie en hayvan bakım tesisi patojen içermeyen koşullar altında muhafaza edildi. Fare ve deneysel prosedürlerin işleme Laboratuvar Hayvanları Koruma Fransız Kanun uyarınca yapılmıştır. Prosedür yetki numarası A-67-345 altında hizmet vétérinaire de la Préfecture du Bas-Rhin (Fransa) tarafından onaylandı.

Fareler yenidoğanlarda MCMV-Luc yayılmasını izlemek için in vivo görüntüleme teknolojisi kullanarak, biz yabani tip karşı mutant hayvanların beyin viral yayılma gözlemlemek mümkün. Beynin hayvan ve ex vivo görüntüleme daha fazla diseksiyon merkezi sinir sisteminde lüminesan virüsünün varlığını doğruladı. Buna ek olarak, aynı zamanda MCMV E1 erken protein için spesifik bir antikor ile beyin ince kesitler üzerinde (gösterilmemiş olan) immünohistokimya gerçekle?...

İnsan Sitomegalovirüs (HCMV/HHV-5) β-herpes ailesinin bir üyesidir. HCMV genellikle asemptomatik enfeksiyon 1 gibi erken ömrü boyunca elde edilir son derece yaygın, fırsatçı patojendir. Tüm herpes gibi, HCMV bağışıklık sistemi sıkıca viral replikasyon kontrol eden ev sahibi, tüm ömrü boyunca devam. Viral reaktivasyonu Bölüm çoğunlukla böyle greft reddi 2 önlemek için ilaç alan transplant hastaları gibi bağışıklık sistemi baskılanmış kişilerde ortaya çıkar. Yetişkinlerde, HCMV, glioblastomlar da 3 ile bağlantılı olmuştur. Buna ek olarak, HCMV olgunlaşmamış bağışıklık 4-6 ile yeni doğanlar için önemli bir patojendir. Gelişmekte olan fetus veya yenidoğanda primer enfeksiyon ciddi sonuçlara yol açabilir. HCMV enfeksiyonu, gelişmiş ülkelerde konjenital doğum kusurlarına ve çocukluk çağı bozukluklarının en yaygın enfeksiyonlu hastalık nedenidir. Bu yenidoğan HCMV enfeksiyonu insidansı% 0.5-1 O etkilediği tahmin edilmektedirf% 5-10, mikrosefali veya serebellar hipoplazi gibi ciddi belirtiler yaşayacaktır aralarında tüm canlı doğumlar. Buna ek olarak, subklinik viral enfeksiyon ile enfekte bebeklerin% 10 daha sonra kaybı, görme bozuklukları veya nöbet ve epilepsi 7,8 işitme, zeka geriliğine yol sequellae geliştirecektir. Gibi enjeksiyon 9 farklı yolla farelere inoküle edilebilir gibi Herpes Simplex 1 (HSV-1/HHV-1) gibi diğer insan herpes karşı, sitomegalovirüs çoğaltma tür özgüdür. Bu özellik, ciddi bir şekilde farklı hayvan modellerinde gerçekleştirilen HCMV, patojenez araştırmalar engel (fare, sıçan, kobay, al yanaklı maymun) ve kendi orijinal ana özgü CMVs biriktirdi. Tüm CMVs genom büyüklüğü ve organizasyon, doku tropizm ve gen ifadesinin düzenlenmesinde önemli benzerlikler gösterirler. Ayrıca kendi ev sahibi benzer patolojiler neden. Rağmen genomik çeşitlilik olmakHCMV, ara ve fare sitomegalovirüs (MCMV) (ORF% 50 sıçangil CMV tanımlanan insan virüsü olarak mevcut), fare modeli, en son çok mutant virüs kontrol etme kabiliyeti açısından test edilebilir, çünkü avantajlı olduğu kanıtlanmıştır in vivo çoğaltma. Bu, bu virüs 10 &quot;resistome&quot; oluşturan yetişkin aşamada ifade fare gen sayısı, bir tahmini etkin bir genetik bir ekran yol açmıştır. Toplamda, bu, MCMV ile enfekte farelerde yetişkinlerde konak-virüs etkileşimleri çalışma için cazip bir modeli temsil gösterir. Insan ve fareler arasındaki plasental katman organizasyon farklılıklar farelerde viral enfeksiyon anne-to-fetus aktarımını etkileyebilir çünkü konjenital CMV enfeksiyonu keşif daha karmaşıktır. Son zamanlarda, gebeliğin gün 12.5 ile plasenta MCMV doğrudan enjeksiyon bozukluğu 11 işitme yol açan fareler yenidoğanların beyin enfeksiyonu sağladı. Bununla birlikte, çoğu investigations şimdi potansiyel hematojen beyin enfeksiyonu yol açan sistemik viral yayılması, bir kafa içi enjeksiyon bundan daha uygun bir model sağlamak için 4-20 saat-eski yenidoğanların intraperitoneal kullanın. Bu protokol, CMV patogenezinde önemli bilgiler verilmiştir ve daha özel olarak ise, bu makrofajlar 12 gibi tek çekirdekli hücreleri ile infiltre inflamatuvar odaklar bulunan nöronal ve glial hücrelerde viral replikasyonda yeni doğan sonuç olduğunu MCMV enfeksiyon gösterilmiştir. Bu rapor ayrıca, azalmış granül nöron çoğalması ve yer değiştirmesi ve birden fazla interferon uyarımlı gen oluşumu ile birlikte, beyincik değiştirilmiş morfojenezini tarif. Merkezi sinir sisteminde MCMV bölgesinin kontrolü için CD8 + T hücrelerinin önemli bir rol aynı grup 13 tarafından rapor edilmiştir. Bir mikrobun patolojik etkisini analiz dikkate alınması gereken önemli bir yönü enfekte dinamikleri olaniyon. MCMV durumunda, gelecekte nörobiyolojik yaralanma büyüklüğünü anlamak ve tahmin etmek için gelişmekte olan beyin viral yayılması ve ilerlemesini keşfetmek ve ölçmek için özellikle önemlidir. Geleneksel olarak, bir enfeksiyonun ilerleme miktarının enfekte hayvanların normal kurban başka nedenden ötürü erişilemez olan beyin gibi dokularda patojen, titre gerektirir. Protokol Bu tür şimdi gerekli hayvan refahı iyileştirilmesi ve 3RS (Değiştir, daraltın azaltın) ilkeleri 14 tarafından meydan. In vivo görüntüleme teknolojileri kullanılarak in vivo enfeksiyon deneylerde gerekli olan hayvanların sayısı ciddi bir azalma sağlayabilir. Burada, rapor ve fare yenidoğanlarda için periton MCMV-Luc enjeksiyon üzerine beyin içine viral yayılması bir zaman ders analizi tarif. Aynı hayvanlar kullanarak, yoğun vi siteleri takip ve in vivo takip2 haftalık bir dönemde ral çoğaltma.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagent/Material</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>W3523A</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Methylene blue</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>319112</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Insulin needles</td>
			<td>VWR</td>
			<td>613-4897</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>CentraVet</td>
			<td>Ket 201</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Xylazine/Vetranal</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>46995</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>DUTSCHER</td>
			<td>P0436500</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Luciferin</td>
			<td>Caliper</td>
			<td>760504</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>gentamycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G1272</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>penicillin/streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>carboxymethylcellulose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C4888</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>formaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>crystal violet</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C3886</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>IVIS 50</td>
			<td>Caliper/Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

use of in vivo imaging to monitor the progression of experimental mouse cytomegalovirus infection in neonates

İnsan Sitomegalovirüs (HCMV veya HHV-5) bağışıklık sistemi baskılanmış kişilerde hayatı tehdit eden bir patojendir. Konjenital veya neonatal enfeksiyon üzerine, virüs bulaşabilir ve sağırlık ve zeka geriliği gibi ciddi nörolojik hasar, neden olabilir gelişmekte olan beyin, çoğaltmak. Semptomların potansiyel ciddiyeti rağmen, tedavi seçenekleri, bir aşı ve belirli bir antiviral tedavinin yokluğunda olmaması ile sınırlıdır. Gözlemler çoğunlukla enfekte çocukların otopsi türeyen bu yana Ayrıca, merkezi sinir sistemi (MSS) enfeksiyon sırasında meydana gelen moleküler olayların kesin bir açıklamasına hala eksiktir. Bu Rhesus makak CMV gibi çeşitli hayvan modellerinde, MSS CMV patogenezinde dönüştü ve önemli bilgiler verilmiştir. Ancak, insanlar ile evrimsel yakınlığı rağmen, bu model hayvanlar ve eksilerini bulaştırmak için kullanılan kafa içi aşılama prosedürü ile sınırlıydıistently MSS enfeksiyonu neden. Ayrıca, etik fare sitomegalovirüs (MCMV) ile yeni doğan farelerin neonatal enfeksiyon son zamanlarda önemli adımlar atılmış durumda aralarında, alternatif modellerin geliştirilmesi teşvik var. Örneğin, Balb / c yenidoğan için MCMV intraperitoneal, beynin spesifik bölgelerinde nöronlar ve glial hücrelerin enfeksiyonu neden olduğu rapor edilmiştir. Bu bulgular, farelerin deneysel aşı çocuklarda HCMV enfeksiyonuna tarafından uyarılan açıkları özetlemek olabileceğini düşündürmektedir. Bununla birlikte, yenidoğanların MCMV enfeksiyon dinamik bir analiz klasik yöntem viral yükü ve / veya bağışıklık ile ilgili parametreler analiz etmek için farklı zaman noktalarında hayvanların önemli sayıda kurban gerektirdiği için yapmak zordur. Bu darboğaz aşmak için ve nadir mutant hayvanlar gelecekteki araştırmalar sağlamak için, biz vira bir zaman ders analiz gerçekleştirmek için in vivo görüntüleme teknolojisi uygulananC57BL / 6 yenidoğan için lusiferaz ifade eden bir rekombinant MCMV periferik enjeksiyon üzerine beyinde l dağıtılması.

Temsili bir deney Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. MCMV-Luc 50 PFUs (A Paneli iğnenin deri altı görselleştirmek için metilen mavisi ile yapılan benzer bir enjeksiyonunu göstermektedir) intraperitonal enjeksiyonu sırasında, yeni doğan bebekler anestezi edilmiştir ve aynı zamanda, lusiferaz substrat (luciferase, kaliper), 0.3 mg. On beş dakika sonra, hayvanlar IVIS 50 edinimi odası (Vivo Görüntüleme Sistemi, Kaliper) ventral yüzü yukarı yerleştirildi ve bütün hayvan yaydığı ı?...

Watch this Scientific Journal Video about Use of In vivo Imaging to Monitor the Progression of Experimental Mouse Cytomegalovirus Infection in Neonates at JoVE.com

Use of In vivo Imaging to Monitor the Progression of Experimental Mouse Cytomegalovirus Infection in Neonates

Yenidoğanların İnsan Sitomegalovirüs (HCMV) enfeksiyonu zeka geriliği önemli bir nedeni temsil, henüz virüs kaynaklı patogenezinde yol açan moleküler olayların hala tam olarak anlaşılamamıştır. Beyin enfeksiyon dinamiğini incelemek için, bütün hayvan adapte<em&gt; In vivo</em&gt; Görüntüleme lusiferaz-rekombinant virüs ile enfekte yenidoğanların zaman ders analiz yapmak için.

Kullanımı<em&gt; In vivo</em&gt; Görüntüleme Yenidoğanlar Deneysel Fare Sitomegalovirüs Enfeksiyon ilerleme Monitör

Human Cytomegalovirus (HCMV or HHV-5) is a life-threatening  pathogen in immune-compromised individuals. Upon congenital or neonatal  infection, the virus ...

use-vivo-imaging-to-monitor-progression-experimental-mouse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Use of In vivo Imaging to Monitor the Progression of Experimental Mouse Cytomegalovirus Infection in Neonates

14.8K Görüntüleme.  Université de Strasbourg. Yenidoğanların İnsan Sitomegalovirüs (HCMV) enfeksiyonu zeka geriliği önemli bir nedeni temsil, henüz virüs kaynaklı patogenezinde yol açan moleküler olayların hala tam olarak anlaşılamamıştır. Beyin enfeksiyon dinamiğini incelemek için, bütün hayvan adapte In vivo Görüntüleme lusiferaz-rekombinant virüs ile enfekte yenidoğanların zaman ders analiz yapmak için.

Video: Use of In vivo Imaging to Monitor the Progression of Experimental Mouse Cytomegalovirus Infection in Neonates

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most common forms of disease are visceral leishmaniasis (VL) and cutaneous leishmaniasis (CL). Mouse models of leishmaniasis are widely used, but quantification of parasite burdens during murine disease requires mice to be euthanized at various times after infection. Parasite loads are then measured either by microscopy, limiting dilution assay, or qPCR amplification of parasite DNA. The in vivo imaging system (IVIS) has an integrated software package that allows the detection of a bioluminescent signal associated with cells in living organisms. Both to minimize animal usage and to follow infection longitudinally in individuals, in vivo models for imaging Leishmania spp. causing VL or CL were established. Parasites were engineered to express luciferase, and these were introduced into mice either intradermally or intravenously. Quantitative measurements of the luciferase driving bioluminescence of the transgenic Leishmania parasites within the mouse were made using IVIS. Individual mice can be imaged multiple times during longitudinal studies, allowing us to assess the inter-animal variation in the initial experimental parasite inocula, and to assess the multiplication of parasites in mouse tissues. Parasites are detected with high sensitivity in cutaneous locations. Although it is very likely that the signal (photons/second/parasite) is lower in deeper visceral organs than the skin, but quantitative comparisons of signals in superficial versus deep sites have not been done. It is possible that parasite numbers between body sites cannot be directly compared, although parasite loads in the same tissues can be compared between mice. Examples of one visceralizing species (L. infantum chagasi) and one species causing cutaneous leishmaniasis (L. mexicana) are shown. The IVIS procedure can be used for monitoring and analyzing small animal models of a wide variety of Leishmania species causing the different forms of human leishmaniasis.

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

An in vivo imaging system is used to generate quantitative measurements of murine infection with the Trypanosomatid protozoan Leishmania. This is a non-invasive and non-lethal method for detecting parasites expressing luciferase within many tissues throughout the course of chronic Leishmania spp. infection.

Canlı bir Host Transgenik Leishmania Parazitlerinin in vivo Imaging

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists. The value of 2P microscopy is that it provides rich spatiotemporal information regarding cell behaviors within intact tissues and in live mice. Leukocyte recruitment plays a significant role in host defense against infection and when unchecked, can contribute to inflammatory and autoimmune diseases. Studying leukocyte recruitment in vivo is technically challenging since cells are moving rapidly within vessels located deep within light scattering tissues. To date, most intravital imaging studies require surgical preparation to expose the blood vessels and tissues. To avoid the tissue damage and inflammation induced by surgery itself, here, we describe a non-invasive single-cell imaging approach that can be used to study leukocyte trafficking in the mouse footpad and phalanges. We discuss the technical aspects of our 2P imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Here, we describe a non-invasive two-photon (2P) microscopy approach to study leukocyte homing in the mouse footpad. We discuss the technical aspects of our tissue imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

Lökosit Homing Göç ve non-invaziv Görüntüleme In vivo</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) is an effective and popular means to monitor lymphocyte division1-3. CFSE covalently labels long-lived intracellular molecules with the fluorescent dye, carboxyfluorescein. Thus, when a CFSE-labeled cell divides, its progeny are endowed with half the number of carboxyfluorescein-tagged molecules and thus each cell division can be assessed by measuring the corresponding decrease in cell fluorescence via Flow cytometry. The capacity of CFSE to label lymphocyte populations with a high fluorescent intensity of exceptionally low variance, coupled with its low cell toxicity, make it an ideal dye to measure cell division. Since it is a fluorescein-based dye it is also compatible with a broad range of other fluorochromes making it applicable to multi-color flow cytometry. This article describes the procedures typically used for labeling mouse lymphocytes for the purpose of monitoring up to 8 cell divisions. These labeled cells can be used both for in vitro and in vivo studies.

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester CFSE to Monitor Lymphocyte Proliferation

CFSE covalently labels long-lived intracellular molecules with the fluorescent dye, carboxyfluorescein. As such, when a CFSE-labeled cell divides, its progeny have half the amount of fluorescence, which can thereby be used to assess cell division. This article describes the procedures typically used for labeling mouse lymphocytes with CFSE.

Lenfosit Silahların Yayılmasının Önlenmesi Monitör Carboxyfluorescein diasetat Succinimidyl Ester (KAKE) Kullanımı

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) is an effective and popular means to monitor lymphocyte division1-3.  CFSE covalently labels long-lived ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

There is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from cystic fibrosis (CF) patients. Existing methods rely on single or a few isolates grown aerobically and planktonically. Predetermined cut-offs are used to define whether the bacteria are sensitive or resistant to any given antibiotic1. However, during chronic lung infections in CF, P. aeruginosa populations exist in biofilms and there is evidence that the environment is largely microaerophilic2. The stark difference in conditions between bacteria in the lung and those during diagnostic testing has called into question the reliability and even relevance of these tests3.
 Artificial sputum medium (ASM) is a culture medium containing the components of CF patient sputum, including amino acids, mucin and free DNA. P. aeruginosa growth in ASM mimics growth during CF infections, with the formation of self-aggregating biofilm structures and population divergence4,5,6. The aim of this study was to develop a microtitre-plate assay to study antimicrobial susceptibility of P. aeruginosa based on growth in ASM, which is applicable to both microaerophilic and aerobic conditions.
 An ASM assay was developed in a microtitre plate format. P. aeruginosa biofilms were allowed to develop for 3 days prior to incubation with antimicrobial agents at different concentrations for 24 hours. After biofilm disruption, cell viability was measured by staining with resazurin. This assay was used to ascertain the sessile cell minimum inhibitory concentration (SMIC) of tobramycin for 15 different P. aeruginosa isolates under aerobic and microaerophilic conditions and SMIC values were compared to those obtained with standard broth growth. Whilst there was some evidence for increased MIC values for isolates grown in ASM when compared to their planktonic counterparts, the biggest differences were found with bacteria tested in microaerophilic conditions, which showed a much increased resistance up to a &gt;128 fold, towards tobramycin in the ASM system when compared to assays carried out in aerobic conditions.
 The lack of association between current susceptibility testing methods and clinical outcome has questioned the validity of current methods3. Several in vitro models have been used previously to study P. aeruginosa biofilms7, 8. However, these methods rely on surface attached biofilms, whereas the ASM biofilms resemble those observed in the CF lung9 . In addition, reduced oxygen concentration in the mucus has been shown to alter the behavior of P. aeruginosa2 and affect antibiotic susceptibility10. Therefore using ASM under microaerophilic conditions may provide a more realistic environment in which to study antimicrobial susceptibility.

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Current diagnostic antimicrobial susceptibility testing relies on the planktonic growth of isolates in nutrient rich, aerobic conditions. Here, we employ an alternative artificial sputum medium to study antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa biofilms under both aerobic and microaerophilic conditions more representative of the cystic fibrosis lung.

Karşı Antibiyotik Etkinlik Test Yapay Balgam Orta Kullanımı<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Kistik Fibrozis Akciğer Daha İlgili Koşullar

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

In Vivo Imaging Systems (IVIS) Detection of a Neuro-Invasive Encephalitic Virus

Modern advancements in imaging technology encourage further development and refinement in the way viral research is accomplished. Initially proposed by Russel and Burch in Hume's 3Rs (replacement, reduction, refinement), the utilization of animal models in scientific research is under constant pressure to identify new methodologies to reduce animal usage while improving scientific accuracy and speed. A major challenge to Hume's principals however, is how to ensure the studies are statistically accurate while reducing animal disease morbidity and overall numbers. Vaccine efficacy studies currently require a large number of animals in order to be considered statistically significant and often result in high morbidity and mortality endpoints for identification of immune protection. We utilized in vivo imaging systems (IVIS) in conjunction with a firefly bioluminescent enzyme to progressively track the invasion of the central nervous system (CNS) by an encephalitic virus in a murine model. Typically, the disease progresses relatively slowly, however virus replication is rapid, especially within the CNS, and can lead to an often, lethal outcome. Following intranasal infection of the mice with TC83-Luc, an attenuated Venezuelan equine encephalitis virus strain modified to expresses a luciferase gene; we are able to visualize virus replication within the brain at least three days before the development of clinical disease symptoms. Utilizing CNS invasion as a key encephalitic disease development endpoint we are able to quickly identify therapeutic and vaccine protection against TC83-Luc infection before clinical symptoms develop. With IVIS technology we are able to demonstrate the rapid and accurate testing of drug therapeutics and vaccines while reducing animal numbers and morbidity.

In Vivo Imaging Systems IVIS Detection of a Neuro-Invasive Encephalitic Virus

Utilizing luciferase and in vivo imaging systems (IVIS) as a novel means to identify disease endpoints before clinical developments occur. IVIS has allowed us to visualize in real time the invasion of encephalitic viruses over multiple days, providing a more accurate disease model for future study. It has also allowed us to identify the potential protective features of antivirals and vaccines faster than currently utilized animal models. The capability to utilize individual animals over multiple time points ensures reduced animal requirements, costs, and overall morbidity to the animals utilized ensuring a more humane and more scientific means of disease study.

Bir Nöro-İnvazif encephalitic Virüs Vivo Görüntüleme Sistemleri (IVIS) Algılama

Modern advancements in imaging technology encourage further development and refinement in the way viral research is accomplished. Initially proposed by ...

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that distinguish acute and chronic inflammation in mouse models. With tissue damage or pathogen invasion, neutrophils are the first line of defense, playing a major role in mediating the acute inflammatory response. As the inflammatory reaction progresses, circulating monocytes gradually migrate into the site of injury and differentiate into mature macrophages, which mediate chronic inflammation and promote tissue repair by removing tissue debris and producing anti-inflammatory cytokines. Intraperitoneal injection of luminol (5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione, sodium salt) enables detection of acute inflammation largely mediated by tissue-infiltrating neutrophils. Luminol specifically reacts with the superoxide generated within the phagosomes of neutrophils since bioluminescence results from a myeloperoxidase (MPO) mediated reaction. Lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrate) also reacts with superoxide in order to generate bioluminescence. However, lucigenin bioluminescence is independent of MPO and it solely relies on phagocyte NADPH oxidase (Phox) in macrophages during chronic inflammation. Together, luminol and lucigenin allow non-invasive visualization and longitudinal assessment of different phagocyte populations across both acute and chronic inflammatory phases. Given the important role of inflammation in a variety of human diseases, we believe this non-invasive imaging method can help investigate the differential roles of neutrophils and macrophages in a variety of pathological conditions.

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

We describe a non-invasive imaging method for distinguishing inflammatory stages. Systemic delivery of luminol reveals areas of acute inflammation dependent upon MPO activity in neutrophils. In contrast, injection of lucigenin allows for visualization of chronic inflammation dependent upon Phox activity in macrophages.

In vivo Görüntüleme Yöntemi Akut ve Kronik İltihap ayırt

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of immunotherapies. Here we describe the use of fluorescent target array (FTA) technology, which utilizes vital dyes such as carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE), violet laser excitable dyes (CellTrace Violet: CTV) and red laser excitable dyes (Cell Proliferation Dye eFluor 670: CPD) to combinatorially label mouse lymphocytes into &#62;250 discernable fluorescent cell clusters. Cell clusters within these FTAs can be pulsed with major histocompatibility (MHC) class-I and MHC class-II binding peptides and thereby act as target cells for CD8+ and CD4+ T cells, respectively. These FTA cells remain viable and fully functional, and can therefore be administered into mice to allow assessment of CD8+ T cell-mediated killing of FTA target cells and CD4+ T cell-meditated help of FTA B cell target cells in real time in vivo by flow cytometry. Since &#62;250 target cells can be assessed at once, the technique allows the monitoring of T cell responses against several antigen epitopes at several concentrations and in multiple replicates. As such, the technique can measure T cell responses at both a quantitative (e.g.&#160;the cumulative magnitude of the response) and a qualitative (e.g.&#160;functional avidity and epitope-cross reactivity of the response) level. Herein, we describe how these FTAs are constructed and give an example of how they can be applied to assess T cell responses induced by a recombinant pox virus vaccine.

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The ability to monitor T cell responses in detail in vivo is important for the development of our understanding of the immune response. Here we describe the use of fluorescent target arrays (FTAs) in an in vivo T cell assay that assesses &#62;250 parameters simultaneously by flow cytometry.

T hücre yanıtlarının Değerlendirme Floresan hedef Dizilerin Kullanımı<em&gt; In vivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Imaging of In Situ Interferon Gamma Production in the Mouse Spleen following Listeria monocytogenes Infection

Cytokines are small proteins secreted by cells, mediating cell-cell communications that are crucial for effective immune responses. One characteristic of cytokines is their pleiotropism, as they are produced by and can affect a multitude of cell types. As such, it is important to understand not only which cells are producing cytokines, but also in which environment they do so, in order to define more specific therapeutics. Here, we describe a method to visualize cytokine production in situ following bacterial infection. This technique relies on imaging cytokine-producing cells in their native environment by confocal microscopy. To do so, tissue sections are stained for markers of multiple cell types together with a cytokine stain. Key to this method, cytokine secretion is blocked directly in vivo before harvesting the tissue of interest, allowing for detection of the cytokine that accumulated inside the producing cells. The advantages of this method are multiple. First, the microenvironment in which cytokines are produced is preserved, which could ultimately inform on the signals required for cytokine production and the cells affected by those cytokines. In addition, this method gives an indication of the location of the cytokine production in vivo, as it does not rely on artificial in vitro re-stimulation of the producing cells. However, it is not possible to simultaneously analyze cytokine downstream signaling in cells that receive the cytokine. Similarly, the cytokine signals observed correspond&#160;only to the time-window during which cytokine secretion was blocked. While we describe the visualization of the cytokine Interferon (IFN) gamma in the spleen following mouse infection by the intracellular bacteria Listeria monocytogenes, this method could potentially be adapted to the visualization of any cytokine in most organs.

Imaging of In Situ Interferon Gamma Production in the Mouse Spleen following Listeria monocytogenes Infection

Here, we describe a simple confocal imaging method to visualize the in situ localization of cells secreting the cytokine Interferon gamma in murine secondary lymphoid organs. This protocol can be extended for the visualization of other cytokines in diverse tissues.

Listeria monocytogenes enfeksiyonu sonrasında Mouse dalağında In situ Interferon gama üretiminin görüntülenmesi

Cytokines are small proteins secreted by cells, mediating cell-cell communications that are crucial for effective immune responses. One characteristic of ...

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important role in the dissemination and pathogenesis of this opportunistic fungal pathogen. However, methods to visualize fungal hyphae in the GI tract in vivo are challenging which limits the understanding of environmental signals in controlling this morphogenesis process. The protocol described here demonstrates a novel ex vivo method for visualization of hyphal morphogenesis in gut homogenate extracts. Using an ex vivo assay, this study demonstrates that cecal contents from antibiotic treated mice, but not from untreated control mice, promote C. albicans hyphal morphogenesis in the gut content. Further, adding back specific groups of gut metabolites to the cecal contents from antibiotic-treated mice differentially regulates hyphal morphogenesis ex vivo. Taken together, this protocol represents a novel method to identify and investigate the environmental signals that control C. albicans hyphal morphogenesis in the GI tract.

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

The ex vivo assay described in this study using gut homogenate extracts and immunofluorescence staining represents a novel method to examine the hyphal morphogenesis of Candida albicans in the GI tract. This method can be utilized to investigate the environmental signals regulating morphogenetic transition in the gut.

Bir Ex vivo Assay Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Hyphal Morphogenesis Çalışma

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important ...

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of UTI in male and female mice have illustrated the procedures for bacterial inoculation and enumeration in urine and tissues. During an initial bladder infection in C57BL/6 mice, UPEC establish latent reservoirs inside bladder epithelial cells that persist following clearance of UPEC bacteriuria. This model builds on these studies to examine rUTI caused by the emergence of UPEC from within latent bladder reservoirs. The urogenital bacterium Gardnerella vaginalis is used as the trigger of rUTI in this model because it is frequently present in the urogenital tracts of women, especially in the context of vaginal dysbiosis that has been associated with UTI. In addition, a method for in situ bladder fixation followed by scanning electron microscopy (SEM) analysis of bladder tissue is also described, with potential application to other studies involving the bladder.

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

A mouse model of uropathogenic E. coli (UPEC) transurethral inoculation to establish latent intracellular bladder reservoirs and subsequent bladder exposure to G. vaginalis to induce recurrent UPEC UTI is demonstrated. Also demonstrated are the enumeration of bacteria, urine cytology, and in situ bladder fixation and processing for scanning electron microscopy.

Farelerde Gardnerella vaginalis Mesane Maruziyeti Tarafından Tetiklenen Tekrarlayan Escherichia coli İdrar Yolu Enfeksiyonu

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of ...