Biz yazının hazırlanmasında Dr Xinyu Li&#39;nin yardım için minnettarız. SW Tulane Üniversitesi, UT Güneybatı Tıp Merkezi, NIH Hibe EY021862, Körlük vakıf Engellenir Research bir kariyer geliştirme ödülü itibaren Başkanlık Araştırma Konseyi, Yeni Araştırmacı Ödülü, ve Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonu Araştırma Parlak Odak Ödülü bir başlangıç ​​fonu tarafından desteklenen .

Not: Aşağıdaki protokol ve sonuçlar temsili bir örneği, bir bileşik olarak HDAC inhibitörü SAHA kullanın. Bununla birlikte, bu protokol SAHA kullanımıyla hiçbir şekilde sınırlı değildir ve korneal neovaskularizasyon üzerindeki çözünür bileşiklerin etkisini test etmek için genel bir yöntem olarak tavsiye edilir. Küçük değişiklikler seyreltme derecesi hem de frekans ve uygulama süresi için yapılmış olması gerekir. Ek olarak, su içinde kolayca çözünür olan bileşikleri DMSO yokluğunda tatbik edilmesi mümkün olacaktır. Etik Açıklama: Tüm hayvan deneyleri sadece ulusal hukuk ve kurumsal düzenlemelere uygun olarak yapılmalıdır. Bu protokol, Tulane Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kullanım için onaylanmıştır. 1.. (Kullanım Düzeninde) Malzemelerin Hazırlanması <ol><li> 2 mm daire içine selüloz filtre kağıdı (11 mikron) bir parça kesin. </li><li> NaOH ile 1 M çözelti hazırlayın500 ml damıtılmış H2O içinde NaOH 20 g çözülmesi Oda sıcaklığında saklayın. DİKKAT: NaOH çözümleri aşındırıcı ve alkali-yanıklara neden olabilir. </li><li> Nihai 20 mg / ml ketamin konsantrasyonu ve 4 mg / ml ksilazin 1x PBS 37.5 ml 20 mg / ml ksilazin 10 ila 100 mg / ml ketamin ml ve 2,5 ml seyreltilmesi ile bir anestezi kokteyl hazırlayın. </li><li> Filtre PBS 100 ml proparakain hidroklorür 500 mg çözülmesiyle (lokal analjezi için) proparakain hidroklorür ile% 0.5 &#39;lik çözelti hazırlayın. </li><li> 8 g NaCl, 0.2 g KCI, 1.44 g 2 Na HPO 4 ve damıtılmış H2O içinde 900 ml NaH 2 PO 4, 0.23 g çözülerek 1x PBS hazırlayın 7.4 pH ayarlayın. Sterilite sağlamak için damıtılmış H2O ve filtre ile 1000 ml &#39;lik bir son hacim için çözüm getirmek. </li><li> DMSO içinde 1 ml SAHA 26.4 mg çözülmesiyle dimetil sülfoksit (DMSO) içinde ~ 100 mM&#39;de SAHA 1000 x stok çözelti hazırlayın. Bir 1x sulandırmak (~ 10 uM)her bir kullanım için, filtre PBS çözeltisi. Kadar bir ay boyunca -20 ° C de stok solüsyonu saklayın. DİKKAT: DMSO bilinen bir toksin ve mutajen olduğu. </li><li> Tespit için paraformaldehid (PFA) bir% 4 çözelti hazırlayın. Kimyasal bir başlık altında, PBS içinde 90 ml PFA 4 g çözülür. 65 ° C&#39;ye kadar karışımın getirin ve 7.4 arasında bir pH&#39;a titre edilir. PFA çözündükten sonra, 100 ml &#39;lik bir son hacim için bir çözüm getirir. Kadar bir ay boyunca 4 ° C&#39;de saklayın. DİKKAT: PFA bir, alerjik karsinojenik ve toksik olduğu bilinmektedir. </li><li> PBS içinde 94.5 ml keçi serumu içinde 5 ml ve Triton X-100&#39;ün 500 ul seyreltilmesi ile 1 x bloke edici tamponu hazırlayın. </li><li> PBS içinde 99.5 ml Triton X-100, 500 ul seyreltilmesi ile 1x yıkama tamponu hazırlayın. </li></ol> 2. Yaralanma ve Bileşik Tedavisi Alkali-Yanık <ol><li> 1 M NaOH çözeltisi içinde, çapı filtre kağıdı yuvarlak parça, yaklaşık 2 mm bekletin. </li><li> WH, 100 mg / kg ketamin ve 5 mg / kg ksilazin enjeksiyonu ile fare anestezisiich ~ 25 g fare başına aşama 1.3 anestezik kokteyl 100 ul. Anestezi anestezi yanıt olmalıdır yeterli ise, yavaşça hayvanın parmak veya kuyruğu kısma belirlenebilir ~ anestezi derinliği in ayarlamak için 1-2 dakika sürer. Not: Bakım fare anestezi kaynaklı hipotermi yenik değildir sağlamak için alınmalıdır. </li><li> Bir damlalık kullanarak, topikal lokal analjezi için kornea yüzeyinin 0.5% proparakain hidroklorür bir damla uygulanır. </li><li> Steril forseps kullanarak, NaOH ıslatılmış filtre kağıdı bir parça almak. Eğer aşırı NaOH tutunarak veya filtre kağıdı damlayan fark ederseniz, kısaca aşırı emmek için filtre kağıdı kuru bir parça üzerinde ıslatılmış filtre kağıdı dokunun. Merkezi kornea üzerinde NAOH ıslatılmış filtre kağıdı parçası koyun. Bölgede ~ 2 x 2, 2 mm arasında akut alkali-yanık oluşturmak için 30 saniye boyunca bekletin. Bir cerrahi mikroskop düzgün bir filtre kağıdı koyularak yararlıdır. Not: fare s Sadece bir gözünühould diğer bir kontrol olarak hizmet veren yaralanabilir. </li><li> Filtre kağıdı çıkarın. Bir 10 ml şırınga kullanarak, yumuşak kalıntı 1 M NaOH aşındırmak için iki kez 1 x 10 ml PBS ile göz yıkayın. </li><li> Hemen 1x SAHA hazır çözelti (ya da PBS içeren bir araç kontrol no SAHA içeren seyreltilmiş DMSO) topikal kornea bir damla uygulanır. 14 gün boyunca uygulama 3x/day tekrarlayın. Not: zedelenmesinin gelişiminde ve bileşiğin verilmesine bir müdahalede olabileceğinden bu dönemde bir lokal antibiyotik merhem tavsiye edilmez. Bir sıvı antibiyotik çözüm gibi% 3 Gentamisin çözüm yerine kullanın. </li><li> Klinik Değerlendirme (aşağıda Protokolü 3) doğrudan devam veya fare kurban ve (aşağıda Protokolü 4) ya da geleneksel parafin / dondurulmuş histoloji kornea düz montaj için gözleri tanıttılar. </li></ol> 3. Klinik Değerlendirme <ol><li> Cerrahi bir mikroskop altında bir kör şekilde farelerin günlük inceleme yapın ve c skororneal NV korneal opasite, NV ve damar boyutuna göre. En az iki gözlemci kullanmak ve iki ortalama bir skor kaydedebilirsiniz. <ol><li> 0-4 bir ölçekte kornea saydamlığını skor. 0 = tamamen açık; 1 = hafif puslu, iris ve öğrenci kolayca görülebilir; 2 = hafif opak, iris ve öğrenci hala saptanabilir; Zor saptanabilir 3 = opak, öğrenciler; ve öğrencinin hiçbir manzaralı tamamen opak 4 =. </li><li> 0-3 arasındaki bir ölçek üzerinde NV Skor. 0 = hayır neoveselleri; Korneal limbusta 1 = neoveselleri; Kornea limbus kapsayan ve kornea merkezine yaklaşırken 2 = neoveselleri; Kornea merkezi kapsayan 3 = neoveselleri. </li><li> 0-3 arasındaki bir ölçek üzerinde damar büyüklüğü Skor. 0 = hayır neoveselleri; Ameliyat mikroskobu altında tespit 1 = neoveselleri; Kolayca cerrahi mikroskop altında görülebilen 2 = neoveselleri; Kolayca mikroskop olmadan görülen 3 = neoveselleri. </li></ol></li><li> Bir dijital kamera kullanıyorsanız, 7 gün ve 14 gün gözün temsilcisi görüntü almak. </li></ol> 4.Kornea Boyama ve Düz Mounts <ol><li> 4 ° C&#39;de en az 1 saat süreyle% 4 PFA içinde enüklee göz saptamak </li><li> PBS 1x ve dikkatle aşırı doku çıkarmak için forseps kullanabilir göz aktarın. </li><li> Bir cerrahi mikroskop yardımı ile, (Bu göz sıvının serbest gereken dikkat edin) gözün pericorneal bölgesini delmek için bir iğne (18 ölçü) veya mikro bıçak kullanın. <ol><li> Bölüm 4.3.1 &#39;de yapılan delikli itibaren arka kısmından göz (kornea) ön kısmını kesmek için cerrahi bir makas kullanımı. </li></ol></li><li> 4 ° C&#39;de gece boyunca sabitlenmesi için geri% 4 PFA içine kornea aktarın </li><li> (: PFA tehlikeli ve kurumsal düzenlemelere uygun olarak bertaraf edilmelidir DİKKAT) ve kalan PFA çıkarmak için 1x PBS ile korneaya üç defa çalkalayın% 4 PFA atın. </li><li> Doku permeabilize ve birincil antikorun özel olmayan bağlanmasını önlemek üzere, oda sıcaklığında en az 2 saat boyunca 1 x bloke edici tamponu içinde inkübe. <ol><li> Bir 100-500 kat seyreltmede, 1 x bloke edici tampon maddesi içinde birincil antikor uygulayın. 1:100 kan damarlarının tespit etmek için (örneğin, sıçan anti-fare PECAM-1, tavşan anti-fare-LYVE-1 makrofajlar tespit etmek için 1:500 &#39;de lenf damarlarına tespit ve / veya fare için anti-mouse-F4/80 1:100). Gece boyunca 4 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> Tam Bağlanmamış birinci antikorları ayıklamak için oda sıcaklığında 1 saat boyunca 1 x Yıkama tamponu ile her altı kez yıkayın. </li><li> 1x bir 500-1000 kat seyreltmede bloke edici tampon içinde bir ikincil antikor uygulayın. (Örneğin, 488 nm floresan 1:800 at, keçi anti-fare-IgG&#39;si etiketli ya da 594 nm floresan 1:800 da keçi anti-tavşan-IgG&#39;si etiketli). Gece boyunca 4 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> Tam Bağlanmamış ikinci antikorları ayıklamak için oda sıcaklığında 1 saat için, her 1x PBS ile üç kez yıkanır. </li></ol></li><li> Taze 1x PBS içine aktarın ve kornea, bir cerrahi mikroskop yardımıyla, dikkatlice yüzde doğru çevresinden dört kesiler yapmaker. Bu (edilen şekil yerine bir kelebek gibi görünmelidir) yaklaşık olarak eşit büyüklükte dört parçaya bölünür kornea bölmek ve bir slayt düz yatmak için izin vermelidir. </li><li> Floresan görüntüleme için bir montaj orta uygun şekilde monte edilir. En iyi sonuçlar için, numuneler hemen görüntülü olmalıdır ve dijital fotoğraf alınmıştır, ancak, 4 ° C&#39;de ışıktan korunmuş olarak birkaç hafta boyunca depolanabilir </li></ol>

<ol>
	<li>Pascolini, D., Mariotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+visual+impairment.">Global estimates of visual impairment.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (5), 614-618 (2010).</li><li>Whitcher, J., Srinivasan, M., Upadhyay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Blindness:+A+Global+Perspective.">Corneal Blindness: A Global Perspective.</a> Bull. World Health Org. 79 (3), 214-221 (2003).</li><li>Gupta, D., Illingworth, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatments+for+corneal+neovascularization:+a+review.">Treatments for corneal neovascularization: a review.</a> Cornea. 30 (8), 927-938 (2011).</li><li>Cursiefen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consensus+statement+on+indications+for+anti-angiogenic+therapy+in+the+management+of+corneal+diseases+associated+with+neovascularisation:+outcome+of+an+expert+roundtable.">Consensus statement on indications for anti-angiogenic therapy in the management of corneal diseases associated with neovascularisation: outcome of an expert roundtable.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (1), 3-9 (2012).</li><li>Delmonte, D., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+Physiology+of+the+Cornea.">Anatomy and Physiology of the Cornea.</a> J. Cataract Refract. Surg. 37 (3), 588-598 (2011).</li><li>Cursiefen, C., Seitz, B., Dana, M. R., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+lymphangiogenesis+in+the+cornea.+Pathogenesis,+clinical+implications+and+treatment+options.">Angiogenesis and lymphangiogenesis in the cornea. Pathogenesis, clinical implications and treatment options.</a> Der Ophthalmologe. 100 (4), 292-229 (2003).</li><li>Chang, J., Gabison, E., Kato, T., Azar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Neovascularization.">Corneal Neovascularization.</a> Curr. Opin Ophthalmol. 12 (4), 242-249 (2001).</li><li>Ambati, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Avascularity+is+due+to+Soluble+VEGF+Receptor-1.">Corneal Avascularity is due to Soluble VEGF Receptor-1.</a> Nature. 443 (7114), 993-997 (2006).</li><li>Cursiefen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-A+Stimulates+Lymphangiogenesis+and+Hemangiogenesis+in+Inflammatory+Neovascularization+via+Macrophage+Recruitment.">VEGF-A Stimulates Lymphangiogenesis and Hemangiogenesis in Inflammatory Neovascularization via Macrophage Recruitment.</a> J. Clin. Invest. 113 (7), 1040-1050 (2004).</li><li>Jiri, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paper+Strips+and+Rings+as+Simple+Tools+for+Standardization+of+Experimental+Eye+Injuries.">Paper Strips and Rings as Simple Tools for Standardization of Experimental Eye Injuries.</a> Ophthal. Res. 1975 (7), 363-367 (2009).</li><li>Ormerod, L., Abelson, M., Kenyon, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+Models+of+Corneal+Injury+Using+Alkali-Immersed+Filter+Discs+Invest.">Standard Models of Corneal Injury Using Alkali-Immersed Filter Discs Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 30 (10), 2148-2153 (1989).</li><li>Saika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+effects+of+adenoviral+gene+transfer+of+bone+morphogenic+protein-7+on+a+corneal+alkali+injury+model+in+mice.">Therapeutic effects of adenoviral gene transfer of bone morphogenic protein-7 on a corneal alkali injury model in mice.</a> Lab. Invest. 85 (4), 474-486 (2005).</li><li>Ferrari, G., Bignami, F., Giacomini, C., Franchini, S., Rama, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+topical+infliximab+in+a+mouse+model+of+ocular+surface+scarring.">Safety and efficacy of topical infliximab in a mouse model of ocular surface scarring.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (3), 1680-1688 (2013).</li><li>Sosne, G., Christopherson, P., Barrett, R., Fridman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymosin-beta4+modulates+corneal+matrix+metalloproteinase+levels+and+polymorphonuclear+cell+infiltration+after+alkali+injury.Invest.">Thymosin-beta4 modulates corneal matrix metalloproteinase levels and polymorphonuclear cell infiltration after alkali injury.Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 46 (7), 2388-2395 (2005).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Multiple+Pathogenic+Pathways+by+Histone+Deacetylase+Inhibitor+SAHA+in+a+Corneal+Alkali-Burn+Injury+Model.">Inhibition of Multiple Pathogenic Pathways by Histone Deacetylase Inhibitor SAHA in a Corneal Alkali-Burn Injury Model.</a> Mol. Pharm. 10 (1), 307-318 (2013).</li><li>Yoeruek, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety,+penetration+and+efficacy+of+topically+applied+bevacizumab:+evaluation+of+eyedrops+in+corneal+neovascularization+after+chemical+burn.">Safety, penetration and efficacy of topically applied bevacizumab: evaluation of eyedrops in corneal neovascularization after chemical burn.</a> Acta Ophthalmol. 86 (3), 322-328 (2008).</li><li>Bucher, F., Parthasarathy, A., Bergua, A., Onderka, J., Regenfu&#223;, B., Cursiefen, C., Bock, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+Ranibizumab+inhibits+inflammatory+corneal+hem-+and+lymphangiogenesis.">Topical Ranibizumab inhibits inflammatory corneal hem- and lymphangiogenesis.</a> Acta Ophthalmol. , (2012).</li><li>Hajrasouliha, A., Sadrai, Z., Chauhan, S., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=b-FGF+induces+corneal+blood+and+lymphatic+vessel+growth+in+a+spatially+distinct+pattern.">b-FGF induces corneal blood and lymphatic vessel growth in a spatially distinct pattern.</a> Cornea. 31 (7), 804-809 (2012).</li><li>Rogers, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+albino+mutation+of+tyrosinase+alters+ocular+angiogenic+responsiveness.">The albino mutation of tyrosinase alters ocular angiogenic responsiveness.</a> Angiogenesis. 16 (3), 639-646 (2013).</li><li>Connor, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+oxygen-induced+retinopathy+in+the+mouse:+a+model+of+vessel+loss,+vessel+regrowth+and+pathological.">Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological.</a> Nat. Protoc. 4 (11), 1565-1573 (2009).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada sunulan protokol bu üç (birbiriyle) süreçleri incelemek için ideal bir sistem haline hemangiogenesis, lenfanjiyogenezin ve inflamasyon tekrarlanabilir seviyeleri ile sonuçlanır. Bu yöntem merkezi kornea NV, hapların 18 ifade büyüme faktörü korneanın 17 yani sütür daha yönetti NV, neden geliştirilmiş ve implante edilmiş çeşitli yöntemler üretirken, aynı zamanda ilgi çekici olabilir. Bizim protokol de büyük memeliler için henüz mevcut değil moleküler ve transgen...

Kornea körlük tüm olgularda 1 yaklaşık 4% sorumlu körlüğün en yaygın dördüncü nedenidir. Kornea neovaskülarizasyon (NV) herpetik keratit (Batı&#39;da körlüğün en önde gelen nedenidir bulaşıcı) ve trahom (dünya çapında bulaşıcı körlüğün önde gelen nedenidir) 2 dahil olmak üzere bu patolojilerin, çok önemli bir rol oynar. Mevcut tedaviler steroidler, steroidal olmayan anti-enflamatuar ilaçlar (NSAID), anti-VEGF terapileri, A ve yanı sıra, geleneksel lazer ya da cerrahi teknikleri 3 siklosporin içerir. Ancak, kornea NV bazlı patolojilerin ciddi zayıflatıcı doğa, cerrahi kornea NV tedavi edebilen tesisleri ve güçlü bir performans farmakolojik seçeneği eksikliği yetersizliği, kaybolmamış tedavilere rağmen, temel tıbbi ihtiyacı olduğu sonucuna yeni bir uzman yuvarlak masa açtı Bu patolojilerde tarafından sunulan 4 karşılanmamış kalır. Insan kornea5 kat, 3 hücre tabakaları (epitelyal, stromal ve endotelyum) ve 2 arabirimi (Bowman ve zar Descemet) oluşur. Bu göz için mekanik bir engel ve refraktif yüzeyi olarak işlev görür. Onun şeffaf doğası onun bileşenlerinin hassas bir denge sonucudur ve doğru fonksiyon 5 ayrılmaz bir parçasıdır. Normal avasküler, kornea ve göz siliyer arterlerden beslenir dış kenarı boyunca uzanan kılcal kan alır. Bir uyarıcı onları kornea merkezine doğru büyür ve böylece görme 6 sınırlamak için izin Bu damarların anjiyojenezi teşvik zaman korneal NV oluşur. Kornea anjiyojenez kornea merkezine doğru limbal damar pasajı kan damarları ve lenf damarlarının büyümesinin neden olan hemangiogenesis ve lenfanjiyogenezin içerir. Bu kornea &quot;Anjiyojenik ayrıcalık&quot;, korneal opasite ve fibrozis bir artış, korneal la bozulması bozulmasına yol açarkuramsal ve ödem 7. Kornea NV&#39;nin kesin tetikler geleneksel ilaçlar, endüstriyel kimyasallar, hatta kimyasal savaş ajanları neden olduğu bulaşıcı hastalığa bir tepki böyle trahom gibi bir kimyasal kaynaklı durumuna kadar çoktur. Bu sürecin moleküler mekanizmalar, henüz tam olarak karakterize edici özelliği değildir; Ancak, birkaç anahtar oyuncular tespit edilmiştir. Normal koşullar altında, kornea (örneğin, çözünür VEGF-R1 gibi) anti-anjiyojenik faktörler 8 bir yedek dizisi tarafından tutulan bir benzersiz bir &#39;anjiyojenik ayrıcalık&#39; sahiptir. Bununla birlikte, (örneğin, bir yaralanma gibi) harici bir uyarana yanıt olarak, pro-anjiyojenik faktörler (VEGF-A) yerel bir yukarı-regülasyonu olacaktır. Bu ipuçları kornea Anjiyojenik ayrıcalığını yatan ve bu nedenle kornea patolojisi ve hatta körlüğe neden 9, hemangiogenesis, lymphangeogenesis ve inflamasyona neden olur yanlısı ve anti-anjiyogenik faktörlerin dengesi. &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Bu son derece zayıflatıcı patolojinin karşılanmamış tıbbi ihtiyaçları göz önüne alındığında, bu kornea NV güvenilir bir hayvan modeli var alanına ilgi. Kontrollü alkali-yanık: İşte biz böyle bir model sunuyoruz. Filtre kağıdı yüzük kullanmaya dayalı çeşitli göz yaralanması modelleri 1970&#39;lerden 10 beri kullanılmaktadır. 1989 yılında, Harvard Medical School oftalmologların bir grup, sodyum hidroksit (NaOH) ile yuvarlak bir filtre kağıdı parçası ıslatma ve belirli bir aralığının en kornea uygulamadan göre tavşan merkezi bir korneal alkali yanığı hasarının bir standart model özelliği, konsantrasyonları 11. O zamandan beri, bu teknik, fare 12-14 kullanılmak üzere adapte edilmiştir. Son zamanlarda, Wang laboratuvar fare korneal alkali yanık yaralanma modeli 15 kullanılarak kornea NV patogenezinde histon deasetilaz (HDAC) inhibitörü SAHA terapötik etkilerini inceledi. Burada yer alan fare korneal alkali-yanık yaralanması modeli inşa edilmiş metodolojiEsas olarak iki diğer kağıtlar 14,16 önceden çalışmaları.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="598">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL Syringe</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">18 Guage Needle</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL Syringe</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">306575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">25 Guage Needle</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anti-F4/80 (rat anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">AbD Serotech</td>
			<td>MCA497RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-LYVE-1 (rabbit anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab14917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anti-PECAM-1 (rat anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">553370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-IgG Alexa488 (goat anti-rat)</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-IgG Alexa594 (goat anti-rabbit)</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Camera</td>
			<td style="width:96px;">Tucsen</td>
			<td style="width:119px;">TCC 5.0 ICE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Coverslips</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-548-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D4540-1L</td>
			<td>Caution: Mutagenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps (Blunt), Iris</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">15915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps (Sharp), Dumont #4</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">500340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KCl</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine Solution</td>
			<td style="width:96px;">MedVet</td>
			<td>RXKETAMINE</td>
			<td>Controlled substance, proper license required for use.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Light Source for Microscope</td>
			<td style="width:96px;">AmScope</td>
			<td style="width:119px;">LED-14M-YA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope (Stereo 7X-45X)</td>
			<td style="width:96px;">AmScope</td>
			<td style="width:119px;">SM-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mounting Medium, Vectashield</td>
			<td style="width:96px;">Vector</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S271-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S397-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S318-1</td>
			<td>Caution: Corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:96px;"></td>
			<td style="width:119px;">P6148-500G</td>
			<td>Caution: Allergenic, Carcenogenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Proparacaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4554-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scissors (5mm blade), Vanas</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">14003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:96px;">MPBio</td>
			<td align="right" style="width:119px;">92939249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope Slides</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8787-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Whatman Grade 1 Filter Paper</td>
			<td style="width:96px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-6508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine Solution</td>
			<td style="width:96px;">MedVet</td>
			<td style="width:119px;">RXANASED-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an alkali-burn injury model of corneal neovascularization in the mouse

Normal koşullar altında, kornea avasküler, ve bu iyi bir şeffaflık görme keskinliği korumak için gereklidir. Travma, keratoplasti veya bulaşıcı hastalığa neden olabilir kornea, Neovaskülarizasyon (NV) korneanın sözde &#39;Anjiyojenik ayrıcalığı&#39; ayırır ve hatta körlüğe neden olabilir birden fazla görsel patolojilerin temelini oluşturur. Çeşitli tedavi seçenekleri olmasına rağmen, kornea neovasküler patolojilerin tarafından sunulan temel tıp ihtiyacı karşılanmamış kalır. Güvenli, etkili ve hedefli tedaviler geliştirmek amacıyla, kornea NV ve farmakolojik müdahale güvenilir bir model gereklidir. Burada, fare içinde bir alkali-yanık yaralanması korneal neovaskularizasyon modeli açıklar. Bu protokol, kornea, ilgi konusu bir farmakolojik bileşik uygulaması, ve sonuç görselleştirilmesi için kontrollü bir alkali-yanık uygulanması için bir metot sağlar. Bu yöntem instrumen olabilecektal kornea NV ve diğer neovasküler bozukluklarında müdahale mekanizmaları ve fırsatları eğitim için.

Alkali-yanık yaralanması sonrasında, kornea NV tahmin edilebilir, zamana bağlı bir şekilde oluşur. 1, bir muamele edilmemiş hayvan (Şekil 1A) ve HDAC inhibitörü SAHA (Şekil 1B ile tedavi edilmiş bir hayvan arasında yeni damarlanma ve kornea opasitesi hem de sade farkı gösterir Şekil ) 7 günlük bir zaman noktasında gerçekleştirilir. Şekiller 2A ve 2B, primer PECAM-1 ve ...

Watch this Scientific Journal Video about An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse at JoVE.com

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Korneanın neovaskülarizasyon (NV) çoklu görsel patolojileri karmaşık hale getirebilir. Kontrollü, alkali-yanık yaralanması modeli kullanılarak, korneal NV bir ölçülebilir düzeyde neovasküler hastalıkları için potansiyel tedavilerinin kornea NV ve değerlendirme mekanik çalışma için üretilebilir.

Fare Kornea Neovaskülarizasyonunun bir Alkali-yanık Yaralanma Modeli

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

an-alkali-burn-injury-model-of-corneal-neovascularization-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

16.5K Görüntüleme.  Tulane University.  Korneanın neovaskülarizasyon (NV) çoklu görsel patolojileri karmaşık hale getirebilir. Kontrollü, alkali-yanık yaralanması modeli kullanılarak, korneal NV bir ölçülebilir düzeyde neovasküler hastalıkları için potansiyel tedavilerinin kornea NV ve değerlendirme mekanik çalışma için üretilebilir. 

Video: An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable during renal transplantation. Experimental models that accurately and reproducibly recapitulate renal IRI are crucial in dissecting the pathophysiology of AKI and the development of novel therapeutic agents. Presented here is a mouse model of renal IRI that results in reproducible AKI. This is achieved by a midline laparotomy approach for the surgery with one incision allowing both a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia of the left kidney. By careful monitoring of the clamp position and body temperature during the period of ischaemia this model achieves reproducible functional and structural injury. Mice sacrificed 24 hr&#160;following surgery demonstrate loss of renal function with elevation of the serum or plasma creatinine level as well as structural kidney damage with acute tubular necrosis evident. Renal function improves and the acute tissue injury resolves during the course of 7 days following renal IRI such that this model may be used to study renal regeneration. This model of renal IRI has been utilized to study the molecular and cellular pathophysiology of AKI as well as analysis of the subsequent renal regeneration.

The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

Renal İskemi Reperfüzyon Hasarı: Yaralanma Fare Modeli ve Rejenerasyon

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

Tıp

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

Lazer kaynaklı Koroid Neovaskülarizasyonlarında A Fare Modeli

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Farelerde Hızlandırılmış Ateroskleroz Indüksiyonu: "Tel-Yaralanma" Modeli

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

A Mouse Model of Single and Repetitive Mild Traumatic Brain Injury

Mild Traumatic Brain Injury (mTBI) can result in the acute loss of brain function, including a period of confusion, a loss of consciousness (LOC), focal neurological deficits and even amnesia. Athletes participating in contact sports are at high risk of exposure to large number of mTBIs. In terms of the level of injury in a sporting athlete, a mTBI is defined as a mild injury that does not cause gross pathological changes, but does cause short-term neurological deficits that are spontaneously resolved. Despite previous attempts to model mTBI in mice and rats, many have reported gross adverse effects including skull fractures, intracerebral bleeding, axonal injury and neuronal cell death. Herein, we describe our highly reproducible animal model of mTBI that reproduces clinically relevant symptoms. This model uses a custom made pneumatic impactor device to deliver a closed-head trauma. This impact is made under precise velocity and deformation parameters, creating a reliable and reproducible model to examine the mechanisms that contribute to effects of single or repetitive concussive mTBI.

Athletes absorb several hundred mild traumatic brain injuries (mTBI)/concussions every year; however, the consequence of these on the brain is poorly understood. Therefore, an animal model of single and repetitive mTBI that consistently replicates clinically relevant symptoms provides the means to advance the study of mTBI and concussion.

Tek ve Tekrarlayan Hafif Travmatik Beyin Hasarı İçin Bir Fare Modeli

Mild Traumatic Brain Injury (mTBI) can result in the acute loss of brain function, including a period of confusion, a loss of consciousness (LOC), focal ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

Delici cisim kaynaklı Iris neovaskülarizasyon Rubeosis Iridis bir fare modeli olarak

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to injury. In fact, the most common type of eye injury found in clinic is a corneal abrasion. Here, we utilize an ocular burr to induce an abrasion resulting in removal of the corneal epithelium in vivo on anesthetized mice. This method allows for targeted and reproducible epithelial disruption, leaving other areas intact. In addition, we describe the visualization of the abraded epithelium with fluorescein staining and provide concrete advice on how to visualize the abraded cornea. Then, we follow the timeline of wound healing 0, 18, and 72 h after abrasion, until the wound is re-epithelialized. The epithelial abrasion model of corneal injury is ideal for studies on epithelial cell proliferation, migration and re-epithelialization of the corneal layers. However, this method is not optimal to study stromal activation during wound healing, because the ocular burr does not penetrate to the stromal cell layers. This method is also suitable for clinical applications, for example, pre-clinical test of drug effectiveness.

This protocol describes a method to inflict an abrasion to the ocular surface of the mouse, and to follow the wound healing process thereafter. The protocol takes advantage of an ocular burr to partially remove the surface epithelium of the eye in anaesthetized mice.

Kornea epitel aşınma oküler Burr ile bir Model olarak kornea için yara iyileşme

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

A Novel Approach to Monitoring Graft Neovascularization in the Human Gingiva

Laser speckle contrast imaging (LSCI) is a novel method for measuring superficial blood perfusion over large areas. Since it is non-invasive and avoids direct contact with the measured area, it is suitable for monitoring blood flow changes during wound healing in human patients. Vestibuloplasty is periodontal surgery to the oral vestibule, aiming to restore vestibular depth with simultaneous enlargement of the keratinized gingiva. In this special clinical case, a split thickness flap was elevated at the first upper premolar and a xenogenic collagen matrix was adapted to the resulting recipient bed. LSCI was used to monitor the re- and neovascularization of the graft and the surrounding mucosa for one year. A protocol is introduced for the correct adjustment of microcirculation measurement in the oral mucosa, highlighting difficulties and possible failures.
The clinical case study presented demonstrated that &#8212; following the appropriate protocol &#8212; LSCI is a suitable and reliable method for following up microcirculation in a healing wound in the human oral mucosa and gives useful information on graft integration.

This study introduces a protocol for measuring microcirculation in human oral mucosa by laser speckle contrast imaging. The monitoring of wound healing after vestibuloplasty combined with a xenogenic collagen graft is presented on a clinical case.

İnsan jinjiva greft neovaskülarizasyon izleme için yeni bir yaklaşım

Laser speckle contrast imaging (LSCI) is a novel method for measuring superficial blood perfusion over large areas. Since it is non-invasive and avoids ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for experimental investigations as they are normally needed for transplantation. Endothelial cell cultures often do not translate well to in vivo situations. Due to the biostructural characteristics of non-human corneas, stromal swelling during cultivation induces substantial corneal endothelial cell loss, which makes it difficult to perform cultivation for an extended period of time. Deswelling agents such as dextran are used to counteract this response. However, they also cause significant endothelial cell loss. Therefore, an ex vivo organ culture model not requiring deswelling agents was established. Pig eyes from a local slaughterhouse were used to prepare split corneal buttons. After partial corneal trephination, the outer layers of the cornea (epithelium, bowman layer, parts of the stroma) were removed. This significantly reduces corneal endothelial cell loss induced by massive stromal swelling and Descemet&#39;s membrane folding throughout longer cultivation periods and improves general preservation of the endothelial cell layer. Subsequent complete corneal trephination was followed by the removal of the split corneal button from the remaining eye bulb and cultivation. Endothelial cell density was assessed at follow-up times of up to 15 days after preparation (i.e., days 1, 8, 15) using light microscopy. The preparation technique used allows a better preservation of the endothelial cell layer enabled by less stromal tissue swelling, which results in slow and linear decline rates in split corneal buttons comparable to human donor corneas. As this standardized organo-typically cultivated research model for the first time allows a stable cultivation for at least two weeks, it is a valuable alternative to human donor corneas for future investigations of various external factors with regards to their effects on the corneal endothelium.

Here, a step-by-step protocol for the preparation and cultivation of porcine split corneal buttons is presented. As this organo-typically cultivated organ culture model shows cell death rates within 15 days, comparable to human donor corneas, it represents the first model allowing long-term cultivation of non-human corneas without adding toxic dextran.

Split Korneal Düğmeleri Kullanarak Bir Domuz Korneal Endotel Organ Kültür Modeli

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...