Yazarlar Giessen Meinhardt laboratuvarda birincil Sertoli hücrelerinin izolasyonu kurulması son derece yararlı Guido Verhoeven ve Ludo Deboel, Leuven, teşekkür etmek istiyorum. Monika Fijak, Gießen, şekil 1A ve tavsiye ona yardım için kabul edilmektedir. Çalışmalar Uluslararası Araştırma Lisansüstü Koleji JLU Giessen (Almanya) / Monash Üniversitesi (Melbourne, Avustralya) GRK 1871 (SB) hibe BH 93 / 1-1 (SB) ve finansman yoluyla Deutsche Forschungsgemeinschaft tarafından desteklendi. Destek de &quot;Männliche Infertilität bei Infektion &amp; Entzündung&quot; (MIBIE) adlı programda &quot;Landes-Ofansif zur Entwicklung Wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz&quot; (LOEWE) bünyesinde Hessen Eyaleti hibe elde edildi.

1. Hayvan Etik Beyanı Burada anlatılan deneyler, yerel otorite olarak, Regierungspräsidium Giessen, Almanya kurallarına göre yapılır ve Deneysel Amaçlı Hayvanların Bakım ve Kullanım Uygulama Alman Kanunu (İzin yok onaylamak edildi. GI 20/23 sayılı A 31 / 2012). Medya, Enzim Çözümleri ve Hayvanların 2. Hazırlık <ol><li> 100 mi etanol içinde iyot, 1 g çözülmesiyle% 1 iyot alkol hazırlayın. </li><li> 2x 500 mi Dulbecco&#39;s fosfat tamponlu tuzlu su 7.5 mi, D-glükoz (100 g / L) ve 5 ml 100X Penisilin / Streptomisin stok çözeltisi (15 mg / ml D, her takviye Ca olmayan (PBS) + 2 ve Mg + 2 hazırlamak -glükoz, 50 U / ml penisilin ve 50 | ig / ml streptomisin nihai). </li><li> 500 mi Roswell Park Memorial Institute (RPMI), 5 mL 100X Penisilin / Streptomisin stok çözeltisi (50 U / ml penisilin ve 50 | ig / ml streptomisin yüzgeç 1640 ortamında 1 x Ekal). </li><li> tripsin DNaz I solüsyonu hazırlayın (2.5 mg / tripsin ve 10 ug / ml DNase I mi), 25 mg tripsin ve 0.1 ml DNAz ekleyerek ortaya 9.9 mL PBS (1 mg / ml DNase I). </li><li> Bir çözeltisi (10 mg / ml) tripsin önleyicisi 5 ml PBS içinde 50 mg tripsin inhibitörü içinde çözülür. Tripsin inhibitörü B çözeltisi 10 ml PBS (2.5 mg / ml) içinde 25 mg tripsin inhibitörü içinde çözülür. </li><li> Bir Kollajenaz-Hiyaluronidaz Deoksiribonükleaz I (DNase I) çözeltisi (1 mg / ml nihai), 10 mg Kollajenaz A, 10 mg Hiyaluronidaz (1 mg / ml nihai) ve 0.1 mi DNaz çözülür I (1 mg / ml DNase I () 10 ug 10 mi, PBS içinde) son / ml olmuştur. </li><li> 9.9 ml PBS, 10 mg Hiyaluronidaz (1 mg / ml nihai) ve 0.1 mi DNaz I çözeltisi (1 mg / ml) (10 ug son / ml) ilave edilerek, bir Hiyaluronidaz DNaz I çözelti hazırlayın. </li><li> Onlar Sertoli hücre izolasyonu gününde 19 gün eski böylece zamanında Wistar sıçan sipariş edin. Not: Açıklanan protokol 10 sıçanlar için tasarlanmıştır, ancak en az 5, 20 sıçan en fazla modifiye edilebilir.Tüm çözeltilerin miktarları buna göre ayarlanması gerekir. </li><li> 100 mi izopropanol içinde 0.35 g Yağ Kırmızı O çözülmesiyle, Yağ Kırmızı O stok çözelti hazırlayın. Stir O / N, en fazla bir yıl süreyle oda sıcaklığında 0,2 um ve mağaza üzerinden filtre. </li><li> 4 ml su ile 6 mi, Yağ Kırmızı O stok solüsyonu karıştırılarak yağ kırmızısı çözelti hazırlayın (3: 2). 0.2 mikron ile 10-20 dk süzdükten sonra. Bir sonraki 2 saat içinde kullanın. </li><li> % 4 Hazırlama yavaşça karıştırılırken 1x PBS 80 ml ila 4 g paraformaldehit tozu (PFA) ekleyerek havalandırılmış başlığı içinde formaldehit çözeltisi (w / v). Isı ~ 60 ° C, 1 M NaOH ile 1 ml ilave edilir ve paraformaldehit çözünene kadar karıştırma devam etmektedir. Çözelti, oda sıcaklığına kadar soğumaya 1 M HCI ile 7.4 pH&#39;a ve 1 x PBS, 100 ml hacim ayarlama olsun. çözeltisi (0.45 um) filtreden geçirilir ve birkaç ay boyunca -20 ° C &#39;de parçalar halinde taze veya deposu kullanımı. Not: polimerize formaldehit (PFA) su içinde monomerik formaldehite depolimerize eder. Bu süreçorta derecede ısıtma ve hafif baz pH ile katalize. taze tüm enzim çözümleri hazırlayın ve filtre kullanımı gününde (0.2 uM) sterilize. Bir enzim için farklı bir üretici (Malzeme / Ekipman Tablosu) Eğer dikkatlice konsantrasyonu / aktivitesini ayarlamak kullanılır. Aşağıdaki protokolde bir &quot;pipet&quot; bir serolojik pipet anlamına gelir. </li></ol> Seminifer tübül 3. hazırlanması <ol><li> CO2 kullanarak bir desikatör ve dakikada odacık hacminin en az% 20 oranında değiştiren bir akış oranında, 10 erkek Wistar sıçanları tek tek anestezisi. Bir ayak pedi sıkarak nefes duruncaya kadar test anestezi bekleyin ve varsa hiçbir tepki servikal dislokasyon her sıçan euthanize. akan su altında juguler ven ve karotis arter (vajina carotica) kesit ile kan akıtmak. % 70 etanol ile silerek karın dezenfekte edin. </li><li> Forseps karın mus cildi kaldırınkartılması sternum (Şekil 2A) için pubis eklemi uzanan bir oval şekilli cilt lob kesip ve göğüs üzerine yukarı doğru flap. Sonraki, karın kasları kapmak ve sternum pubis eklemi bir medial kesi yapmak. <ol><li> yukarı aşağı pelvis dışına testis itmek için pelvis gelen başparmak ile karın sıkın. Ayrıca testis yukarı çekmek için forseps ile epididimal yağ yastığı (Şekil 2B) seçin. Tunika albugineada zedelemeden, sperm kablosu (Şekil 2B) kesin ve 50 ml konik bir tüp (Şekil 2C) 20 ml PBS içinde testis toplar. </li></ol></li><li> testis topladıktan sonra, etanol içinde iyot (ağ / hac)% 1 eşit hacimde (20 mi) ilave edilerek dezenfekte. İki kez tüp ters çevirin ve hemen süpernatant süzün. Hızlı bir şekilde 25 ml PBS, her (Şekil 2D) ile iki kez testisler yıkayın. </li><li> ihtiva Bir Petri kabı testisler aktarın15 mi ing PBS (Şekil 2e). , Bir ucunda forseps ile sıkıca her testis kavramak ters sonunda tunika albugineada içine küçük bir kesi yapmak ve bir kazıma aracı olarak kapalı makas bıçakları kullanarak tübüller sıkmak. Not: tübül hala sadece bir kaç tübüller homojen enzimatik sindirim (Şekil 2F) sağlamak amacıyla çözelti içine uzanan ile kompakt bir testis şeklindeki paket oluşturmalıdır. </li><li> 10 ml tripsin-DNase I çözeltisi ihtiva eden 100 ml&#39;lik bir vida kapaklı şişeye de-kapsüllü testisler aktarın. 32 ° C (120 salınım / dakika) bir çalkalama su banyosu içinde sindirim gerçekleştirin. 4 saat sonra en az tübül dispersiyon için çıplak gözle tübülleri değerlendirir. tübüller solüsyon içine dağıtmak başladığınızda, hemen sindirim durdurun. Gerekirse, en fazla 2 dakika boyunca inkübasyona devam edin. </li><li> aşağı 3-4 defa iyice yukarı pipetleme çözüm karıştırmak tripsin inhibitörü çözüm A. 5 ml ekleyerek tripsin sindirim durdurun ve10 ml&#39;lik pipet kullanarak ve bir 50 ml konik tüp transfer s. </li><li> inkübasyon 5 dakika sonra tübül dikkatlice adım 3.6 10 ml pipet kullanarak süpernatant kaldırmak ve tam tripsin sindirim durdurmak için tripsin inhibitörü B çözeltisi 10 ml ekleyin, birim yerçekimi tarafından yerleşmek gözlemlemek. aşağı 2-3 kez yukarı ve aşağı pipetleme tübülleri tekrar süspansiyon. </li><li> kirlenmesine neden kaldırmak için geçiş hücreleri 25 ml PBS her biri tübülleri 9 kez yıkayın. 25 ml&#39;lik bir pipet kullanarak her yıkama tübülleri tekrar süspansiyon ve onları 10 dakika boyunca birim yerçekimi tarafından yerleşmek için izin verir. Her zaman PBS, tabanda ve süpernatant kaldırılmasını pipetle için aynı 25 ml pipet kullanın. </li></ol> Peritubular Hücreleri 4. Sökme / İzolasyon (PTCs) <ol><li> 100 ml&#39;lik bir vida kapaklı şişeye Tüm tübüller aktarın ve kollajenaz-Hiyaluronidaz DNaz I çözeltisi (Şekil 3A) ekleyin. (120 titreşimler / dakika) 32 ° C&#39;de çalkalanan bir su banyosu içinde 10 dakika için sindirim gerçekleştirme. </li><li> Pipetleyin cam slayt süspansiyon bir damla ve hızlı bir şekilde 100x büyütmede rutin hücre kültürü için bir ters ışık mikroskobu altında tübülleri kontrol edin. sindirim gelişmiş değilse yeterli (mikroskobik kontrolü için gereken zamanı saymazsak) Ek 2 dakika süreyle inkübasyon devam ediyor. Not: Bu adım sırasında tüm tübüller (Şekil 3B ve C) kaba haline gelmelidir uzunluk ve tübül kenarlarında kısaltılmış olsun. Kaba kenarları peritübüler hücrelerin serbest bırakılması için göstergesidir. </li><li> Adım 3.8 25 ml pipet kullanarak 50 ml konik tüp sindirilir tübüllerden ile süspansiyon aktarın. 10 ml PBS ile 100 ml&#39;lik şişe yıkayın ve konik tüp tübüllerden ekleyin. Yine 25 ml pipet kullanarak, PTCs içeren, sindirilmiş tübüller süpernatant 10 dakika boyunca birim çekimi ile yerleşmek ve dikkatlice aspire izin verin ve yeni bir konik tüp transfer. Son birkaç mililitre aspirasyon orde 5 ml&#39;lik bir pipet kullanınr tübüller herhangi carry-over önlemek için. </li><li> Toplanmış, tübül süpernatanları 20 ml RPMI,% 10 ısı ile inaktive edilmiş fetal büyükbaş hayvan serumu (FBS) ile desteklenmiş 1640 ortamı ekleme ara kullanmadan oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 300 x g&#39;de karıştırılır ve santrifüjlenir. </li><li> Süpernatantı dikkatlice süzün ve 16 mi ortamı, her biri beş T75 balonlarına on RPMI, 20 ml içinde% 10 ısı ile inaktive edilmiş FBS ile takviye 1640 ortamında yıkandı ve tohum 4 mL pelet PTCs tekrar süspansiyon. CO2 atmosferinde (Şekil 4A),% 5 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Kültür 3. gününde PTCs trypsinize ve onları 1 bölünmüş:% 10 ısı ile inaktive edilmiş FBS ile takviye 16 ml RPMI 1640 ortamı içeren T75 balonlarına 2 her biri (verim 10 şişeler tamamen) (Şekil 4B). CO2 atmosferinde% 5, 37 ° C &#39;de inkübasyon devam edin. </li><li> Kültür 5. gün tekrar PTCs trypsinize ve deneye bağlı olarak 6 oyuklu veya 24 oyuklu plakalar üzerine bunları plaka(Plaka başına bir T75 şişesi). Deneyler 6. günde gerçekleştirilebilir. </li></ol> Sertoli hücrelerinin 5. İzolasyon (SC&#39;ler) <ol><li> 25 ml&#39;lik bir pipet ile iyice PBS, 25 ml adım 4.3 yerleşmiş tübüller yeniden süspanse edin ve bunları 12 dakika için birim yerçekimi ile oturmasına izin verin. Pipetleme PBS tübüller ve yüzer uzaklaştırılması yeniden süspanse edilmesi için, aynı 25 mi pipet kullanın. 3 kez yıka (toplam 4 yıkama) tekrarlayın. </li><li> Son yıkama başka bir 100 ml sindirilmiş tübüller aktardıktan sonra Hyaluronidase-DNaz I çözüm içeren şişe-cap vida. 32 ° C (120 salınım / dakika) bir çalkalama su banyosu içinde sindirim gerçekleştirin. </li><li> Adım 4.2 anlatıldığı gibi 5 dakika sonra 100X büyütmede ışık mikroskobu inceleme ile tekrar tübüller kontrol edin. Not: Kısa tübüller, borulu agrega ve serbest hücreleri (Şekil 3D) görünür olmalıdır. <ol><li> boru şeklindeki agrega 10 dakika yerleşmek izin ve bizi süpernatant aspire25 ml&#39;lik bir pipet ing. Yıkama 25 ml PBS ve her yıkama aşaması (Şekil 3E) 10 dakikalık bir sedimantasyon süresi kullanılarak 4 defa toplanır. </li></ol></li><li> RPMI 1640 ortamı 20 ml ilave edilir ve 20 ml&#39;lik bir şırınga üzerine monte edilmiş bir 18 G iğne ile süspansiyon 10 kez geçer. hava kabarcıkları kaçının. Not: ve iğne tek geçişte olarak kabul edilir aracılığıyla süspansiyon çekerek. hidrodinamik kesme hücrelerin bozulması ve homojenleştirme topaklaşma eğilimi hücrelerin hazırlanması için standart bir yöntemdir. Küçük bir iç çapa sahip olan bir hipodermik iğne ile hücrelerin geçici 25. Şekil 5C ve D&#39;nin kültürün gün 4 saflaştınldı Sertoli hücreleri normal ultrastrüktürel gösteren fonksiyonel özellikleri üzerinde bir etkisi olması beklenmemektedir. <ol><li> Pipetleyin AGG eğer 10X büyütmede rutin hücre kültürü için bir ters ışık mikroskobu altında tübülleri kontrol hızla bir bardak slayt ve süspansiyon bir damlaRegates Tüm (Şekil 3F) dağıtılır. Filtrattaki saf tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için bir 70 mikron hücre süzgecinden hücre süspansiyonu filtre. </li></ol></li><li> ara kullanmadan oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 200 x g&#39;de adım 5.4 süzüntü santrifüjleyin. Dikkatle 40 Sertoli hücreleri 25 ml&#39;lik bir pipet kullanılarak süpernatan aspire ve tekrar süspansiyon mi RPMI 1640 ortamı (serumsuz). </li><li> Tripan mavi rengin 100 ul ile 100 ul hücre süspansiyonu karıştırın ve bir Neubauer Geliştirilmiş bölmesi ile hücre sayımı. Sayma sonucuna göre 3 x 10 6 hücre / ml hücre yoğunluğu ayarlayın. Tohum 6-çukurlu bir tablaya (= Gün 1) üzerinde oyuk başına 1 mi. Bir Oil Red O boyama (adım 6) planlanıyorsa birine bir kapak kayma koymak ya da Sertoli hücreleri ekim önce birkaç kuyu. Not: tüp kısaca bir hücre kısım pipet ile çekilmeden önce her zaman sarsılmış gerektiğini, böylece süspansiyon içinde Sertoli hücreleri hızlı bir şekilde çözmek. 4. günde onlar sıkıca att kadaralt tabakası, ACH. </li><li> 4. günde, yüzen veya yapışmış germ hücreleri çıkarmak için (Şekil 4C) izole sertoli hücreleri PBS (Şekil 4D) (aşama 5.6) kaplama için kullanılan 6 oyuklu plakaların her bir yıkama. , Orta aspire her iyi PBS 1-2 ml ekleyin ve şiddetle bir tablo ama PBS dökmeden yatay 6-kuyucuğu sallayın. Yıkandıkları 3 kez tekrarlayın ve günde 5 ve 6 (Şekil 4E) aynı yıkama işlemi gerçekleştirin. Gün 4 Sertoli hücreleri sıkıca bağlı olan Açık ve ters ışık mikroskobu (Şekil 4C) altında desen gibi bir arnavut gösterir Not:. Deneyler 7. günden itibaren gerçekleştirilebilir. <ol><li> Yapışkan germ hücreleri 6-yuvalı plakalar üzerinde tohumlama 3 gün sonra, bir hipotonik şoku yerine yüzen ve çıkarılması için (adım 5.7 için alternatif). orta kaldırmak ve buzdolabı üzerinden doğrudan alınan 20 mM Tris pH 7.5 1 ml ekleyin. 90 sn 120 değil sonra Tris tamponu aspireDaha sonra. PBS ile iki kez hücreleri yıkanır ve RPMI 1640 ortamı (serumsuz) 2 ilave edin. İsteğe bağlı olarak, bir sonraki gün deneyleri. Not: Hipotonik şok daha uzun süre daha germ hücreleri kaldırılabilir ancak daha Sertoli hücreleri de kaybolur. İlk PBS yıkama herhangi Sertoli hücreleri yerinden etmemek için hızlı ama dikkatli yapılmalıdır. Doğrudan farklı boyutlarda hipotonik muameleye sayıda vakuollerin faz kontrast mikroskopisi ile sitoplazma içerisinde gözlenebilir sonra. Vakuoller hipotonik tedavi sonrası birkaç saat içinde kaybolur. </li></ol></li></ol> 6. Yağ Kırmızı O boyamasıyla <ol><li> Oda sıcaklığında tüm adımları uygulayın. gününde 7 yıkama Sertoli hücreleri PBS ile iki kez bir kapak kayma (adım 5.6) yetiştirilen ve PBS içinde% 10 formalin ile bunları düzeltmek. 10 dakika sonra taze solüsyon ile formalin yerine, başka bir 60 dakika tespiti devam ediyor. Not: Bütün çözeltiler, bir kayar kapak ile birlikte (S) içerisine ilave edildi ve bir sonraki aşamada daha önce aspire edilir. </li&gt; <li> Aspire formalin, su ile hücreler iki kez yıkama ve% 60 izopropanol ilave edin. 5 dakika sonra, bir kaç dakika için havayla kurumaya hücreleri sağlar. </li><li> oyuk başına 1 mi, Yağ Kırmızı O boya solüsyonu eklenir ve 10 dakika süre ile inkübe edilir. çözelti aspire ve su ile hücreler hemen 4 kez yıkayın ve montaj kapağı gliserol PBS fişleri (9: 1). Rutin ışık mikroskobu (Şekil 4F) ile parlak bir alan görüntüleri çekmek. </li></ol> 7. İmmünofloresan Boyama <ol><li> ya da iki kez PBS ile bir kapak slip üzerinde büyümüş (aşama 5.5) sertoli hücreleri (adım 4.5 arasında) PTCs yıkayın ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca% 4 PFA sabitleyin. </li><li> Oda sıcaklığında 1 saat boyunca PBS içerisinde% 5 BSA ile inkübe edin. BSA-PBS çözüm atın ve taze BSA-PBS (PTCs için) aktin (düz kas) içeren çözelti veya vimentin (Sertoli hücreleri) primer antikor (seyreltme 1: 100, her iki antikor için) ekleyin ve 4 ° CO / N inkübe. Not: Primer antikorun spesifik olmayan bağlanma BSA blokları ile inkube edildi. </li><li> Yıkama kapağı PBS% 0.1 Tween 20 içinde 5 dakika için 3 kez kayar ve yeşil flüoresan boya konjuge keçi anti-fare ikincil antikoru (seyreltme 1: 1.000) ile birlikte inkübe karanlıkta, 1 saat boyunca oda sıcaklığında karıştırıldı. </li><li> Yıkama kapağı PBS% 0.1 Tween 20 içinde 5 dakika için 3 kez kayar ve DAPI montaj ortamı içine monte edilir. </li></ol> 8. ultrastrüktürel Analizi <ol><li> PBS ile 6 cm hücre kültürü plakasının üzerinde büyümüş (aşama 5.6) yıkama sertoli hücreleri ve (67 mM kakodilat tampon maddesi içinde% 2.5 glutaraldehit,% 2.5 paraformaldehid ve% 0.05 pikrik asit karışımı içinde, 4 ° C&#39;de 2 saat boyunca, onları gidermek Ito ve Karnovsky 26 uygun pH 7.4). </li><li> 50 mM maleat tamponu (pH 5) içinde çözülmüş% 0.3 uranil asetat içinde bir O / N inkübasyon takip% 1 ozmiyum tetroksit sonrası tespit gerçekleştirin. Standart prosedürlere göre ortamı gömme yerleştirme örnekleri. Ince bölümleri kesmek kurşun sitrat ile kontrast ve elektron mikroskobu ile incelenmesi. </li></ol>

<ol>
	<li>Nieschlag, E., Behre, H., Nieschlag, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Andrology. Male Reproductive Health and Dysfunction. , (2010).</li><li>Esaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#220;ber+Kulturen+des+Hodengewebes+der+S&#228;ugetiere+und+&#252;ber+die+Natur+des+interstitiellen+Hodengewebes+und+der+Zwischenzellen.">&#220;ber Kulturen des Hodengewebes der S&#228;ugetiere und &#252;ber die Natur des interstitiellen Hodengewebes und der Zwischenzellen.</a> Z. Mikrosk. Anat. Forsch. 15, 368-404 (1928).</li><li>Hall, P. F., Irby, D. C., De Kretser, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+cholesterol+to+androgens+by+rat+testes:+comparison+of+interstitial+cells+and+seminiferous+tubules.">Conversion of cholesterol to androgens by rat testes: comparison of interstitial cells and seminiferous tubules.</a> Endocrinology. 84, 488-496 (1969).</li><li>Welsh, M. J., Wiebe, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+sertoli+cells:+a+rapid+method+for+obtaining+viable+cells.">Rat sertoli cells: a rapid method for obtaining viable cells.</a> Endocrinology. 96, 618-624 (1975).</li><li>Vitale, R., Fawcett, D. W., Dym, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+normal+development+of+the+blood-testis+barrier+and+the+effects+of+clomiphene+and+estrogen+treatment.">The normal development of the blood-testis barrier and the effects of clomiphene and estrogen treatment.</a> Anat. Rec. 176, 331-344 (1973).</li><li>Dorrington, J. H., Roller, N. F., Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+follicle-stimulating+hormone+on+cultures+of+Sertoli+cell+preparations.">Effects of follicle-stimulating hormone on cultures of Sertoli cell preparations.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 3, 57-70 (1975).</li><li>Tung, P. S., Skinner, M. K., Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+synthesis+is+a+marker+for+peritubular+cell+contaminants+in+Sertoli+cell-enriched+cultures.">Fibronectin synthesis is a marker for peritubular cell contaminants in Sertoli cell-enriched cultures.</a> Biol. Reprod. 30, 199-211 (1984).</li><li>Verhoeven, G., Cailleau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testicular+peritubular+cells+secrete+a+protein+under+androgen+control+that+inhibits+induction+of+aromatase+activity+in+Sertoli+cells.">Testicular peritubular cells secrete a protein under androgen control that inhibits induction of aromatase activity in Sertoli cells.</a> Endocrinology. 123, 2100-2110 (1988).</li><li>Tung, P. S., Dorrington, J. H., Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+changes+induced+by+follicle-stimulating+hormone+or+dibutyryl+cyclic+AMP+on+presumptive+Sertoli+cells+in+culture.">Structural changes induced by follicle-stimulating hormone or dibutyryl cyclic AMP on presumptive Sertoli cells in culture.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 72, 1838-1842 (1975).</li><li>Teng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+Sertoli+cells+and+their+effects+on+the+function+of+co-cultured+allogeneic+islets+in+vitro.">Isolation and culture of adult Sertoli cells and their effects on the function of co-cultured allogeneic islets in vitro.</a> Chin. Med. J. (Engl.). 118, 1857-1862 (2005).</li><li>Kohno, S., Ziparo, E., Marek, L. F., Tung, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Sertoli+cells:+major+histocompatibility+antigens+and+glycoconjugates.">Murine Sertoli cells: major histocompatibility antigens and glycoconjugates.</a> J. Reprod. Immunol. 5, 339-350 (1983).</li><li>Dufour, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sertoli+cell+line+lacks+the+immunoprotective+properties+associated+with+primary+Sertoli+cells.">Sertoli cell line lacks the immunoprotective properties associated with primary Sertoli cells.</a> Cell Transplant. 17, 525-534 (2008).</li><li>Majumdar, S. S., Tsuruta, J., Griswold, M. D., Bartke, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+Sertoli+cells+from+the+testes+of+adult+Siberian+hamsters:+analysis+of+proteins+synthesized+and+secreted+by+Sertoli+cells+cultured+from+hamsters+raised+in+a+long+or+a+short+photoperiod.">Isolation and culture of Sertoli cells from the testes of adult Siberian hamsters: analysis of proteins synthesized and secreted by Sertoli cells cultured from hamsters raised in a long or a short photoperiod.</a> Biol. Reprod. 52, 658-666 (1995).</li><li>Zhang, H., Liu, B., Qiu, Y., Fan, J., Yu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pure+cultures+and+characterization+of+yak+Sertoli+cells.">Pure cultures and characterization of yak Sertoli cells.</a> Tissue Cell. 45, 414-420 (2013).</li><li>Ziparo, E., Geremia, R., Russo, M. A., Stefanini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+interaction+in+vitro+between+Sertoli+cells+and+germ+cells+at+different+stages+of+spermatogenesis.">Surface interaction in vitro between Sertoli cells and germ cells at different stages of spermatogenesis.</a> Am. J. Anat. 159, 385-388 (1980).</li><li>Anway, M. D., Folmer, J., Wright, W. W., Zirkin, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Sertoli+cells+from+adult+rat+testes:+an+approach+to+ex+vivo+studies+of+Sertoli+cell+function.">Isolation of Sertoli cells from adult rat testes: an approach to ex vivo studies of Sertoli cell function.</a> Biol. Reprod. 68, 996-1002 (2003).</li><li>Scarpino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+method+of+Sertoli+cell+isolation+by+DSA+lectin,+allowing+mitotic+analyses.">A rapid method of Sertoli cell isolation by DSA lectin, allowing mitotic analyses.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 146, 121-127 (1998).</li><li>Mather, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+two+distinct+mouse+testicular+epithelial+cell+lines.">Establishment and characterization of two distinct mouse testicular epithelial cell lines.</a> Biol. Reprod. 23, 243-252 (1980).</li><li>Korbutt, G. S., Elliott, J. F., Rajotte, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cotransplantation+of+allogeneic+islets+with+allogeneic+testicular+cell+aggregates+allows+long-term+graft+survival+without+systemic+immunosuppression.">Cotransplantation of allogeneic islets with allogeneic testicular cell aggregates allows long-term graft survival without systemic immunosuppression.</a> Diabetes. 46, 317-322 (1997).</li><li>Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+cell-germ+cell+relationships+in+mammalian+testes+during+development+and+spermatogenesis.">Somatic cell-germ cell relationships in mammalian testes during development and spermatogenesis.</a> Ciba Found. Symp. 182, 271-281 (1994).</li><li>Whaley, P. D., Chaudhary, J., Cupp, A., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+specific+response+elements+of+the+c-fos+promoter+and+involvement+of+intermediate+transcription+factor(s)+in+the+induction+of+Sertoli+cell+differentiation+(transferrin+promoter+activation)+by+the+testicular+paracrine+factor+PModS.">Role of specific response elements of the c-fos promoter and involvement of intermediate transcription factor(s) in the induction of Sertoli cell differentiation (transferrin promoter activation) by the testicular paracrine factor PModS.</a> Endocrinology. 136, 3046-3053 (1995).</li><li>Bhushan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uropathogenic+Escherichia+coli+block+MyD88-dependent+and+activate+MyD88-independent+signaling+pathways+in+rat+testicular+cells.">Uropathogenic Escherichia coli block MyD88-dependent and activate MyD88-independent signaling pathways in rat testicular cells.</a> J. Immunol. 180, 5537-5547 (2008).</li><li>Meinhardt, A., Hedger, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological,+paracrine+and+endocrine+aspects+of+testicular+immune+privilege.">Immunological, paracrine and endocrine aspects of testicular immune privilege.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 335, 60-68 (2011).</li><li>Fijak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+Testosterone+on+Inflammatory+Response+in+Testicular+Cells+and+Expression+of+Transcription+Factor+Foxp3+in+T+Cells.">Influence of Testosterone on Inflammatory Response in Testicular Cells and Expression of Transcription Factor Foxp3 in T Cells.</a> Am. J. Reprod. Immunol. , 12-25 (2015).</li><li>Mamidi, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+passing+mesenchymal+stem+cells+through+smaller+bore+size+needles+for+subsequent+use+in+patients+for+clinical+or+cosmetic+indications.">Impact of passing mesenchymal stem cells through smaller bore size needles for subsequent use in patients for clinical or cosmetic indications.</a> J. Transl. Med. 10, 229 (2012).</li><li>Ito, S., Karnovsky, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formaldehyde-glutaraldehyde+fixatives+containing+trinitro+compounds.">Formaldehyde-glutaraldehyde fixatives containing trinitro compounds.</a> J. Cell. Biol. 39, 168-169 (1968).</li><li>Galdieri, M., Ziparo, E., Palombi, F., Russo, M. A., Stefanini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pure+Sertoli+cell+cultures:+a+new+model+for+the+study+of+somatic-germ+cell+interactions.">Pure Sertoli cell cultures: a new model for the study of somatic-germ cell interactions.</a> J. Androl. 5, 249-254 (1981).</li><li>Fijak, M., Meinhardt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+testis+in+immune+privilege.">The testis in immune privilege.</a> Immunol. Rev. 213, 66-81 (2006).</li><li>Jegou, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sertoli+cell+in+vivo+and+in+vitro.">The Sertoli cell in vivo and in vitro.</a> Cell Biol. Toxicol. 8, 49-54 (1992).</li><li>Pineau, C., Le Magueresse, B., Courtens, J. L., Jegou, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+in+vitro+the+phagocytic+function+of+Sertoli+cells+in+the+rat.">Study in vitro the phagocytic function of Sertoli cells in the rat.</a> Cell Tissue Res. 264, 589-598 (1991).</li><li>Ren, Y., Savill, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis:+the+importance+of+being+eaten.">Apoptosis: the importance of being eaten.</a> Cell Death Differ. 5, 563-568 (1998).</li><li>Ducray, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+mouse+Sertoli+cell+line+producing+rat+androgen-binding+protein+(ABP).">Establishment of a mouse Sertoli cell line producing rat androgen-binding protein (ABP).</a> Steroids. 63, 285-287 (1998).</li><li>Konrad, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+Sertoli+cells+express+epithelial+but+also+mesenchymal+genes+after+immortalization+with+SV40.">Rat Sertoli cells express epithelial but also mesenchymal genes after immortalization with SV40.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1722, 6-14 (2005).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

The seminiferous tubules are bounded by a circular layer of peritubular cells and a basal lamina on the luminal side. Sertoli cells are resting on the basal lamina, establish the blood testis barrier through formation of occluding junctions between adjacent cells and provide the structural framework for the organisation of the seminiferous epithelium. Sertoli cells and adjacent spermatogenic cells maintain intimate contacts throughout germ cell development providing physical contact and communication alike. Therefore, wh...

Testisler, androjenler yani erkek gamet ve cinsel hormonları üretir. Organ iki bölmeden oluşmaktadır. Interstisyel bölmesindeki, o steroidogenez Leydig hücreleri içinde yer alır, toplam testis hacmi 1 yaklaşık% 10-12 temsil etmektedir. Boru şeklindeki bölme testis hacmi 1 yaklaşık 60-80% temsil ve germ hücreleri ve somatik hücre iki tür içerir - peritübüler hücreler ve Sertoli hücrelerinin. testis, her 1-3 derece kıvrık seminifer tübüller içeren, 250-300 lobülleri içine bağ dokusu septa bölünür. Bu tübüller bazal membran kollajen tabakası ve peritübüler hücrelerin bir çevresel katman (Şekil 1A) içine alınır. Germinal epitel bazal membran luminal tarafında yer almaktadır. Sertoli hücreleri lümene bazal membran bütün germinal epitel kapsayan geniş uzun hücrelerdir. Onlar güçlü olan attbazal membran ağrıyordu ve interstisyumda gelen germinal epitel tıkar ve kan-testis bariyerini temsil bazolateral organize sıkı kavşaklar sayesinde sürekli hücresel tabaka oluştururlar. Sertoli hücreleri belirgin sitoplazmik çıkıntıları ve germ hücrelerinin bir türe özgü ama sürekli numarası ile sıkı morfolojik ve fonksiyonel temas almak sağlayacak etkileri vardır. Diploid germinal kök hücreleri çoğalır ve spermatogonia farklılaşırlar. mayoz sırasında mayoz II sırasında daha fazla dört haploit spermatidler haline oluşturulan tetraploid spermatositlerde kısa ömürlü. bir hücresel ağ oluştururlar ve böylece tüm germ hücreleri sitoplazmik köprüler ile birbirine bağlanır. spermatidlerin olgunlaşması sırasında ana olay Spermiyogenez denilen bir süreçle, kalıntı organları oluşturan, sitoplazmanın büyük parçaların ekstrüzyon olduğunu. Kalıntı organları Sertoli hücreleri tarafından fagosite edilir. Geç spermatid sonra içine salınırtübüler lümen ve daha olgunlaşması için epididime taşınır. Sertoli hücreleri ve tohum hücreleri karşılıklı topografik ve fonksiyonel spermatogenezi koordine etmek görünür. Küçük testis parçaları ekili ve hücre türleri mikroskopla 2 tarafından tespit edildiğinde bireysel testiküler hücre tiplerinin hazırlanması neredeyse bir asır önce başladı. Ince uçlu forseps kullanarak tunika albuginea&#39;yı açtıktan sonra tübül dikkatli diseksiyon ile tubuler ve interstisyel bölmeleri 3 ayırmak, daha sonra mümkün olmuştur. 1975 yılında Galler ve Wiebe interstisyel doku ve dış peritübüler hücre tabakasının 4 çıkarılması için bir pankreatini tedavi yapışmasını tübülleri boşaltmak için bir kollajenaz tedavi tanıttı. erken genç olgunlaşmamış fareler üzerinde (eski 20 civarında gün) içinde kullanılmaya başlanmış itibaren spermatogenez henüz başlamamış çünkü Sertoli hücreleri tübüler hücre nüfusun büyük bir kısmını oluşturmaktadır. Bu yaş sıçan Sert atoli hücreleri bölünmeye son ve kan-testis bariyeri 5 kurulmuştur, böylece komşu hücreler arasındaki sıkı bağlantılar oluşturur. Welsh ve Wiebe Dorrington ve ark., Bağımsız olarak tripsin bir kombinasyonunu ortaya aynı yıl 6 yayınlanan soybeen tripsin inhibitörü ve kolajenaz bunu takiben deoksiribonükleaz. Her iki grup, aynı zamanda, yaklaşık% 70 sertoli hücreleri içeren kaplama için homojen bir hücre süspansiyonu üretmek için (bir şırınga iğnesi veya, sırasıyla, bir Pasteur pipeti ile tekrar tekrar sindirilmiş boru şekilli parçaların çizilmesi) mekanik kuvvet kullanılır. serumsuz bir ortam kullanılarak kültür içinde 3 gün sonra, sertoli hücreleri yüzdesi, yaklaşık% 90 artar. Bu büyük ölçüde germ hücrelerine kirlenmesine neden ölümü isnat edilebilir. Kalıntı peritübüler hücreleri (PTCs), bununla birlikte, sıkıca hücre dışı matrisin üzerinden bağlı kalır. PTCs ancak Sertoli hücreleri üretmek için bilinmektedirPTCs kontaminasyonun tahmin edilmesi için bir markör proteini olarak hizmet edebilir fibronektin. Bu nedenle, Tung ve ark. Ek hyaluronidaz tedavi Sertoli hücre fraksiyonu 7 saflığını artırmak olabilir gerekçeli. Gerçekten de ek bir tedavi kıyasla serum ihtiva eden bir ortam saflaştırılmıştır sertoli hücreleri yetiştirilmesi için kullanıldığında özellikle belirgindir hale geldiği, yaklaşık 20-kat PTCs kirlenmeyi azaltmak mümkün olduğunu gösterebilir. Bundan sonra Tung ve ark geliştirilmiş prosedürü. hakim protokolü oldu ve yoğun alanda 8 (Şekil 1B) diğer büyük gruplar tarafından kullanılmıştır. kollajenaz muamelesi sırasında PTCs çoğunluğu serbest bırakılır ve sertoli hücreleri paralel olarak izole edilebilir. PTCs şiddetle çoğalır ve folikül stimüle edici hormon (FSH) yanıt vermeyen Oysa, Sertoli hücreleri artık mitoz geçiren ve karakteristik morfolojik değişikliklerin FSH yanıt vermeyenve siklik adenosin monofosfat (cAMP) konsantrasyonda 9 bir artış. Çok benzer bir enzimatik sindirim protokolleri erkek 10, fare 11,12, Sibirya hamsteri 13 veya yak 14 gibi diğer hayvanlardan elde edilen primer Sertoli hücrelerin izolasyonu için de kullanılabilir. Germ hücreleri bir hipotonik şok kirletici büyük miktarlarda çıkarılması için izolasyon prosedürü 15 sonunda kullanılabilir. Yetişkin sıçan 16 testis Bu, sertoli hücreleri etkili izolasyonunu sağlayan. Bir zenginleştirilmiş Sertoli hücre süspansiyonu da dozdaki ile aglutinin 17 kaplı lektin yemekleri süspansiyon kaplama ile germ hücrelerinden ayrılabilir. Sadece Sertoli hücreleri ve birkaç kalıntı PTCs lektin plakalara uygun. Birincil Sertoli hücre kültürleri, özellikle sıçan, fare Sertoli hücre li gibi hücre hatları hormonlara yanıt soruşturma veya kurmak için başlangıçta kullanılmaktadırne TM4 18. Bu hücre hattı bugüne kadar yüzden fazla çalışmalarda araştırılmıştır. Bir translasyon yaklaşımda Sertoli hücreleri sistemik bağışıklığı 19 olmayan ko-kültürlenmiş hücreler ve uzun vadede aşı yaşamda kalması hakkında kseno veya allojenik pankreas adacıklarının eş nakli gibi doku immüno korunması için kullanılmaktadır. Ve somatik-germ hücresi (Sertoli hücreleri - germ hücreleri) 20 etkileşimleri, 21 - İzole Sertoli hücreleri de epitel-mezenkimal (PTCC Sertoli hücreleri) çalışmak için ko-kültür deneylerinde kullanılmıştır. Son zamanlarda birincil Sertoli hücreleri patojenik ve üropatojenik E. ile enfeksiyonu takiben ifadeyi sitokin yol açan Toll benzeri reseptörler ifadesini ve proinflamatuar sitokinlerin salgılanmasını yanı sıra sinyal iletimi kaskadlarını araştırmak için istihdam edilmiştir E. coli 22. Diğer son araştırmalar testis bağışıklık p incelemek için sertoli hücreleri kullanılarak yapıldırivilege 23 ve testosteron ön arıtma LPS ile güdülenmiş ateşli tepkiyi 24 bastırdığını göstermiştir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="813">
	<tbody>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:289px;">Actin (smooth muscle) antibody clone 1A4</td>
			<td style="width:111px;">Dako</td>
			<td style="width:124px;">M0851</td>
			<td style="width:289px;">Monoclonal mouse anti human antibody. 
			Use 1:100 dilution for immunofluorescence.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:289px;">Albumin bovine fraction V 
			Standard grade, lyophilized</td>
			<td style="width:111px;">Serva</td>
			<td style="width:124px;">11930.04</td>
			<td style="width:289px;">Filter (0.45 &#181;m) BSA solutions used for immunofluorescence.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Corning&#8482; Cell Strainers 70&#160;&#181;m</td>
			<td style="width:111px;">Corning</td>
			<td style="width:124px;">431751</td>
			<td>White color</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:289px;">Collagenase A from Clostridium histolyticum</td>
			<td style="width:111px;">Roche</td>
			<td style="width:124px;">10103586001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">DAPI mountant ProLong&#174; Gold Antifade</td>
			<td style="width:111px;">Life technologies</td>
			<td style="width:124px;">P-36931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">D-glucose</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">G8644</td>
			<td>100 g/l</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Dulbecco&#180;s PBS without Ca2+/Mg2+</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:124px;">14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">DNase I</td>
			<td style="width:111px;">Roche</td>
			<td style="width:124px;">10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Electron microscope</td>
			<td style="width:111px;">Zeiss</td>
			<td>EM 109S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Fluorescence microscope</td>
			<td style="width:111px;">Zeiss</td>
			<td style="width:124px;">Axioplan 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Hyaluronidase from bovine testis</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">H3506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Inverted light microscope</td>
			<td style="width:111px;">Olympus</td>
			<td style="width:124px;">CKX41</td>
			<td>Routine cell culture microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:289px;">Mouse IgG / IgM (H+L) polyclonal 
			secondary Antibody&#160;</td>
			<td style="width:111px;">Life technologies</td>
			<td style="width:124px;">A-10684</td>
			<td>Alexa Fluor&#174; 488 conjugate</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:289px;">Oil Red O</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">O0625</td>
			<td style="width:289px;">Has replaced Sudan III and Sudan IV 
			because of brighter color.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">P6148</td>
			<td style="width:289px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:289px;">Penicillin (5,000&#160;U/ml)/ 
			Streptomycin (5,000 &#181;g/ml)</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:124px;">15070-063</td>
			<td>100x solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">RPMI-1640</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:124px;">21875-034</td>
			<td>Contains 300 mg/L L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Trypsin from porcine pancreas</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">T5266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Trypan Blue Stain (0.4%)</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:124px;">15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:289px;">Trypsin inhibitor from soybean</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">T6522</td>
			<td style="width:289px;">The Sigma product is considerably cheaper than the previously used 
			BPTI (Aprotinin) from Roche.</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:289px;">Vimentin antibody (V9)</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">V6630</td>
			<td style="width:289px;">Monoclonal mouse anti pig vimentin antibody.&#160; Use 1:100 dilution for immunofluorescence.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Wistar WU rats</td>
			<td style="width:111px;">Charles River</td>
			<td style="width:124px;">N/A</td>
			<td>Should be 19 days old on day of experiment.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of sertoli cells and peritubular cells from rat testes

farklılaştırılmış sperm ilk ergenlik dönemindeki görünür, çünkü testis ve özellikle erkek gamet olarak, benzersiz bir şekilde bağışıklık sistemini zorlukları - on yıldan fazla sistemik immün tolerans kuruluşundan sonra. Spermatogenik hücreler bağışıklık sistemi tarafından kendi-olmayan olarak kabul edilebilir bir protein dizi ifade eder. Testis daha sonra, bir yandan, bu neo-antijenlere karşı tolerans oluşturmak ancak diğer yandan enfeksiyon ve tümör gelişimi korunmak mümkün olmalıdır. Bu nedenle testis zararlı inflamatuar immün yanıtı çağrıştıran olmadan yabancı antijenleri tolere vücutta birkaç bağışıklık ayrıcalıklı yerlerden biridir. Sertoli hücreleri testis bu bağışıklık ayrıcalıklı bir ortamda sürdürülmesi için kilit rol oynayacak ve aynı zamanda yabancı bir ortamda cotransplanted hücre yaşam süresini. Bu nedenle birincil Sertoli hücreleri, e olamaz testisin bağışıklık ayrıcalığını eğitim için önemli bir araçtırasily yerleşik hücre hatları veya başka bir hücresel modellerinde ile ikame. ve istenirse peritübüler hücreler - - sıçan testis tek bir gün içinde burada Sertoli hücrelerinin izolasyonu için detaylı ve kapsamlı bir protokol mevcut.

Açıklanan prosedür 10 sıçan testis yaklaşık 12 x 10 7 Sertoli hücrelerinin izolasyonu sağlar. Altı-yedi 6 oyuklu plakalar 7. günde deneyler için uygun olduğu tripsin-DNase I sindirim Sertoli hücre izolasyonu sırasında çok önemli bir adım olan, böylece, 3 x 10 6 hücre 6 oyuklu bir plaka üzerinde oyuk başına yerleştirilir. Bu noktada sindirim çok ilerleyen ise germ hücrelerinin oranı / Sertoli hücreleri orantısız sonuna kadar artacaktır...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Sertoli Cells and Peritubular Cells from Rat Testes at JoVE.com

Isolation of Sertoli Cells and Peritubular Cells from Rat Testes

Birincil Sertoli hücreleri immüno özelliklerinin iltihap ya da enfeksiyon ve yararlanma sırasında testis immün ayrıcalığı, sinyal transdüksiyonunu çalışmak için gereklidir. Burada yüksek derecede saflaştırılmış birincil Sertoli hücreleri ve sıçan testis peritübüler hücrelerin izolasyonu için bir enzim bazlı protokol açıklar.

Sıçan Testislerindeki Sertoli Hücreleri İzolasyon ve peritübüler Hücreler

The testis, and in particular the male gamete, challenges the immune system in a unique way because differentiated sperm first appear at the time of ...

isolation-of-sertoli-cells-and-peritubular-cells-from-rat-testes

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

22.3K Görüntüleme.  Justus-Liebig-Universität Gießen.  Birincil Sertoli hücreleri immüno özelliklerinin iltihap ya da enfeksiyon ve yararlanma sırasında testis immün ayrıcalığı, sinyal transdüksiyonunu çalışmak için gereklidir. Burada yüksek derecede saflaştırılmış birincil Sertoli hücreleri ve sıçan testis peritübüler hücrelerin izolasyonu için bir enzim bazlı protokol açıklar. 

Video: Isolation of Sertoli Cells and Peritubular Cells from Rat Testes

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal tract and other viscera. It harbors a number of immune cells including macrophages, B cells and T cells. The presence of a high number of na&iuml;ve macrophages in the peritoneal cavity makes it a preferred site for the collection of na&iuml;ve tissue resident macrophages (1). The peritoneal cavity is also important to the study of B cells because of the presence of a unique peritoneal cavity-resident B cell subset known as B1 cells in addition to conventional B2 cells. B1 cells are subdivided into B1a and B1b cells, which can be distinguished by the surface expression of CD11b and CD5. B1 cells are an important source of natural IgM providing early protection from a variety of pathogens (2-4). These cells are autoreactive in nature (5), but how they are controlled to prevent autoimmunity is still not understood completely. On the contrary, CD5+ B1a cells possess some regulatory properties by virtue of their IL-10 producing capacity (6). Therefore, peritoneal cavity B1 cells are an interesting cell population to study because of their diverse function and many unaddressed questions associated with their development and regulation. The isolation of peritoneal cavity resident immune cells is tricky because of the lack of a defined structure inside the peritoneal cavity. Our protocol will describe a procedure for obtaining viable immune cells from the peritoneal cavity of mice, which then can be used for phenotypic analysis by flow cytometry and for different biochemical and immunological assays.

The peritoneal cavity in mammals contains different immune cell populations crucial for innate immune responses. An efficient isolation method is required for biochemical and functional analyses of these cells. Here we provide a comprehensive method for the isolation of peritoneal cavity cells in the mouse.

Fare Periton Boşluk Hücreleri İzolasyon

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5 These immune cells, which include mast cells, T-cells and macrophages; store and release a variety of biologically active mediators including cytokines and proteases such as tryptase.6-8 These mediators have been shown to be key players in extracellular matrix metabolism by activating matrix metalloproteinases or causing collagen accumulation by modulating the cardiac fibroblasts' function.9-11 However, available techniques for isolating cardiac immune cells have been problematic because they use bacterial collagenase to digest the myocardial tissue. This technique causes activation of the immune cells and thus a loss of function. For example, cardiac mast cells become significantly less responsive to compounds that cause degranulation.12 Therefore, we developed a technique that allows for the isolation of functional cardiac immune cells which would lead to a better understanding of the role of these cells in cardiac disease.13, 14
This method requires a familiarity with the anatomical location of the rat's xiphoid process, axilla and falciform ligament, and pericardium of the heart. These landmarks are important to increase success of the procedure and to ensure a higher yield of cardiac immune cells. These isolated cardiac immune cells can then be used for characterization of functionality, phenotype, maturity, and co-culture experiments with other cardiac cells to gain a better understanding of their interactions.

This method for isolating functional immune cells from the heart provides an alternative to the conventional methods of collagenase digestion, which causes unwanted immune cell activation, resulting in a decreased responsiveness of these cells. Our method of isolation yields functional cardiac immune cells by avoiding problems associated with enzymatic digestion.

Fonksiyonel Kardiyak Bağışıklık Hücreleri İzolasyon

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the simultaneous infection of the cell by a number of phages, one of two pathways is chosen: lytic (virulent) or lysogenic (dormant)3,4. We recently developed a method for fluorescently labeling individual phages, and were able to examine the post-infection decision in real-time under the microscope, at the level of individual phages and cells5. Here, we describe the full procedure for performing the infection experiments described in our earlier work5. This includes the creation of fluorescent phages, infection of the cells, imaging under the microscope and data analysis. The fluorescent phage is a "hybrid", co-expressing wild- type and YFP-fusion versions of the capsid gpD protein. A crude phage lysate is first obtained by inducing a lysogen of the gpD-EYFP (Enhanced Yellow Fluorescent Protein) phage, harboring a plasmid expressing wild type gpD. A series of purification steps are then performed, followed by DAPI-labeling and imaging under the microscope. This is done in order to verify the uniformity, DNA packaging efficiency, fluorescence signal and structural stability of the phage stock. The initial adsorption of phages to bacteria is performed on ice, then followed by a short incubation at 35&deg;C to trigger viral DNA injection6. The phage/bacteria mixture is then moved to the surface of a thin nutrient agar slab, covered with a coverslip and imaged under an epifluorescence microscope. The post-infection process is followed for 4 hr, at 10 min interval. Multiple stage positions are tracked such that ~100 cell infections can be traced in a single experiment. At each position and time point, images are acquired in the phase-contrast and red and green fluorescent channels. The phase-contrast image is used later for automated cell recognition while the fluorescent channels are used to characterize the infection outcome: production of new fluorescent phages (green) followed by cell lysis, or expression of lysogeny factors (red) followed by resumed cell growth and division. The acquired time-lapse movies are processed using a combination of manual and automated methods. Data analysis results in the identification of infection parameters for each infection event (e.g. number and positions of infecting phages) as well as infection outcome (lysis/lysogeny). Additional parameters can be extracted if desired.

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

This article describes the procedure for preparing a fluorescently-labeled version of bacteriophage lambda, infection of E. coli bacteria, following the infection outcome under the microscope, and analysis of infection results.

Hücre-kaderi ardından<em&gt; E. coli</em&gt; Faj Lambda tarafından Enfeksiyon Sonrası

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the respiratory tract. At least three main subsets of lung dendritic cells have been described in mice: conventional DC (cDC) 4, plasmacytoid DC (pDC) 5 and the IFN-producing killer DC (IKDC) 6,7. The cDC subset is the most prominent DC subset in the lung 8. 
The common marker known to identify DC subsets is CD11c, a type I transmembrane integrin (&beta;2) that is also expressed on monocytes, macrophages, neutrophils and some B cells 9. In some tissues, using CD11c as a marker to identify mouse DC is valid, as in spleen, where most CD11c+ cells represent the cDC subset which expresses high levels of the major histocompatibility complex class II (MHC-II). However, the lung is a more heterogeneous tissue where beside DC subsets, there is a high percentage of a distinct cell population that expresses high levels of CD11c bout low levels of MHC-II. Based on its characterization and mostly on its expression of F4&#47;80, an splenic macrophage marker, the CD11chiMHC-IIlo lung cell population has been identified as pulmonary macrophages 10 and more recently, as a potential DC precursor 11. 
In contrast to mouse pDC, the study of the specific role of cDC in the pulmonary immune response has been limited due to the lack of a specific marker that could help in the isolation of these cells. Therefore, in this work, we describe a procedure to isolate highly purified mouse lung cDC. The isolation of pulmonary DC subsets represents a very useful tool to gain insights into the function of these cells in response to respiratory pathogens as well as environmental factors that can trigger the host immune response in the lung.

A highly purified preparation of mouse lung dendritic cells is described. Specific emphasis is given to the isolation of conventional dendritic cell subset.

Fare Akciğer Dendritik Hücrelerinin İzolasyonu

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and food antigens while concomitantly remaining poised to mount inflammatory responses toward invasive pathogens1,2. Antigen presenting cells, particularly DCs and macrophages, play critical roles in maintaining intestinal immune homeostasis via their ability to sense and appropriately respond to the microbiota3-14. Efficient isolation of intestinal DCs and macrophages is a critical step in characterizing the phenotype and function of these cells. While many effective methods of isolating intestinal immune cells, including DCs and macrophages, have been described6,10,15-24, many rely upon long digestions times that may negatively influence cell surface antigen expression, cell viability, and/or cell yield. Here, we detail a methodology for the rapid isolation of large numbers of viable, intestinal DCs and macrophages. Phenotypic characterization of intestinal DCs and macrophages is carried out by directly staining isolated intestinal cells with specific fluorescence-labeled monoclonal antibodies for multi-color flow cytometric analysis. Furthermore, highly pure DC and macrophage populations are isolated for functional studies utilizing CD11c and CD11b magnetic-activated cell sorting beads followed by cell sorting.

Here, we detail a methodology for the rapid isolation of mouse intestinal dendritic cells (DCs) and macrophages. Phenotypic characterization of intestinal DCs and macrophages is performed using multi-color flow cytometric analysis while magnetic bead enrichment followed by cell sorting is used to yield highly pure populations for functional studies.

Fare Barsak ayrı dendritik hücreler ve makrofajlar İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Adipose Tissue Immune Cells

The discovery of increased macrophage infiltration in the adipose tissue (AT) of obese rodents and humans has led to an intensification of interest in immune cell contribution to local and systemic insulin resistance. Isolation and quantification of different immune cell populations in lean and obese AT is now a commonly utilized technique in immunometabolism laboratories; yet extreme care must be taken both in stromal vascular cell isolation and in the flow cytometry analysis so that the data obtained is reliable and interpretable. In this video we demonstrate how to mince, digest, and isolate the immune cell-enriched stromal vascular fraction. Subsequently, we show how to antibody label macrophages and T lymphocytes and how to properly gate on them in flow cytometry experiments. Representative flow cytometry plots from low fat-fed lean and high fat-fed obese mice are provided. A critical element of this analysis is the use of antibodies that do not fluoresce in channels where AT macrophages are naturally autofluorescent, as well as the use of proper compensation controls.

Adipose tissue (AT) is a site of intense immune cell activation and interaction. Almost all cells of the immune system are present in AT and their ratios are altered by obesity. Proper isolation, quantification, and characterization of AT immune cell populations are critical for understanding their role in immunometabolic disease.

Yağ Doku Bağışıklık Hücre İzolasyonu

The discovery of increased macrophage infiltration in  the adipose tissue (AT) of obese rodents and humans has led to an  intensification of interest in ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen presenting cell (APC) types found in a normal thymus and it is well established that they play distinct roles during thymic selection. These cells are localized in distinct microenvironments in the thymus and each APC type makes up only a minor population of cells. To further understand the biology of these cell types, characterization of these cell populations is highly desirable but due to their low frequency, isolation of any of these cell types requires an efficient and reproducible procedure. This protocol details a method to obtain cells suitable for characterization of diverse cellular properties. Thymic tissue is mechanically disrupted and after different steps of enzymatic digestion, the resulting cell suspension is enriched using a Percoll density centrifugation step. For isolation of myeloid DC (CD11c+), cells from the low-density fraction (LDF) are immunoselected by magnetic cell sorting. Enrichment of TEC populations (mTEC, cTEC) is achieved by depletion of hematopoietic (CD45hi) cells from the low-density Percoll cell fraction allowing their subsequent isolation via fluorescence activated cell sorting (FACS) using specific cell markers. The isolated cells can be used for different downstream applications.

This protocol details a method to isolate antigen presenting cells from human thymus via different steps of enzymatic digestion of the tissue followed by density centrifugation of the single cell suspension and finally magnetic and/or FACS sorting of the cell populations of interest.

İnsan Thymus ile myeloid dendritik hücreleri ve epitel hücreleri İzolasyonu

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation of Double Negative &#945;&#946; T Cells from the Kidney

There is currently no standard protocol for the isolation of DN T cells from the non-lymphoid tissues despite their increasingly reported involvement in various immune responses. DN T cells are a unique immune cell type that has been implicated in regulating immune and autoimmune responses and tolerance to allotransplants1-6. DN T cells are, however, rare in peripheral blood and secondary lymphoid organs (spleen and lymph nodes), but are major residents of the normal kidney. Very little is known about their pathophysiologic function7 due to their paucity in the periphery. We recently described a comprehensive phenotypic and functional analysis of this population in the kidney8 in steady state and during ischemia reperfusion injury. Analysis of DN T cell function will be greatly enhanced by developing a protocol for their isolation from the kidney.
Here, we describe a novel protocol that allows isolation of highly pure ab CD4+ CD8+ T cells and DN T cells from the murine kidney. Briefly, we digest kidney tissue using collagenase and isolate kidney mononuclear cells (KMNC) by density gradient. This is followed by two steps to enrich hematopoietic T cells from 3% to 70% from KMNC. The first step consists of a positive selection of hematopoietic cells using a CD45+ isolation kit. In the second step, DN T cells are negatively isolated by removal of non-desired cells using CD4, CD8, and MHC class II monoclonal antibodies and CD1d &#945;-galcer tetramer. This strategy leads to a population of more than 90% pure DN T cells. Surface staining with the above mentioned antibodies followed by FACs analysis is used to confirm purity.

DNabT cells are rare among peripheral T cells; however, they are abundant in certain non-lymphoid tissues. Difficulty of isolating DN T cells from non-lymphoid tissue hinders their functional analysis despite increasing recognized pathophysiologic significance. We describe a novel protocol for isolation of highly purified DN T cells from murine kidney.

Böbrek gelen Çift Negatif αβ T Hücreleri İzolasyon

There is currently no standard protocol for the isolation of DN T cells from the non-lymphoid tissues despite their increasingly reported involvement in ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and differentiation of lymphocytes. Various stromal cell subsets have been identified by the expression of the adhesion molecule CD31 and glycoprotein podoplanin (gp38), T zone reticular cells or fibroblastic reticular cells, lymphatic endothelial cells, blood endothelial cells and FRC-like pericytes within the double negative cell population. For all populations different functions are described including, separation and lining of different compartments, attraction of and interaction with different cell types, filtration of the draining fluidics and contraction of the lymphatic vessels. In the last years, different groups have described an additional role of stromal cells in orchestrating and regulating cytotoxic T cell responses potentially dangerous for the host. 
Lymph nodes are complex structures with many different cell types and therefore require a appropriate procedure for isolation of the desired cell populations. Currently, protocols for the isolation of lymph node stromal cells rely on enzymatic digestion with varying incubation times; however, stromal cells and their surface molecules are sensitive to these enzymes, which results in loss of surface marker expression and cell death. Here a short enzymatic digestion protocol combined with automated mechanical disruption to obtain viable single cells suspension of lymph node stromal cells maintaining their surface molecule expression is proposed.

Isolation of lymph node stromal cells is a multistep procedure including enzymatic digestion and mechanical disaggregation to obtain fibroblastic reticular cells, lymphatic and blood endothelial cells. In the described procedure, a short digestion is combined with automated mechanical disaggregation to minimize surface marker degradation of viable lymph node stromal cells.

Kemirgen Lenf Düğümü Stromal Hücrelerinin İzolasyonu

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident cells. A key mechanism of this inflammatory response is the migration of circulating immune cells to the ischemic brain facilitated by chemokine release and increased endothelial adhesion molecule expression. Brain-invading leukocytes are well-known contributing to early-stage secondary ischemic injury, but their significance for the termination of inflammation and later brain repair has only recently been noticed.
Here, a simple protocol for the efficient isolation of immune cells from the ischemic mouse brain is provided. After transcardial perfusion, brain hemispheres are dissected and mechanically dissociated. Enzymatic digestion with Liberase&#160;is followed by density gradient (such as Percoll) centrifugation to remove myelin and cell debris. One major advantage of this protocol is the single-layer density gradient procedure which does not require time-consuming preparation of gradients and can be reliably performed. The approach yields highly reproducible cell counts per brain hemisphere and allows for measuring several flow cytometry panels in one biological replicate. Phenotypic characterization and quantification of brain-invading leukocytes after experimental stroke may contribute to a better understanding of their multifaceted roles in ischemic injury and repair.

Inflammation plays a central role in the pathogenesis of ischemic stroke. Increasing evidence suggests that it acts as a double-edged sword which exacerbates early brain injury, but also contributes to later repair. This protocol describes the isolation of immune cells from the ischemic brain and their subsequent flow cytometric phenotyping.

İskemik Fare Beyin gelen Bağışıklık Hücreleri İzolasyon ve Akım Sitometrisi Analizi

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...