Bu çalışma, AHA Ödülü No. 15BGIA23250030, NIH Ulusal Tıp Bilimleri Enstitüsü, 8P20 GM103432-12 ödülü ve Wyoming Üniversitesi Teknik Destek Bursu adı altında BT tarafından desteklenmiştir.

Tüm protokoller, Wyoming Üniversitesi&#39;ndeki hayvan bakım kılavuzlarına uymaktadır. 1. Hayvan Barınağı ve Beslenme NOT: Yetişkin vahşi tipli fareler (C57BL / 6) (12-24 haftalık yaşlar), Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) onaylı protokollere göre araştırma hayvan tesislerinde yetiştirilmiştir. <ol><li> Yaşın 6. haftasından itibaren ev fareleri dört grup halinde ayrı kafeste gruplandı ve rastgele onları 38 yaşına kadar NBH veya HFD (±% 0.01 CAP) beslenme gruplarına atadılar. NOT: CAP, yağ dokuları 11 , 17&#39;de ifade edilen TRPV1 kanal proteininin bir agonistidir. Kaput içinde bir karıştırıcıda HFD ile CAP karıştırın ve küçük 1 2 bölümleri ihtiva eden bir tepsiye harmanlanmış karışımın aktarın. Tepsiyi -20 ° C dondurucuda saklayın. HFD + CAP diyetini içeren tepsiyi 24 saat sonra dondurucudan çıkarın ve -20 ° C&#39;de bir kapta saklayın.# 176; C dondurucu kullanana kadar. </li><li> Evde beslenen fareler, iklimle kontrol edilen bir ortamda (22.8 ± 2.0 ° C,% 45-50 nem) 12/12 ışık / karanlık döngüsü ile belirlenmiş diyet ve suya serbestçe erişebilirler. </li><li> 38 haftanın sonunda, inguinal yağ dokularını inceleyin ve lipoliz deneyleri için kullanın (bölümler 2-7). </li></ol> 2. Deneyler için Fare Hazırlama <ol><li> Ketamin ve ksilazin karışımı (sırasıyla 10 mg / kg ve 80 mg / kg vücut ağırlığı) enjekte ederek farelere anestezi uygulayın. 0.01 mL karışım / 10 g vücut ağırlığı fare enjekte edin. </li><li> Sıkı bir anestezi sıkı bir ayak parmağı çimdikle teyit edin. Pedal refleksi varsa fareyi en az 30 saniye sonra tekrar test edin. </li><li> Anestezi sırasında gözlerin kuruluğunu önlemek için veteriner merhemi kullanın. İşlemlerden herhangi birisi sırasında fareleri gözetimsiz bırakmayın. </li><li> Yüksek dozda ketamin ve xylazine karışım enjeksiyonu (sırasıyla 10 mg / kg ve 80 mg / kg vücut ağırlığı) karışımını enjekte ederek fareleri euthanize edinE (0.01 ml / 10 g vücut ağırlığı) ve ardından servikal dislokasyon. NOT: Bu ötenazi yöntemi Wyoming Üniversitesinin IACUC tarafından onaylanmıştır. </li></ol> 3. Inguinal Adipose Fat Pad&#39;lerin İzolasyonu <ol><li> Prosedür için solunda kalan fareyi (NCD veya HFD (± CAP) ile 32 hafta boyunca beslenir) yerleştirin. NOT: Fareyi sol tarafa yerleştirerek sağ ön ayak ve sağ arka platform platformdan uzaklaşırken sol ön ayak ve sol arka bacak diseksiyon platformunda olacaktır. </li><li> 2.5 inç% 70 etanol batırılmış 2 inç 2 gazlı bezle cilt yüzeyini sterilize edin. Altta yağ tabakası ortaya çıkarmak için bir neşter kullanarak deriden 2 - 3 mm&#39;lik bir yanal kesim yapın. </li><li> Dorsal yüzeyin iki yanal kesisini birleştiren kaburga kafesinin hemen altında bir neşter kullanarak cilt boyunca 1 cm&#39;lik bir kesik yapın (fare boyutuna bağlı olarak). </li><li> Deriyi sürükleyerek deriyi soyun.Steril forseps kullanarak ve yağ pedleri keserek cilt altı pedini sağlam bırakın. Bu, cildin altında yatan yağ yastığı. </li><li> Bir çift makas kullanarak yağ bandını alttaki kas ve fasyadan dikkatlice ayırın. Yağ pedini, alttaki kası kesildiği için çekin. NOT: Yağ yastıklarının ağırlığı ve boyutu farelerin türüne (NCD veya HFD (± CAP) -fed) bağlıdır. </li><li> Oda sıcaklığında (~ 15 dakika) lipoliz deneyi olana kadar fosfat tamponlu salin (PBS) içeren bir Petri kabına aktarmak için cımbız kullanın. </li><li> Adımlar 3.2-3.6&#39;da açıklandığı gibi yağ yastıklarını farenin sağ tarafından ayırın. </li></ol> 4. İnguinal Yağ Keçelerinden Bazal Gliserol Salınımı <ol><li> 5 ila 8 parçaya yaklaşık 20 mg yağ dokusu kesmek için keskin makas kullanın. </li><li> Inüinal yağ yastıklarının kesme parçalarını 200 uL inkübasyon ortamında (% 2 yağ asidi içeren Dulbecco Modifiye Eagel&#39;s Medium (DMEM) kuluçkalayın37 ° C &#39;de içermeyen sığır serum albümini (BSA)),% 5 CO2 ve 60 dakika için% 95 nem. <ol><li> İnkübasyon ortamı toplayın ve lipoliz testi için -80 ° C&#39;de dondurun. NOT: Kesilen parçalar, lipit ekstraksiyonu sonrası protein konsantrasyonunun belirlenmesi için kullanılır. </li><li> Kesilen yağ parçalarını cımbız yardımıyla 1 mL ekstraksiyon çözeltisine (kloroform: metanol (2: 1, v / v) ve% 1 buzlu asetik asit) aktarın ve 100 ° C&#39;de çalkalarken 37 ° C&#39;de 60 dakika inkübe edin rpm. Yağ ekstraksiyon çözeltisini atın. NOT: Bu adım kesilen parçalardan yağ çıkaracaktır. Yağ ekstraksiyon çözeltisini, protein belirlenmesini etkileyeceğinden atın. </li><li> Dokuyu (adım 4.2.2&#39;den), cımbızı kullanarak, 500 μL lizis çözeltisi (% 0.1 sodyum dodesil sülfat içeren 0.3 N NaOH; SDS) içeren steril bir mikrofuge tüpüne aktarın ve gece boyunca (12 saat) 55 ° C&#39;de kuvvetli çalkantı altında inkübe edin 100 rpm&#39;de. </li></ol></li><li> Doku (aşama 4.2.3) standart 18 olarak bisinkoninik asit (BCA) reaktif ve BSA kullanılarak protein konsantrasyonunu belirleyin. </li><li> Donmuş ortamı buz üzerinde çözün (adım 4.2.1) ve protokol bölümleri 6 ve 7&#39;de açıklandığı gibi serbest bir gliserol reaktifi kullanarak ortamın gliserol içeriğini belirleyin 6 . <ol><li> Gliserol standartları 19 ile çizilen standart eğriden alınan örneklerdeki gliserol konsantrasyonunu hesaplayın ve lipoliz, saat 20 başına mg protein başına nanomole gliserol olarak ifade edin. </li></ol></li></ol> 5. FSK ile uyarılan lipoliz <ol><li> % 2 yağ asidi içermeyen BSA, 10 uM FSK ve 5 uM Triacsin C içeren 200 μL DMEM&#39;de NCD veya HFD (± CAP) ile beslenmiş yabani tip fareden elde edilen yaklaşık 20 mg kasık yağ yastığını (5 ila 8 kesilmiş parça) önceden inkübe edin. 60 dakika boyunca 37 ° C,% 5 CO2 ve% 95 nem. </strong&gt; <ol><li> 37 ° C,% 5 CO2 ve% 95 nem ile bir 60 dakika daha aynı ortama cımbız kullanarak doku parçaları aktarın ve inkübe edilir. Kuluçka ortamı toplayın ve lipoliz testine kadar -80 ° C&#39;de saklayın. NOT: Lipoliz stimülasyonu, ilk saatlerde doğrusal olan 15 dakika içinde yağ asitleri ve gliserol&#39;ün hızlı bir şekilde serbest bırakılmasına ve bundan sonraki yaylalara neden olur. Uyarılmış lipoliz oranı FSK Uyarımın birinci ve ikinci saat arasında daha yüksek ve stabil olduğu daha önce tarif edildiği gibi 1, uyarılmış halde bu protokol ölçülen lipoliz ikinci kuluçka dönemi geçirmektedir. Bu nedenle, hem deneysel adımlar (5.1 ve 5.1.1) gereklidir. </li></ol></li><li> Kasıktaki yağ yastıklarından yağ almak için, cımbız yardımıyla 5.1 adımdan 1 mL ekstraksiyon solüsyonu (kloroform: metanol (2 mi) ile kasık yağ pedleri kesitleri (NCD veya HFD (± CAP) -fed farelerden) : 1 v /V) ve% 1 buzlu asetik asit) ve 100 rpm&#39;de şiddetli çalkalama altında 37 ° C&#39;de 60 dakika inkübe edin. Çıkarılan yağları atın. </li><li> Dokuyu (adım 5.2&#39;den) püskürtücüler kullanarak, 500 μL liziz çözeltisi (% 0.1 SDS içeren 0,3 N NaOH) içeren steril bir mikrofaj tüpüne aktarın ve 100 rpm&#39;de şiddetli çalkalama altında 55 ° C&#39;de gece boyunca (12 saat) inkübe edin. </li><li> Sırasıyla 4.3 ve 4.4 adımlarında açıklandığı gibi doku protein konsantrasyonunu ve gliserol içeriğini belirleyin. </li></ol> 6. Serbest Gliserol Reaktifinin Hazırlanması <ol><li> Gliserol reaktifi 19&#39;u , amber renkli bir cam şişede 40 mL&#39;lik deiyonize su içinde yeniden bir araya getirin, şişeye bir tıpa yerleştirin ve 10 kez ters çevirerek iyice karıştırın. Çalkalamak suretiyle karıştırmayın. </li><li> Şişeyi, alüminyum folyo ile tamamen kaplayarak, ışığa karşı korunan bir buzdolabının içine 4 ° C&#39;de saklayın. </li><li> Gliserol standardının hazırlanmasına geçin (bölüm 7). </li&gt; </ol> 7. Gliserol Standardının Hazırlanması ve Gliserol İçeriğinin Belirlenmesi <ol><li> Sağlanan stok 35 mcL deiyonize su 65 mcL seyreltilerek 1 mM stok olun. NOT: Üreticiden temin edilen gliserol standart stok 2.8 mM gliserol&#39;dür. </li><li> 1 cm uzunluğunda yol uzunluğunda tek kullanımlık metakrilat küvetler alın. Bir işaretleyiciyi 0, 1.25, 2.5, 5 ve 10 nmol standart olarak kullanarak küvetler etiketleyin. </li><li> Etiketli küvetler için 0, 1.25, 2.5, 5 ve 10 uL 1 mM gliserol standardı ekleyin. Deiyonize su ile her küvette 10 μL&#39;ye kadar hacim oluşturun. </li><li> Taze 500-μL önceden etiketlenmiş santrifüj tüplerine 90 μL deiyonize suya 10 uL örnek ekleyerek tüm örneklerin (adım 4.4 veya 5.1.1&#39;den) 1 ila 10 seyreltmesini yapın. 10 uL seyreltilmiş numuneleri ilgili numune tanımlama numarasıyla etiketlenmiş küvete ekleyin. </li><li> UV-VIS spektrofotometresini açın ve dalgayı ayarlayınUzunluğunu 540 nm&#39;ye çıkarır. </li><li> Şişeyi (adım 6.2) oda sıcaklığında 15 dakika tutarak serbest gliserol reaktifini oda sıcaklığına ısıtın. </li><li> Boş &quot;0&quot; nmol standardı (adım 7.3), standartlar (adım 7.3) ve örnekler (adım 7.4) olarak bir dizi etiketlenmiş küvet ayarlayın. </li><li> Standardın ve numunenin her birinden 10 uL, ilgili etiketli küvete ekleyin. &quot;0&quot; nmol standardını boş olarak kullanın. </li><li> Gliserol standartlarını 1 mL&#39;lik bir pipet kullanarak içeren, her bir küvete 0,8 mL serbest gliserol reaktif ekleyin. </li><li> Küveti 1.5 cm kare plastik parafin film ile örtün ve küveti 3 kez ters çevirerek karıştırın ve oda sıcaklığında 10 dakika bekletin. </li><li> Küveti UV-VIS spektrofotometresine yerleştirin ve absorbansı (dalga boyu 540 nm) kaydedin. </li><li> Standart eğrileri, X ekseni standartlarının (nmol) konsantrasyonlarını ve kaydedilen absorbansı Y ekseni ile çizin. </li><li> Gl konsantrasyonunu hesaplaÖrnek 7.12&#39;de çizilen standart eğri kullanılarak ekstrapolasyon ile örneklerde (nmol) yserol. </li><li> Seyreltme faktörü 10 (adım 7.4&#39;e bakın) ve 20 (toplam hacim) ile numunelerin konsantrasyonunu (nmol / küvet) çarpın </li><li> Her numunedeki (adım 7,13) gliserol konsantrasyonunu BCA metodu ile hesaplanan protein mg oranında bölün. NOT: Kasık yağ yastığı numuneleri 60 dakika kuluçka yapılacağından, sonuçlar gluterol / mg protein / saat olarak nmol olarak gösterilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Schweiger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+lipolysis.">Measurement of lipolysis.</a> Methods Enzymol. 538, 171-193 (2014).</li><li>Coelho, M., Oliveira, T., Fernandes, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+of+adipose+tissue:+an+endocrine+organ.">Biochemistry of adipose tissue: an endocrine organ.</a> Arch Med Sci. 9 (2), 191-200 (2013).</li><li>Richard, D., Picard, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+fat+biology+and+thermogenesis.">Brown fat biology and thermogenesis.</a> Front Biosci (Landmark Ed). 16, 1233-1260 (2011).</li><li>Barquissau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-to-brite+conversion+in+human+adipocytes+promotes+metabolic+reprogramming+towards+fatty+acid+anabolic+and+catabolic+pathways.">White-to-brite conversion in human adipocytes promotes metabolic reprogramming towards fatty acid anabolic and catabolic pathways.</a> Mol Metab. 5 (5), 352-365 (2016).</li><li>Rodriguez, A., Ezquerro, S., Mendez-Gimenez, L., Becerril, S., Fruhbeck, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+the+adipocyte:+a+model+for+integration+of+cytokine+signaling+in+the+regulation+of+energy+metabolism.">Revisiting the adipocyte: a model for integration of cytokine signaling in the regulation of energy metabolism.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 309 (8), E691-E714 (2015).</li><li>Giordano, A., Smorlesi, A., Frontini, A., Barbatelli, G., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White,+brown+and+pink+adipocytes:+the+extraordinary+plasticity+of+the+adipose+organ.">White, brown and pink adipocytes: the extraordinary plasticity of the adipose organ.</a> Eur J Endocrinol. 170 (5), R159-R171 (2014).</li><li>Langin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+lipolysis+as+a+metabolic+pathway+to+define+pharmacological+strategies+against+obesity+and+the+metabolic+syndrome.">Adipose tissue lipolysis as a metabolic pathway to define pharmacological strategies against obesity and the metabolic syndrome.</a> Pharmacol Res. 53 (6), 482-491 (2006).</li><li>Zimmermann, R., Lass, A., Haemmerle, G., Zechner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+of+fat:+the+role+of+adipose+triglyceride+lipase+in+lipolysis.">Fate of fat: the role of adipose triglyceride lipase in lipolysis.</a> Biochim Biophys Acta. 1791 (6), 494-500 (2009).</li><li>Miyoshi, H., Perfield, J. W., Obin, M. S., Greenberg, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+triglyceride+lipase+regulates+basal+lipolysis+and+lipid+droplet+size+in+adipocytes.">Adipose triglyceride lipase regulates basal lipolysis and lipid droplet size in adipocytes.</a> J Cell Biochem. 105 (6), 1430-1436 (2008).</li><li>Kolditz, C. I., Langin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+lipolysis.">Adipose tissue lipolysis.</a> Curr Opin Clin Nutr Metab Care. 13 (4), 377-381 (2010).</li><li>Baskaran, P., Krishnan, V., Ren, J., Thyagarajan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capsaicin+induces+browning+of+white+adipose+tissue+and+counters+obesity+by+activating+TRPV1+channel-dependent+mechanisms.">Capsaicin induces browning of white adipose tissue and counters obesity by activating TRPV1 channel-dependent mechanisms.</a> Br J Pharmacol. 173 (15), 2369-2389 (2016).</li><li>Yang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+TRPV1+by+dietary+capsaicin+improves+endothelium-dependent+vasorelaxation+and+prevents+hypertension.">Activation of TRPV1 by dietary capsaicin improves endothelium-dependent vasorelaxation and prevents hypertension.</a> Cell Metab. 12 (2), 130-141 (2010).</li><li>Ding, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+lipolysis+response+to+adipose+afferent+reflex+involved+in+impaired+activation+of+adrenoceptor-cAMP-PKA-hormone+sensitive+lipase+pathway+in+obesity.">Reduced lipolysis response to adipose afferent reflex involved in impaired activation of adrenoceptor-cAMP-PKA-hormone sensitive lipase pathway in obesity.</a> Sci Rep. 6, 34374 (2016).</li><li>Ohyama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+exercise+and+capsinoid+supplementation+additively+suppresses+diet-induced+obesity+by+increasing+energy+expenditure+in+mice.">A combination of exercise and capsinoid supplementation additively suppresses diet-induced obesity by increasing energy expenditure in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 308 (4), E315-E323 (2015).</li><li>Beylot, M., Martin, C., Beaufrere, B., Riou, J. P., Mornex, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+steady+state+and+nonsteady-state+glycerol+kinetics+in+humans+using+deuterium-labeled+tracer.">Determination of steady state and nonsteady-state glycerol kinetics in humans using deuterium-labeled tracer.</a> J Lipid Res. 28 (4), 414-422 (1987).</li><li>Gilker, C. D., Pesola, G. R., Matthews, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mass+spectrometric+method+for+measuring+glycerol+levels+and+enrichments+in+plasma+using+13C+and+2H+stable+isotopic+tracers.">A mass spectrometric method for measuring glycerol levels and enrichments in plasma using 13C and 2H stable isotopic tracers.</a> Anal Biochem. 205 (1), 172-178 (1992).</li><li>Baskaran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV1+activation+counters+diet-induced+obesity+through+sirtuin-1+activation+and+PRDM-16+deacetylation+in+brown+adipose+tissue.">TRPV1 activation counters diet-induced obesity through sirtuin-1 activation and PRDM-16 deacetylation in brown adipose tissue.</a> Int J Obes (Lond). , (2017).</li><li>Smith, N. C., Fairbridge, N. A., Pallegar, N. K., Christian, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+upregulation+of+CD24+in+pre-adipocytes+promotes+adipogenesis.">Dynamic upregulation of CD24 in pre-adipocytes promotes adipogenesis.</a> Adipocyte. 4 (2), 89-100 (2015).</li><li>Schweiger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+lipolysis.">Measurement of lipolysis.</a> Methods Enzymol. 538, 171-193 (2014).</li><li>Duncan, R. E., Ahmadian, M., Jaworski, K., Sarkadi-Nagy, E., Sul, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+lipolysis+in+adipocytes.">Regulation of lipolysis in adipocytes.</a> Annu Rev Nutr. 27, 79-101 (2007).</li><li>Ahmadian, M., Duncan, R. E., Sul, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+skinny+on+fat:+lipolysis+and+fatty+acid+utilization+in+adipocytes.">The skinny on fat: lipolysis and fatty acid utilization in adipocytes.</a> Trends Endocrinol Metab. 20 (9), 424-428 (2009).</li><li>Jaworski, K., Sarkadi-Nagy, E., Duncan, R. E., Ahmadian, M., Sul, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+triglyceride+metabolism.+IV.+Hormonal+regulation+of+lipolysis+in+adipose+tissue.">Regulation of triglyceride metabolism. IV. Hormonal regulation of lipolysis in adipose tissue.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 293 (1), G1-G4 (2007).</li><li>Jeppesen, J., Kiens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+and+limitations+to+fatty+acid+oxidation+during+exercise.">Regulation and limitations to fatty acid oxidation during exercise.</a> J Physiol. 590 (5), 1059-1068 (2012).</li><li>Nakamura, M. T., Yudell, B. E., Loor, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+energy+metabolism+by+long-chain+fatty+acids.">Regulation of energy metabolism by long-chain fatty acids.</a> Prog Lipid Res. 53, 124-144 (2014).</li><li>Murray, A. J., Panagia, M., Hauton, D., Gibbons, G. F., Clarke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+free+fatty+acids+and+peroxisome+proliferator-activated+receptor+alpha+in+the+control+of+myocardial+uncoupling+protein+levels.">Plasma free fatty acids and peroxisome proliferator-activated receptor alpha in the control of myocardial uncoupling protein levels.</a> Diabetes. 54 (12), 3496-3502 (2005).</li><li>Barbera, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisome+proliferator-activated+receptor+alpha+activates+transcription+of+the+brown+fat+uncoupling+protein-1+gene.+A+link+between+regulation+of+the+thermogenic+and+lipid+oxidation+pathways+in+the+brown+fat+cell.">Peroxisome proliferator-activated receptor alpha activates transcription of the brown fat uncoupling protein-1 gene. A link between regulation of the thermogenic and lipid oxidation pathways in the brown fat cell.</a> J Biol Chem. 276 (2), 1486-1493 (2001).</li><li>Leung, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capsaicin+as+an+anti-obesity+drug.">Capsaicin as an anti-obesity drug.</a> Prog Drug Res. 68, 171-179 (2014).</li><li>Hursel, R., Westerterp-Plantenga, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermogenic+ingredients+and+body+weight+regulation.">Thermogenic ingredients and body weight regulation.</a> Int J Obes (Lond). 34 (4), 659-669 (2010).</li><li>Kang, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+capsaicin+reduces+obesity-induced+insulin+resistance+and+hepatic+steatosis+in+obese+mice+fed+a+high-fat+diet.">Dietary capsaicin reduces obesity-induced insulin resistance and hepatic steatosis in obese mice fed a high-fat diet.</a> Obesity (Silver Spring). 18 (4), 780-787 (2010).</li><li>Winkler, B., Steele, R., Altszuler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+glycerol+uptake+to+plasma+glycerol+concentration+in+the+normal+dog.">Relationship of glycerol uptake to plasma glycerol concentration in the normal dog.</a> Am J Physiol. 216 (1), 191-196 (1969).</li><li>Dugan, C. E., Cawthorn, W. P., MacDougald, O. A., Kennedy, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+microfluidic+enzyme+assays+for+simultaneous+detection+of+lipolysis+products+from+adipocytes.">Multiplexed microfluidic enzyme assays for simultaneous detection of lipolysis products from adipocytes.</a> Anal Bioanal Chem. 406 (20), 4851-4859 (2014).</li></ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

TGL&#39;nin gliserol ve yağ asitleri haline dönüşümü, bazal lipoliz sırasında ATGL 9 ile katalize edilir ve uyarılan lipoliz 21 , 22 , 23 sırasında adenil siklaz / PKA&#39;ya bağımlı yolağın aktivasyonu da dahil olmak üzere bir dizi protein ile düzenlenir. Lipolizin arttırılması, ulaşım ve enerji kullanımı için yağ asitlerinin plazma seviyelerini arttırır 24...

Yağ dokuları yağ 2 olarak enerji depolarlar ve termojenez 3 , 4 için yağ asidi oksidasyonu gerekir. Diyetle yutulan yağ asitleri apoproteinler ile birlikte şilomikronlara paketlenir ve kan dolaşımıyla vücuttaki farklı dokulara aktarılır. Vücuttaki çoğu hücrenin bir enerji rezervi depolamasına rağmen, yağ dokusu yağ olarak fazla enerji depolar 5 , 6 . Yağ dokusundaki lipoliz kompleks proseslerle düzenlenir ve lipolizin moleküler detayları halen belirsiz kalmaktadır 7 . Lipoliz, yağ dokusunda depolanan trigliseridlerin (TGL), yağlı trigliserid lipaz (ATGL) 8 enzimi ile gliserol ve yağ asitleri (FA) üretmek üzere hidrolizlenmesiyle oluşan bir işlemdir. Bazal ve uyarılmış lipolizdeki değişiklikler obezitenin karakteristik bir özelliğidir. BAsal lipoliz, TGL&#39;yi diasilgliserol (DAG) haline getiren, daha sonra monoasil gliserole (MAG) hidrolize edilen ATGL aktivasyonu 9 ile düzenlenir. Adenillyla siklaz yoluyla hormona duyarlı lipazın (HSL) aktivasyonu siklik adenozin monofosfat (cAMP) bağımlı protein kinaz A (PKA) uyarılmasını aktive eder ve lipolize neden olur. Bu nedenle, bazal ve uyarılmış lipoliz ölçümü, bu prosese dahil olan proteinlerin aktivitesini analiz etmek için önemlidir. Ayrıca, lipoliz moleküler düzenleme çözülüyor obezite 10 karşı yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi faydalı olabilir. Lipoliz ve yağ asidi oksidasyonunu uyaran moleküller, depolarda depolanan yağları azaltmak için potansiyel aday olduğundan, tekrarlanabilirlik için sağlam bir test kullanmak önemlidir. Daha önce yayınlanmış veriler, beyaz yağ dokusunda ifade edilen TRPV1 proteininin CAP ile güçlendirilmiş bazalVe kasık yağ pedlerinde FSK (adenillyla siklaz aktivatörü) uyarılmış lipoliz 11 . Önceki araştırmalar ayrıca, TRPV1&#39;in CAP tarafından uzun süreli aktive edilmesinin PKA 12&#39;yi aktive ettiğini ileri sürmektedir. PKA&#39;nın aktivasyonu, lipozizi uyardığından , 13 , 14 , ilgili diyetlerin beslenmesinden 32 hafta sonra NCD veya HFD (± CAP) ile beslenen farelerden izole edilmiş kasık yağ pedlerinde bazal ve PKA&#39;ya bağlı uyarılmış lipolizin ölçülmesiyle TRPV1&#39;in rolü doğrulanacaktır Lipoliz aktivasyonu. Bu makale, bazal ve uyarılan lipolizin belirlenmesinde etkili bir yöntem anlatmaktadır. Gliserolün radyoaktif izotoplarını kullanan diğer yöntemler ve ölçümler 15 , 16 için sıkıcı yüksek performanslı sıvı kromatografisi veya gaz kromatografisi / kütle spektrometresi mevcut olsa da, bu yöntem daha doğrudan, basit ve uygun maliyetli bir yöntem sunmaktadırYağ dokusundaki lipolizi belirleme tekniği.

<table><tbody><tr><td>Capsaicin</td><td>Sigma, USA</td><td>M2028</td><td>TRPV1 agonist</td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma, USA</td><td>F6886</td><td>Adenylyl cyclase activator</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>GE healthcare and life sciences, UT, USA</td><td>SH30081.01</td><td></td></tr><tr><td>High fat diet</td><td>Research diets, New Brunswick, USA</td><td>D12492</td><td>Abbreviated as HFD</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Amresco, USA</td><td>O497</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td></td></tr><tr><td>Sodium deoxycholate</td><td>Sigma, USA</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma, USA</td><td>D9163</td><td></td></tr><tr><td>Sodium orthovanadate</td><td>Sigma, USA</td><td>S6508</td><td></td></tr><tr><td>Protease inhibitor cocktail</td><td>Sigma, USA</td><td>P8340</td><td></td></tr><tr><td>Free Glycerol reagent</td><td>Sigma USA</td><td>F6428</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma, USA</td><td>D8779</td><td></td></tr><tr><td>Triacsin C</td><td>Sigma, USA</td><td>T4540</td><td>Acyl CoA transferase inhibitor</td></tr><tr><td>Bovine serum albumin</td><td>Sigma, USA</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Sigma Aldrich</td><td>31998-8</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Thermofisher Scientific, USA</td><td>A412-1</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hydroxide</td><td>Amresco, USA</td><td>O583</td><td></td></tr><tr><td>Sodium dodecyl sulfate</td><td>Sigma, USA</td><td>L3371</td><td></td></tr><tr><td>Bicinchoninic acid reagent</td><td>Sigma, USA</td><td>BCA1-1KT</td><td></td></tr><tr><td>UV-VIS Spectrophotometer</td><td>Pharmacia Biotech, NJ, USA</td><td>Ultrospec 2000</td><td></td></tr><tr><td>Normal chow diet</td><td>Labdiet.com</td><td>500I</td><td>abreviated as NCD</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Jackson Laboratory, CT, USA</td><td>Stock number000664</td><td>wild type mice</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Heathrow Scientific, USA</td><td>HS 234526A</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol standard</td><td>Sigma, USA</td><td>G7793</td><td></td></tr></tbody></table>

measurement of basal and forskolin-stimulated lipolysis in inguinal adipose fat pads

Lipoliz, yağ dokularında trigliserit olarak depolanan lipitin, gliserol ve yağ asitlerine hidrolize edilmesiyle ilgili bir işlemdir. Bu makale, normal yemeklik diyet (NCD), yüksek yağlı diyet (HFD) ya da 0.01&#39;i içeren yüksek yağlı bir diyet ile beslenen vahşi tipli farelerden izole edilen kasıktaki yağ yastıklarında bazal ve forskolin (FSK) uyarılmış lipolizin ölçülmesine yönelik yöntemi açıklamaktadır % Kapsaisin (CAP; geçici reseptör potansiyeli vaniloid altfamilı 1 (TRPV1) agonisti) 32 hafta boyunca. Ex vivo lipoliz gerçekleştirmek için burada tarif edilen yöntem Schweiger ve ark. 1 UV-Görünür (UV / VIS) spektrofotometri ile gliserol düzeylerini ölçmek için ayrıntılı bir protokol sunmaktayız. Burada açıklanan yöntem, tutarlı sonuçlar elde etmek için kasık yağ pedlerinin lipoliz ölçümleri için başarıyla izole edilmesi için kullanılabilir. Kasık yağ pedleri için tanımlanan protokol, diğer dokulardaki lipolizin ölçülmesi için kolaylıkla genişletilebilir.

CAP&#39;nin bazal ve uyarılmış lipoliz üzerindeki etkisini değerlendirmek için, bu araştırma, NCD veya HFD (± CAP) -fed vahşi tipli farelerden izole edilmiş inguinal yağlı yastıklardaki lipolizi ölçtü. Kasık yağ pedleri için bazal ve FSK ile uyarılan lipoliz için temsili sonuçlar Tablo I&#39;de verilmektedir. Asil coA sentetazı inhibe eden ve TGL&#39;nin yenilenmesini önleyen Triacsin C&#39;nin varlığında bazal ve FSK ile uyarılmış gliserol...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads at JoVE.com

Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

Bu protokol, normal yem diyetinden (NCD) veya yüksek yağlı diyetten (HFD) ± kapsaisin ile beslenen vahşi tipli farelerde elde edilen kasık yağ tabletlerinde bazal ve forkolinin uyardığı lipoliz belirleme metodunu açıklamaktadır. Lipoliz için bir indeks olarak, inguinal yağlı yağ pedlerinden gliserol salınımı ölçülmüştür.

İnguinal Yağ Yastıklarında Basal ve Forskolin ile uyarılmış Lipoliz Ölçümleri

Lipolysis is a process by which the lipid stored as triglycerides in adipose tissues are hydrolyzed into glycerol and fatty acids. This article describes ...

measurement-basal-forskolin-stimulated-lipolysis-inguinal-adipose-fat

Research

JoVE Journal

Biochemistry

9.5K Görüntüleme.  University of Wyoming.  Bu protokol, normal yem diyetinden (NCD) veya yüksek yağlı diyetten (HFD) ± kapsaisin ile beslenen vahşi tipli farelerde elde edilen kasık yağ tabletlerinde bazal ve forkolinin uyardığı lipoliz belirleme metodunu açıklamaktadır. Lipoliz için bir indeks olarak, inguinal yağlı yağ pedlerinden gliserol salınımı ölçülmüştür. 

Video: Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

Mechanism of Regulation of Adipocyte Numbers in Adult Organisms Through Differentiation and Apoptosis Homeostasis

Considering that adipose tissue (AT) is an endocrine organ, it can influence whole body metabolism. Excessive energy storage leads to the dysregulation of adipocytes, which in turn induces abnormal secretion of adipokines, triggering metabolic syndromes such as obesity, dyslipidemia, hyperglycemia, hyperinsulinemia, insulin resistance and type 2 diabetes. Therefore, investigating the molecular mechanisms behind adipocyte dysregulation could help to develop novel therapeutic strategies. Our protocol describes methods for evaluating the molecular mechanism affected by hypoxic conditions of the AT, which correlates with adipocyte apoptosis in adult mice. This protocol describes how to analyze AT in vivo through gene expression profiling as well as histological analysis of adipocyte differentiation, proliferation and apoptosis during hypoxia exposure, ascertained through staining of hypoxic cells or HIF-1&#945; protein. Furthermore, in vitro analysis of adipocyte differentiation and its responses to various stimuli completes the characterization of the molecular pathways behind possible adipocyte dysfunction leading to metabolic syndromes.

Adipose tissue (AT) can influence whole body homeostasis, therefore understanding the molecular mechanisms of adipocyte differentiation and function is of importance. We provide a protocol for gaining new insights into these processes by analyzing adipocyte homeostasis, differentiation and hypoxia exposure as a model for induced adipocyte apoptosis.

Farklılaşma ve Apoptoz Homeostazis sayesinde Yetişkin Organizmalar içinde Adiposit Numaraları Yönetmeliği Mekanizması

Considering that adipose tissue (AT) is an endocrine organ, it can influence whole body metabolism. Excessive energy storage leads to the dysregulation of ...

Gelişim Biyolojisi

A Microphysiologic Platform for Human Fat: Sandwiched White Adipose Tissue

White adipose tissue (WAT) plays a crucial role in regulating weight and everyday health. Still, there are significant limitations to available primary culture models, all of which have failed to faithfully recapitulate the adipose microenvironment or extend WAT viability beyond two weeks. The lack of a reliable primary culture model severely impedes research in WAT metabolism and drug development. To this end we have utilized NIH's standards of a microphysiologic system to develop a novel platform for WAT primary culture called 'SWAT' (sandwiched white adipose tissue). We overcome the natural buoyancy of adipocytes by sandwiching minced WAT clusters between sheets of adipose-derived stromal cells. In this construct, WAT samples are viable over eight weeks in culture. SWAT maintains the intact ECM, cell-to-cell contacts, and physical pressures of in vivo WAT conditions; additionally, SWAT maintains a robust transcriptional profile, sensitivity to exogenous chemical signaling, and whole tissue function. SWAT represents a simple, reproducible, and effective method of primary adipose culture. Potentially, it is a broadly applicable platform for research in WAT physiology, pathophysiology, metabolism, and pharmaceutical development.

White adipose tissue (WAT) has critical deficiencies in its current primary culture models, hindering pharmacological development and metabolic studies. Here, we present a protocol to produce an adipose microphysiological system by sandwiching WAT between sheets of stromal cells. This construct provides a stable and adaptable platform for primary WAT culture.

İnsan yağı için bir Microphysiologic Platform: beyaz yağ dokusu sandviç

White adipose tissue (WAT) plays a crucial role in regulating weight and everyday health.  Still, there are significant limitations to available primary ...

Davranış

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.

Due to the drastic and negative connection between obesity and other comorbidities, research on the role adipose plays in disease and overall health is warranted. We present a protocol for the isolation and excision of adipose depots allowing for the study of adipose using in situ and in vitro methods.

Yerelleştirme, Kimlik ve Eksizyon Kemirgen Yağ depolarının

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Tıp

Isolation, Expansion, and Adipogenic Induction of CD34+CD31+ Endothelial Cells from Human Omental and Subcutaneous Adipose Tissue

Obesity is accompanied by an extensive remodeling of adipose tissue primarily via adipocyte hypertrophy. Extreme adipocyte growth results in a poor response to insulin, local hypoxia, and inflammation. By stimulating the differentiation of functional white adipocytes from progenitors, radical hypertrophy of the adipocyte population can be prevented and, consequently, the metabolic health of adipose tissue can be improved along with a reduction of inflammation. Also, by stimulating a differentiation of beige/brown adipocytes, the total body energy expenditure can be increased, resulting in weight loss. This approach could prevent the development of obesity co-morbidities such as type 2 diabetes and cardiovascular disease.
This paper describes the isolation, expansion, and differentiation of white and beige adipocytes from a subset of human adipose tissue endothelial cells that co-express the CD31 and CD34 markers. The method is relatively cheap and is not labor-intensive. It requires access to human adipose tissue and the subcutaneous depot is suitable for sampling. For this protocol, fresh adipose tissue samples from morbidly obese subjects [body mass index (BMI) &#62;35] are collected during bariatric surgery procedures. Using a sequential immunoseparation from the stromal vascular fraction, enough cells are produced from as little as 2&#8211;3 g of fat. These cells can be expanded in culture over 10&#8211;14 days, can be cryopreserved, and retain their adipogenic properties with passaging up to passage 5&#8211;6. The cells are treated for 14 days with an adipogenic cocktail using a combination of human insulin and the PPAR&#947; agonist-rosiglitazone.
This methodology can be used for obtaining proof of concept experiments on molecular mechanisms that drive adipogenic responses in adipose endothelial cells, or for screening new drugs that can enhance the adipogenic response directed either towards white or beige/brown adipocyte differentiation. Using small subcutaneous biopsies, this methodology can be used to screen out non-responder subjects for clinical trials aimed to stimulate beige/brown and white adipocytes for the treatment of obesity and co-morbidities.

The differentiation of white and beige adipocytes from adipose tissue vascular progenitors bears potential for metabolic improvement in obesity. We describe protocols for a CD34+CD31+ endothelial cell isolation from human fat and for a subsequent in vitro expansion and differentiation into white and beige adipocytes. Several downstream applications are discussed.

Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + insan Omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden

Obesity is accompanied by an extensive remodeling of adipose tissue primarily via adipocyte hypertrophy. Extreme adipocyte growth results in a poor ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for the design of personalized microtissues for health screening and drug testing. Current strategies are often quite complex and fail to accurately fully depict the multicellular and functional properties of thermogenic adipose tissue. Microvascular fragments, small intact microvessels comprised of arteriole, venules, and capillaries isolated from adipose tissue, serve as a single autologous source of cells that enable vascularization and adipose tissue formation. This article describes methods for optimizing culture conditions to enable the generation of three-dimensional, vascularized, and functional thermogenic adipose tissues from microvascular fragments, including protocols for isolating microvascular fragments from adipose tissue and culture conditions. Additionally, best practices are discussed, as are techniques for characterizing the engineered tissues, and sample results from both rodent and human microvascular fragments are provided. This approach has the potential to be utilized for the understanding and development of treatments for obesity and metabolic disease.

Here, we present a detailed protocol outlining the use of microvascular fragments isolated from rodent or human fat tissue as a straightforward approach to engineer functional, vascularized beige adipose tissue.

Mikrovasküler Fragmanlardan Vaskülarize Termojenik Yağ Dokusunun Üç Boyutlu Kültürü

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

Biyomühendislik

Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice

Assessing lipid metabolism is a cornerstone of evaluating metabolic function, and it is considered essential for in vivo metabolism studies. Lipids are a class of many different molecules with many pathways involved in their synthesis and metabolism. A starting point for evaluating lipid hemostasis for nutrition and obesity research is needed. This paper describes three easy and accessible methods that require little expertise or practice to master, and that can be adapted by most labs to screen for lipid-metabolism abnormalities in mice. These methods are (1) measuring several fasting serum lipid molecules using commercial kits (2) assaying for dietary lipid-handling capability through an oral intralipid tolerance test, and (3) evaluating the response to a pharmaceutical compound, CL 316,243, in mice. Together, these methods will provide a high-level overview of lipid handling capability in mice.

This paper provides three easy and accessible assays for assessing lipid metabolism in mice.

Farelerde Tüm Vücut Lipid Taşıma Kapasitesinin Değerlendirilmesi

Assessing lipid metabolism is a cornerstone of evaluating metabolic function, and it is considered essential for in vivo metabolism studies. Lipids are a ...

Differentiation and Imaging of Brown Adipocytes from the Stromal Vascular Fraction of Interscapular Adipose Tissue from Newborn Mice

Brown adipose tissue (BAT) is only present in mammals and has a thermogenic function. Brown adipocytes are characterized by a multilocular cytoplasm with multiple lipid droplets, a central nucleus, a high mitochondrial content, and the expression of uncoupling protein 1 (UCP1). BAT has been proposed as a potential therapeutic target for obesity and its associated metabolic disorders due to its ability to dissipate metabolic energy as heat. To investigate BAT function and regulation, brown adipocyte culturing is indispensable. The present protocol optimizes tissue processing and cell differentiation for culturing brown adipocytes from newborn mice. Additionally, procedures for the imaging of differentiated adipocytes with both confocal immunofluorescence and transmission electron microscopy are shown. In the brown adipocytes differentiated with the techniques described herein, the major defining features of classical BAT are preserved, including high UCP1 levels, increased mitochondrial mass, and very close physical contact between the lipid droplets and mitochondria, making this method a valuable tool for BAT studies.

Preadipocytes are isolated from the stromal vascular fraction of interscapular brown adipose tissue from newborn mice and differentiated into cells that accumulate lipid droplets, express molecular markers, and show the mitochondrial morphology of mature brown adipocytes. These cells are further analyzed by immunofluorescence and transmission electron microscopy.

Yenidoğan Farelerden İnterskapular Yağ Dokusunun Stromal Vasküler Fraksiyonundan Kahverengi Adipositlerin Farklılaşması ve Görüntülenmesi

Brown adipose tissue (BAT) is only present in mammals and has a thermogenic function. Brown adipocytes are characterized by a multilocular cytoplasm with ...

Biyoloji

Measuring the Rate of Lipolysis in Ex Vivo Murine Adipose Tissue and Primary Preadipocytes Differentiated In Vitro

Adipocytes store energy in the form of triglycerides in lipid droplets. This energy can be mobilized via lipolysis, where the fatty acid side chains are sequentially cleaved from the glycerol backbone, resulting in the release of free fatty acids and glycerol. Due to the low expression of glycerol kinase in white adipocytes, glycerol re-uptake rates are negligible, while fatty acid re-uptake is dictated by the fatty acid binding capacity of media components such as albumin. Both glycerol and fatty acid release into media can be quantified by colorimetric assays to determine the lipolytic rate. By measuring these factors at multiple time points, one can determine the linear rate of lipolysis with high confidence. Here, we provide a detailed protocol for the measurement of lipolysis in in vitro differentiated adipocytes and ex vivo adipose tissue from mice. This protocol may also be optimized for other preadipocyte cell lines or adipose tissue from other organisms; considerations and optimization parameters are discussed. This protocol is designed to be useful in determining and comparing the rate of adipocyte lipolysis between mouse models and treatments.

Measuring the Rate of Lipolysis in Ex Vivo Murine Adipose Tissue and Primary Preadipocytes Differentiated In Vitro

Triglyceride lipolysis in adipocytes is an important metabolic process resulting in the liberation of free fatty acids and glycerol. Here, we provide a detailed protocol to measure basal and stimulated lipolysis in adipocytes and ex vivo adipose tissue from mice.

Lipoliz Oranının Ex Vivo Murin Yağ Dokusu ve İn Vitro Diferansiye Primer Preadipositlerin Ölçülmesi

Adipocytes store energy in the form of triglycerides in lipid droplets. This energy can be mobilized via lipolysis, where the fatty acid side chains are ...

Murin Beyaz Yağ Dokusunun Yarı Otomatik İzolasyonu

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their mechanisms. Immortalized white preadipocyte cell lines are publicly available and widely used. However, the emergence of beige adipocytes in white adipose tissue in response to external cues is difficult to recapitulate to the full extent using publicly available white adipocyte cell lines. Isolation of the stromal vascular fraction (SVF) from murine adipose tissue is commonly executed to obtain primary preadipocytes and perform adipocyte differentiation. However, mincing and collagenase digestion of adipose tissue by hand can result in experimental variation and is prone to contamination. Here, we present a modified semi-automated protocol that utilizes a tissue dissociator for collagenase digestion to achieve easier isolation of the SVF, with the aim of reducing experimental variation, reducing contamination, and increasing reproducibility. The obtained preadipocytes and differentiated adipocytes can be used for functional and mechanistic analyses.

Yazar Spotlight: Murin Beyaz Yağ Dokusundan Stromal Vasküler Fraksiyonun Bir Doku Ayrıştırıcı Kullanılarak Yarı Otomatik İzolasyonu  

This protocol describes the semi-automated isolation of the stromal vascular fraction (SVF) from murine adipose tissue to obtain preadipocytes and achieve adipocyte differentiation in vitro. Using a tissue dissociator for collagenase digestion reduces experimental variation and increases reproducibility.

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...

İnguinal Yağ Yastıklarında Basal ve Forskolin ile uyarılmış Lipoliz Ölçümleri

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Farklılaşma ve Apoptoz Homeostazis sayesinde Yetişkin Organizmalar içinde Adiposit Numaraları Yönetmeliği Mekanizması

İnsan yağı için bir Microphysiologic Platform: beyaz yağ dokusu sandviç

Yerelleştirme, Kimlik ve Eksizyon Kemirgen Yağ depolarının

Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + insan Omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden

Mikrovasküler Fragmanlardan Vaskülarize Termojenik Yağ Dokusunun Üç Boyutlu Kültürü

Farelerde Tüm Vücut Lipid Taşıma Kapasitesinin Değerlendirilmesi

Yenidoğan Farelerden İnterskapular Yağ Dokusunun Stromal Vasküler Fraksiyonundan Kahverengi Adipositlerin Farklılaşması ve Görüntülenmesi

Lipoliz Oranının Ex Vivo Murin Yağ Dokusu ve İn Vitro Diferansiye Primer Preadipositlerin Ölçülmesi

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu