Yazarlar Profesör Christian Heinis FXIIa inhibitörü ve ilgili denetim sağlamak için kabul etmek istiyorum. Ayrıca minnetle anıyoruz Olgica Beslac, Dr. Daniel Mettler ve Kay Nettelbeck deneysel cerrahi birimi bölümü Biyomedikal Araştırma, Bern Üniversitesi teknik destek için. Celine Guillod ve Matthias Rausch tanı, Interventional ve pediatrik Radyoloji, Bern Üniversitesi Hastanesi, bölümünden Inselspital x ışını donanımları ve teknikleri ile destek sağlamıştır. Bu proje İsviçre Ulusal Bilim Vakfı tarafından proje no. 320030_156193 finanse edildi. Ayrıca Bay Reto Haenni iletişim ve pazarlama, Bern Üniversitesi Hastanesi, Inselspital video bizim deneme kaydı için teşekkür etmek istiyorum.

1. hayvanlar:
Bütün hayvanlar İsviçre Ulusal yasa kurallarına göre tedavi edildi. Çalışma Bern Kanton yerel hayvan deney Komitesi tarafından kabul edildi (izni yok. «««OLMAK) 25/16.
Büyük beyaz domuzlar her iki cinsiyette kullanın (~ 30 ± 5 kg). Hayvanlar körü körüne iki gruba ayırın bir grup bicyclic (80 kDa proteaz) inhibitörü olan FXIIa veya tedavi seçimi ve diğer etkin olmayan bir denetimi alma.
2. cerrahi işlem (şekil 1)
<ol><li>Anestezi ve hayvan hazırlanması:
	<ol>
<li>Hayvanlar için 12 h deneme başlamadan önce hızlı.</li>
		<li>20 mg/kg ketamin ve 2 mg/kg Xylazine 10 mL şırınga kullanarak boyun, içine bir kas içi enjeksiyon yoluyla hayvanla önceden ilaçlamak. Hayvan ağırlık ve seks kaydedin.</li>
		<li>Anestezi 0.5 mg/kg Midazolam ve 0,05 mg/kg Atropin kulak çevresi damar içine enjekte edilerek ikna etmek. Tüp endotrakeal tüp hayvanla takacağım.</li>
		<li>Anestezi solunum kullanarak mekanik havalandırma tarafından korumak (O2/air 1:3, Sevorane % 1,5), 7-8 mm hava yolu tüp ve bir filtre. % 35 ve 6-10 mL/kg tidal hacim için ilham oksijen (FiO2) kısmını ayarlayın.</li>
		<li>Anestezi derinliği kadar yeterli yokluğunda burun pinching motor veya otonomik yanıt-e doğru değerlendirilir. Palpebral refleksleri ve çene sesi sürekli de rahat çene sesi ve palpebral Reflekslerin yokluğu hedefleme takip. Çekirdek sıcaklığı sürekli takip ve bakım normothermia (38-38,5 ° C) pasif ısınma (yalıtkan battaniye ve sıcak şişe) sağlamış.</li>
		<li>Teşrih ücretsiz, daha önce Koudstaal ve onun meslektaşları adımları 3-1 3 318, Karotid arter her iki tarafından açıklanan ve 7F kılıf ile cannulate. Venöz kan örnekleme için 7F kılıf ile sol juguler ven cannulate.</li>
		<li>250 µg fentanil analjezik 250 µg/h tarafından bir infüzyon pompası ile sürekli bir intravenöz infüzyon takip Merkezi Venöz hattı üzerinden bir bolus doz yönetmek. Vücut ısısı, kalp hızı ve ritim bir 3-kurşun Elektrokardiyogram (EKG), Bütün deneyin sırasında Arteryel ve merkezi Venöz basınç ile izleyin.</li>
		<li>Standart kan toplama borular kullanarak, aşağıdaki temel kan örnekleri Venöz satırından çekilme: 5 mL citrated plazma ve 2.9 mL EDTA plazma ilgili tüpler içine. Hemen, 2.000 x g 4 ° C'de 15 dakika santrifüj kapasitesi 2.9 mL kan serumu tüp içine almak ve yukarıda açıklandığı gibi centrifuging önce oda sıcaklığında 30 dakika koagüle sağlar.</li>
		<li>Plazma veya serum 500 µL içine aliquot 200 µL tüpler ve tüm örneklerini daha fazla çözümleme için-80 ° C'de depolayın.</li>
		<li>0.5 mL kan BGA üretici yönergelerine göre BGA makinesi kullanarak ölçmek için özel kan gaz analizi (BGA) şırıngalar kullanılarak Arteryel satırından geri alıyorum.</li>
		<li>0.5 mL kan Venöz satırından bir standart 2 mL şırınga kullanarak geri çekilin ve hemen 30 G iğne kullanarak hareket kartuşun aktarın. Üreticinin yönergelerine göre Pıhtılaşma zamanı ölçmek için hareket makine dolu kartuş takın. Zaman puan için bkz: Şekil 2 .</li>
		<li>5000 IU unfractionated heparin 2 mL şırınga kullanarak Venöz hattına yönetmek ve 20 dk için MI deney başlamadan önce stabilize etmek hayvan izin.</li>
		<li>Monitör her 30-45 dk 2.1.11 içinde belirtildiği gibi DAVRAN. Hareket < 180 s ise 2500 unfractionated IU heparin intravenöz enjekte et.</li>
	</ol></li>
	<li>Miyokard İnfarktüsü deney
	<ol>
<li>Standart bir C atış floroskop donatımı kullanın (koroner anjiyografi program, açı 0°, 12 çerçevelemek-de ikinci, ~ 70 kV) - ya da alternatif olarak bir adanmış anjiyografi sistemi - koroner girişim gerçekleştirmek için.</li>
		<li>Floroskopik kılavuz daha önce yerleştirilmiş kılıf sol Karotis arter yolu ile bir basınç kateter (5F, 120 cm) eklemek için kullanın. Sol ventrikül ilerlemek. Basınç kateter sol ventrikül basıncı kaydetmek için bir satın alma sisteme bağlayın. Koordinat belirleme sistemi sürekli olarak hesaplamak ve kalp hızı, geliştirilen kaydetmek gerekiyor basınç, dP/dt maksimum (sol ventrikül contractility) ve dP/dt en az (sol ventrikül gevşeme) tüm deney sırasında. 10 dk için temel değerlerini kaydetmek.</li>
		<li>6F (100 cm, EB3.75) eklemek yol gösterici kateter yolu ile sağ Karotis arter içine daha önce yerleştirilmiş kılıf. X-ışını rehberliği altında sol koroner arter ile sol ön inen koroner arter (evlat) ulaşmak için ilerlemek. Kontrast bir temel koroner anjiyografi gerçekleştirmek için yol gösterici kateter yolu ile 20 mL şırınga kullanarak orta enjekte. Not: Enjeksiyon kontrast orta el ile basınç tarafından yapıldı ama bir özel güç enjektör sistemi de kullanılabilir.</li>
		<li>Perkütan koroner girişim (PCI) kateter uygun boyutunu seçmek için x-ışını monitörde delikanlı boyutunu değerlendirmek. 15-25 mm ve çapları arasında 2 ve 3.5 mm delikanlı boyutuna bağlı olarak uzunluğu ile PCI Balon kullan. PCI kateter ve koroner embolisinin (F 014/J, 175 cm) bir araya getirin. PCI kateter ile kontrast orta önceden doldurulmuş enflasyon aygıt bağlantı kurun. Not: Delikanlı çapı bir cetvel kullanılarak kalibre edilmiş monitöre doğrudan ölçülebilir ve PCI balon boyutunu daha sonra buna göre seçilir.</li>
		<li>Monte sistemi 2.2.4 yol gösterici kateter Lümen yerleştirin. DELİKANLI ikinci çapraz şube ulaşıncaya kadar embolisinin delikanlı ilerlemek.</li>
		<li>DELİKANLI orta hakkında ulaşana kadar PCI kateter ilerlemek için floroskopik kılavuz kullanın. Genellikle sol ventrikül (LV) AAR benzer oranlarda için bazen ilk çapraz şube (şekil 3) sonra ikinci sonra delikanlı engelleme site TRANSPOSE anatomisi göre seçin. Not: Çapraz dalları uzunluğu ve böylece kan yolu ile ilgili şube tarafından verilen doku bölgesinin engelleme site seçimi bağlıdır. Uzun durumunda, çatallı ilk çapraz şube engelleme sitesi bundan sonra olacak. Daha kısa bir ilk çapraz şube durumunda belgili tanımlık kütük parçası ikinci diyagonal sonra yapılır.</li>
		<li>Embolisinin kaldırmak ve daha sonra 7-10 bar PCI kateter balon şişirmek ve yavaş yavaş 1 h. artırmak için 50-%60 15 ila 40 dk iskemi arasında FiO2 miyokardiyal iskemi neden için enflasyon aygıta basıncı artırmak. Deprem ses 6-10 mL/kg tutun. Not: Bu yordam extrasystoles oluşumunu azaltmak ve Ventriküler fibrilasyon sıklığını azaltmak.</li>
		<li>Kaydı kontrast orta sadece iskemi başlattıktan sonra yerde anjiyogram PCI kateter balon için yol gösterici kateter aracılığıyla enjekte ederken bir 5-10 s video dizisi; iskemi PCI kateter balon distal delikanlı tam tıkanıklığı doğrulamak için 10 dakika sonra tekrar.</li>
		<li>Yakından hemen tespit ve tedavi (2.2.10) hayvan izlemek kardiyak aritmiler. Extrasystoles genellikle oluşur ve frekans artışı (> 3 min başına) 20 ve 40 dakika sonra indüksiyon miyokardiyal iskemi arasında. Böyle bir durumla karşılaşırsanız, nazikçe yanak hemen altında her iki tarafta boyun masaj. Çoğu durumda bu normal bir kalp atışı, muhtemelen ortak Karotid arter üzerinde bulunan Vagus sinir baroreceptors uyarılması yeniden kurmak için yeterli olacaktır.</li>
		<li>Kardiyak aritmiler Ventriküler fibrilasyon ilerleme, bir, bifazik cihazı bir sinüs ritmi yeniden oluşturmak için kullanın. 5-10 göğüs sıkıştırma hemen sipariş TRANSPOSE oksijenli kan ile doldurun ve sonra 150 J (için 30 kg hayvan) ile şok şok uygulamadan önce defibrilatör pedleri kullanarak uygulayın.</li>
		<li>Tekrarlamak gerekirse ve artış enerji 175 J 3rd şok sonra için. Daha yüksek enerji ayarları ağır hayvanlar için kullanın.</li>
		<li>İskemi süre sonundan önce beş dakika 2.1.8-2.1.13 içinde belirtilen kan örnekleme yineleyin. Test madde enjekte (her iki bicyclic FXIIa engelleyici veya 4 mg/kg kontrol, bu körü körüne bunu) intravenöz aracılığıyla ana Venöz damar ve floş 20 mL serum fizyolojik içeren satırı.</li>
		<li>Bir plazma sitrat örnek (2.1.8 ve 2.1.9 belirtildiği gibi) çekilme 2.2.12 madde enjekte sonra 4 dak.</li>
		<li>DELİKANLI tıkanıklığı, onaylamak sonra PCI kateter balonu deflate ve bu kateter yol gösterici kateter kaldırmak için anjiyogram (2.2.3) gerçekleştirin. Miyokardiyal iskemi belirtileri görünür ECG tarafından daha--dan 5 min için ve hemen önce ne zaman tıkanıklığı siteye distal delikanlı perfüzyon tarafından Anjiyo hemen sonra deflasyon ve PCI kateter, 10 dk sonra balon kaldırılmasını onaylamak yeniden tıkanıklığı, delikanlı.</li>
		<li>2 h için iskemik Miyokardiyum reperfüzyon izin. Plazma ve serum örnekleri reperfüzyon (2.1.8 ve 2.1.9) 10, 30, 60 ve 115 dk az almak. Monitör BGA 60 ve 115 dk (2.1.10).</li>
		<li>PCI kateter ile birlikte embolisinin iskemi için kullanılan tam olarak aynı konuma yeniden takın. PCI kateter daha önce balon şişirmek ve delikanlı tıkanıklığı Anjiyo (2.2.3) onaylayın. Sol ventrikül basıncı kateter kaldırmak ve kaydı durdurmak.</li>
		<li>%2 100 mL enjekte Evans mavi fosfat tamponlu tuz (PBS, pH 7,4) ana Venöz damar. Yaklaşık 30 s sonra ne zaman tüm hayvan onaylamasına enjekte 40 mL % 20 KCl hayvan ötenazi yapmak. Ölüm ECG sinyalleri ve nabız dalgalar yokluğunda tarafından doğrulandı.</li>
	</ol></li>
</ol>3. örnekleme teknikleri
<ol><li>
Ayıklama, anatomi ve kalp (Şekil 4) örnekleme
	<ol>
<li>Kalp ortaya çıkarmak için bir yöntemdir gerçekleştirin. Daha önce Koudstaal ve meslektaşları, adım 8-2 ve 8-318tarafından açıklanan protokol izleyin. Kalp zarını anormallikler, önceki arasında perikardit kök, ve hayvan daha fazla değerlendirme dışlamak için teftiş sırasında kesmiş.</li>
		<li>Deflate ve PCI gibi yol gösterici kateter kaldırın. Kalp daha fazla çözümleme için tüketim. Vena kava kesme ve emme pompası kullanarak, sonra kalp ile vücut bağlanma büyük gemilerin kesip kan kaldırmak.</li>
		<li>İçte ve dışta kalp oda sıcaklığında salin ile yıkayın. Bütün kalp tartın.</li>
		<li>30-40 dk içinde kalp yaklaşık 3-5 mm'den tepe mitral kapak, keskin bir bıçak kullanarak uzun eksenine dikey Chordae tendinae dilimler halinde kesin.</li>
		<li>Her zaman kalp ventral yüzü yukarı bakacak şekilde-kesim örnekleri (şekil 5) yönünü kaybetmemek için ile aynı yönde yerleştirmek dikkatli olun.</li>
		<li>Dijital tek objektifli refleks fotoğraf makinesi kullanarak kalp dilim fotoğraf.</li>
		<li>Sağ ventrikül (silmek değil gerektiği gibi) Kes gitsin. Sol ventrikül dilimleri fotoğraf ve sol ventrikül toplam ağırlığı için tüm dilimleri tartın.</li>
		<li>Evans mavi pozitif ve negatif dokusunda Evans mavi: tüm bölümleri birbirinden ayırmak. İskemik (Evans mavi negatif) bir neşter kullanarak iskemik olmayan dokudan (Evans mavi pozitif) ayırmak için dilimleri incelemek.</li>
		<li>İlk Evans mavi negatif bölümler (risk, AAR iskemik alan) analiz. Hepsini tartmak ve bir plastik konteyner içine koydu.</li>
		<li>100-150 mL (göre kalp boyutu) triphenyl tetrazolium klorür çözüm (2 g TTC, 16 g Dextran, molekül ağırlığı 48000-90000, 200 ml taze hazırlanmış PBS) tamamen dilimlerle kapak böylece kalp adet çözüm içinde özgürce hareket edebilirsiniz. Konteyner kapağı ve hafifçe sallayarak süre 37 ° C'de 20 dk için kuluçkaya.</li>
		<li>Bu 20 dk kuluçka süresi tartmak sırasında Evans mavi olumlu parçaları (alan değil risk ANR), doku-Tek katıştırma için örnekleri almak (yaralanma en distal bölümü seçin) ve daha fazla analiz-80 ° C'de depolayın. Geri kalan % 4 formaldehit çözüm aktarmak ve Histoloji bölümleri için oda sıcaklığında saklayın.</li>
		<li>AAR parçalarını TTC çözümden kaldırmak. Kırmızı lekeli doku uygun iskemik doku (VIT) ve sigara lekeli doku çürümüş iskemik doku (NIT). 2 küçük parçalar (blok 2-3 mm) kesim hem NIT ve VIT, doku - Tek katıştırabilirsiniz ve daha fazla analiz-80 ° C'de depolayın. Bu örnekler aynı ağırlığa sahip.</li>
		<li>Adet (Tüm dilimler AAR türetilmiş) geri kalanı bir Styrofoam konteyner sabitleme ve tamamen kaplayan bir duman başlıklı oda sıcaklığında 24 h için % 4 formaldehit çözüm ile sabitleyin. Parçaları düz bir sonraki adımda fotoğraf belgeleri için kalmalısın.</li>
		<li>Ertesi gün her iki adet aynı yakınlaştırma ayarını ve doku (aynı büyütme) mesafe yüksek çözünürlüklü bir kamera ile fotoğraf. Otomatik ölçek çubukları için tüm resimleri ekleyin. Tüm çubukları aynı uzunlukta olması gerekir. Not: Yüksek çözünürlüklü kamera otomatik olarak ölçek çubuğu her fotoğrafa ekleyen yazılım bağlanması gerekir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
AAR ve enfarktüsü boyutu
	<ol>
<li>Sol ventrikül AAR yüzdesi = (AAR ağırlığı g / ağırlık g sol ventrikül) * 100.</li>
		<li>ImageJ yazılım AAR ve fotoğraf üzerinde dayalı NIT (her parçanın iki) Toplam yüzey alanı hesaplamak için kullanın.</li>
		<li>Ölçek çubuğu düz çizgi açı aracı kullanarak ölçek çubuğu uzunluğu seçerek ayarlayın. Menüsünden Çözümle seçin > ölçeği ayarla ve bilinen mesafe ve ölçek çubuğu birimi ekleyin. Aynı ölçek tüm fotoğraflara uygulanana kadar "küresel" seçin.</li>
		<li>AAR hesaplamak için serbest el seçim aracını kullanarak doku tüm yüzey alanı işaretleyin. Doku ve/veya yağlı doku (Şekil 6-C) tarafı (yükseklik) eklemeyi dikkat et.</li>
		<li>"Alanı" ve "etiketi analiz görüntülemek" seçerek ölçüm ayarla > ayarla ölçüleri menüsü. Çözümle gelen yüzey alanı ölçmek > ölçü birimi.</li>
		<li>3.2.5 (işareti sadece sigara lekeli doku) ölçü birimi NIT için adımları yineleyin. Not: yağ dokusu (Şekil 6-D) NIT hesaplamasına dahil etmeyin. Doku diğer tarafında adımı yineleyin.</li>
		<li>Ortalama AAR ve NIT doku her parça için hesaplar.</li>
		<li>3.2.7 elde edilen değerler NIT AAR AAR:% NIT yüzdesi hesaplamak için kullanın = (Σ ortalama yüzey alanı NIT cm2/ Σ ortalama yüzölçümü AAR cm2) * 100.</li>
		<li>İki farklı müfettişler yukarıdaki yöntemi yinelemeniz. Fark kabul edilebilir marjı % < 10 olduğunu.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İskemi işaretleri
	<ol>
<li>Daha önce-80 ° kardiyak troponin seviyesini ölçmek için C (2.1.9) depolanan EDTA plazma numuneleri kullanın-ben daha önce bir tek-plex Luminex tipi tahlil kullanarak 19açıklanan.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Mozaffarian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update.</a> Circulation. 133, e338-e360 (2016).</li><li>Miller, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+size+after+acute+myocardial+infarction+measured+by+quantitative+tomographic+99mTc+sestamibi+imaging+predicts+subsequent+mortality.">Infarct size after acute myocardial infarction measured by quantitative tomographic 99mTc sestamibi imaging predicts subsequent mortality.</a> Circulation. 92, 334-341 (1995).</li><li>Ovize, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postconditioning+and+protection+from+reperfusion+injury:+where+do+we+stand?+Position+Paper+from+the+Working+Group+of+Cellular+Biology+of+the+Heart+of+the+European+Society+of+Cardiology.">Postconditioning and protection from reperfusion injury: where do we stand? Position Paper from the Working Group of Cellular Biology of the Heart of the European Society of Cardiology.</a> Cardiovasc Res. 87, 406-423 (2010).</li><li>Neri, M., Riezzo, I., Pascale, N., Pomara, C., Turillazzi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia/Reperfusion+Injury+following+Acute+Myocardial+Infarction:+A+Critical+Issue+for+Clinicians+and+Forensic+Pathologists.">Ischemia/Reperfusion Injury following Acute Myocardial Infarction: A Critical Issue for Clinicians and Forensic Pathologists.</a> Mediators Inflamm. 2017, 1-14 (2017).</li><li>Yang, Q., He, G. -. W., Underwood, M. J., Yu, C. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanisms+of+endothelial+ischemia/reperfusion+injury:+perspectives+and+implications+for+postischemic+myocardial+protection.">Cellular and molecular mechanisms of endothelial ischemia/reperfusion injury: perspectives and implications for postischemic myocardial protection.</a> Am J Transl Res. 8, 765-777 (2016).</li><li>Massberg, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-Endothelial+Cell+Interactions+During+Ischemia/Reperfusion:+The+Role+of+P-Selectin.">Platelet-Endothelial Cell Interactions During Ischemia/Reperfusion: The Role of P-Selectin.</a> Blood. 92, 507-515 (1998).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithrombin+is+protective+against+myocardial+ischemia+and+reperfusion+injury.">Antithrombin is protective against myocardial ischemia and reperfusion injury.</a> J Thromb and Haemost. 11, 1020-1028 (2013).</li><li>Hopp, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+coagulation+factor+XII+as+a+novel+therapeutic+option+in+brain+trauma.">Targeting coagulation factor XII as a novel therapeutic option in brain trauma.</a> Ann Neurol. 79, 970-982 (2016).</li><li>Crick, S. J., Sheppard, M. N., Ho, S. Y., Gebstein, L., Anderson, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+pig+heart:+comparisons+with+normal+human+cardiac+structure.">Anatomy of the pig heart: comparisons with normal human cardiac structure.</a> J Anat. 193 (Pt 1), 105-119 (1998).</li><li>Heusch, G., Skyschally, A., Schulz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in-situ+pig+heart+with+regional+ischemia/reperfusion+-+ready+for+translation.">The in-situ pig heart with regional ischemia/reperfusion - ready for translation.</a> J Mol Cell Cardiol. 50, 951-963 (2011).</li><li>Poirier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise,+heart+rate+variability,+and+longevity:+the+cocoon+mystery?.">Exercise, heart rate variability, and longevity: the cocoon mystery?.</a> Circulation. , 2085-2087 (2014).</li><li>Milani-Nejad, N., Janssen, P. M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+and+large+animal+models+in+cardiac+contraction+research:+advantages+and+disadvantages.">Small and large animal models in cardiac contraction research: advantages and disadvantages.</a> Pharmacol Ther. 141, 235-249 (2014).</li><li>Bloor, C. M., White, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+development+of+the+coronary+collateral+circulation+during+coronary+artery+occlusion+in+the+conscious+dog.">Functional development of the coronary collateral circulation during coronary artery occlusion in the conscious dog.</a> Am J Pathol. 67, 483-500 (1972).</li><li>Banz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locally+targeted+cytoprotection+with+dextran+sulfate+attenuates+experimental+porcine+myocardial+ischaemia/reperfusion+injury.">Locally targeted cytoprotection with dextran sulfate attenuates experimental porcine myocardial ischaemia/reperfusion injury.</a> Eur Heart J. 26, 2334-2343 (2005).</li><li>Krombach, G. A., Kinzel, S., Mahnken, A. H., G&#252;nther, R. W., Buecker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+Invasive+Close-Chest+Method+for+Creating+Reperfused+or+Occlusive+Myocardial+Infarction+in+Swine.">Minimally Invasive Close-Chest Method for Creating Reperfused or Occlusive Myocardial Infarction in Swine.</a> Invest Radiol. 40, 14 (2005).</li><li>Suzuki, Y., Lyons, J. K., Yeung, A. C., Ikeno, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+porcine+model+of+reperfused+myocardial+infarction:+in+situ+double+staining+to+measure+precise+infarct+area/area+at+risk.">In vivo porcine model of reperfused myocardial infarction: in situ double staining to measure precise infarct area/area at risk.</a> Catheter Cardiovasc Interv. 71, 100-107 (2008).</li><li>McCall, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarction+and+intramyocardial+injection+models+in+swine.">Myocardial infarction and intramyocardial injection models in swine.</a> Nat Protoc. 7, 1479-1496 (2012).</li><li>Koudstaal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarction+and+functional+outcome+assessment+in+pigs.">Myocardial infarction and functional outcome assessment in pigs.</a> J Vis Exp. , e51269 (2014).</li><li>Kamat, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexrazoxane+Shows+No+Protective+Effect+in+the+Acute+Phase+of+Reperfusion+during+Myocardial+Infarction+in+Pigs.">Dexrazoxane Shows No Protective Effect in the Acute Phase of Reperfusion during Myocardial Infarction in Pigs.</a> PLoS One. 11, e0168541 (2016).</li><li>Carden, D. L., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+ischaemia-reperfusion+injury.">Pathophysiology of ischaemia-reperfusion injury.</a> J Pathol. 190, 255-266 (2000).</li><li>P&#233;rez de Prado, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Closed-chest+experimental+porcine+model+of+acute+myocardial+infarction-reperfusion.">Closed-chest experimental porcine model of acute myocardial infarction-reperfusion.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 60, 301-306 (2009).</li><li>Lown, B., Levine, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+carotid+sinus.+Clinical+value+of+its+stimulation.">The carotid sinus. Clinical value of its stimulation.</a> Circulation. 23, 766-789 (1961).</li><li>Regueiro-Purri&#241;os, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventricular+Arrhythmias+and+Mortality+Associated+with+Isoflurane+and+Sevoflurane+in+a+Porcine+Model+of+Myocardial+Infarction.">Ventricular Arrhythmias and Mortality Associated with Isoflurane and Sevoflurane in a Porcine Model of Myocardial Infarction.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. , (2011).</li><li>Roberts, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evans+blue+toxicity.">Evans blue toxicity.</a> Can Med Assoc J. 71, 489-491 (1954).</li><li>Ellenbroek, G. H. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Outcome+Assessment+in+a+Pig+Model+of+Acute+Myocardial+Infarction.">Primary Outcome Assessment in a Pig Model of Acute Myocardial Infarction.</a> J Vis Exp. , e54021 (2016).</li></ol>

Yazarlar hiçbir çıkar çatışması beyan ederim.

Miyokardiyal ben / R yaralanma sonra akut miyokard infarktüsünde3hastanın prognozu doğrudan çevrilen son enfarktüsü boyutu üzerinde önemli bir etkiye sahip. Miyokardiyal Patofizyoloji anlama ben / R yaralanma azaltmak veya önlemek için ilk adımdır. Miyokardiyal ben / R yaralanma tehlikesi damarları doğrudan reperfüzyon sonra oluşan akut bir durumu. Ben / R yaralanma yol açar doğuştan gelen bağışıklık yanıtının harekete geçirmek ve hücresel hasar oluşur, reperfüzyon ...

İskemik kalp hastalığı, özellikle akut miyokard infarktüsü (mı), gelişmiş ülkelerde 1ölüm ana nedenidir. Bugün, MI standart tedavisinde Perkütan koroner girişim (PCI), balon kateter tedavi 's. Yaşam kalitesini etkileyen önemli faktörlerden biri ve prognoz akut MI PCI tedavi sonra hastaların infarktüsü boyutudur. Boyutu azaltma hastanın hayatta kalma ve prognoz 2üzerinde büyük bir etkisi olabilir. Miyokardiyal iskemi/reperfüzyon (ı / R) yaralanma var enfarkt boyutu üzerinde önemli bir etkiye kardiyovasküler araştırma ana amaçlarından biri miyokardiyal azaltmak veya önlemek için bu nedenle ben / R yaralanma 3. Ben tam mekanizmaları / R yaralanma altında hala 4soruşturma. Plazma cascades ve endotel hücre aktivasyonu vardır ben işaretlerinden / R yaralanma 5. Koagülasyon sisteminin harekete geçirmek açıkça dahil 6,7' dir. Son zamanlarda, bir FXII FXII, rol bir erken ters yönde peptid koagülasyon cascade kişi faz aktivasyonu dahil olarak gösterilmiştir fare modeli beyin vurmak / R yaralanma 8. Bu sonuçlar bir domuz modeli doğrulama klinik Çeviri içine önemli bir adımdır. Bu nedenle, bir roman bicyclic (80 kDa proteaz) FXIIa inhibitörü miyokardiyal bağlamında test ediyoruz ben / R yaralanma bir pilot çalışma içinde.
Akut MI ve PCI tedavilerinin klinik durumu taklit, hayvan modelleri bizim anlama miyokardiyal Patofizyoloji ben geliştirmek için gerekli / R yaralanma ve roman tedavi seçenekleri test etmek için. Domuzlar temsil etmek için iyi bir hayvan model klinik miyokardiyal ben / R yaralanma. Çünkü kalpleri çok anatomi ve koroner kan dolaşımı ile ilgili olarak insan kalpleri benzer, ancak onlar da miyokardiyal iskemi ve reperfüzyon 9,10benzer patofizyolojik yanıtları göstermek değil. Sıçanlar ve fareler gibi diğer modeller değil bu kriterleri yerine getirmek ve köpekler, örneğin, pek çok daha fazla teminat koroner damarları ile karşılaştırıldığında insanlar var ise insan kalpleri 11,12' ye, karşılaştırıldığında önemli farkları göster 13.
Domuz akut miyokard infarktüsü modeli yaygın kardiyovasküler araştırma iskemik kalp hastalığı miyokard dahil olmak üzere araştırma için kullanılmıştır ben / R yaralanma 14,15,16,17. İkinci hangi en aza indirilmesi nedeniyle inflamatuar reaksiyon yöntemdir için ilgili bir enflamatuar, veya koşul aç-göğüs cerrahisinde kullanılan Torakotomi esastır. Klinik bir C-kol anjiyografi ayarı kullanarak kapalı göğüs modeli bu sorunun üstesinden gelir. Ayrıca, en önemli noktalarından biri enfarktüsü boyutu (nekrotik iskemik doku, NIT)-ebilmek bizim iletişim kuralı iskemik (alan) risk, AAR üst ve sol ventrikül (alan değil risk ANR) iskemik olmayan alanları arasında doğru bir ayrım sağlar olduğunu doğru bir şekilde kararlı olmak. Amacımız bu kağıt için açıkça bir domuz miyokardiyal tekrarlanabilir bir metodoloji tanımlamaktır ben / R yaralanma modeli, özellikle ben moleküler mekanizmaları daha kesin bir analiz için izin verir miyokard doku örnekleme ile ilgili olarak / R yaralanma ve bir yeni ilaç tedavileri etkileri daha net görüntü.

<table><tbody><tr><td>ABL 90 Flex, blood gas analyser</td><td>Radiometer</td><td>-</td><td>Blood gas analysis (BGA)</td></tr><tr><td>ACT Plus</td><td>Medtronic</td><td>-</td><td>Activated clotting time</td></tr><tr><td>Atropin</td><td>Sintetica</td><td>-</td><td>Atropinum Sulfas, 0,5mg/ml</td></tr><tr><td>Balance (20-500 Kg)</td><td>NAGATA Scale, Tiwan</td><td>HTB/HTR</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Balance (21-4200 g)</td><td>Mettler toledo, Switzerland</td><td>MS4002SDR</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Blood collection tubes: EDTA, citrate and serum</td><td>S-Monovette, Nuembrecht, Germany</td><td>05.1167.001,&lt;br/&gt; 05.1071.001&lt;br/&gt; and&lt;br/&gt; 05.1557.001 respectively</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>BV Pulsera mobile C-arm</td><td>Philips</td><td>-</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Labcare, UK</td><td>ALC PK120R</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Defibrillator Lifepak 12</td><td>Medtronic</td><td>-</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Dextran from Leuconostoc mesenteroides</td><td>Sigma-Aldrich, Germany</td><td>D3759</td><td>Average M.wt 48000-90000</td></tr><tr><td>Digital single lens reflex camera</td><td>Sony, Thailand</td><td>DSLR-A500/A550</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Dissecting forceps</td><td></td><td></td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>EMPIRA RX PCI dilatation catheter</td><td>Cordis, Johnson&amp;amp;Johnson, USA</td><td>85R15300S</td><td>Diameter 3 mm, length 15 mm, Alternative products can be used</td></tr><tr><td>EMPIRA RX PCI dilatation catheter</td><td>Cordis, Johnson&amp;amp;Johnson, USA</td><td>85R15350S</td><td>Diameter 3.5 mm, length 15 mm, Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich, Germany</td><td>E2129</td><td>Toxic</td></tr><tr><td>Fabius GS premium respirator</td><td>Dr&amp;auml;ger, L&amp;uuml;beck, Germany</td><td>-</td><td>Anesthesia work station, Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Fentanyl</td><td>Inselspital ISPI</td><td>-</td><td>Fentanyl 2500mcg/50ml</td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Pathology Institute, Bern University</td><td>SI148701</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>FXIIa inhibitor</td><td>Provided by Prof. Christian Heinis&#039; laboratory in EPFL</td><td></td><td>Novel bicyclic peptide</td></tr><tr><td>Galeo, coronary guidewire</td><td>Biotronik, Germany</td><td>125497</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Guidance catheter</td><td>Boston Scientific, Florida, USA</td><td>34356-06</td><td>6F (100 cm, EB3.75). Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Heparin Sodium</td><td>Drossapharm, Basel, Switzerland</td><td>-</td><td>Liquemin, 25000 U.I./5 ml</td></tr><tr><td>High end electrosurgery</td><td>BOWA, Germany</td><td>ARC 400</td><td>Electrical source for blood suction. Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Hydro-Guardmini breathing filter</td><td>Intersurgical, Lithuania</td><td>1745000</td><td>Filters</td></tr><tr><td>Image J</td><td>National Institute of Health, USA</td><td>1.47v</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Inflation device, Atrion QL2530</td><td>Atrion medical product, Alabama, USA</td><td>96402</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>IntelliVue MP 70</td><td>Philips, Boeblingen, Germany</td><td>-</td><td>Monitor (ECG, heart rate, blood presure and body temperature). Alternative products can be used</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sintetica SA</td><td>-</td><td>Potassium chloride 15%</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Vetoquinol</td><td>-</td><td>Narketan, 1ml/100mg</td></tr><tr><td>LR-ACT</td><td>Medtronic</td><td>402-01</td><td>ACT special syringes</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Roche</td><td>-</td><td>Dormicum, 5mg/ml</td></tr><tr><td>Monopolar scalpel</td><td></td><td></td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Needle holder</td><td></td><td></td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>High resolution camera, PathStand Macro Imaging Stand for Grossing</td><td>Spotimaging, USA</td><td></td><td>1080 p HD resolution. Alternative products can be used</td></tr><tr><td>PBS</td><td>In-house preparation</td><td>-</td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Peripheral venous cannula, 18 G</td><td></td><td></td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>PowerLab 4/35 data acquisition system</td><td>Adinstruments, Spechbach, Germany</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Rotamax120T</td><td>Heidolph, Germany</td><td>544-41200-00</td><td>Shaker. Alternative can be used</td></tr><tr><td>R&amp;uuml;schelit-Super Safety Clear Tube</td><td>Teleflex, Dublin, Irland</td><td>112480</td><td>Air way tubing, Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Safe Pico Aspirator Syringes</td><td>Radiometer</td><td>956-622</td><td>BGA special syringes</td></tr><tr><td>Saline</td><td>Sintetica Bioren</td><td>-</td><td>NaCl 0,9%. Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Sevorane 1.5%</td><td>AbbVie AG</td><td>-</td><td>Sevorane 250ml 100%</td></tr><tr><td>Sheath</td><td>Cordis, Johnson&amp;amp;Johnson, USA</td><td>504-607 A</td><td>AVANTI + / 7 F, Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Space infusion pump</td><td>B.Braun Medical AG, Germany</td><td>-</td><td>For infusion of fentanyl. Alternative products can be used</td></tr><tr><td>SPR-350 (Millar catheter)</td><td>Adinstruments, Texas, USA</td><td>840-8166</td><td>MIKRO-TIP, 5F, 120 cm</td></tr><tr><td>Sternotomy saw</td><td></td><td></td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Sutures</td><td>ETHICON, Johnson&amp;amp;Johnson, USA</td><td>Y3110H</td><td>Monocryl 3-0 SH-1 Plus. Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Syringes (20, 10 and 5 mL)</td><td>CODAN,Baar, Switzerland</td><td>62.7602,&lt;br/&gt; 62.6616,&lt;br/&gt; 62.5607&lt;br/&gt; respectively</td><td>Used to inject anesthetic materials intramuscularly or directly into the central venous line. Also to inject heparin or FXIIa or the respective control. Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Thorax spreader</td><td></td><td></td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Tissue-tek</td><td>SAKURA, Netherlands</td><td>4583</td><td>O.C.T. compound</td></tr><tr><td>Vascular forceps</td><td></td><td></td><td>Alternative products can be used</td></tr><tr><td>Xenetix 300 contrast media</td><td>Guerbet, Z&amp;uuml;rich, Switzerland</td><td>-</td><td>Lobitridol, 300 mg iodide/ml</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Vetoquinol</td><td>-</td><td>Xylapan, 20mg/1 mL</td></tr><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazolium choride</td><td>Sigma-Aldrich, Austria</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>500 &amp;mu;L tubes (eppendorf)</td><td>Trefflab, Switzerland</td><td>96.08185.9.03</td><td>Alternative products can be used</td></tr></tbody></table>

improvement of a closed chest porcine myocardial infarction model by standardization of tissue and blood sampling procedures

Miyokardiyal iskemi reperfüzyon (ı / R) yaralanma nekrotik alan neredeyse yarısı akut miyokard infarktüsü sonrası katkıda bulunur. Bugüne kadar miyokardiyal önlemek veya azaltmak için onaylı bir ilaç yok ben / R yaralanma. Çalışma ve miyokardiyal patofizyolojik mekanizmaları anlama / R yaralanma başarılı tedavileri geliştirmek esastır. Büyük hayvan deneyleri translasyonel yöntemleri konusunda önemli bir adım vardır. Akut Miyokard İnfarktüsünde domuz modeli kurulan ve kendimizi ve diğerleri tarafından açıklanan. Daha fazla değer modelinin örnekleme teknikleri kullanmak gelecekteki deneyler için ayrıntılı olarak odaklanarak geliştirmek amaçlanmıştır. Ayrıca, biz kesin sonuçları kalitesini etkileyebilir küçük ama önemli adımları vurgulamak. Miyokardiyal klinik durumu taklit etmek için ben / R yaralanma, Perkütan koroner girişim (PCI) kateter sol ön inen koroner arter (DOSTUM) imzalat domuz eklenmiş. Bu modeli taklit eder akut miyokard infarktüsü ve PCI tedavi doğru yönü alanını belirleme imkanı ile insanlarda risk nekrotik yanı sıra ° ° °- ve uygun iskemik doku. Burada model bicyclic peptid inhibitörü olan FXIIa etkisini araştırmak için kullanıldı. Model uzun reperfüzyon süreleri akut miyokard infarktüsü sonrası etkilerini incelemek izin vermek için de değiştirilebilir.

Bir hayvan zamanından önce FXIIa inhibitörü veya denetim peptid (test madde eklenmesi önce iskemi süre boyunca kan basıncı ani bir düşüş) teknik bir hata nedeniyle, yönetimi daha önce öldü. Hiçbir iskemi/reperfüzyon hasarı sol ön inen arter (evlat) anormal anatomisi nedeniyle gözlenmiştir çünkü bir hayvan FXIIa inhibitörü grubundan dışarıda bırakıldı. Sol ventrikül ve tepe de dahil olmak üzere, büyük bir kısmı bu hayvan sirkumfleks arter tarafından ...

Watch this Scientific Journal Video about Improvement of a Closed Chest Porcine Myocardial Infarction Model by Standardization of Tissue and Blood Sampling Procedures at JoVE.com

Improvement of a Closed Chest Porcine Myocardial Infarction Model by Standardization of Tissue and Blood Sampling Procedures

Burada biz miyokardiyal iskemi/reperfüzyon hasarı Patofizyoloji anlamada translasyonel değerini artırmak için örnekleme prosedürleri akut miyokard infarktüsü, kurulan bir domuz modelinin standart hale getirmek için bir protokol göstermek ve yeni ilaç adaylarının sınamak için.

Kapalı göğüs domuz miyokard infarktüsü manken standardizasyon doku ve kan örnekleme prosedürleri tarafından geliştirilmesi

Myocardial ischemia reperfusion (I/R) injury contributes to almost half of the necrotic area after myocardial infarction. To date there is no approved ...

improvement-closed-chest-porcine-myocardial-infarction-model

Research

JoVE Journal

Medicine

10.8K Görüntüleme.  University of Bern. Burada biz miyokardiyal iskemi/reperfüzyon hasarı Patofizyoloji anlamada translasyonel değerini artırmak için örnekleme prosedürleri akut miyokard infarktüsü, kurulan bir domuz modelinin standart hale getirmek için bir protokol göstermek ve yeni ilaç adaylarının sınamak için.

Video: Improvement of a Closed Chest Porcine Myocardial Infarction Model by Standardization of Tissue and Blood Sampling Procedures

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ischemia and reperfusion. Immune response includes cytokine expression and release or secretion of endogenous ligands of innate immune receptors. Activation of innate immunity can potentially modulate infarct size. We have modified an existing murine closed-chest model using hanging weights which could be useful for studying myocardial pre- and postconditioning and the role of innate immunity in myocardial ischemia and reperfusion. This model allows animals to recover from surgical trauma before onset of myocardial ischemia.
Volatile anesthetics have been intensely studied and their preconditioning effect for the ischemic heart is well known. However, this protective effect precludes its use in open chest models of coronary artery ligation. Thus, another advantage could be the use of the well controllable volatile anesthetics for instrumentation in a chronic closed-chest model, since their preconditioning effect lasts up to 72 hours. Chronic heart diseases with intermittent ischemia and multiple hit models are other possible applications of this model.
For the chronic closed-chest model, intubated and ventilated mice undergo a lateral blunt thoracotomy via the 4th intercostal space. Following identification of the left anterior descending a ligature is passed underneath the vessel and both suture ends are threaded through an occluder. Then, both suture ends are passed through the chest wall, knotted to form a loop and left in the subcutaneous tissue. After chest closure and recovery for 5 days, mice are anesthetized again, chest skin is reopened and hanging weights are hooked up to the loop under ECG control.
At the end of the ischemia/reperfusion protocol, hearts can be stained with TTC for infarct size assessment or undergo perfusion fixation to allow morphometric studies in addition to histology and immunohistochemistry.

Surgical trauma induces an inflammatory response. Cytokines and endogenous ligands are known to modulate myocardial infarct size following ischemia and reperfusion. We present a modified closed-chest model of murine ischemia and reperfusion using hanging weights to minimize effects of thoracotomy.

Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Tıp

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One important prerequisite is a good understanding of all safety and efficacy aspects obtained in a large animal model that validly reflect the human scenario of myocardial infarction (MI). Pigs are widely used in this regard since their cardiac size, hemodynamics, and coronary anatomy are close to that of humans. Here, we present an effective protocol for using the porcine MI model using a closed-chest coronary balloon occlusion of the left anterior descending artery (LAD), followed by reperfusion. This approach is based on 90 min of myocardial ischemia, inducing large left ventricle infarction of the anterior, septal and inferoseptal walls. Furthermore, we present protocols for various measures of outcome that provide a wide range of information on the heart, such as cardiac systolic and diastolic function, hemodynamics, coronary flow velocity, microvascular resistance, and infarct size. This protocol can be easily tailored to meet study specific requirements for the validation of novel cardioregenerative biologics at different stages (i.e. directly after the acute ischemic insult, in the subacute setting or even in the chronic MI once scar formation has been completed). This model therefore provides a useful translational tool to study MI, subsequent adverse remodeling, and the potential of novel cardioregenerative agents.

This protocol describes the porcine myocardial infarction (MI) model using a 90 min closed-chest coronary balloon occlusion of the left anterior descending artery (LAD), followed by reperfusion. Furthermore, the protocol for several outcome parameters, such as cardiac function, hemodynamics, microvascular resistance, and infarct size, are also presented.

Domuzlar miyokard enfarktüsü ve Fonksiyonel Sonuç Değerlendirmesi

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

Primary Outcome Assessment in a Pig Model of Acute Myocardial Infarction

Mortality after acute myocardial infarction remains substantial and is associated with significant morbidity, like heart failure. Novel therapeutics are therefore required to confine cardiac damage, promote survival and reduce the disease burden of heart failure. Large animal experiments are an essential part in the translational process from experimental to clinical therapies. To optimize clinical translation, robust and representative outcome measures are mandatory. The present manuscript aims to address this need by describing the assessment of three clinically relevant outcome modalities in a pig acute myocardial infarction (AMI) model: infarct size in relation to area at risk (IS/AAR) staining, 3-dimensional transesophageal echocardiography (TEE) and admittance-based pressure-volume (PV) loops. Infarct size is the main determinant driving the transition from AMI to heart failure and can be quantified by IS/AAR staining. Echocardiography is a reliable and robust tool in the assessment of global and regional cardiac function in clinical cardiology. Here, a method for three-dimensional transesophageal echocardiography (3D-TEE) in pigs is provided. Extensive insight into cardiac performance can be obtained by admittance-based pressure-volume (PV) loops, including intrinsic parameters of myocardial function that are pre- and afterload independent. Combined with a clinically feasible experimental study protocol, these outcome measures provide researchers with essential information to determine whether novel therapeutic strategies could yield promising targets for future testing in clinical studies.

Reliable and accurate outcome assessment is the key for translation of preclinical therapies into clinical treatment. The current paper describes how to assess three clinically relevant primary outcome parameters of cardiac performance and damage in a pig acute myocardial infarction model.

Akut Miyokard İnfarktüsü bir Domuz Modeli İlköğretim Sonuç Değerlendirmesi

Mortality after acute myocardial infarction remains substantial and is associated with significant morbidity, like heart failure. Novel therapeutics are ...

3D Whole-heart Myocardial Tissue Analysis

Cardiac regenerative therapies aim to protect and repair the injured heart in patients with ischemic heart disease. By injecting stem cells or other biologicals that enhance angio- or vasculogenesis into the infarct border zone (IBZ), tissue perfusion is improved, and the myocardium can be protected from further damage. For maximum therapeutic effect, it is hypothesized that the regenerative substance is best delivered to the IBZ. This requires accurate injections and has led to the development of new injection techniques. To validate these new techniques, we have designed a validation protocol based on myocardial tissue analysis. This protocol includes whole-heart myocardial tissue processing that enables detailed two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) analysis of the cardiac anatomy and intramyocardial injections. In a pig, myocardial infarction was created by a 90-min occlusion of the left anterior descending coronary artery. Four weeks later, a mixture of a hydrogel with superparamagnetic iron oxide particles (SPIOs) and fluorescent beads was injected in the IBZ using a minimally-invasive endocardial approach. 1 h after the injection procedure, the pig was euthanized, and the heart was excised and embedded in agarose (agar). After the solidification of the agar, magnetic resonance imaging (MRI), slicing of the heart, and fluorescence imaging were performed. After image post-processing, 3D analysis was performed to assess the IBZ targeting accuracy. This protocol provides a structured and reproducible method for the assessment of the targeting accuracy of intramyocardial injections into the IBZ. The protocol can be easily used when the processing of scar tissue and/or validation of the injection accuracy of the whole heart is desired.

This protocol describes a novel method for the 3D comparison of whole-heart myocardial tissue with MRI. This is designed for the accurate assessment of intramyocardial injections in the infarct border zone of a chronic porcine model of myocardial infarction.

3D Tüm kalp Miyokard Doku Analizi

Cardiac regenerative therapies aim to protect and repair the injured heart in patients with ischemic heart disease. By injecting stem cells or other ...

Establishing a Swine Model of Post-myocardial Infarction Heart Failure for Stem Cell Treatment

Although advances have been achieved in the treatment of heart failure (HF) following myocardial infarction (MI), HF following MI remains one of the major causes of mortality and morbidity around the world. Cell-based therapies for cardiac repair and improvement of left ventricular function after MI have attracted considerable attention. Accordingly, the safety and efficacy of these cell transplantations should be tested in a preclinical large animal model of HF prior to clinical use. Pigs are widely used for cardiovascular disease research due to their similarity to humans in terms of heart size and coronary anatomy. Therefore, we sought to present an effective protocol for the establishment of a porcine chronic HF model using closed-chest coronary balloon occlusion of the left circumflex artery (LCX), followed by rapid ventricular pacing induced with pacemaker implantation. Eight weeks later, the stem cells were administered by intramyocardial injection in the peri-infarct area. Then the infarct size, cell survival, and left ventricular function (including echocardiography, hemodynamic parameters, and electrophysiology) were evaluated. This study helps establish a stable preclinical large animal HF model for stem cell treatment.

We sought to establish a swine model of heart failure induced by left circumflex artery blockage and rapid pacing to test the effect and safety of intramyocardial administration of stem cells for cell-based therapies.

Kök Hücre Tedavisi Için Post-miyokard Enfarktüsü Kalp Yetmezliği Domuz Modeli Oluşturma

Although advances have been achieved in the treatment of heart failure (HF) following myocardial infarction (MI), HF following MI remains one of the major ...

Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease

Structural remodeling is a common consequence of chronic pathological stresses imposed on the heart. Understanding the architectural and compositional properties of diseased tissue is critical to determine their interactions with arrhythmic behavior. Microscale tissue remodeling, below the clinical resolution, is emerging as an important source of lethal arrhythmia, with high prevalence in young adults. Challenges remain in obtaining high imaging contrast at sufficient microscale resolution for preclinical models, such as large mammalian whole hearts. Moreover, tissue composition-selective contrast enhancement for three-dimensional high-resolution imaging is still lacking. Non-destructive imaging using micro-computed tomography shows promise for high-resolution imaging. The objective was to alleviate sufferance from X-ray over attenuation in large biological samples. Hearts were extracted from healthy pigs (N = 2), and sheep (N = 2) with either induced chronic myocardial infarction and fibrotic scar formation or induced chronic atrial fibrillation. Excised hearts were perfused with: a saline solution supplemented with a calcium ion quenching agent and a vasodilator, ethanol in serial dehydration, and hexamethyldisilizane under vacuum. The latter reinforced the heart structure during air-drying for 1 week. Collagen-dominant tissue was selectively bound by an X-ray contrast-enhancing agent, phosphomolybdic acid. Tissue conformation was stable in air, permitting long-duration microcomputed tomography acquisitions to obtain high-resolution (isotropic 20.7 &#181;m) images. Optimal contrast agent loading by diffusion showed selective contrast enhancement of the epithelial layer and sub-endocardial Purkinje fibers in healthy pig ventricles. Atrial fibrillation (AF) hearts showed enhanced contrast accumulation in the posterior walls and appendages of the atria, attributed to greater collagen content. Myocardial infarction hearts showed increased contrast selectively in regions of cardiac fibrosis, which enabled the identification of interweaving surviving myocardial muscle fibers. Contrast-enhanced air-dried tissue preparations enabled microscale imaging of the intact large mammalian heart and selective contrast enhancement of underlying disease constituents.

Here, we present a protocol to obtain high resolution micro computed tomography images of healthy and pathological large mammalian whole hearts with collagen-selective contrast enhancement.

Kronik Hastalığı Olan Büyük Memeli Kardiyak Modellerinin Kontrastlı Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntülemesinde Doku Hazırlama Teknikleri

Structural remodeling is a common consequence of chronic pathological stresses imposed on the heart. Understanding the architectural and compositional ...

Myocardial Infarction by Percutaneous Embolization Coil Deployment in a Swine Model

Myocardial infarction (MI) is the leading cause of mortality worldwide. Despite the use of evidence-based treatments, including coronary revascularization and cardiovascular drugs, a significant proportion of patients develop pathological left-ventricular remodeling and progressive heart failure following MI. Therefore, new therapeutic options, such as cellular and gene therapies, among others, have been developed to repair and regenerate injured myocardium. In this context, animal models of MI are crucial in exploring the safety and efficacy of these experimental therapies before clinical translation. Large animal models such as swine are preferred over smaller ones due to the high similarity of swine and human hearts in terms of coronary artery anatomy, cardiac kinetics, and the post-MI healing process. Here, we aimed to describe an MI model in pig by permanent coil deployment. Briefly, it comprises a percutaneous selective coronary artery cannulation through retrograde femoral access. Following coronary angiography, the coil is deployed at the target branch under fluoroscopic guidance. Finally, complete occlusion is confirmed by repeated coronary angiography. This approach is feasible, highly reproducible, and emulates the pathogenesis of human non-revascularized MI, avoiding the traditional open-chest surgery and the subsequent postoperative inflammation. Depending on the time of follow-up, the technique is suitable for acute, sub-acute, or chronic MI models.

Myocardial infarction (MI) animal models that emulate the natural process of the disease in humans are crucial to understanding pathophysiological mechanisms and testing the safety and efficacy of new emergent therapies. Here, we describe an MI swine model created by deploying a percutaneous embolization coil.

Bir Domuz Modelinde Perkütan Embolizasyon Bobini Dağıtımı ile Miyokard Enfarktüsü

Myocardial infarction (MI) is the leading cause of mortality worldwide. Despite the use of evidence-based treatments, including coronary revascularization ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence suggests that thrombolytic therapy or primary percutaneous coronary intervention (PPCI) does not prevent reperfusion injury. There is still no ideal animal model for MIRI. This study aims to improve the MIRI model in rats to make surgery easier and more feasible. A unique method for establishing MIRI is developed by using a soft tube during a key step of the ischemic period. To explore this method, thirty rats were randomly divided into three groups: sham group (n = 10); experimental model group (n = 10); and existing model group (n = 10). Findings of triphenyltetrazolium chloride staining, electrocardiography, and percent survival are compared to determine the accuracies and survival rates of the operations. Based on the study results, it has been concluded that the improved surgery method is associated with a higher survival rate, elevated ST-T segment, and larger infarct size, which is expected to mimic the pathology of MIRI better.

Myocardial ischemia-reperfusion model of rat heart is improved by using a self-made retractor, polyvinyl chloride tube, and a unique knotting method. Electrocardiogram, triphenyltetrazolium chloride and histological staining, and percent survival analysis results showed that the improved model group has higher success and survival rates than the already existing model group.

Miyokard İskemisi ve Reperfüzyon Hasarının Geliştirilmiş Kemirgen Modeli

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...

Dissection Techniques and Histological Sampling of the Heart in Large Animal Models for Cardiovascular Diseases

The standard gross examination and sampling are key elements in the reproducibility and success of experimental studies of cardiovascular diseases carried out in large animals. Considering the complex anatomy of the heart, interspecies differences, and the types of compensatory and pathological reactions, consistent protocols are challenging to implement. The utilization of multiple dissection protocols is usually adapted to suit the prosector's experience, and personal preference continues to be a source of experimental and interobserver variability. Here, the aim is to present the main anatomical features and landmarks, dissection protocols, and histological sampling standards of the heart in some commonly used species (including dogs, pigs, ruminants, and cats) as models of cardiovascular diseases.
Two standard gross examination protocols are presented here. First, the inflow-outflow method, which follows the physiological blood flow direction through the heart and large vessels (frequently used in dogs, ruminants, and pigs), and second, the four-chamber dissection technique (exemplified in cats). Both techniques can be adapted to any species in certain experimental circumstances. The sampling protocols include all the areas of interest (sinoatrial node, ventricles, interventricular septum, atria, valves, and aorta), and if properly carried out, improve both the reproducibility and reliability of experimental studies.

Due to the complex anatomy, a consistently reproducible dissection and harvesting protocol for cardiac samples can be challenging to implement. This manuscript presents the key elements of some standard cardiac dissection protocols, highlighting both the gross examination approaches and the sampling sites commonly used for histopathologic examination.

Diseksiyon Teknikleri ve Kardiyovasküler Hastalıklar için Büyük Hayvan Modellerinde Kalbin Histolojik Örneklemesi

The standard gross examination and sampling are key elements in the reproducibility and success of experimental studies of cardiovascular diseases carried ...

Large-Animal Model of Donation after Circulatory Death and Normothermic Regional Perfusion for Cardiac Assessment

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ donor pool. However, the DCD process is associated with the risk of cardiac tissue injury due to the inevitable period of warm ischemia. Normothermic regional perfusion (NRP) allows for an in situ organ assessment, allowing the procurement of hearts determined to be viable. Here, we describe a clinically relevant large-animal model of DCD followed by NRP. Circulatory death is established in anesthetized pigs by stopping mechanical ventilation. After a preset warm ischemia period, an extracorporeal membrane oxygenator (ECMO) is used for a NRP period lasting at least 30 min. During this reperfusion period, the model allows the collection of various myocardial biopsies and blood samples for initial cardiac evaluation. Once NRP is weaned, biochemical, hemodynamic, and echocardiographic assessments of cardiac function and metabolism can be performed before organ procurement. This protocol closely simulates the clinical scenario previously described for DCD and NRP in heart transplantation and has the potential to facilitate studies aimed at decreasing ischemia-reperfusion injury and enhance cardiac functional preservation and recovery.

The protocol describes a large-animal (porcine) model of donation after circulatory death, followed by thoracoabdominal normothermic regional perfusion that closely simulates the clinical scenario in heart transplantation, and has the potential to facilitate therapeutic studies and strategies.

Dolaşım Ölümü Sonrası Büyük Hayvan Bağış Modeli ve Kardiyak Değerlendirme için Norannemik Bölgesel Perfüzyon

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ ...