הליך זה ליציקה והכנסת חלונות סיליקון מוריד את המחסומים הטכניים להדמיה תוך-ורידית אורכית. הפרוטוקול שלנו מייצר חלונות יציבים, הניתנים להתאמה בקלות, אשר נסבלים היטב על ידי בעלי החיים. באמצעות טכניקה זו, דמיינו סרטן ותאי חיסון בכבד, בלבלב ובבלוטת החלב.
עם התאמות מינימליות, ניתן היה להתאים אותו למיקומים אנטומיים רבים ולשאלות ביולוגיות. למי שמנסה טכניקה זו בפעם הראשונה, תרגלו שחרור כמויות קטנות של דבק מהמזרק. מריחת יותר מדי דבק תעיב על שדה ההדמיה ותקשה על האזור הכירורגי לעבוד איתו.
התחל ליצוק חלון הסיליקון על ידי הפקדת כמות קטנה של פולימר הסיליקון שזה עתה הוכן, polydimethylsiloxane, של PDMS, על משטח חלק ונקי, והתאם את יחס הנפח לאזור כדי לקבל את העובי הרצוי. לאחר הפקדת ה-PDMS על משטח היציקה הרצוי, לחצו קלות על רשת נירוסטה לתוך הסיליקון כדי לספק ציוני דרך להדמיה חוזרת ונשנית של אותם אזורי רקמה. כדי להסיר את בועות האוויר ולדגה את פולימר הסיליקון, מניחים את המשטח המצופה במייבש ואקום למשך 45 דקות.
בסיום, לרפא את הפולימר בתנור ב 75 עד 80 מעלות צלזיוס במשך 45 דקות. נקו את הפולימר בשולי התבנית והשתמשו במלקחיים כדי לקלף בעדינות את החלונות שנרפאו מהמשטח המשמש ליציקה. מקם את העכבר על מיקום הדקוביטוס הצדדי השמאלי.
הכן את העכבר המרדים לניתוח על ידי החלת 10% נפח לפי נפח תמיסת יוד povidone ו-70% נפח לפי נפח אתנול שלוש פעמים ברציפות באתר הניתוח המגולח. יש להקפיד על שמירה על שדה כירורגי סטרילי. לאחר מכן, השתמש במספריים ובמלקחיים סטריליים כדי לבצע חתך של 10 מילימטרים באגף הימני בשלושה מילימטרים מתחת לקשת הקוסטלית.
יש להסיר חלק מרובע אחד של העור ולהשתמש בזוג שני של מספריים ומלקחיים סטריליים כדי להסיר חלק של הצפק מעט קטן יותר מאשר החלק של העור. מפקידים כמות קטנה של דבק כירורגי על צלחת באר סטרילית ומושכים אותה עם מזרק 31 מדים כדי למרוח על פני השטח של הכבד סביב קצוות האזור שיש לדמיין, ואז למקם את החלון על האזור הרצוי, ולהחזיק אותו בחוזקה כנגד הכבד במשך כשתי דקות עד שהדבק התייבש. לאחר קיפול קצוות החלון מתחת למאגר הצפק כמות קטנה של דבק הניתוח בשולי החלון שנמצאים כעת מתחת לצפק, דחפו כלפי מטה את הצפק עם מלקחיים כדי להצמיד אותו לחלון.
באופן דומה, אטמו את הצפק על ידי הפקדת כמות קטנה של הדבק הניתוחי לפני דחיפת העור כלפי מטה, ואז מרחו דבק סביב קצות החלון כדי ליצור שפה שתמנע מהעור לצמוח בחזרה מעל החלון. כדי להכניס את החלון ללבלב, הניחו את העכבר על מיקום הדקוביטוס הצדדי הימני, ובצעו את החתך באגף השמאלי לפני הסרת קטע מהציפור כפי שהודגם קודם לכן. באמצעות צמר גפן סטרילי ספוג במי מלח סטריליים, משכו בעדינות את הטחול כדי לדמיין את הלבלב.
מקם מחדש את הלבלב עם מטושים מכותנה לחה כדי להפוך שטח פנים רב יותר גלוי דרך החתך. לאחר הגישה ללבלב, הכנס ואטם את חלון ההדמיה על האזור הרצוי כפי שהוסבר קודם לכן. כדי לגשת לבלוטת החלב, מניחים את העכבר במצב שכיבה, ועושים חתך 10 מילימטר מדיאלי לאחת הפטמות המפשעתיות באמצעות מספריים ומלקחיים סטריליים.
יש להסיר קטע של 0.5 סנטימטרים רבועים של העור מעל בלוטת החלב, ולאחר מכן להפריד בעדינות את בלוטת החלב מהעור על ידי פיזור המספריים הסטריליים בין שני המשטחים כדי לשבש את ההדבקה. השתמש במזרק מד 31 כדי להחיל כמות קטנה של דבק הניתוח על פני השטח של בלוטת החלב סביב קצוות האזור כדי להצטלם. מקם והחזק את החלון בחוזקה כנגד בלוטת החלב עד שהדבק מתייבש.
לאחר קיפול קצוות החלון מתחת לעור, הפקידו כמות קטנה של דבק כירורגי בשולי החלון שנמצאים כעת מתחת לעור, ודחפו למטה על העור עם מלקחיים כדי להדק את העור לחלון. מרחו את הדבק סביב קצות החלון כדי ליצור שפה שתמנע מהעור לצמוח בחזרה מעל החלון. לפני תחילת סשן ההדמיה, נקו את החלון מכל שארית פסולת על ידי ניגוב עדין שלו עם צמר גפן טבול ב-70% אתנול.
בעת שימוש בעדשת טבילה במים, יש למרוח את ג'ל האולטרסאונד על החלון ולהימנע מבועות. כדי להתחיל את ההדמיה, אתרו והניחו את הרשת במוקד דרך העיניים. לאחר מכן קבע את עומק הדמיית הרקמה המשוער על-ידי הגדרת תחתית הרשת לאפס.
המידע יסייע באיתור מישור ה-Z המתאים במפגשי ההדמיה הבאים. כדי לזהות את אותו מיקום במשך מספר הפעלות הדמיה, השתמש בריבועים שעל הרשת כנקודת ייחוס. במהלך הפעלת ההדמיה, שים לב לכיוון הרשת ולמיקום של כל שדה ראייה המצולם בתוך הרשת.
ניתן להשתמש ברשת כדי לנווט בחזרה לאזורי רשת ספציפיים ולשדות הדמיה בהצלחה של הפעלות הדמיה. לאחר כל סשן הדמיה יש להסיר כל מדיום טבילה של עדשה שיורית ופסולת על ידי ניגוב עדין של החלון עם צמר גפן טבול ב-70% אתנול. חלון הסיליקון מאפשר ללכוד את חדירת תאי החיסון הדינמיים לאורך זמן.
הניתוח הייצוגי ממחיש את חדירת הנויטרופילים לתוך רקמת בלוטת החלב המשפצת בימים השני והרביעי. חלון הסיליקון מאפשר לדמיין גידולים בנקודות זמן מרובות במשך שבועות לאחר החדרת החלון. החלונות יצוקים עם 200 מיליגרם של PDMS הם בדרך כלל טובים יותר עבור השתלה כירורגית כפי שהם הפגינו קשיחות גדולה יותר באופן משמעותי מאשר החלונות יצוקים עם 150 מיליגרם.
יש לציין כי חלונות PDMS לא היו קשיחים כמו זכוכית סטנדרטית, המיוצגת על ידי מודולוס יאנג של חלונות הזכוכית שהיה גדול משמעותית מ- PDMS. החדרת החלון באיברים שונים הייתה נסבלת היטב מכיוון שרוב העכברים המשיכו לעלות במשקל לאורך זמן. הדבר החשוב ביותר שיש לזכור כאשר מנסים הליך זה הוא לאטום את החלון באופן מלא באמצעות דבק.
זה מונע זיהום, הרקמה מלהתייבש, ואת התזוזה של החלון. בעקבות ההליך, ניתן לבצע זריקות אורתוטופיות דרך חלון הסיליקון, מה שמאפשר לחוקרים לחקור מגוון רחב של נושאים, כגון התפשטות תאים, אינטראקציות בין תאים ויעילות טיפולית.
