Bu protokol, fotoğrafa duyarlı ilaç-boya sistemlerinin, özellikle de ışık radyasyonunun kurulumunun yapımı ve karakterizasyonu hakkında bir referans sağlar. Bu teknik, basit imalat, yüksek ilaç yükleme kapasitesi ve fotoğraf kontrol edilebilirliğinin avantajını gösterir. Bu teknik, tümör bölgesinde ilaç salınımını aktive etmek için ışıklar sağlamak üzere kolorektal tümörü optik fiber yardımıyla tedavi etmek için kullanılabilir.
Bor dipirometen klorambucil veya BC ön ilacının 10 miligramını tartarak başlayın ve 1.5 mililitrelik bir mikro tüp içinde bir mililitre dimetil sülfoksit veya DMSO içinde çözün. BC çözeltisini folyo ile örtün, ardından filtrelenmiş deiyonize suda mililitre IR783 başına 0.4 miligram hazırlayın ve 1.5 mililitrelik bir mikro tüpte 300 mikrolitre aktarın. Bu mikro tüpü 1500 RPM'de bir vorteks karıştırıcıya yerleştirin.
Daha sonra, 20 mikrolitrelik pipet ucunun ucu mikro tüpün iç duvarına dokunduğunda, IR783 çözeltisine sabit bir hızda 10 saniye boyunca 20 mikrolitre BC çözeltisi ekleyin. IR783 / BC nanopartiküllerini elde etmek için mikro tüpü 30 saniye boyunca vorteks karıştırıcıya yerleştirin. Daha sonra nanopartikül çözeltisini tamamen folyo ile kaplı bir rafa yerleştirin.
Elde edilen IR783 / BC nanopartikül çözeltisini, agregaları çıkarmak için 2000 G'de 10 dakika ve dört santigrat derecede santrifüj edin. Süpernatanı toplayın, atmadan önce peleti rahatsız etmemek için tüpte yaklaşık 20 mikrolitre bırakın. Süpernatantı 30.000 G ve 4 santigrat derecede 30 dakika boyunca iki kez santrifüj ettikten sonra, nanopartikül çökeltisini her iki merkezden de toplayın.
Nanopartikülleri 300 mikrolitre PBS'de yeniden askıya alın. Elüsyon yöntemini kullanarak IR783 ve BC içeriğini yüksek performanslı sıvı kromatografisi veya HPLC ile ölçün. Ön ilaç kapsülleme verimliliğini veya EE yüzdesini ve yükleme kapasitesini veya LC yüzdesini hesaplayın.
IR783 / BC nanopartiküllerinin ortalama boyutunu dinamik bir ışık saçılması veya DLS cihazı ile ölçmek. Bir küvete 200 mikrolitre IR783 / BC nanopartikül çözeltisi ekleyin ve küveti ölçüm için tutucuya yerleştirin. Ölçüm türünü boyut ve ölçüm sıcaklığını 25 santigrat derece olarak ayarlayın.
Her ölçüm için 20 saniye süreli üç ölçüm gerçekleştirin. IR783 / BC nanopartiküllerinin yüzey yükünü DLS cihazı ile ölçmek için, 25 mikrolitre IR783 / BC nanopartikül çözeltisini 1.5 mililitrelik bir mikro tüp içinde 725 mikrolitre deiyonize su ile seyreltin. Çözeltiyi bir zeta potansiyel test küvetine ekleyin.
Küveti numune oluğuna yerleştirin. Numune oluğunu kapatın. Ardından, ölçüm türünü zeta potansiyeli ve sıcaklığı 25 santigrat derece olarak ayarlayın.
10 ölçüm yapın. Tamamlandığında, 300 ağlık bir bakır ızgara üzerindeki delikli karbon filmin bir parçasına 10 mikrolitre IR783 / BC nanopartikül çözeltisi ekleyerek ve delikli karbon filminden yedi mikrolitreyi çıkararak numuneleri iletim elektron mikroskobu veya TEM görüntüleme için hazırlayın. Otomatik buharlaşma için gece boyunca film üzerinde üç mikrolitre çözelti bırakın.
Işığın doğrudan çalışma alanına bakması için demir bir stand ile 530 nanometrede bir LED lamba kurun. Doğrudan LED lambanın altına entegre bir küre fotodiyot fotometresi yerleştirin. LED lambasını açın ve fotometrenin kapağını açın.
Işıntıyı kaydedin. İlgili yazılımı kullanarak lamba parametrelerini ayarlayın ve ışımayı santimetre kare başına 50 miliwatt olarak ayarlamak için miliamperdeki giriş akımını ayarlayın. IR783 / BC nanopartikül çözeltisini, BC konsantrasyonuna bağlı olarak deiyonize su ile 50 mikromolar'a seyreltin.
1.5 mililitrelik bir mikro tüpe 200 mikromolar IR783 / BC nanopartikül çözeltisi ekleyin. Tüpü, mikro tüpün boyutuna uyan bir oluğa sahip ve fotometre ile aynı yükseklikte bir köpük blok üzerine yerleştirin. Tüpün kapağını açın.
LED lambayı açın ve nanopartikül çözeltisini 1, 2, 3, 5, 7 ve 10 dakika boyunca ışınlayın. Işık ışınlamasından sonra, HPLC ile BC tüketimini ve Cb salınımını ölçün ve kalan BC ve Cb salınımını hesaplayın. IR783 / BC nanopartikülleri bu çalışmada bir flaş çökeltme yöntemi kullanılarak başarıyla üretildi.
Sentezlenen nanopartiküller mor bir çözelti olarak mevcutken, IR783'ün sulu çözeltisi maviydi. IR783 / BC nanopartikülleri, 0.089'luk bir polidispersite indeksi veya PDI ile ortalama 87.22 nanometre büyüklüğünde bir boyut sergiledi; dar bir boyut dağılımı gösterdi. Yüzey yükü yaklaşık eksi 29.8 milivolt idi ve IR783'ün negatif yüklü sülfonat gruplarını gösteriyordu.
Nanopartikül boyutu, üretimden sonra en az 48 saat boyunca 85 nanometrede tutulurken, PDI'sı 0.2'den az kaldı. İmalattan sonraki 0, 24 ve 48 saat içinde boyut dağılımında anlamlı bir değişiklik gözlenmedi. Daha hafif ışınlamadan sonra agregalar ve fragmanlar gözlendi.
Üç ve beş dakikalık ışık ışınlamasından sonra boyut ve dağılım değişiklikleri gözlendi. Prodrug BC 10 dakika içinde foto yarıldı. Bu arada, klorambucil aynı dönemde yaklaşık% 22'lik bir geri kazanım verimliliği ile serbest bırakıldı.
IR783 / BC nanopartikülleri, ışınlama yapmayan gruba kıyasla 530 nanometrede ışık ışınlaması altında insan kolorektal tümör hücreleri HCT 116 üzerinde önemli sitotoksisite göstermiştir. Mikro tüpün iç duvarına peptitlerin ucuyla sıkıca dokunmak ve mikro tüpü girdap üzerine sabit bir şekilde yerleştirmek önemlidir.
