Ce protocole fournit une référence sur la construction et la caractérisation des systèmes de colorant médicamenteux photosensibles, en particulier la configuration du rayonnement lumineux. Cette technique montre l’avantage d’une fabrication simple, d’une capacité de chargement de drogue élevée et d’une photocontrôleabilité. Cette technique peut être utilisée pour traiter la tumeur colorectale à l’aide de la fibre optique pour fournir des lumières pour activer la libération du médicament sur le site de la tumeur.
Commencez par peser 10 milligrammes de chlorambucil de dipyrrométhène de bore ou de prodrogue BC et dissolvez-le dans un millilitre de diméthylsulfoxyde, ou DMSO, dans un microtube de 1,5 millilitre. Couvrir la solution BC avec du papier d’aluminium, puis préparer 0,4 milligramme par millilitre IR783 dans de l’eau désionisée filtrée et transférer 300 microlitres dans un microtube de 1,5 millilitre. Placez ce micro tube sur un mélangeur vortex à 1500 RPM.
Ensuite, avec l’extrémité de la pointe de la pipette de 20 microlitres touchant la paroi interne du microtube, ajoutez 20 microlitres de la solution BC à la solution IR783 pendant 10 secondes à un taux constant. Placez le microtube sur le mélangeur vortex pendant 30 secondes pour obtenir les nanoparticules IR783/BC. Placez ensuite la solution de nanoparticules sur une grille entièrement recouverte de papier d’aluminium.
Centrifuger la solution de nanoparticules IR783/BC obtenue pendant 10 minutes à 2000 G et quatre degrés Celsius pour éliminer les agrégats. Recueillir le surnageant, en laissant environ 20 microlitres dans le tube pour éviter de déranger la pastille avant de la jeter. Après avoir centrifugé le surnageant deux fois pendant 30 minutes à 30 000 G et 4 degrés Celsius, prélever le précipité de nanoparticules des deux centrifications.
Remettez les nanoparticules en suspension dans 300 microlitres de PBS. Quantifier la teneur en IR783 et en BC par chromatographie liquide à haute performance, ou CLHP, en utilisant la méthode d’élution. Calculez l’efficacité d’encapsulation de la prodrogue, ou pourcentage EE, et la capacité de chargement ou le pourcentage de CL.
Mesurer la taille moyenne des nanoparticules IR783/BC avec un instrument DLS (diffusion dynamique de la lumière). Ajouter 200 microlitres de solution de nanoparticules IR783/BC dans une cuvette et insérer la cuvette dans le support pour mesure. Définissez le type de mesure comme taille et la température de mesure sur 25 degrés Celsius.
Effectuez trois mesures d’une durée de 20 secondes pour chaque mesure. Pour mesurer la charge de surface des nanoparticules IR783/BC avec l’instrument DLS, diluez 25 microlitres de solution de nanoparticules IR783/BC avec 725 microlitres d’eau désionisée dans un microtube de 1,5 millilitre. Ajouter la solution dans une cuvette de test de potentiel zêta.
Placez la cuvette dans la rainure de l’échantillon. Capsulez le sillon de l’échantillon. Ensuite, définissez le type de mesure sur le potentiel zêta et la température sur 25 degrés Celsius.
Effectuez 10 mesures. Une fois cela fait, préparez les échantillons pour l’imagerie par microscopie électronique à transmission, ou MET, en ajoutant 10 microlitres de solution de nanoparticules IR783 / BC sur un morceau du film de carbone troué sur une grille de cuivre de 300 mailles et en retirant sept microlitres du film de carbone troué. Laissez trois microlitres de solution sur le film pendant la nuit pour l’évaporation automatique.
Installez une lampe LED à 530 nanomètres avec un support en fer pour que la lumière fasse directement face au plancher d’opération. Placez un photomètre à photodiode à sphère intégratrice directement sous la lampe LED. Allumez la lampe LED et ouvrez le capuchon du photomètre.
Notez l’irradiance. Réglez les paramètres de la lampe à l’aide du logiciel associé et ajustez le courant d’entrée en milliampère pour régler l’irradiance à 50 milliwatts par centimètre carré. Diluer la solution de nanoparticules IR783/BC avec de l’eau désionisée à 50 micromolaires, en fonction de la concentration de BC.
Ajouter 200 micromolaires IR783/BC solution de nanoparticules dans un microtube de 1,5 millilitre. Placez le tube sur un bloc de mousse ayant une rainure adaptée à la taille du microtube et à la même hauteur que le photomètre. Ouvrez le capuchon du tube.
Allumez la lampe LED et irradiez la solution de nanoparticules pendant 1, 2, 3, 5, 7 et 10 minutes. Après irradiation lumineuse, quantifier la consommation de BC et le rejet de Cb par CLHP et calculer le rejet restant de BC et de Cb. Les nanoparticules IR783/BC ont été fabriquées avec succès dans cette étude à l’aide d’une méthode de précipitation éclair.
Les nanoparticules synthétisées étaient présentes sous forme de solution violette tandis que la solution aqueuse d’IR783 était bleue. Les nanoparticules IR783 / BC présentaient une taille moyenne de 87,22 nanomètres avec un indice de polydispersité, ou PDI, de 0,089; démontrant une distribution de taille étroite. La charge de surface était d’environ moins 29,8 millivolts, indiquant les groupes sulfonates chargés négativement de l’IR783.
La taille des nanoparticules a été maintenue à 85 nanomètres pendant au moins 48 heures après la fabrication, tandis que son PDI est resté inférieur à 0,2. Aucun changement significatif n’a été observé dans la distribution de la taille à 0, 24 et 48 heures après la fabrication. Des agrégats et des fragments ont été observés après une irradiation plus légère.
Des changements de taille et de distribution ont été observés après trois et cinq minutes d’irradiation lumineuse. Prodrug BC a été photoclivée en 10 minutes. Pendant ce temps, le chlorambucil a été libéré avec une efficacité de récupération d’environ 22% au cours de la même période.
Les nanoparticules IR783/BC ont montré une cytotoxicité significative sur les cellules tumorales colorectales humaines HCT 116 sous irradiation lumineuse à 530 nanomètres par rapport au groupe non-irradiation. Il est important de toucher fermement la paroi interne du microtube avec l’extrémité des peptides et de placer le microtube sur le vortex de manière stable.
