Colorado patates böceği, ılıman bölgedeki en ciddi patates zararlılarından biridir. Bu haşerenin bağışıklığı ve patogenezi ile ilgili çalışmalar esas olarak aktif aşamada gerçekleştirilir. Bununla birlikte, ılıman bölgede, bu haşere yaşam döngüsünün çoğunu kış uykusunda geçirir.
Bu çalışmada, Colorado patates böceğinin kış uykusuna yatması için bir yöntem ve kışın böcek toplama tekniği sunuyoruz. Bu yöntemin temel avantajı, herhangi bir kış uykusu döneminde virüs analizi için herhangi bir sayıda kışlayan bireyin elde edilmesine izin vermesidir. 25 x 25 x 40 santimetre boyutlarında sert ahşap çerçeveden yapılmış kafesler kullanın.
Kafes için bir çerçeve oluşturmak için en az iki santimetre kalınlığında ve dört santimetre genişliğinde tahta çıtalar kullanın. Kafesin içini, beş x üç milimetreden büyük olmayan paslanmaz çelik bir ağ ile örtün. Ağı tahta zımba ile sabitleyin.
Kafesin içini, metrekare başına 60 gram yoğunluğa sahip siyah sentetik bir jeotekstil ile hizalayın. Kafesin tepesine yaklaşık 60 santimetre yüksekliğinde sentetik yarı saydam nefes alabilen bir kumaş tüpünü sıkıca tutturun. Gerektiğinde topraktan çıkarmak için iki güçlü ipi kafesin dibine çaprazlayın ve sabitleyin.
Toprakta 40 santimetre derinliğinde bir çukur kazın. Deliğin üzerine kuru ot veya saman koyun. Kafesi, saman veya kuru ot kafesin duvarları ile toprak arasında olacak şekilde yerleştirin.
Kafesleri, böceklerin toplandığı aynı patates tarlasından toprakla doldurun. Su geçirmez sıcaklık ve nem dataloggerlarını kafeslere gerekli derinliklerde monte edin. Patates fidelerini böceğin girişinden üç ila dört hafta önce kafesin içine dikin ve orta derecede sulayın.
Bir sentetik kumaş tüpünü, kafesin dışına monte edilmiş herhangi bir malzemeden bir çubuğa dikey olarak sabitleyin. Pestisit içermeyen patates tarlalarında yetişkin böcekleri patates bitki örtüsünün sonuna doğru elle toplayın. Toplanan böcekleri kafeslere yerleştirmeden önce böcekleri beslemek için patates üstleri içeren 20 litrelik plastik kovalarda saklayın.
Kovaları nefes alabilen bir bezle örtün. Sentetik kumaş ağ ile kaplanmış patates bitkilerinin üzerine 200'den fazla böcek bireyi yerleştirmeyin. Patates üstleri tüketildiğinde, su içeren plastik bir kavanoza yerleştirilmiş taze olanları ekleyin ve daha sonra patates üstlerini günlük olarak değiştirin.
Tüm böcekler kışlamak için toprağa girdikten sonra, sentetik kumaş tüpünü çubuktan çözün ve kumaşı yere koyun. Kafes yüzeyinin üzerindeki karı temizleyin. Kafesi her iki taraftan güçlü bir kürekle gevşetin.
Halatları kullanarak kafesi topraktan dışarı çekin. Kafesi laboratuvara getirin. Toprağı kafesten küçük porsiyonlarda çıkarın, büyük toprak parçalarını dikkatlice parçalayın ve cımbız kullanarak böcekleri izole edin.
Canlı böcekleri kadavralardan ayırın. Canlı, sağlıklı böcekler, etraflarındaki toprağı sıkıştırır, beşik adı verilen bir hava boşluğu oluşturur ve bu nedenle topraktan kolayca ayrılır. Mantarlar tarafından öldürülen böcekler mumyalanır veya yüzeyde görünür miselyum bulunur.
Bakteriyel olarak ayrışan böcekler karanlıktır. Tüm böceklerin izole edildiğinden ve zarar görmediğinden emin olmak için toprağı bir elek ile eleyin. Mantar enfeksiyonu veya bakteriyel ayrışma semptomları olan kadavraları, ileride tanımlamak için ayrı bir steril Falcon tüpüne yerleştirin.
Canlı böcekleri, nemli bir pamuk topu içeren kapalı havalandırmalı kaplarda analiz edilene kadar buzdolabında 2 santigrat derece sıcaklıkta saklayın. Hemolenf toplamak için, bir insülin iğnesi ile aort altında karnın yan kısmında bir delik açın. Bağırsakları izole etmek için, kafa kapsülünü kesin, tüm içeriği fosfat tamponlu bir Petri kabına sıkın.
Bağırsakları ayırın ve yağdan ve Malpighian damarlarından temizleyin. Ön bağırsak, orta bağırsak veya arka bağırsak gibi bağırsağın istenen bir bölümünü ayırın. Yağ gövdesini izole etmek için, bağırsağın izolasyonundan sonra diğer dokulardan ayırın.
Entomopatojenik mantarları kadavralardan izole etmek için mumyalanmış kadavraları steril bir nem odasına koyun. % 0.4 laktik asit ile Sabouraud dekstroz agar üzerine kaplama yapmak için böceklerin iç içeriğinden hava conidia veya sklerotia kullanın. Bakteriyel çürüme belirtileri olan kadavralardan bakterileri izole edin.
Bir böceğin kafasını kesin, iç içeriği sıkın ve daha sonra bakteriler için ortam üzerine kaplama yapmak üzere tüplerde toplayın. 30 santimetre derinlikteki kafeslerde sıfırın altındaki sıcaklıklar, Kasım ayının sonundan Nisan ayının başına kadar kaydedildi. Bu dönemde ortalama sıcaklık 3.3 0.1 Santigrat idi.
Kaydedilen en düşük sıcaklık Şubat ortasında 7,9 santigrat derece oldu. Böcek ölümleri kış uykusu sırasında arttı ve ortaya çıkmadan önce ilkbaharda maksimuma ulaştı. İlk böcek sayısı 2.000 idi ve bunlardan 1.470 kişi hayatta kaldı.
Böylece, kış uykusu sırasında böceklerin hayatta kalma oranı% 61 idi 530 kadavra üzerinde yapılan bir analiz, kış uykusu döneminde% 53'ünün bakteriyel ayrışma semptomları ve% 25'inin mantar enfeksiyonu semptomları ile karakterize olduğunu gösterdi. Beauveria, entomopatojenik mantarların izole kültürleri arasında baskındı. Metarhizium, Cordyceps ve Lecanicillium çok daha az yaygındı.
Kadavralardan izole edilen ve bakteriyel ayrışma belirtileri gösteren bakteriler arasında Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas, Serratia, Rahnella ve Glutamicibacter cinslerine ait türler tespit edilmiştir. Bu yöntemin kullanılması, kışın tarladan Colorado patates böcekleri elde etme sorununu çözebilir. Böceklerin düşük ölüm oranı ile ihtiyacınız olduğu kadar birey elde etmenizi sağlar.
Böceklerin kış uykusuna yatmasının çeşitli yönlerinin incelenmesi, bu haşerenin kontrolüne yaklaşımı geliştirmek için hem temel hem de uygulamalı açıdan önemlidir. Ve elbette, bu teknik toprakta kışı geçiren diğer böcek türleri için uyarlanabilir.
