Name: maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

אנו להכיר הנג לין לחלומות כריס פטון, פטרינה ג'ונסון, קלייר Doig על תרומתם לפיתוח שיטות התחזוקה שלנו המושבה, שלושה אנונימיים בודקים עבור שלהם הצעות אשר עזר לשפר את כתב היד. המחקר שלנו נתמך על-ידי תוכנית גרנט מלגת אל תסמכו עלי הבריאות הלאומי, מועצת המחקר הרפואי ותרגום מענק של טרסט. סעיף זה נמען של הכשרה מחקר הממשלה האוסטרלית תוכנית מלגה.

דם האכלה של יתושים בנושאים האנושית אושרה על ידי אוניברסיטת מלבורן ועדת האתיקה האנושית (אישור #: 0723847). כולם מתנדבים בתנאי הודיע הסכמה בכתב.
1. זחל לגידול
הערה: יתושים נערכים 26 ± 0.5 ° C ו- 50-70% לחות יחסית, עם photoperiod h (בהירה: כהה) 12:12 עבור פרוטוקול תחזוקה זה המושבה. תנאים ?...

בעקבות פרוטוקול המובאת כאן לשם קיום Wolbachia-נגועים aegypti Ae. עליך לוודא כי יתושים בריא איכות עקבית מיוצרים לניסויים, פתח שדה לעיתונות. בניגוד פרוטוקולים אחרים זה סדר עדיפויות בייצור המוני כמויות היתושים (ראה התייחסות57), השיטות הם התמקדו למקסם את הכושר שלהם, הן בתוך דורות ?...

Aedes aegypti יתושים אחראים להעברת חלק arboviruses החשוב ביותר בעולם, לרבות קדחת דנגה, Zika ו- chikungunya1. וירוסים אלה הופכים איום גובר על הבריאות העולמי ההתפלגות הנפוצה של Ae. aegypti באזורים הטרופיים ממשיך להרחיב את2,3,4. נקבה Ae. aegypti מעדיפים ניזונים דם אנושי5 , ולכן נוטים בקרבה לבני אדם, במיוחד באזורים עירוניים איפה אוכלוסיות הצפופים ביותר. באמצעות הקשר הזה קרוב עם בני אדם הם הסתגלו גם להתרבות בבתי גידול מלאכותיים, כולל צמיגים, סירים, מרזבים מים טנקים6,7. Aegypti Ae. גם ברצון להתאים לסביבות מעבדה שבה הם יכול להישמר ללא כל דרישות מיוחדות לאחר איסוף ישירות מהשדה, בניגוד כמה מינים אחרים סוג אאדס 8, 9,10. שלהם קלות התחזוקה ראה אותם למד נרחב במעבדה במגוון רחב של תחומים, בסופו של דבר במטרה לשלוט היתושים מחלות יכולה לשדר.
באופן מסורתי, arboviral שליטה מתבסס בעיקר על שימוש חומרי הדברה כדי להפחית אוכלוסיות יתוש. עם זאת, יש עניין גובר על גישות בהם יתושים ששונה גדלו במעבדה, ואז שוחרר לאוכלוסיות טבעי. היתושים שפורסמו עשוי להיות שונה גנטית11,12,13, ביולוגית14,15, דרך הקרנה16, טיפול כימי17,18, או עם בשילוב טכניקות19 לדכא אוכלוסיות של יתושים או להחליף אותם עם יתושים כי הם דברים מעוותים שידור arboviral20.
Wolbachia הם חיידקים כיום בשימוש כסוכן הדברה ביולוגית של arboviruses. זנים שונים של Wolbachia שהוכנסו לאחרונה Ae. aegypti השפעול באמצעות עובריים microinjection21,22,23,24. זנים אלו להפחית את היכולת של arboviruses להפיץ, לשכפל, היתוש, הולכת ופוחתת שלהם שידור פוטנציאליים23,25,26,27,28 . זיהומים Wolbachia מועברים מאמא לצאצאים, אולם זנים מסוימים לגרום עקרות כאשר נגוע זכרים להזדווג עם נקבות נגוע22. Wolbachia-זכרים הנגוע ולכן יכול להיות משוחרר בכמויות גדולות כדי לדכא אוכלוסיות יתושים טבעי, הפגין לאחרונה15,מינים אחרים אאדס 29. עם זאת, מאז Wolbachia לעכב גם שידור arboviral ב Ae. aegypti, יתושים יכולים גם להשתחרר כדי להחליף את אוכלוסיות מקומיות וקטורים עניים. Ae. aegypti השפעול נגוע Wolbachia עכשיו שוחררו בתוך השדה במספר מדינות באמצעות זה הצגנו14,30,31.
Wolbachia-גישות מבוססות עבור פקד arboviral להסתמך על הבנה צליל של האינטראקציות בין Wolbachia, היתוש ואיכות הסביבה. Wolbachia להתרחש באופן טבעי במגוון רחב של חרקים, זנים מוחדרים יתושים מגוונים ב שלהם אפקטים32. כמו סוגים חדשים של זיהום Wolbachia הם מוחדרים Ae. aegypti24, זה הכרחי לאפיין כל אסנן והשפעותיהם על כושר יתושים, רבייה, הפרעה arboviral תחת מגוון תנאים. ניסויים קפדניות במעבדה ולכן נדרש להעריך את פוטנציאל Wolbachia זנים להצליח בתחום.
שדה פתוח מהדורות של Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia יכול לעיתים קרובות דורשים אלפי עד עשרות אלפי יתושים לפי אזור שחרור להיות גדלו כל שבוע14,30,31. ניתן לשפר את ההצלחה של מהדורות הראשונית על ידי שחרור יתושים בגודל גדול להגדיל את פוריות33 ,34,הצלחה35ההזדווגות שלהם. היתושים צריך גם להתאים את התנאים שהם יחוו בשטח, אולם לטווח ארוך מעבדה לגידול עלולה לגרום לשינויים בהתנהגות, פיזיולוגיה אשר יכול להשפיע על שדה ביצועים36,37, 38.
אנו מתארים פרוטוקול פשוט לגידול Ae. aegypti במעבדה בעזרת ציוד בסיסי. פרוטוקול זה מתאים הן פראי-סוג של Wolbachia-נגוע היתושים, שהאחרון שבהם תוכל לדרוש תשומת לב מיוחדת כמו כמה זנים Wolbachia יש השפעות משמעותי על יתושים חיים-היסטוריה תכונות39, 40. התנאים rearing למנוע צפיפות יתר ותחרות לאוכל לייצר יתושים בגודל אחיד, אשר הוא קריטי עבור וקטור כשירות וניסויים כושר, והוא מבטיח היתושים יהיו בריאים לשחרור שדה41 . אנחנו גם לוקחים אמצעי הזהירות האפשריים כדי למזער את עיבוד מעבדה ואת נישואי קרובים על-ידי הפחתת לחצים בררניים, להבטיח כי הדור הבא נדגמים מתוך מאגר גדול, אקראי. עם זאת, סביבות מעבדה הן שונה במובהק מתנאי שדה, תחזוקה לטווח הארוך בתנאים רגועים יכול להפחית את הכושר של יתושים עם שחרורם לתוך שדה37,42,43 . לכן נחצה נקבות משורות מעבדה זכרים שנאספו שדה מעת לעת, וכתוצאה מכך המושבות אשר דומים גנטי להשוואות ניסיוני, שהם להתאים יעד אוכלוסייה של שדה39. השיטות אינן דורשות שום ציוד מיוחד, וניתן לשנותם האחורי עשרות אלפים של אנשים בכל שבוע עבור שדה לעיתונות. הפרוטוקול קובע סדר עדיפויות של גם בחדר הכושר של יתושים בתוך ועל -פני דורות, שיקול חשוב עבור חרקים המיועדים הממסד באוכלוסיות טבעיות. הפרוטוקול מתאים ברוב מעבדות הדורשים תחזוקה של Ae. aegypti, במיוחד להשוואות ניסיוני איפה חשובים איכות עקבית של יתושים, relatability לשדה.

<table width="1661">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">Wild type Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:1087px;">Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w Mel-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w AlbB-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w MelPop-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Instant dried yeast</td>
			<td style="width:168px;">Lowan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">5 L plastic tub</td>
			<td style="width:168px;">Quadrant</td>
			<td style="width:119px;">Q110950</td>
			<td>Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)</td>
			<td style="width:168px;">Tetra</td>
			<td style="width:119px;">16152</td>
			<td>Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic containers</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Clicker counter</td>
			<td style="width:168px;">RS Pro</td>
			<td style="width:119px;">710-5212</td>
			<td>Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rearing trays</td>
			<td style="width:168px;">Gratnells</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cages</td>
			<td style="width:168px;">BugDorm</td>
			<td>DP1000</td>
			<td>Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td style="width:119px;">AA272225</td>
			<td>Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup lid</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td>GB030005</td>
			<td>Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cotton wool</td>
			<td style="width:168px;">Cutisoft</td>
			<td style="width:119px;">71841-13</td>
			<td>Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">White Sugar</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rope</td>
			<td style="width:168px;">M Recht Accessories</td>
			<td>C323C/W</td>
			<td>Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic cup (large)</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Sandpaper</td>
			<td style="width:168px;">Norton Master Painters</td>
			<td>CE015962</td>
			<td>Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Filter paper</td>
			<td style="width:168px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-150</td>
			<td>Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Latex gloves</td>
			<td style="width:168px;">SemperGuard</td>
			<td>Z560979</td>
			<td>Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia

Aedes aegypti יתושים נגועים השפעול Wolbachia מנוצל ב תוכניות כדי לשלוט על התפשטות arboviruses כגון קדחת דנגה, chikungunya Zika. Wolbachia-יתושים נגועים יכול להשתחרר לתוך השדה גם להפחית את אוכלוסיית גדלים באמצעות matings לא תואמת או להפוך אוכלוסיות עם יתושים המהווים עקשן וירוס שידור. אסטרטגיות אלו להצליח, היתושים שוחרר לתוך השדה מהמעבדה חייב להיות תחרותי עם יתושים מקורית. עם זאת, שמירה על יתושים במעבדה יכול לגרום נישואי קרובים, סחף גנטי, עיבוד מעבדה אשר יכול להפחית את הכושר שלהם בתחום עשויים לבלבל את התוצאות של ניסויים. כדי לבדוק את התאמתו של זיהומים שונים Wolbachia לפריסה בשטח, זה הכרחי לשמור על יתושים בסביבה מעבדתית מבוקרת על פני דורות רבים. אנו מתארים פרוטוקול פשוטים לשמירה על יתושים Ae. aegypti במעבדה, אשר מתאים הן Wolbachia-יתושים נגועים ופראי-סוג. השיטות למזער מעבדה הסתגלות וליישם outcrossing כדי להגביר את הרלוונטיות של ניסויים כדי שדה יתושים. בנוסף, מושבות נשמרים בתנאים אופטימליים כדי למקסם את הכושר שלהם עבור מהדורות בשטח פתוח.

איור 4 ממחישה את ההשפעות של תזונה שיוצרת על הפיתוח של Ae. aegypti הזחלים. מתי מכולות מסופקים עם 0.25 מ ג של מזון לכל זחל ליום או פחות, מגביר את קצב ההתפתחות עבור זכרים ונקבות, סינכרונית פחות מאשר במיכלים מסופק עם 0.5 מ ג של מזון. אם במזון הולם זה אינו מסופק בכל מש?...

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

שמירה על Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia

Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia שוחררו לאוכלוסיות טבעי לדכא את השידור של arboviruses. אנו מתארים שיטות האחורי Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia במעבדה ניסויים ולשחרר שדה, נקיטת אמצעי זהירות כדי למזער את עיבוד מעבדה ובחירה.

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia זיהום חיידקי ב תסיסנית

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

הזרקת dsRNA לתוך יתושים א נקבה aegypti

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Microinjection עוברים א aegypti לקבל יתושים טראנסגנטי

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

פרוטוקול זיהומים דנגי ב יתושים (א aegypti) ו הפנוטיפ קביעת זיהום

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

שמירה ב Wolbachia בינוני סלולרי חינם

In this video protocol, procedures are demonstrated to (1) purify Wolbachia symbionts out of cultured mosquito cells, (2) use a fluorescent assay to ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Dissection של בלוטות הרוק midgut ו מ AE. aegypti יתושים

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

בניית יתוש עדיף: זיהוי הגנים הפעלת מלריה קדחת דנגי ההתנגדות ב א gambiae וא aegypti יתושים

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi בתיווך ג&#39;ין מציאה ו<em&gt; In vivo</em&gt; Diuresis Assay ב נקבה בוגרת<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; יתושים

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

הקלטות פיסיולוגיות וRNA רצף של האיברים התעוררו אצל של יתוש הקדחת הצהובה<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

תרבות הגוף השמן איברים במערכת Aedes Aegypti, וקטור של וירוס Zika

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...