ELIME (انزيم مرتبط المناعي المغناطيسي الكهروكيميائية) طرق الكشف عن السموم الفطرية

Summary

ويتجلى بروتوكول للكشف عن trichothecenes (السموم الفطرية للقلق على الصحة البشرية) باستخدام أسلوب الفحص وضعت حديثا على أساس أسلوب immunochemical تنافسية وكشف الكهروكيميائية النهائي.

Abstract

المناعية هي بديل صالح للاستهلاك كمية HPLC أكثر كلفة والوقت أو GC ^{1 ، 2} طرق للكشف فحص السموم الفطرية الخطرة في السلع الغذائية. في هذا البروتوكول نظهر كيفية تلفيق واستجواب انزيم الكهروكيميائية تنافسية مقايسة immunomagnetic مرتبط على أساس استخدام الخرز المغناطيسي ودعما قويا لسلسلة immunochemical ³ و أقطاب الشاشة المطبوعة والاستشعار عن منصة.

لدينا وسيلة تهدف إلى تحديد المبلغ الإجمالي للHT - 2 و T - 2 السموم ، والسموم الفطرية تعود لعائلة trichothecenes وقلق كبير على صحة الإنسان ^4. استخدام الأجسام المضادة لاستنساخ عبر التفاعل مع 100 ٪ من نحو 2 و HT - 2 - T يسمح للكشف عن السموم في وقت واحد على حد سواء مع حساسية مماثلة ^5.

الخطوة الأولى للمقايسة لدينا هي الخطوة طلاء أين نحن شل HT2 - KLH السم المتقارن على السطح من الخرز المغناطيسي. بعد خطوة الحجب ، من الضروري تجنب الجواذب غير محددة ، وإضافة ريتوكسيماب يسمح المنافسة بين يجمد HT - 2 و HT - 2 مجانا أو T - 2 موجودة في العينة أو الذائب في محلول قياسي.

في نهاية هذه الخطوة من حيث المنافسة ، وكمية من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ترتبط يجمد HT - 2 سوف تكون متناسبة عكسيا مع كمية من السم في حل العينة.

وتستخدم الأجسام المضادة الثانوية المسمى مع الفوسفاتيز القلوية (ا ف ب) للكشف عن الربط بين الأجسام المضادة المحددة ويجمد HT - 2. يتم تنفيذ الخطوة النهائية قياس ألقت عليه قسامة التعليق حبة المغناطيسي ، والمقابلة لحل محدد / نموذج قياسي ، على سطح القطب الشاشة المطبوعة في العمل ، ويتم يجمد الخرز المغناطيسي ومركزة عن طريق المغناطيس وضعت على وجه التحديد في إطار الشاشة المطبوعة الكهربائي. بعد دقيقتين من الحضانة بين حبات المغناطيسي وركيزة لأب ، يتم الكشف عن المنتج الأنزيمية التي Voltammetry نبض التفاضلية (DPV) باستخدام أداة محمولة (PalmSens) قادرة أيضا على بدء تلقائيا eight قياسات ضمن فاصل زمني من بضع ثوان.

Protocol

1) حظر الخرز المغناطيسي المغلفة :

المضي قدما على النحو التالي لعرقلة الخرز المغناطيسي المغلفة :

1. إعداد مجموعة من أنابيب إيبندورف 2 مل ؛
2. التجانس (الهز ولكن ليس vortexing) حبات مغلفة المغناطيسي (انظر الملحق لإعداد حبات المغناطيسي مغلفة) باستخدام عينة الدورية خلاط ؛
3. مباشرة بعد التجانس ، ماصة 10 ميكرولتر من الخرز المغناطيسي في كل الأنابيب المغلفة إيبندورف منفصلة ؛
4. إضافة 1ml من الحليب منزوع الدسم عرقلة الحل في كل أنبوب إيبندورف من المجموعة ؛
5. اسمحوا الخرز المغناطيسي احتضان لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة على خلاط نموذج الدورية ؛
6. إزالة الحجب الحل : أن تفعل ذلك في مكان الأنبوب المكثف الجسيمات المغناطيسية مع الجزء المغناطيسي وضعت على لمدة 2 دقيقة (انظر الخرز المغناطيسي شائكة على الجدار الجانبي للأنبوب) ؛ ماصة بعناية قبالة طاف ، تاركا حبات دون عائق ؛
7. إضافة 1 مل من نان PBS عازلة + ₃ + جيش صرب البوسنة باعتبارها حلا لتخزين كل أنبوب ؛
8. تخزين حبات المغناطيسي المغلفة وسدت في 4 درجات مئوية (يرجى ملاحظة أن حبات المغناطيسي المغلفة مستقرة لمدة لا تقل عن 2 أشهر على 4 درجات مئوية) ؛

2) سلسلة مناعية على حبات المغناطيسي لبناء منحنى المعايرة وتحليل العينات

المضي قدما على النحو التالي أن يكون جاهزا الخرز المغناطيسي لقياس :

1. تأخذ واحدة إيبندورف أنبوب (2 مل) من حل المغلفة وسدت لكل استخراج عينة أنت ذاهب لتحليل ؛
2. أخذ أنبوب إيبندورف إضافية لكل حل calibrant العمل ؛
3. التجانس الخرز المغناطيسي لمدة 2 دقيقة على خلاط نموذج الدورية قبل الاستعمال ؛
4. إزالة السائل التخزين باستخدام الجسيمات المغناطيسية المكثف ؛
5. تغسل حبات المغناطيسي ثلاث مرات بمحلول الغسيل PBS / جيش صرب البوسنة. إزالة غسل السائل ؛
6. الخطوة المنافسة : أضف لكل أنبوب يحتوي على حبات غسلها المغناطيسي ، واستخراج عينة من 200μl أعدت ، واستخدام أنبوب واحد لكل حبة المغناطيسي العينة. كرر نفس الإجراء لكل حل القياسية. إضافة 200 ميكرولتر من محلول ريتوكسيماب إلى أنبوب كل حبة المغناطيسي. اسمحوا الخرز المغناطيسي احتضان لمدة نصف ساعة على خلاط نموذج الدورية في درجة حرارة الغرفة ؛
7. إزالة أنابيب من إيبندورف الحل المستخدمة في خطوة المنافسة ؛
8. وسم الخطوة : أضف 400μl من الأجسام المضادة الثانوية المسمى لكل أنبوب المغناطيسي إيبندورف حبة. اسمحوا الخرز المغناطيسي احتضان لمدة نصف ساعة على خلاط نموذج الدورية في درجة حرارة الغرفة ؛
9. إزالة العلامات من حل أنابيب إيبندورف ؛
10. تغسل حبات المغناطيسي ثلاث مرات مع PBS / توين ® 20 حل الغسيل. إزالة السائل ؛
11. Resuspend 100μl مع كل من إدارة مكافحة المخدرات العازلة قسامة من الخرز المغناطيسي. الآن الخرز المغناطيسي مستعدون للخطوة القياس الكهروكيميائية ؛

3) جمعية PalmSens مع الخيارات (مسك الغزال) المضاعف

يرجى ملاحظة : المنتج من التحلل الأنزيمي الركيزة الأخطاء سطح القطب ، ولهذا السبب هناك حاجة إلى القطب جديد لكل قياس.

1. توصيل جهاز الكمبيوتر المحمول إلى الكمبيوتر عن طريق كابل PalmSens المسلسل ؛
2. توصيل القابس من 9 - DIN مع PalmSens CH8 المضاعف.
3. اتصال كبل تسلسلي الثمانية قناة اتصال مع مسك الغزال الكهربائية CH8 المضاعف ؛
4. مكان الشريط الكهربائي على كتلة المغناطيس ثمانية. الالتفات الى كل مكان تحت كل أقطاب المغناطيس العمل (لاحظ ، على ضرورة وجود مغناطيس كهربائي واحد لكل أمر حتمي وإلا سوف لا الجسيمات المغناطيسية أن يتركز على منطقة القطب العمل) ؛
5. سد العجز في قطاع غزة إلى ثمانية أقطاب كهربائية قناة اتصال مسك الغزال ؛

لقياس DPV استخدام المعلمات التالية في المربعات المناسبة :
E تبدأ : 0 (V) ؛ نهاية E : 0.6 (V) ؛ الخطوة الخامسة : 0.016 (V) ؛ E نبض : 0.0339 (V) ؛ E تكييف : معدل المسح الضوئي ؛ : ؛ 0 (V) 0 (V) ترسب E : 0.1 (V / ث) ؛ T نبض : 0.06 (ق) ؛ T تكييف : 0 (ق) ؛ T ترسب : 0 (ق) ؛ T موازنة : 8 (ق).

4) رد الفعل الأنزيمية والقياس الكهروكيميائية

1. التجانس التي تهز برفق كل أنبوب إيبندورف تحتوي حبات المغناطيسي على استعداد للخطوة القياس الكهروكيميائية من أجل الحصول على تعليق من الخرز كذلك فرقت المغناطيسي ؛
2. ماصة من كل إيبندورف ، مباشرة بعد التجانس ، وقسامة من 20 ميكرولتر من التشتت حبة المغناطيسي على سطح القطب المقابل العمل. لكل قطب من استخدام شريط واحد 20 ميكرولتر من الخرز المغناطيسي المأخوذة من أنابيب إيبندورف مختلفة (على سبيل المثال لاستخدام القطب eight eight إيبندورف مختلفة) ؛
3. إضافة 80 ميكرولتر حل الركيزة الأنزيمية على القطب الأول. بدء العد التنازلي 2 دقيقة. بعد 14 ثانية ، إضافة 80 ميكرولتر من محلول الركيزة الأنزيمية على القطب الثاني. بعد 14 ثانية أخرى ، إضافة 80 ميكرولتر من محلول الركيزة الأنزيمية في القطب الثالث. المضي قدما في الوقت نفسه مادباerval (14 ثانية) حتى القطب الماضي (وهذا يعني : كل قطرة من قسامة الركيزة مع فترات من 14 ثانية). ويتم احتساب الوقت الفاصل الزمني من 14 ثانية والوقت اللازم من قبل potentiostat لأداء القياس ؛ من المذكرة ، فإن الحل 80 ميكرولتر على كل أجهزة الاستشعار ينبغي أن تغطي القطب العمل ، ومرجعية وصفة طبية. وعلاوة على ذلك ، ينبغي للحلول لكل مجس لا تتلامس مع حلول من الأقطاب الكهربائية المجاورة.
4. بعد 2 دقيقة العد التنازلي من اضافة اولى حل الركيزة الأنزيمية ، بدء القياس الكهروكيميائية ؛
5. استخدام برامج لايت PalmSens للحصول على قمم الحالية (أمبير) لكل حل.

5) حساب

إنشاء منحنى المعايرة باستخدام معادلة لوجستية 4 معلمات وحساب المبلغ الإجمالي تركيز السم في HT-2/T-2 نانوجرام لكل ملليلتر لكل عينة تحتوي على أنبوب إيبندورف مجهولة.

البيانات التجريبية ، وارتفاع الذروة (أمبير) مقابل تركيز calibrants (نانوغرام / مل) ، يجب أن تكون مجهزة لاستعمال غير الخطية أربعة المعلمة لوجستية (4 - PL) مؤامرة المعادلة (1) (سيغما باستخدام قطعة أو 8.0 Kaleidagraph). يعتمد عادة غير الخطية 4 - PL نموذج لوصف المقايسات ملزم يجند (LBAs) ^6.

(1)
أ ، ب ، X0 ، y0 معلمات اللوجستي والتي قدمها البرنامج مؤامرة سيغما تناسب المنحنى.
استخدام صيغة لحساب يفسر من محتوى HT-2/T-2 السم المبلغ الإجمالي في حل استخراج عينة المخففة
(2)
x هو تركيز كتلة من المبلغ الإجمالي للHT-2/T-2 السموم في حل استخراج المخفف ، وتحسب من المعادلة 4 معلمات لوجستية في نانوغرام لكل milliltre (نانوغرام / مل)
y هو القيمة الحالية في أمبير الحصول على عينة غير معروفة

ملحق

6) المغناطيسي الخرز المغلفه

المضي قدما على النحو التالي أن يكون مطلي الخرز المغناطيسي :

الغسيل الداخلي

1. التجانس Dynabeads tosylactivated ® M - 280 (2 × الأسهم حل حبات 109 / مل) من الهز وvortexing (سرعة قصوى) لمدة 1 دقيقة (تجنب الرغوة) (يرجى ملاحظة تركيز حبات المغناطيسي يجب أن يكون دائما هو نفسه لضمان تكرارية في قياس) ؛
2. ماصة فورا 1 مل من الخرز والمتجانس أعلاه في أنبوب 2 مل إيبندورف ؛
3. وضع أنبوب في الجسيمات المغناطيسية المكثف مع الجزء المغناطيسي وضعت على لمدة 2 دقيقة (انظر الخرز المغناطيسي شائكة على الجدار الجانبي للأنبوب) ؛
4. ماصة بعناية قبالة طاف ، تاركا حبات دون عائق ؛
5. إزالة أنبوب إيبندورف المكثف من الجسيمات المغناطيسية وresuspend حبات في 1 مل من 0.1 درجة الحموضة عازلة M بورات 9.5. المزيج برفق لمدة 2 دقيقة في الخلاط عينة بالتناوب لمدة 2 دقيقة ؛
6. ماصة قبالة طاف ؛
7. ماصة 1 مل من محلول بورات عازلة داخل الأنبوب إيبندورف. الخرز المغناطيسي على استعداد الآن للخطوة الطلاء ؛

طلاء الداخلي

8. إضافة 600 مل من HT - 2 مترافق مع الحل KLH الأسهم (الخادم Keyhole هيموسيانين بطلينوس) إلى 1 مل من الخرز المغناطيسي) (نهائي HT - 2 - KLH تركيز 375 ملغ / مل) ؛ الخرز المغناطيسي احتضان والحل HT - 2 - لKLH 20h عند 37 درجة مئوية * مع دوران بطيء على الميل الدورية خلاط نموذج ؛
9. بعد مكان الحضانة الأنبوب المكثف في الجسيمات المغناطيسية وماصة قبالة طاف ؛
   تغسل حبات مغلفة مرتين مع 1 مل من محلول العازلة PBS / جيش صرب البوسنة. بين كل غسيل إزالة PBS / BSA الحل. أجريت كل خطوة الغسيل وضع الخرز المغناطيسي وPBS / جيش صرب البوسنة على خلاط الدورية لمدة 5 دقائق ؛
10. تغسل حبات المغناطيسي به مرة واحدة 1 مل من محلول العازلة TRIS / جيش صرب البوسنة. إزالة TRIS / حل جيش صرب البوسنة. القيام بهذه الخطوة عن طريق وضع الخرز المغناطيسي والعازلة TRIS / جيش صرب البوسنة على الدورية خلاط لمدة 4 ساعات في 37 درجة مئوية * ؛
11. تغسل حبات المغناطيسي مرة واحدة باستخدام 1ml من منتعشة (يحتفظ بها في الثلاجة على 4 درجات مئوية) PBS / BSA حل العازلة. إزالة PBS / BSA الحل. تنفيذ هذه الخطوة وضع الخرز المغناطيسي والعازلة PBS / جيش صرب البوسنة على الدورية للخلاط 5min في درجة حرارة الغرفة ؛
12. بعد الغسيل السائل الخطوة إزالة كافة الغسيل وإضافة 1 مل PBS العازلة نان + ₃ + جيش صرب البوسنة وتخزين السائل ؛
13. تخزين حبات المغناطيسي المغلفة في 4 درجات مئوية (يرجى ملاحظة أن حبات المغناطيسي المغلفة مستقرة لمدة لا تقل عن 2 أشهر على 4 درجات مئوية) ؛

* ولهذا الغرض يوضع في الفرن خلاطة مجهزة حفرة الذي يسمح للالإدراج من كابل لامدادات الطاقة. بدلا من ذلك يمكن أن يوضع في الخلاط في غرفة thermostated عند 37 درجة مئوية.

7) إعداد واستخراج عينة

25 غ من العينة المطحون ناعما (أغذية الأطفال أو الفطور الحبوب) نحنighed في وعاء الخلاط وانتزعت مع 100 مل من أسيتونتريل / المحلول المائي (86/14) لمدة 3 دقائق في خلاط عالية السرعة. بعد الطرد المركزي عند 4000 دورة في الدقيقة (3000 ز) لمدة 5 دقائق ، اتخذت 8 مل من طاف وتنقيته مع العمود Mycosep ، والمجففة 4 مل من مستخلص تنظيفها تحت تدفق النيتروجين. ويمكن تخزين العينات المجففة في -30 درجة مئوية تصل إلى عدة أشهر.

8) إعادة تشكيل نموذج

إفطار الحبوب

إعادة تشكيل حبوب الافطار المجففة استخراج (الغذائية من الحبوب المخصصة للاستهلاك تستند الكبار) مع 40 مل من الحموضة PBS 7.4. بهذه الطريقة سوف عينة مع تركيز السم المساواة القانونية للحد من المفترض (200 نغ / غ) في خطوة تعطي قياس إشارة سقوطه في منتصف نطاق العمل.

طعام للأطفال

إعادة تشكيل أغذية الأطفال المجففة استخراج (الغذائية من الحبوب المخصصة للاستهلاك تستند الرضع) مع 4 مل من برنامج تلفزيوني. بهذه الطريقة سوف عينة مع التركيز على قدم المساواة من السموم للحد من المفترض القانونية (20-25 نانوغرام / غرام) في خطوة تعطي إشارة القياس التي سقطت في منتصف نطاق العمل.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

وقد شهد استخدام الأجسام المضادة وتحقيق الاعتراف الجزيئية البيولوجية استخدام تقنيات الاستشعار عن بعد على نطاق واسع ل؛ منهجيات الكشف immunochemical ، مثل ELISAs وMEIAs ، هي ، في الوقت الحاضر ، من بين المنصات المستخدمة وتطبيقها في العديد من المختبرات ^7.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

اسم كاشف	شركة	فهرس العدد	تعليقات (اختياري)
كلوريد البوتاسيوم	سيغما	P9333
هيدروجين فوسفات البوتاسيوم	سيغما	P9791
الفوسفات ثنائي الصوديوم الهيدروجينية	سيغما	S3264
كلوريد الصوديوم	سيغما	S3014
2 MgCl اللامائية	سيغما	M8266
DEA (99.5 ٪)	سيغما	31589
حمض الهيدروكلوريك 37 ٪	سيغما	320331
H 3 BO 3	سيغما	B6768
تريس [hydroxymethyl] - aminomethane	سيغما	252859
BSA (ألبومين المصل البقري)	سيغما	A4503
هيدروكسيد الصوديوم	سيغما	S5881
توين 20	سيغما	P9416
نان 3	الدريتش	71290
1 - النفثول الفوسفات ثنائي الصوديوم الملح	Fluka	N7255
منزوع الدسم الحليب عرقلة الحل -- غير دهن الحليب الجاف	الحيوي راد	170-6404
HT - 2 مترافق مع KLH (الخادم Keyhole هيموسيانين البطلينوس) ، حل سهم (1 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني) :	Biopure	004050	تم الحصول على المتقارن HT - 2 - KLH - CDI حسب الطريقة التي تم تنشيط الحرة OH - مجموعات على موقف 3 و 4 في السم HT - 2 بواسطة N ، N' - carbonyldiimidazole (CDI) وتنشيط HT - 2 توكسين كان السماح للتفاعل مع aminogroups من البروتين (KLH) لإنشاء الربط carbammate مستقرة.
الثانوية الضد المسمى : مكافحة الماوس مفتش (H + L) من الخيل ، مترافق مع الفوسفاتيز القلوية ، وتركيز 1 ملغ / مل.	ناقلات مختبرات	AP - 2000
HT - 2 توكسين	Biopure
الخرز المغناطيسي : Dynabeads ®	Dynal	M - 280 Tosylactivated	تركيز 2 × 10 9 حبات / مل.

اسم كاشف	إعداد	تعليقات (اختياري)
الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) ، ودرجة الحموضة 7.4	حل 0،20 غرام من كلوريد البوتاسيوم ، 0.20 غرام من فوسفات هيدروجين البوتاسيوم ، 1،16 غرام من فوسفات الصوديوم والهيدروجين 8.00 جرام من كلوريد الصوديوم في 900 مل من الماء
الديثانولامين العازلة ، DEA ، 0.97 M + 1 ملم MgCl 2 + 0.15 م بوكل ، ودرجة الحموضة 9.8	حل 0.0476g من 2 MgCl اللامائية و7.3.59 غرام من بوكل في 300 ~ مل من الماء. بعد انحلال إضافة 51 مل من إدارة مكافحة المخدرات (99.5 ٪). ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 9.8 مع حمض الهيدروكلوريك (6 م). مخفف الى 500 مل من الماء.
بورات العازلة ، 0.1 م ، ودرجة الحموضة 9.5	حل 3،09 غرام من H 3 BO 3 في 300 ~ مل من الماء المقطر ، ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 9.5 و / أو حمض الهيدروكلوريك هيدروكسيد الصوديوم (6 م أو أقل تركيزات). مخفف الى 500 مل من الماء المقطر.
TRIS العازلة ، 0.2 م ، ودرجة الحموضة 8.5	حل 3،85 غرام من تريس [hydroxymethyl] - aminomethane في 100 مليلتر من الماء. ضبط درجة الحموضة إلى 8.5 و / أو حمض الهيدروكلوريك هيدروكسيد الصوديوم (6 م أو أقل تركيزات). مخفف الى 200 مل من الماء.
TRIS عازلة + حل جيش صرب البوسنة (0.1 ٪) ، ودرجة الحموضة 8.4	حل 0.050 غرام من جيش صرب البوسنة في 50 مل من الحموضة عازلة TRIS 8.4.	يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام.
PBS عازلة + توين ® 0.05 ٪	حل 0.250 غرام من توين 20 في 500 مل من المخزن برنامج تلفزيوني أعد سابقا ، ودرجة الحموضة 7.4
PBS العازلة حل جيش صرب البوسنة + 0.1 ٪	حل 0.050 غرام من جيش صرب البوسنة في 50 مل من المخزن برنامج تلفزيوني ، ودرجة الحموضة 7.3.	يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام.
PBS عازلة + 0.1 ٪ + جيش صرب البوسنة نان 3 0.02 ٪	حل 0.050 غرام من جيش صرب البوسنة و0،010 نان من 3 في 50 مل من المخزن برنامج تلفزيوني ، ودرجة الحموضة 7.3.	تخزين سولution
الركيزة الأنزيمية	حل 0.010 غرام من 1 النفثول فوسفات الصوديوم في 100 مل من الحموضة عازلة DEA 9.8. التفاف القارورة بإحكام بورق الألمنيوم.	يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام.
منزوع الدسم الحليب عرقلة الحل	إضافة 0،20 غرام من التنشيف الصف حظر غير دهن الحليب الجاف (بيو راد ، هرقل ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) إلى 200 مل من برنامج تلفزيوني العازلة الحموضة 7.3.	يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام.
HT - 2 الاسهم الحل	حل 10 ملغ من HT - 2 trichothecene قارورة السم ، في 10 مل من أسيتونتريل لإعطاء الحل مع تركيز 1 ملغ / مل.	تقسيم هذا الحل في استخدام المفرد aliquots من 30 مل وتخزينها في أقل من -30 درجة مئوية.
HT - 2 العامل حل القياسية	ماصة 20 مل من HT - 2 توكسين حل البورصة إلى 2 مل معايرة الدورق الحجمي وتمييع مع أسيتونتريل للحصول على حل HT - 2 العمل تحتوي على 10 ميكروغرام / مل من السم trichothecene.	وينبغي أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام.
HT - 2 حلول calibrant العامل	تمييع HT - 2 الحل معيار العمل (10 ميكروغرام / مل) لإعداد حل calibrant العمل 100 نانوغرام / مل. تمييع HT - 2 العاملة حل calibrant 100 نانوغرام / مل لإعداد العاملين حلول calibrant لتركيزات التالية 0 (فارغة) ، 0.5 ، 1 ، 2 ، 4 ، 10 نانوغرام / مل.	يجب أن يكون مستعدا هذه الحلول الطازجة في اليوم للاستخدام.
HT - 2 مترافق مع KLH	تقسيم HT - 2 مترافق مع الحل KLH الأسهم (الخادم Keyhole هيموسيانين البطلينوس) (1 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني) في واحد استخدام aliquots من 350 ميكرولتر.	aliquots المحل في -30 درجة مئوية.
ضد وحيد النسيلة محددة	تمييع 1:350 (ت : ت) تركيز المخزون (1،383 ملغ / مل) من ريتوكسيماب في برنامج تلفزيوني ، لاستخدامها في خطوة المنافسة	يجب أن يكون مستعدا هذا الحل الجديد في لحظة استخدامها. 10 مل الأسهم الضد الحل في برنامج تلفزيوني عن الحجم النهائي من 3.5 لتر ، ما يكفي لتحليل المعايير 17 و / أو عينات.
إعتبر جسم الثانوية	غير المخفف المضادة للمفتش الماوس (H + L) مترافق مع الفوسفاتيز القلوية 1:100 (ت : v) في برنامج تلفزيوني ، لاستخدامها في خطوة المنافسة.	100 سهم الضد ميكرولتر الحل في برنامج تلفزيوني عن الحجم النهائي من 10 مل تكفي لتحليل المعايير 25 و / أو عينات. يجب أن يكون مستعدا هذا الحل الجديد في لحظة استخدامها.

اسم كاشف	شركة	تعليقات (اختياري)
الجسيمات المغناطيسية المكثف : MPC ® - S	Dynal
PalmSens الصك	PalmSens	قدمت مع لايت PalmSens ، المسلسل المحمول كابل ربط الكمبيوتر والبرمجيات خيارات مسك الغزال
CH8 PalmSens المضاعف	PalmSens
ثمانية قناة اتصال الكهربائية مسك الغزال	اليد التي قدمت
مع أقطاب قطاع الشاشة eight المطبوعة (الكيانات الخاصة الغرض)	اليد التي قدمت
المصممة خصيصا لدعم قطاع الأقطاب	اليد التي قدمت	يتضمن المغناطيس النيوديميوم 8 كل واحدة منها وضعت تحت سطح القطب كل عمل SPE
ماصات معايرة ميكروليتر	جيلسون
النمام المغناطيسي وقضبان ضجة.
الأكواب الزجاجية (100 ، 50 ، 20 مل).
الحجمي القوارير (2ml).
0.2 و 2ml أنابيب إيبندورف.	إيبندورف
الصقر ™ من أنابيب و5ml 15ml.	صقر
مختبر دوامة خلاط		لا تستخدم لدوامة خلاط resuspend الخرز المغناطيسي المغلفة مع HT2 - KLH أو مرتبطة مع سلسلة المناعية لتفادي تغيير طبيعة قطع بروتيني
فرن مختبر أو غرفة thermostated		اختيار الفرن قادرة على الحفاظ على درجة حرارة 37 درجة مئوية ± 3