في قياس الجسم الحي من الماوس الرئوي الطبقة السطحية غشائي

Summary

ودرس مثالي البطانية الطبقة السطحية الكنان السكري / البطانية باستخدام المجهر intravital. المجهر يمثل تحديا تقنيا Intravital في جهاز متحرك مثل الرئة. علينا أن نظهر كيف يمكن استخدام brightfield المجهري الفلورسنت في وقت واحد والبطانية لتقدير سمك الطبقة السطحية في الانتقال بحرية، في الجسم الحي الرئة الماوس.

Abstract

والكنان السكري البطانية هي طبقة من بروتيوغليكان والجليكوزامينوجليكان المرتبطة بطانة التجويف الأوعية الدموية. في الجسم الحي، والكنان السكري هو رطب للغاية، وتشكيل الطبقة السطحية كبيرة البطانية (ESL) التي تساهم في الحفاظ على وظيفة بطانة الأوعية الدموية. كما الكنان السكري في كثير من الأحيان البطانية الشاذة في المختبر، ويتم فقدان القياسية خلال تقنيات تثبيت الأنسجة، دراسة ESL يتطلب استخدام المجهر intravital. علم وظائف الأعضاء لأفضل تقريبي الجملة الوعائية المجهرية المعقدة للالسنخية، يتم تنفيذ مثالي التصوير intravital الرئوي على الرئة بحرية الحركة. هذه الاستعدادات، ومع ذلك، تعاني عادة من قطعة أثرية الحركة واسعة النطاق. علينا أن نظهر كيف يمكن استخدام مغلقة الصدر المجهر intravital من الرئة الماوس بحرية الحركة لقياس سلامة الكنان السكري عن طريق الاستبعاد من fluorescently ESL التي تحمل علامات عالية الوزن الجزيئي dextrans من سطح البطانية. هذه التقنية غير الجراحية الانتعاش، الأمر الذي يتطلبbrightfield في وقت واحد والتصوير الفلورسنت في الرئة الماوس، ويسمح للمراقبة الطولي للالجملة الوعائية المجهرية تحت الجنبة دون وجود أدلة على إحداث التباس إصابة الرئة.

Introduction

والكنان السكري البطانية هو طبقة من خارج الخلية بروتيوغليكان والجليكوزامينوجليكان المرتبطة بطانة الأوعية الدموية البطانية. في الجسم الحي، والكنان السكري هو رطب للغاية، وتشكيل الطبقة السطحية كبيرة البطانية (ESL) الذي ينظم مجموعة متنوعة من الوظائف بما في ذلك البطانية نفاذية السوائل ^1، العدلات البطاني التصاق ^2، وmechanotransduction من السوائل ³ إجهاد القص.

تاريخيا، كان الكنان السكري بالتقدير نظرا لضلال في الاستعدادات خلايا مستنبتة ⁴ و ⁵ و تدهورها خلال تثبيت الأنسجة القياسية وتجهيز ^6. تزايد استخدام المجهر ⁷ من intravital (في الجسم الحي المجهري، IVM) وتزامن مع تزايد الاهتمام العلمي في أهمية ESL إلى وظيفة الأوعية الدموية أثناء الصحة والمرض. وESL غير مرئي إلى المجهر الضوئي ولا يمكن وصفها بسهولة فيفيفو، نظرا لنزوع يكتينس الكنان السكري ملزم الفلورسنت تسبب RBC تراص ⁸ و الصمات الرئوية المميتة (الملاحظات غير منشورة). ولذلك تم تطوير العديد من الأساليب غير المباشرة للاستدلال ESL سمك (، وبالتالي، الكنان السكري سلامة) في غير متحرك الأسرة الأوعية الدموية مثل microcirculations مشمري والمساريقي. هذه التقنيات تشمل قياس الاختلافات في تعميم سرعة microparticle بوصفها وظيفة من المسافة من غشاء بطانة (microparticle velocimetry صورة ⁹⁾ وكذلك قياس استبعاد الضخمة التي تحمل علامات علامات fluorescently، الأوعية الدموية (مثل dextrans) من سطح البطانية (ديكستران تقنية استبعاد ^{10، 11).} من هذه التقنيات، إلا ديكستران استبعاد قادر على تقدير ESL سمك من القياسات التي أجريت عند نقطة واحدة في الوقت المناسب. في وقت واحد من خلال قياس الاعراض الأوعية الدموية باستخدام المجهر brightfield (أ عرض فيclusive من ESL "غير مرئية") والمجهر الفلورسنت من التتبع الأوعية الدموية استبعادها من ESL، يمكن حساب سمك ESL ونصف الفرق بين الاعراض الأوعية الدموية ^2.

استخدام إجراء فوري من سمك ESL هو مناسبة تماما للدراسة من الكنان السكري الرئوي. المجهر Intravital من الرئة هو أمر صعب، نظرا قطعة أثرية هامة الحركة الرئوي والقلبي. التطورات الحديثة في حين تسمح لتجميد الماوس الرئتين في الجسم الحي ^{12 و 13،} تبقى المخاوف بشأن تأثير فيزيولوجي من ركود الرئة. ويرتبط الجمود الرئة مع انخفاض أكسيد النيتريك مما يشير البطانية ^14، مما يشير إلى أن مسار يؤثر كل من التصاق الخلايا المتعادلة ¹⁵ و الرئة إصابة ^16. وعلاوة على ذلك، تجميد مساحة الرئة يعرض المحيطة الحويصلات الهوائية المحمول لقوى القص الضارة (ما يسمى ب "atelectrauma")، وفقا للمفاهيم الكلاسيكية الفسيولوجية للالسنخية الترابط ^17.

في عام 2008، وضعت اراتا Tabuchi، فولفغانغ كوبلر وزملاؤه تقنية جراحية السماح للفحص المجهري intravital من الرئة الماوس بحرية الحركة ^18. يمكن تبطل قطعة أثرية الجهاز التنفسي الناجمة عن هذه التقنية باستخدام التصوير عالية السرعة، بما في ذلك قياس وقت واحد من brightfield المجهري والفلورية. في هذا التقرير، إلا أننا بالتفصيل كيف يمكن استخدام التصوير الفوري استبعاد ديكستران لقياس سمك ESL في دوران الأوعية الدقيقة تحت الجنبة من الرئة الماوس بحرية الحركة، في الجسم الحي. ويمكن تعديل هذه التقنية بسهولة لتحديد وظيفة الكنان السكري على وجه التحديد، فإن قدرة على حالها ESL لاستبعاد العناصر المنتشرة من سطح البطانية. وقد استخدمنا هذه التقنيات في الآونة الأخيرة لتحديد أهمية سلامة ESL الرئوي في تطوير إصابة الرئة الحادة الأمراض الالتهابية الجهازية خلال مثل الإنتان ^2.

Protocol

1. إعداد أنابيب الجراحية، القسطرات الأوعية الدموية، والصدر الجدار نافذة

1. Intravital المرحلة المجهري. نحن العرف صنع زجاج شبكي مرحلة التي تقوم عليها الماوس تخدير تقع خلال المجهر. هذه المرحلة تستوعب كل من 15 سم 10 سم من البلاستيك المرن قطع المجلس (الذي تقوم عليه خلال الماوس يكمن تحريض التخدير، والتنسيب القصبة الهوائية، والقسطرة الوريدية)، وكذلك عنصر التدفئة مماثلة في الحجم (الموجود تحت لوح التقطيع).
2. إعداد الماوس أنبوب فغر الصدر (الشكل 1). يتم قطع بطول 10 سم من أنابيب PE 50 (، الداخلية Intramedic قطر 0،58 ملم، وقطرها الخارجي 0،965 ملم). يتم إرفاق واحدة من نهاية إلى نهاية حادة من إبرة مقوسة قياس 23؛ سيتم استخدام هذه الإبرة لتمرير أنبوب من خلال جدار الصدر (داخل خارج →) قبل إغلاق نافذة الصدري.
   نهاية البعيدة للأنابيب (1.5 سم في الطول، مقابل 23 مقياس المرفقوثقب الإبرة بشكل متكرر) بواسطة إبرة قياس 30، خلق "موانئ الجانب" لتسهيل تطلع فعالة من الهواء داخل الصدر.
   ثم يتم فصل هذا الجزء عن بقية منوفذة من الأنبوب بواسطة حلقات كفافي العديد من خياطة الحرير 04:00، وهذه الحلقات سوف تكون بمثابة "سدادة"، في نهاية المطاف ترسيخ الطول 1،5 منوفذة جزء داخل تجويف الصدر.
3. القسطرة الوريدية الوداجي. يتم قطع أطوال الطول اثنين 15 من 10 أنابيب PE (، Intramedic الداخلية بقطر 0،28 ملم، وقطرها 0،61 ملم الخارجي). يتم استخدام مشرط لشطبة نهايات الأنبوب، وبالتالي زيادة سهولة بزل الوريد. يتم مسح أنابيب عبر حقنة 1 مل تحتوي على 6٪ 150 كيلو دالتون حل ديكستران (في PBS) تعلق على نهاية غير مشطوف من الأنابيب.
4. يتم قطع الجدار نافذة إعداد الصدر (الشكل 2). الغشاء البولي فينيل شفاف (جديد كورى التفاف، Kuresha، طوكيو) في شكل بيضاوي (المحور الأكبر 6 سم، 4 سم محور طفيفة). A دائرية 5 مم رقم 1 ساترة (Bellcتم تثبيت س) إلى الغشاء باستخدام α-CYANOACRYLATE الغراء (Pattex flüssig، هنكل، دوسلدورف).
5. ويرد أنبوب لتحريض استرواح الصدر ("أنبوب ضربة") A طول 10 سم من أنابيب (القطر الداخلي 3 مم، 5 مم القطر الخارجي) لحقنة 5 مل؛ سيتم استخدام الطرف الآخر لإدخال الهواء إلى القفص الصدري الحيوان قبل جدار الصدر engraftment النافذة.
6. حقنة لغمر المياه من الهدف. وترد إبرة قياس 23 إلى 30 مل حقنة تحتوي على الماء المقطر. وقلل من رأس الإبرة (باستخدام ملف المعدنية) وذلك لمنع الأضرار التي لحقت الهدف.

2. الماوس التخدير

1. A الماوس تخدير مع خليط من الكيتامين (10 ملغ / مل) وزيلازين (2 ملغ / مل)، الغشاء البريتونى تدار في جرعة من 8 ميكرولتر لكل غرام من وزن الجسم الماوس. التخدير يحدث خلال 3 - 6 دقائق وينبغي ألا تعوق التنفس من تلقاء أنفسهم.
2. باستخدام الحلاقة الكهربائية، ويحلقالحلق والصدر والبطن، والجانب الأيمن من الفأرة.
3. باستخدام الشريط، تأمين الماوس إلى لوحة بلاستيكية رقيقة القطع. ينبغي للرئيس أشر بالفأرة نحو المشغل (الشكل 3). التوتر التي تقدمها لطيف حلقة من مرور خياطة تحت الأسنان العلوية للحفاظ على التمديد يخدم الرأس. يتم وضع قطع المجلس على وسادة التدفئة، والحفاظ على الماوس euthermia خلال القصبة الهوائية ووضع القسطرة الوريدية.
4. الرطب مع الإيثانول المناطق حلق 100٪.
5. تأكيد التخدير الكافي مع قليل الذيل / مخلب. إذا المضي قدما استجابة الحد الأدنى لها، وتوفير البلعة إضافية من الكيتامين / زيلازين تخدير كاف إن لم يكن.

3. القصبة الهوائية

1. يتم إجراء شق 1 سم فوق الحلق. يتم تشريح النسيج الضام الأساسية، ويتم فصل الغدد اللعابية وتنعكس أفقيا. ومقطوعة العضلة الأمامية قصي لامي على الفور إلى القصبة الهوائية.
2. وتقدم حلقة من الدرز تحت ال 04:00ه القصبة الهوائية (الشكل 4). ثم يتم قطع الحلقة، وخلق خطين منفصلين للخياطة الكامنة وراء القصبة الهوائية. سيتم استخدام خياطة الذيلية لتأمين أنبوب القصبة الهوائية، وسيتم استخدام خياطة الجمجمة لتوفير التوتر في القصبة الهوائية القصبة الهوائية أثناء التنسيب.
3. باستخدام اثنين من اصابعه، واستوعب خياطة العليا ويطبق التوتر طيف على القصبة الهوائية. يتم إجراء شق أفقي في القصبة الهوائية العليا والسفلى بين الغرز. وهذا ينبغي أن شق عبور ما يقرب من ثلثي محيط القصبة الهوائية. يتم إدخال أنبوب القصبة الهوائية ذات حواف (هارفارد جهاز، القطر الخارجي 1.22 مم) في القصبة الهوائية البعيدة وتأمين في مكانه باستخدام خياطة الذيلية القصبة الهوائية.
4. توصيل القصبة الهوائية لجهاز التنفس الصناعي الذي تسيطر حجم الحيوانات الصغيرة (Inspira، جهاز هارفارد)، والتهوية الماوس مع الأكسجين 40٪ من وحي و 9 مل / كجم حجم المد والجزر (إعدادات الأمثل للحفاظ على الأوكسجين الكافي / التهوية في مختبرنا). POSIلا tive بدأت نهاية الزفير الضغط (PEEP) في هذه المرحلة. من ملاحظة، يجب أن يكون الأمثل لضبط التنفس الصناعي داخل المختبرات الظروف الفريدة الفردية. ويمكن استخدام أطوال مختلفة من أنابيب زائدة (موسط بين أنبوب التنفس الصناعي Y-موصل والقصبة الهوائية) لضبط الفضاء الميت، وضمان التهوية السنخية مستقرة لحجم المد والجزر أي اختيار.

4. وريدي قسطرة

1. ويمكن تحديد نقطة التقاء الوريد الوداجي في الداخل والخارج من خلال تتبع الفروع البعيدة وريدي قريب. تم العثور على الوداجي الخارجي تحت الغدد اللعابية تنعكس، ويمكن تتبع هذا قريب للعثور على مفترق الخارجية، الداخلية الوداجي.
2. استخدام تشريح حادة لطيف لفصل تقاطع الوداجي من النسيج الضام المحيطة.
3. باستخدام الخيوط الجراحية 04:00، ربط قبالة عروق الوريد الوداجي الخارجي والداخلي البعيدة (الجمجمة) إلى تقاطع الوداجي.
4. إجراء شق صغير في كارينامن مفترق الطرق الوداجي، ويجب أن يكون الحد الأدنى من النزيف.
5. قد يكون اثنين القسطرة تقدمت تدريجيا من خلال شق والجذع الوداجي في. بعد الشفط لطيف لضمان عودة الدم، يتم تأمين القسطرة داخل الوريد باستخدام الخيوط الجراحية 04:00.
6. القسطرة الوريدية الشريط إلى قطع المجلس لمنع الخلع ضد عرضي.

5. Intravital المجهر الرئة جراحة الماوس (مقتبس من Tabuchi وآخرون ¹⁸⁾

1. وقطع المجلس (الذي يحتوي على ضبط النفس، والماوس، وكذلك تخدير وريدي مسجلة القسطرة) وانتقلت إلى المرحلة المجهري intravital، حيث سيتم تنفيذ التدخلات الجراحية المتبقية. يتم وضع مسبار درجة حرارة الجسم، وهذا اجهات مع نظام التدفئة التكيف (الموجود تحت لوح التقطيع)، مما يسمح للصيانة euthermia الماوس.
2. ويرد أحد القسطرة الوريدية الوداجي إلى مضخة الحقنة التي توفر الكيتامين (10 ملغ / مل)-زيلازين (2 ملغ / مل)في 200 ميكرولتر مزيج للساعة الواحدة. ويؤكد مرة أخرى باستخدام التخدير الكافي الذيل / مخلب قرصة.
3. ويمتد خط الوسط من شق في الرقبة إلى عملية سيفي الشكل، انطلاقا ثم أفقيا إلى الجانب الأيمن (الشكل 5).
4. كاو كهربي باستخدام، تتم إزالة الجهاز العضلي الصدر، وفضح القفص الصدري. والحرص على ضمان الإرقاء كاملة.
5. عبور hindleg الماوس، اليمنى على الجانب الأيسر أسفل الشريط و. والالتواء الناجمة البطن يدور الصدر قليلا، وتحسين سهولة الجراحة.
6. ضع المرحلة بزاوية 45 درجة (الشكل 6)، وهذا يسمح لتحديد المواقع الرئة في الانخفاض بعيدا عن جدار الصدر بمجرد أشعل استرواح الصدر.
7. وأدرك الضلع ^{الحادي و1} (الضلع السفلي أكثر) مع ملقط وأثارت؛ يتم الضغط على ملقط المنحني بصراحة تحت الضلع. هذا غشاء الجنب الجداري يفصل من جدار الصدر. يجب أن تبقى unpunctured غشاء الجنب.
8. باستخدام أنبوب ضربة وحقنة، هو عرض قسرا جوية ضد غشاء الجنب الجداري. هذا يؤدي إلى تمزق السطح الجنبي واسترواح الصدر دون الإضرار الرئة الأساسية. سوف الرئة الأساسية تقع بعيدا عن جدار الصدر، والسماح لإدخال ملقط كاو كهربي دون الإضرار الرئة. هو عادة انخفاض في حجم المد والجزر التنفس الصناعي غير مطلوب خلال هذه الخطوة.
9. باستخدام ملقط كاو كهربي، تشريح الصدر وعضلات جدار تتقاطع الأضلاع ^{ال 5} و 6 / غشاء الجنب الجداري، مما يجعل ~ ثقب دائري 8 ملم في جدار الصدر. من الضروري أن يتم الحفاظ الإرقاء كاملة، عن وجود نزيف سوف تحجب المجهري (الشكل 7).
10. استخدام برنامج تشغيل الإبرة، يتم ادخال الانبوب فغر الصدر في صدره ثقب الجدار. ينبغي الإبرة ثقب جدار الصدر والخروج من تجويف الصدر السفلية والجانبية إلى إطار الصدري (الشكل 7). أن تحرص على تجنب ثقب في الحجاب الحاجز. الثم يتم سحبها بلطف أنبوب من جدار الصدر حتى يحدث من المقاومة "سدادة" خياطة يقع على حافة الجزء من الأنبوب منوفذة.
11. ضع المرحلة المسطحة.
12. إضافة 3 سم H PEEP O ₂ إلى التنفس الصناعي للمساعدة في مساعدة الرئة reexpansion.
13. يتم وضع الغراء (Pattex هلام، هنكل) محيطي حول نافذة في الصدر. ويرد الغشاء، مع زجاج غطاء تواجه زلة الخارجية لتجويف الصدر. بعناية (ومحيطي) تقريبي الغشاء إلى الغراء باستخدام قضيب من القطن.
14. أثناء إجراء مناورة تجنيد الرئة (3 مجلدات المد والجزر التي عرقلت خلال منفذ التنفس الصناعي PEEP)، يتم تطبيق الشفط -3 ملم زئبق إلى أنبوب في الصدر. ينبغي الرئة تقريبي استمرار الغشاء بينما تتحرك بحرية خلال المد والجزر التهوية (الشكل 8).
15. وعبرت الرجل الاماميه حق الماوس فوق إلى الجانب الأيسر، مما أدى إلى موقف استلقاء الجانبي الأيسر من الماوس.ويمكن استخدام إسفنجة لوضع أسافين صحيح الماوس بحيث يتم محاذاة نافذة في الصدر مع الغمر الهدف المجهر المياه.
16. يتم وضع الماء المقطر على زلة غطاء قبل المجهري، مما يسمح لتصور من الرئة باستخدام الهدف الغمر بالماء. سوف تحتاج إلى المياه بشكل متقطع للتجديد طوال التصوير.

6. قياس الرئوي غشائي سمك طبقة السطحية

1. مباشرة بعد إغلاق جدار الصدر، ويدير 500 ميكرولتر FITC-150 المسمى ديكستران كيلو دالتون (6٪ في حل PBS) عن طريق القسطرة الوريدية الثاني (غير التخدير) الوداجي. هذا البلعة بمثابة إنعاش حجم فضلا عن التتبع الأوعية الدموية لقياس ESL. والبلعة ديكستران لا يؤثر التصاق الخلايا المتعادلة أو الرئة تشكيل ذمة ^2.
2. ويتركز الهدف غمر الماء على انزلاق الغطاء. اختيار الهدف من ذلك هو الضرورية لتصور الفروق الصغيرة في سمك ESL، وnumeri عاليةوهناك حاجة كال الفتحة (> 0.8) مع الحفاظ على 2-3 ملم مسافة العمل (السماح الاختراق من خلال نافذة سطح الرئة والجنبة). نستخدم CFI نيكون 75 LWD 16X (NA 0.8) وCFI 75 LWD 25X (NA 1.1) أهداف لهذا الغرض.
3. لقياس سمك بدقة ESL في جهاز متحرك، فمن الضروري أن يتم تنفيذ brightfield وعرض الأوعية الدموية الفلورسنت في وقت واحد. ويمكن تحقيق هذا باستخدام صورة الخائن (عرض مزدوجة، Photometrics) الذي يسمح لالتقاط الضوء المنعكس في وقت واحد الفرق المقابل تدخل (DIC، brightfield) والصور FITC (الشكل 9).
4. خلال وقفة 5 ثوانى الشهيق، يتم تنفيذ التصوير المستمر وتسجيلها. في وقت لاحق، قد يكون استعراض هذه الصور لتحديد التركيز في الإطارات.
5. باستخدام التركيز في الإطار، تم تحديد microvessels تحت الجنبة (<ميكرون قطر 20)؛ توجد عادة لا يقل عن 3 microvessels على إطار واحد. بعد الانتهاء من التجربة، مدينة دبي للإنترنتويتم قياس FITC-ديكستران بعرض الأوعية الدموية (بواسطة مراقب أعمى) عن طريق حساب متوسط ​​أطوال اعتراض عمودي ثلاثة في microvessel. على افتراض تساوي ESL سمك في كل من حواف السفينة، يمكن تعريف حجم ESL من نصف الفرق بين مدينة دبي للإنترنت وFITC-ديكستران بعرض الأوعية الدموية، كما هو موضح في القسم الممثل النتائج.
6. عادة، يمكن إجراء الفحص المجهري للintravital 90 دقيقة> دون أي دليل على إصابة الرئة أو نقص ضغط الدم ^2. يجب أن يتم تنفيذ التجارب الأولية لتأكيد الاستقرار الماوس (ضغط الدم، والأوكسجين والتهوية وإصابة الرئة) خلال فترة المراقبة. يمكن إدخال الأدوية التجريبية عن طريق القسطرة الثانية (غير مخدر) الوداجي في أي لحظة أثناء العملية.

7. البديل القياس من السطح الرئوي غشائي النزاهة طبقة

والطبقة السطحية سليمة البطانية وظائف (جزئيا) لاستبعاد circulatعناصر من ال ² جي سطح البطانية. وبالتالي، يمكن ESL سلامة أن تقاس قدرة عنصر تعميم (مثل الفلورسنت المكروية) للوصول والتفاعل مع جزيئات الخلية التصاق السطح (مثل ICAM-1).

1. وتعد مكافحة ICAM-1 المسمى الفلورسنت قبل الجراحة المجهرية. يتم تحضين Streptavidin 0،97 ميكرون المغلفة المجهرية الفلورسنت مع الأجسام المضادة أو السيطرة المعقدة البيروكسيديز نمط إسوي مكافحة ICAM-1 (YN1/1.7.4 استنساخ، 1:50، eBioscience) لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. تغسل المجهرية ثلاث مرات وعلقت في PBS في 1 × ⁹ 10 المجهرية لكل مل.
2. خلال الفحص المجهري intravital، يتم حقن التعليق المكروية (100 ميكرولتر) في القسطرة الوريدية الوداجي. بعد 15 دقيقة من التداول، يتم التقاط الصور الفلورسنت أكثر من 5 دقائق. وتعتبر المجهرية قادرة على الحركة ل5 دقائق> تمسكا وكميا باستخدام برامج معالجة الصور.

8. قتل رحيم

<ف الطبقة = "jove_content"> بعد الانتهاء من هذا الإجراء، يصرح باستخدامها من قبل تخدير الفئران عن طريق استنزاف ثقب في القلب مباشرة. القتل الرحيم ويؤكد عبر pneumothoraces الثنائية، وبعد ذلك يتم حصاد الرئتين والمفاجئة مجمدة لتحليلها لاحقا.

النتائج

والمنهج التجريبي وصفها في الخطوات 1-6 تسمح القبض على إطارات متعددة في وقت واحد من مدينة دبي للإنترنت (brightfield) والصور الفلورسنت. لتحديد سمك ESL، يتم مراجعة الصور المسجلة من قبل المراقب أعمى بعد الانتهاء من البروتوكول التجريبي. باستخدام التركيز في الإطار، تم تحديد microvessels ...

Discussion

تتزامن مع التوسع في استخدام المجهر في الجسم الحي، وهناك زيادة التقدير لحجم كل من كبير من ESL وكذلك مساهماته العديدة للعمل الأوعية الدموية. هذه البيانات الناشئة، ومع ذلك، تستمد أساسا من الدراسات من الأوعية الدموية الجهازية. في الواقع، واستخدام المجهر في الجسم ا...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
			اسم الكاشف
FITC-ديكستران (150 كيلو دالتون)	سيجما	FD150S
TRITC-ديكستران (150 كيلو دالتون)	سيجما	T1287
Streptavidin المغلفة الفلورسنت المجهرية	الانفجارات المختبرات	CP01F/10428	التنين الأخضر مضان (على غرار FITC)
الكيتامين	مور الطبية
زيلازين	مور الطبية
مكافحة ICAM-1 الضد المعقدة البيروكسيديز	eBioscience	استنساخ YN1/1.7.4	1:50 التخفيف
نمط إسوي الأجسام المضادة المعقدة البيروكسيديز	eBioscience	IgG2b eB149/10H5	1:50 التخفيف
			EQUIPMENT
الميكانيكية التنفس الصناعي	جهاز هارفارد	Inspira
القصبة الهوائية القسطرة	جهاز هارفارد	730028
كاو كهربي جهاز	DRE الطبية	Valleylab SSE-2L
ثنائي القطب الكي ملقط	أولسن الطبية	10-1200I	9.9cm ماكفرسون
درجة الحرارة كنترولل نظام	أدوات الدقة العالم	ATC1000
حقنة مضخة	جهاز هارفارد	مضخة 11 النخبة
المجهر (widefield)	نيكون	LV-150
المجهر (مبائر)	نيكون	A1R
صورة الخائن	Photometrics	DV2
CCD كاميرا	Photometrics	CoolSNAP HQ2
برنامج معالجة الصور	نيكون	عناصر NIS
البولي فينيل الغشاء	كورى نادي الهلالا ف ب
التعميم الغطاء زلة	Bellco	5CIR-1-BEL	5 مم، سماكة # 1
الغراء (تغطية زلة لغشاء)	Pattex	Flussig (السائل)	للصق زلة غطاء لغشاء
الغراء (زلة لتغطية الماوس)	Pattex	مادة هلامية	لربط لغشاء الماوس
أنابيب الجراحية	Intramedic	PE50، PE10
خاط	الصياد		04:00 الحرير
الحلاقة الكهربائية	اوستر	78997
ملقط جراحي منحني	Roboz
ملقط جراحي مستقيم	Roboz
مقص جراحي	Roboz
microscissors الجراحية	Roboz
إبرة جراحية سائق	Roboz
الشريط الجراحية	الصياد
اسفنجات المطبخ (مقطعة إلى أسافين)	مختلف