JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

الثقافة الجهاز كاملة من القرص الفقرية (IVD) يحافظ على مصفوفة الأم خارج الخلية، خلية الظواهر، والتفاعلات الخلوية مصفوفة. نحن هنا وصف نظام الثقافة IVD باستخدام الماوس قطني وIVDs الذيلية في وحدات العمود الفقري وظيفية، والعديد من التطبيقات التي تستخدم هذا النظام.

Abstract

الفقرية القرص (IVD) انحطاط هو مساهم كبير في آلام أسفل الظهر. وIVD هو مفصل ليفي غضروفي التي تعمل على نقل وتخفيف الأحمال في العمود الفقري. تتألف IVD من نواة اللبية-بروتيوغليكان الغني (NP) والكولاجين الغنية بالطوق تليف (AF) تقع في نهاية لوحات الغضروفية. جنبا إلى جنب مع فقرات المجاورة، وهيكل فقرات-IVD يشكل وحدة العمود الفقري وظيفية (الاتحاد السوفياتي السابق). هذه المجهرية تحتوي على أنواع الخلايا الفريدة فضلا عن مصفوفات خارج الخلية فريدة من نوعها. الثقافة الجهاز كاملة من الاتحاد السوفياتي السابق يحافظ على مصفوفة الأم خارج الخلية، الظواهر تمايز الخلايا، والتفاعلات الخلوية مصفوفة. وهكذا، تقنيات زراعة الأعضاء هي مفيدة بشكل خاص للتحقيق في الآليات البيولوجية المعقدة للIVD. هنا، نحن تصف النهج الإنتاجية العالية لزراعة كله قطني FSUs الفأر الذي يوفر منصة مثالية لدراسة آليات المرض والعلاجات للIVD. وعلاوة على ذلك، نحن تصف الصورةتطبيقات everal التي تستخدم هذه الطريقة الثقافة الجهاز لإجراء مزيد من الدراسات بما في ذلك على النقيض محسنة التصوير microCT وعالية الدقة النمذجة عنصر محدود ثلاثي الأبعاد من IVD.

Introduction

آلام أسفل الظهر (LBP) هو العامل الرئيسي للإعاقة العالمية وفقدان الإنتاجية في مكان العمل، وينفق الاميركيون وحدها ما يزيد على 50 مليار دولار على العلاج LBP 1. على الرغم من أن انتشارا، مسببات LBP لا تزال معقدة ومتعددة العوامل. ومع ذلك، القرص الفقرية (IVD) انحطاط هو من بين عوامل الخطر الأكثر أهمية ليرة لبنانية (2).

ويتكون من ثلاثة IVD المجهرية: والخارجي بالطوق تليف (AF)، ونواة اللبية الداخلية (NP)، واثنين من الصفائح الطرفية الغضروفية التي ساندويتش الهيكل كله قريب وبشكل أقصى 3. مع الشيخوخة وانحطاط، ومكونات IVD تتغير هيكليا، إنشائي، وميكانيكيا 4. وتشمل هذه التغييرات فقدان البروتيوغليكان والماء في NP، انخفض ارتفاع القرص، وتدهور الكفاءة الميكانيكية 5. هذه التعديلات هيكثيرا ما يكون مصحوبا السيتوكينات التي تعزز استجابة التهابية، وكذلك العدلة والجذر الظهري العقدة اقتحام الفضاء المشترك وبلغت ذروتها في سلسلة من الأحداث التي تؤدي إلى أعراض LBP 6.

دراسة آليات IVD انحطاط هو التحدي في البشر لأنه غالبا ما يكون من غير الممكن عزل سبب انحطاط قبل حدوث آلام أسفل الظهر. وهكذا، فإن المقاربة الاختزالية تبسيط النظام التجريبي وصولا الى الجهاز الخاص بالتحاليل المخبرية يسمح الآلية صقل المتغيرات السببية وفحص آثار المصب من 5. يتم تقليل النظام فقط سكان الخلية الأم والمحيطة المصفوفة خارج الخلية، مما يمكن تفسير مباشر للآثار مؤثرات الخارجية على انحطاط IVD. وعلاوة على ذلك، وانخفاض التكلفة وقابلية للنماذج الفئران، فضلا عن عدد كبير من الحيوانات المعدلة وراثيا 7، تسمح رانه فحص المستهدفة السريع لآليات التنكسية IVD والعلاجات المحتملة. هنا، نحن تصف نظام الجهاز ثقافة الفئران التي تحفظ IVD الخلوية والأنسجة الاستقرار أكثر من 21 أيام، مع التركيز بشكل خاص نظرا لأنماط التماثل الساكن والميكانيكية والهيكلية، والتهابات في IVDs. باستخدام هذه الطريقة، ونحن نراقب التغيرات الوظيفية للIVDs 'في الناجمة عن طعنة نموذج إصابة 8 إلى فهم آليات وراء تنكس القرص. وعلاوة على ذلك، نحن تصف العديد من التطبيقات لهذا الأسلوب الثقافة الجهاز لإجراء مزيد من الدراسات بما في ذلك على النقيض محسنة التصوير microCT وثلاثي الأبعاد النمذجة عالية الدقة من IVD.

Protocol

وأجريت التجارب على الحيوانات فقط وفقا لجامعة واشنطن في لجنة الدراسات الحيوانية لويس القديس.

1. الحيوانات

  1. الحصول على سلالتين من الفئران: 10 الاسبوع القديمة BALB / ج (ن = 6، BALB-M، BALB / cAnNTac) و 10 أسبوع القديمة العامل النووي كابا B-وسيفيراز الحيوانات مراسل (NF-κβ لوك) ولدت في BALB / ج الخلفية (ن = 6، BALB / ج-TG (ريلا لوك) 31Xen).
  2. قبل التشريح، والموت ببطء الحيوانات مع CO 2 جرعة زائدة بمعدل تدفق 2.5-3 لتر / دقيقة لمدة 5 دقائق تليها 2 دقيقة إضافية من المسكن الوقت.
  3. تطهير المنطقة الخارجية للحيوان قبل الاستحمام في حمام الايثانول 70٪ لمدة 2 دقيقة قبل تشريح.

2. تشريح

  1. اجراء خفض طولية العمودي على السطح الظهري للفأرة باستخدام مقص تشريح الصغيرة لفضح تجويف الجسم.
  2. جعل اثنين من التخفيضات العمودية الطولية على جانبي العمود الفقري الحيوان بدءا منأول الفقرات القطنية (L1) إلى فقرات الذيل (C8).
  3. باستخدام مشرط، ملقط غرامة، ومقص تشريح غرامة، وإزالة بعناية العمود الفقري من L1-C8 من تجويف جسم الحيوان.
  4. إزالة بعناية الأنسجة الرخوة المحيطة الزائدة العمود الفقري، مع ضمان أن لا كشط أو تجرح IVD على الجانب البطني.
  5. وعلاوة على ذلك تشريح العمود الفقري في الفقرات القرص-فقرات العمود الفقري وحدات وظيفية (FSUs) في L1 / L2، L3 / L4، L5 / L6، C3 / C4، C5 / C6، وأقراص C7 / C8.
  6. شطف FSUs في محلول ملحي متوازن هانك تستكمل مع 1٪ البنسلين، الستربتوميسين لمدة 2 دقيقة.
  7. عشوائيا تعيين FSUs إلى ثلاث مجموعات: جاهل وغير المعالجة FSUs (الطازجة) ومثقف ولكن غير المعالجة FSUs (التحكم)، ومثقف وطعنة تعامل FSUs (الطعنة).
  8. التقط تجميد العينات الطازجة الاتحاد السوفياتي السابق مع النيتروجين السائل على الفور بعد تشريح وتخزينها في الثلاجة -20 درجة مئوية.

3. الجهاز الظروف الثقافة

  1. إعداد 500 مل من وسائط الثقافة العقيمة 1: 1 Dulbecco لتعديل النسر المتوسط: المغذيات خليط F12 (DMEM: F12) تستكمل مع المصل 20٪ بقري جنيني (FBS) و 1٪ البنسلين ستربتومايسين.
  2. باستخدام 10 مل الماصات المصلية، ماصة 2 مل من وسائط الثقافة في كل بئر من لوحة الثقافة 24 أيضا.
  3. وبعد تشريح وشطف، وضع كل الاتحاد السوفياتي السابق في بئر الفردية في 24 لوحة جيدا مليئة سائل الإعلام.
  4. احتضان هذه العينات في حاضنة العقيمة التي تحافظ على 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2، 20٪ O 2 و> 90٪ الرطوبة.
  5. بعد فترة ثقافة الأولية من 24 ساعة، ميكانيكيا تجرح عينات مجموعة الطعنة عبر ثقب إبرة من الحلقة الليفية باستخدام العقيمة إبرة 27 عيار كما هو مبين في الشكل 1A.
  6. تغيير وسائل الاعلام كل 48 ساعة عن طريق إعداد 24-جيدا لوحة جديدة ثقافة مليئة سائل الإعلام، وبنقل العينات من لوحة قديمة للاستخدام ملاقط معقمة جديدة. نضح في وسائل الإعلام القديمة وdispos (ه) من لوحة الثقافة القديمة في حاوية نفايات بيولوجية.
  7. في اليوم الأخير من الثقافة، واحتضان جميع العينات في وسائل الإعلام التي تحتوي على 0.75 ملغ / مل نيترو كلوريد نتروبلو الأزرق لمدة 24 ساعة.
  8. بعد ذلك، وتجميد جميع FSUs مع النيتروجين السائل وتخزينه في الثلاجة -20 درجة مئوية لتصبح جاهزة للاختبار الميكانيكية أو الأنسجة (الشكل 1B).

4. القياسات الطولية NF كيلوبايت

  1. صورة FSUs من الحيوانات NF-κβ-وسيفيراز في 1 و 5 و 13 و 19 يوما لتقييم التعبير NF كيلوبايت.
  2. إضافة 10 ميكرولتر من 1 ملغ / مل حل وسيفيرين إلى كل بئر واحتضان في حاضنة معقمة عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة.
  3. صورة عينات للتلألؤ بيولوجي باستخدام نظام التصوير في زمن التعرض 1 دقيقة ووضع بن ل2.
  4. وفي الوقت نفسه، استخدام الجهاز لالتقاط صورة وتراكب مع الصورة تلألؤ بيولوجي لتحديد الموقع التشريحي من التألق في IVD.

الطبقة = "jove_title"> 5. تقييم الميكانيكية

  1. تحديد السلوك الميكانيكي للIVDs باستخدام التي تسيطر عليها النزوح ضغط ديناميكي 9.
  2. باستخدام تشريح المجهر، مشرط، وملاقط، وإزالة الهيئات الفقري العظمية من الاتحاد السوفياتي السابق من كل عينة مع الحفاظ على الصفائح الطرفية الغضروفية سليمة والمرفقة إلى IVD.
  3. إرفاق IVDs معزولة لوحة الألومنيوم 1 سم × 1 سم × 0.2 سم باستخدام غراء سريع الغراء.
  4. قياس ارتفاع القرص وعرض عن طريق اتخاذ ما معدله ثلاثة قياسات على المحور الطولي للكل قرص باستخدام ميكرومتر ليزر. حساب نسبة ارتفاع القرص بقسمة متوسط ​​ارتفاع القرص أقصى عرض القرص.
  5. استخدام ارتفاع القرص قياس لحساب القيم سلالة المدخلات المستخدمة في الاختبار الميكانيكي. لاحظ أن متوسط ​​ارتفاع القرص كان ما يقرب من 690 ميكرون ± 39 ميكرون.
  6. وضع العينات في الفوسفات حمام ملحي تحت compressiعلى الجهاز وتحميلها مسبقا على القرص إلى 0.02 N.
  7. دوريا ضغط القرص باستخدام الموجي الجيبية في 1 هرتز لمدة 20 دورات على مستوى سلالة 1٪ ومستوى سلالة 5٪ لمدة 3 محاكمات كل وتسجيل القيم الحمل وتهجير IVD. سماح 10 دقيقة من وقت الراحة بين التجارب للقرص للاسترخاء ولمنع الإصابة.
  8. حساب متوسط ​​صلابة من مرحلة التحميل من الدورة الماضية، وحساب الخسارة الظل من زاوية الطور بين تحميل البيانات والتشريد.

6. بروتيوغليكان والكولاجين الكمي

  1. وبعد الاختبار الميكانيكي، وقياس الوزن الرطب القرص عن طريق وضع IVD معزولة في أنبوب الطرد المركزي قبل tared وقياس الوزن باستخدام الميزان التحليلي.
  2. هضم IVDs معزولة في 250 ميكرولتر حل الهضم غراء (0.1 M خلات الصوديوم، 0.01 M EDTA، 0.005 M السيستين حمض الهيدروكلوريك، ودرجة الحموضة 6.4) بين عشية وضحاها في 65 درجة مئوية باستخدام سخان كتلة.
  3. عينات الطرد المركزي لمدة 10 دقيقةفي 2000 x ج وجمع السائل طاف.
  4. قياس محتوى بروتيوغليكان من IVD باستخدام الأزرق (DMMB) فحص dimethylmethylene مع المعايير شوندروتن كبريتات.
  5. يعد حل DMMB (DMMB 21 ملغ، 5 مل ايثانول المطلق، 2 غرام فورمات الصوديوم في 1 L ده 2 O).
  6. ماصة 30 ميكرولتر من المعايير والعينات في ثلاث نسخ في لوحة 96-جيدا، جنبا إلى جنب مع 250 ميكرولتر من محلول DMMB في كل بئر.
  7. قراءة الامتصاصية من لوحة في 525 نانومتر باستخدام مطياف.
  8. قياس محتوى الكولاجين باستخدام طقم فحص الهيدروكسي برولين وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.

7. علم الأنسجة

  1. إصلاح مجموعة فرعية من العينات في 4٪ امتصاص العرق لمدة 24 ساعة، وإزالة كلس في حمض الفورميك 5٪ لمدة 48 ساعة، ويذوى مع الإيثانول، وتضمينها في البارافين.
  2. باستخدام مبضع للفحص المجهري، قسم العينات sagittally في 10 ميكرون سمك وتطبيق المقاطع على الشرائح الزجاجية. وصمة عار على المقاطع باستخدام سفرانين-O / سريع غرامالتابعين ودابي.
  3. باستخدام المجهر الضوئي، الشرائح صورة في 10X التكبير.

8. على النقيض محسنة microComputed التصوير المقطعي (microCT)

  1. مسح مجموعة فرعية من العينات في نقطة زمنية 0، 2، 5، و 7 أيام باستخدام طولية Ioversol التباين تعزيز 10، ومحطة حمض الفسفومولبديك (PMA) التباين تعزيز في نقطة زمنية 7 أيام.
  2. 4 ساعات قبل microCT وقت الفحص، إضافة 300 ميكرولتر من 350 ملغ / مل اليود Ioversol حل للثقافة وسائل الإعلام لتركيز النهائي من ما يقرب من 50 ملغ / مل تحتوي على اليود حل Ioversol واحتضان في حاضنة معقمة عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ح.
  3. وبعد الحضانة، والتفاف العينة في شاش معقم ووضعه في أنبوب microcentrifuge 1 مل.
  4. مكان العينات في نظام microCT والمسح الضوئي في 45 keVp، 177 أمبير، 10.5 ميكرون حجم فوكسل، و 300 مللي التكامل.
  5. تصدير البيانات من microCT كملفات DICOM وتصور باستخدام برنامج ( على سبيل المثال، سيريكس).
  6. في نقطة زمنية لمدة 7 أيام، وتحديد العينات باستخدام محلول بارافورمالدهيد 4٪ لمدة 24 ساعة، تليها 5٪ حل سلطة النقد الفلسطينية لمدة 3 أيام، والمسح الضوئي باستخدام نفس الإعدادات التي استخدمت في الخطوة 8.4.

9. ثلاثي الأبعاد النمذجة عنصر محدود

  1. قطعة ملفات DICOM من IVDs باستخدام برنامج مع العتبة اليدوية (على سبيل المثال، سيريكس).
  2. تحويل كميات NP وAF من IVD إلى تنسجم العناصر المحدودة القائم على فوكسل باستخدام Meshlab.
  3. الجمع بين المجهرية من NP وAF لتشكيل IVD كاملة وتطبيق شروط الحدود تجريبيا في برنامج العناصر المحددة.

النتائج

الأرقام 2-3 تظهر نتائج ممثل التوزيع بروتيوغليكان، والتعبير NF كيلوبايت، وصلابة، اللزوجة، ارتفاع القرص، والوزن الرطب للIVDs الماوس مثقف. إذا مثقف بشكل صحيح، يجب المعلمات IVD من السيطرة على المجموعة لن تكون مختلفة كثيرا عن مجموعة جديدة. في حالة إصابة ثقافة أو خلاف...

Discussion

ويحدد هذا البروتوكول ثقافة الجهاز من الاتحاد السوفياتي السابق الفئران مع التركيز على رصد التغيرات البيولوجية في IVD. نجاحها في الحفاظ على هذه الثقافات يتطلب تقنيات معقمة دقيقة. على وجه الخصوص، تشريح الخطوات 2،1-2،6 وثقافة الخطوات من 3،1-3،6 يحتاجون إلى ?...

Disclosures

تعلن واضعي هذه المخطوطة أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من قبل مركز جامعة واشنطن العضلية الهيكلية البحوث (NIH P30 AR057235)، مركز التصوير الجزيئي (NIH P50 CA094056)، ميكانيكا الأحياء التدريب غرانت (NIH 5T32EB018266)، NIH R21AR069804، والمعاهد الوطنية للصحة K01AR069116. فإن الكتاب أود أن أشكر باتريك وونغ لإسهاماته في مجال جمع البيانات.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
96 well plateMidwest ScientificTP92096Used for biochemical assays
24 well plateMidwest ScientificTP92024Used for organ culture
25 mL pipettesMidwest ScientificTP94024Used for organ culture
10 mL pipettesMidwest ScientificTP94010Used for organ culture
5 mL pipettesMidwest ScientificTP94005Used for organ culture
500 mL bottle top filters, 22 µmMidwest ScientificTP99505Used for filter media
10 µL pipette tipsMidwest ScientificNP89140098Used for biochemical assays
200 µL pipette tipsMidwest ScientificNP89140900Used for biochemical assays
1,000 µL pipette tipsMidwest ScientificNP89140920Used for biochemical assays
DMEM/F-12Invitrogen11330032Used for culture media
Optiray 350Guebert19133341Used for contrast enhanced microCT
Fetal Bovine SerumSigmaF2442Used for culture media
Penicillin Streptomycin SigmaP4333Used for culture media
Tetrazolium Blue ChlorideSigmaT4375Used for biochemical assays
D-LuciferinSigmaL6152Used for bioluminescence imaging
Chondroitin SulfateSigmaC9819Used for biochemical assays
10% Phosphomolybdic Acid SolutionSigmaHT152Used for contrast enhanced microCT
Safranin OSigmaS8884diluted to .1% concentration (in water)
Fast Green FCFSigmaF7258.001% concentration
Papain from papaya latexSigma P3125Used for biochemical assays
DAPISigma-AldrichD9542Nucleic acid staining
Cyanoacrylate GlueLoctite234790Adhesive 
1.5 mL Microcentrifuge TubesFischer ScientificS348903Used for biochemical assays
Big Equipment
BioDentActiveLifeFor mechanical testing
Cytation 5BiotekSpectrophotometer
AxioCam503Carl Zeiss AGMicroscope
VivaCT40ScancoMicroCT
Analytical balanceDenver Instrument CompanyA-200DSAnalytical balance
Incubator HERAcell 150iThermo ScientificOrgan Culture
Dissection ScopeVistaVisionUsed during dissection
Laser MicrometerKeyenceLK-081Measuring disc height
Microcentrifuge 5810 REppendorfUsed for biochemical assays
MicrotomeLeica RM2255Used for histology
Software
Prism 7GraphPadFor statistics
MATLAB R2014aMathworksFor modeling
Osiri-LXIVPixmeoOpen Source
MeshLab v1.3.3Visual Computing Lab - ISTI - CNROpen Source
PreView/FEBio 2.3Utah MRL & Columbia MBLOpen Source
ImageJNIH
Microsoft ExcelWindows
Dissection Tools
Cohan-Vannas Spring Scissors Fine Science Tools  15000-02Or any nice pair of spring scissors
Fine Scissors - Sharp  (small)Fine Science Tools  14060-09
Fine Scissors - Sharp  (larger)Fine Science Tools  14060-11
Dumont #5 ForcepsFine Science Tools  11252-40At least 2; can also use #3 
Extra Fine Graefe Forceps, serratedFine Science Tools  11150-10At least 2
Micro-Adson Forceps, serratedWorld Precision Instruments503719-12
Micro-Adson Forceps, teethWorld Precision Instruments501244
Scalpel Handle - #3Fine Science Tools  10003-12
Scalpel Handle - #4Fine Science Tools  10004-13
Scalpel Blades - #23Fine Science Tools  10023-00
Insect Pins, size 000Fine Science Tools26000-25
27 G NeedleBD PrecisionGlide NeedlesBD305109

References

  1. Dagenais, S., Caro, J., Haldeman, S. A systematic review of low back pain cost of illness studies in the United States and internationally. Spine J. 8 (1), 8-20 (2008).
  2. Urban, J., Roberts, S. Degeneration of the intervertbral disc. Arthritis Res Ther. 5 (6), 1-48 (2003).
  3. Mirza, S. K., White, A. A. Anatomy of intervertebral disc and pathophysiology of herniated disc disease. J Clin Laser Med Surg. 13 (3), 131-142 (1995).
  4. Acaroglu, E. R., et al. Degeneration and aging affect the tensile behavior of human lumbar anulus fibrosus. Spine. 20 (24), 2690-2701 (1995).
  5. Abraham, A. C., Liu, J. W., Tang, S. Y. Longitudinal changes in the structure and inflammatory response of the intervertebral disc due to stab injury in a murine organ culture model. J Orthop Res. 34 (8), 1431-1438 (2016).
  6. Ohtori, S., Inoue, G., Miyagi, M., Takahashi, K. Pathomechanisms of discogenic low back pain in humans and animal models. Spine J. 15 (6), 1347-1355 (2015).
  7. Pelle, D. W., et al. Genetic and functional studies of the intervertebral disc: A novel murine intervertebral disc model. PLoS ONE. 9 (12), (2014).
  8. Zhang, H., et al. Time course investigation of intervertebral disc degeneration produced by needle-stab injury of the rat caudal spine. J Neurosurg: Spine. 15 (4), 404-413 (2011).
  9. Liu, J. W., Abraham, A. C., Tang, S. Y. The high-throughput phenotyping of the viscoelastic behavior of whole mouse intervertebral discs using a novel method of dynamic mechanical testing. J Biomech. 48 (10), 2189-2194 (2015).
  10. Lin, K. H., Wu, Q., Leib, D. J., Tang, S. Y. A novel technique for the contrast-enhanced microCT imaging of murine intervertebral discs. J Mech Behav Biomed Mater. 63, (2016).
  11. Pasparakis, M. Regulation of tissue homeostasis by NF-kappaB signalling: implications for inflammatory diseases. Nat Rev: Immunol. 9 (11), 778-788 (2009).
  12. O’Connell, G. D., Vresilovic, E. J., Elliott, D. M. Comparison of animals used in disc research to human lumbar disc geometry. Spine. 32 (3), 328-333 (2007).
  13. Lee, C. R., et al. In vitro organ culture of the bovine intervertebral disc: effects of vertebral endplate and potential for mechanobiology studies. Spine. 31, 515-522 (2006).
  14. Chan, S. C., Gantenbein-Ritter, B. Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture. J. Vis. Exp. (60), e3490 (2012).
  15. Holguin, N., Aguilar, R., Harland, R. A., Bomar, B. A., Silva, M. J. The aging mouse partially models the aging human spine: lumbar and coccygeal disc height, composition, mechanical properties, and Wnt signaling in young and old mice. J Appl Physiol. 116 (12), (2014).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

122

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved