نموذج الفأر من قرحة الضغط بعد إصابة الحبل الشوكي

Summary

هنا، نحن تصف طريقة بسيطة للحث على الجلد ذات الصلة سريرياً قرحة الضغط (صديد) في نموذج الفأر من إصابات النخاع الشوكي (الخيال العلمي). يمكن استخدام هذا النموذج في الدراسات ما قبل السريرية على الشاشة للعلاجات المختلفة للشفاء صديد في الخيال المرضى.

Abstract

قرحة الضغط (صديد) شائعة من المنهكة مضاعفات إصابات النخاع الشوكي الرضية (العلوم)، وتميل إلى أن تحدث في الأنسجة الرخوة حول prominences عظمى. هناك، مع ذلك، معروفة حول تأثير العلوم على شفاء الجلد الجرح في سياق نماذج حيوانية في إعدادات التجريبية التي تسيطر عليها. ويرد في هذه الدراسة، نموذج ماوس بسيطة وغير الغازية، واستنساخه وذات الصلة سريرياً من صديد في سياق علوم كاملة. وقد حلق الفئران الذكور البالغين (بالب/ج، 10 أسابيع من العمر) وديبيلاتيد. بعد إزالة الشعر (24 ساعة)، تعرض الفئران للصفيحة تليها الحبل الشوكي كاملة ترانسيكشن (T9 T10 فقرات). مباشرة بعد رفع إضعاف جلد في الجزء الخلفي الفئران وتقع بين اثنين من الأقراص المغنطيسية في المكان للقادم ح 12، وبالتالي إيجاد منطقة الدماغية التي تطورت البلوتونيوم خلال الأيام التالية. أثبتت مجالات الجرحى وذمة الأنسجة واختفاء البشرة قبل تطبيق المغناطيس بعد يوم 3. قيح تلقائياً وتلتئم. الشفاء كان، بالمقارنة مع ذلك، أبطأ في الفئران علوم التحكم الفئران غير الخيال عندما أنشئت الجرح دون مستوى "عشر على العكس من ذلك"، لا يوجد فرق في الشفاء كان ينظر بين الفئران غير الخيال العلمي والتحكم عندما أنشئت الجرح فوق مستوى عشر هذا النموذج هو أداة يمكن أن تكون مفيدة لدراسة ديناميات التنمية بو الجلد وتضميد الجراح بعد الخيال العلمي، فضلا عن اختبار النهج العلاجية التي قد تساعد على تضميد هذه الجروح.

Introduction

قرحة الضغط (صديد) هي المضاعفات الثانوية الرئيسية من الصدمة علوم¹. قيح هي إصابات موضعية للجلد و/أو الأنسجة الكامنة التي عادة ما تحدث خلال prominences عظمى حيث يتركز وزن الجسم بينما هو يجلس المريض أو الكذب¹. الجلد والدهون، والعضلات تتعرض لهذا الضغط المستمر الذي يؤدي إلى تنمية الاسكيمية المترجمة والتهاب الأنسجة والأضرار الميكانيكية ونخر^2،3.

تطوير صديد يتأثر بعوامل محلية عدة، بما في ذلك حجم الضغط والقص، تحميل المدة ورطوبة الجلد ودرجة الحرارة، وطول العمر الإصابة والنظافة العامة الجلد. وهناك أيضا العوامل النظامية التي تلعب دوراً، مثل الحالة البدنية العامة والعظام ومورفولوجيا أنسجة العضلات وقوتها⁴، سن المريض، التدابير الدموية، والجنس والعوامل الاجتماعية-الاقتصادية حتى بما في ذلك الحالة الاجتماعية، التعليم، ودخل^4،5.

الوقاية والعلاج من صديد تبقى تحديات كبيرة في الخيال المرضى. وضع المرضى علوم صديد في ~ 30-40% من الحالات، مع معدل تكرار 60-85%، ربما بسبب ضعف ندبا وانعدام الإحساس الواقية¹. وهكذا، كثيرا ما يؤدي إلى إعادة الاستشفاء للمرضى علوم صديد، وعموما تشكل عبئا ماليا كبيرا (80 ٪ أكثر مقابل الخيال فقط) لأن نظام الرعاية الصحية^5،،من^67،،من^{89 , 10}.

على حد علمنا، كانت هناك لا دراسات في إعدادات التجريبية الخاضعة للتحقيق أثر الخيال على بو عملية الشفاء بسبب عدم وجود نماذج حيوانية مناسبة. ويرد هنا، طراز ماوس ذات الصلة سريرياً واستنساخه من البلوتونيوم في الجلد. يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة ديناميات بداية بو والشفاء اللاحقة، فضلا عن اختبار النهج العلاجية المحتملة لمنع البلوتونيوم أو تحسين بو الشفاء في سياق عشر

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

وأجريت جميع الحيوانات المناولة والعمليات الجراحية وفقا لبروتوكول أقرته لجنة الاستخدام ورعاية الحيوان المؤسسية جامعة روتجرز. تم تغذية الفئران حمية القياسية ومتواصلة للمياه.

1-إعداد الأدوات الجراحية وغير الجراحية

1. تعقيم الأدوات الجراحية وغير الجراحية في اﻷوتوكﻻف.
2. تنظيف طاولة العمليات الجراحية مع الإيثانول 70% والحارة وسادة تدفئة إلى 37 درجة مئوية.
3. وضع وسادة التدفئة على طاولة العمليات، وتغطية ذلك مع الستائر الجراحية المعقمة.
   ملاحظة: في جميع إجراءات البقاء على قيد الحياة، يستخدم تقنية "اللمس لا" هنا للحفاظ على العقم.

2-إعداد الحيوانات وأداء الصفيحة العمود الفقري T9 T10

1. شراء الكبار (بالب/ج) أنثى عمرها 10 الأسبوع الفئران. حمل التخدير في الحيوانات كل استخدام بداية استنشاق مع إيسوفلوراني 5% ومن ثم ينخفض إلى 2-3% للمحافظة على التخدير لما تبقى من الإجراءات.
2. تأكيد التخدير الكامل قبل استخلاص لا استجابة لحفز nociception قرصه الناجمين عن ذيل/مخلب.
3. حلق الشعر أكثر دورسوم (الرأس إلى الذيل) مع ماكينة كهربائية، ومن ثم تطبيق كريم مزيل الشعر (3 دقائق) لإزالة الشعر المتبقي. وأخيراً، أغسل dorsum مع تشغيل المياه/الرطب فرك، وإرجاع الحيوانات إلى اقفاصها.
   ملاحظة: وهذا ضروري لتجنب إضافية تهيج الجلد والتلوث الكيميائي في وقت إصابة الجلد
4. وفي اليوم التالي تطبيق مرهم العيون القرنيات حماية العينين من الجفاف خلال العملية الجراحية وثم فرك الجلد مع 3 الاستعدادات بديلة من الإيثانول تدين فرك و 70%.
5. مع مشرط، تنفيذ شق جلد (~1.0-1.5 سم) على طول خط الوسط في الظهر على مستوى فقرات T8 T12.
   ملاحظة: يتم تعريف مستوى فقرات بإعادة عد الفقرة من T13 استخدام موقع الأضلاع العائمة التي تتوافق مع T13 فقرة^11،12.
6. مسح الأنسجة الدهنية تحت الجلد الحصول على حق الوصول إلى العضلات باراسبينال وثم تشريح لهم ببطء لكشف العمليات الشائكة وعن كلا الجانبين.
   ملاحظة: القيام بهذا الإجراء بعناية فائقة لتجنب النزيف الزائد أو أي ضرر للحبل الشوكي، عند هذه النقطة.
7. أداء الصفيحة لفضح الحبل الشوكي (الفقرات T9 T10) بلطف تقشير قبالة الصفيحة العمود الفقري باستخدام الملقط ميكروديسيكتينج.
   ملاحظة: تنفيذ الصفيحة بحيث يتعرض فائض في النخاع الشوكي لتيسير إيجاد الضرر. في المجموعة عنصر التحكم، يتم فقط الاستئصال.

3-أداء إصابة الحبل الشوكي الكاملة T9 T10

1. استخدام الملقط، تأمين العمود الفقري في T8 ورفع يصل إلى المبالغة انحناء العمود الفقري.
2. باستخدام مقص الجميلة، الفرع الحبل الشوكي بين فقرة T9 و T10 وصولاً إلى الكلمة فقري للقناة، لضمان ترانسيكشن كاملة.
3. بعد مراقبة تطبيق ترانسيكتيون كاملة تحت مجهر جراحي، قطعة من الدهون تحت الجلد عبر موقع الصفيحة توفير مزيد من الحماية للحبل الشوكي قبل إغلاق موقع الجراحية.
4. وأخيراً، الجرح وخياطة عضلات مجاورة، فآسيا سطحية، استخدام خياطة مستمرة ثم أغلق والجلد باستخدام مقاطع خياطة¹².
5. الوظيفة-الخيال، مراقبة حركة الأمعاء اليوم التالي؛ ومع ذلك، إدارة المثانة البولية بإخلاء المثانة اليدوي.
   ملاحظة: يمكن أن تكون المستخدمة رصد التقدم المحرز في اللكتات الانتعاش وظيفية وظيفة-العلوم في يوم 2 وثم أسبوعية مقياس الماوس باسو (خدمات إدارة المباني)، انظر التكميلية الرقم 1^11،،من¹²¹³.

4-تنظيم دورات تعريفية لقرحة الضغط الجلد بعد علوم كاملة

1. فورا بعد الجراحة الخيال، فرك الجزء الخلفي الحيوان مع الكحول تدين و 70%.
2. بو أدناه موقع الخيال، لحقن في الجلد الظهرية بالقرب من العجز، كمية صغيرة جداً (10 ميليلتر) من 0.125 في المائة بوبيفاكيني الحل باستخدام إبرة ز 25 في أماكن مسافة واحدة ~0.5-1.0 سم عن بعضها البعض، في قطع ناقص حول موقع التطبيق المغناطيس.
   ملاحظة: بو فوق موقع الخيال، لحقن الجلد الظهرية بالقرب من منطقة عنق الرحم.
3. رفع إضعاف جلد في الجزء الخلفي الماوس برفق وساندويتش أنها بين 2 أقراص مغناطيسية (5 × 12 مم، كل 2.4 ز، ز 3800 القوة المغناطيسية) (الشكل 1). ^{11 , 12}
4. مباشرة بعد تطبيق المغناطيس، عودة الحيوانات في أقفاص واحدة توضع على وسادة تدفئة حتى يتم الوعي الكامل استعاد (الشكل 1).
5. بعد 12 ساعة تطبيق المغناطيس، طفيفة تخدير الحيوان مع إيسوفلوراني وإزالة المغناطيس. أخذ صورة فوتوغرافية لمواقع الجرح، لتسجيل مظهر الأولية بو (يوم الوقت 0 نقطة). تغطية الجرح مع الفيلم خلع الملابس شفافة (م 3) لتجنب التجفيف أو التلوث.

5-بعد العمليات الجراحية الرعاية الحيوانية، والقتل الرحيم، وجمع الأنسجة لعلم الأنسجة

1. فورا بعد جراحة، حقن الحيوان مع 1 مل من المحلول الملحي 0.9% تحت الجلد للماء.
2. تحت الجلد حقن البوبرينورفين-ريال (1 مغ/كغ) فورا للتسكين.
3. حقن سيفازولين (50 مغ/كغ لمدة 3-7 أيام)، ميلوكسيكام يوميا تحت الجلد الحيواني (1 مغ/كغ)، ومرتين يوميا من إخلاء المثانة اليدوي.
4. ضع الحيوانات في أقفاص مفردة وتوفير الغذاء موجوداً والمياه libitum الإعلانية. الفئران بالخيال العلمي كاملة يمكن المشي باستخدام تلك الأمامية والاقتراب من الأغذية والمياه دون أي صعوبات.
5. إزالة مقاطع الجراحية 7 أيام بعد الجراحة الخيال.
6. في نقاط الوقت المطلوب بعد الخيال وإصابة الجلد، euthanize الحيوانات باستنشاق أول أكسيد الكربون₂ (3-5 دقائق)، وفقا للمبادئ "التوجيهية وبرايتون" شأن القتل الرحيم¹⁴.
7. جمع عينات الجلد الجرحى وإصلاح في الفورمالين 10% ح 24 وتخزينها ثم في الإيثانول 70% في 4 درجات مئوية حتى تمزيقها.
8. معالجة الأنسجة، تضمين في البارافين وإنشاء أقسام رقيقة (5 ميكرومتر) في مبضع. وصمة عار والهيماتوكسيلين ويوزين (H & E) لتصور مورفولوجيا الأنسجة (الشكل 3). للدراسات إيمونوهيستوتشيميستري (الشكل 4)، وصمة عار الأقسام باستخدام الأجسام المضادة المناسبة ل Ki67 (انتشار)، CD31 (الأوعية)، والعضلات الملساء ألفا أكتين (α-SMA) كما هو موضح في كومار et al.¹²
   ملاحظة: يمكن استخدام برمجيات تحليل الصورة تحديد حجم الصورة ميزات¹².

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

ينشئ هذا البروتوكول بو في الإعداد لإكمال "عشر بإيجاز" (كما هو موضح في الشكل 1)، وجميع الفئران مع أو بدون علوم كاملة التسامح المغناطيس جيدا جداً، التي ظلت في موضعها الأصلي لكامل ح 12 (الأرقام 1 ج، د 1، 1 واو، ح 1 ). ووضع جميع الفئران جرحين دائرية مفصولة بو...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

ويصف البروتوكول في هذه الدراسة نموذج تجريبي رواية من صديد لتقييم أثر الخيال على التئام. تم فعل الجلد صديد عبر تطبيق ح 12 من قطرها 12 مم اثنين القرص المغناطيس في حظيرة جلد الظهرية، أما تعيين أعلى أو أسفل الموقع الخيال. وتظهر البيانات أن علوم يبطئ التئام الجلد في الفئران. الأهم من ذلك، هذه المل?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Magnets	Master Magnetcs, Inc., Castle Rock, CO	CD14C	3800 G Magnetic force
Mice standard diet	PMI Nutrition International, Brentwood, MO		Standard Food Pellet
Isoflurane	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 029405
ImageJ	NIH, Bethesda, MD		Image Analysis Software
BETADINE Surgical Scrub	HENRY SCHEIN Animal Health
Ophthalmic Ointment	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 008897
NAIR-Hair Remover Lotion	Church & Dwight Co., Inc. Princeton, NJ
ELOXIJECT (meloxicam) Injection	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 049755	5 mg/mL, 10 mL
Cefazolin Sodium	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 054846	1 g, 10 mL bottle
Buprenorphine-SR	ZooPharm, Windsor, CO	-	-
0.9% Sodium Chloride Injection USP	BRAUN, Irvine, CA	S8004-5384
10% Neutral Buffered Formalin	VWR, Radnor, PA	16004-130
BALB/C Male Mouse	Charles River Lab., Wilmington, MA	28
Sterile Cotton Tipped Applicator	Puritan, Guilford, ME	SKU#: 25-806
Michel Suture Clips	Fine Science Tools (USA) Inc., Foster City, CA	12040-01
Surgical Suture, U.S.P.	Henry Schein Animal Health	101-2636