Medulla Spinalis Yaralanmalarında sonra yatak yarası fare modeli

Özet

Burada, Medulla Spinalis Yaralanmalarında (SCI) bir fare modelinde klinik cilt basınç ülserleri (irin) ikna etmek için basit bir yöntem açıklanmaktadır. Bu model ekran için önceden klinik çalışmalarda farklı therapeutics SCI hastaların şifa irin için kullanılabilir.

Özet

Basınç ülserleri (irin) travmatik spinal kord yaralanması (SCI) komplikasyonlar zayıflatıcı yaygındır ve kemik çikintilari çevresinde Yumuşak dokularda meydana eğilimindedir. Orada ancak, az kontrollü deneysel ayarları hayvan modellerinde bağlamında Cilt yara iyileşmesi SCI etkisi hakkında bilinmektedir. Bu çalışmada, irin tam SCI bağlamında bir basit, non-invaziv, tekrarlanabilir ve klinik fare modeli sunulur. Yetişkin erkek fareler (Balb/c, 10 haftalık) depilated ve traş. Sonrası epilasyon (24 saat), fareler tabi laminektomi tam omurilik transeksiyon (T9-T10 omurga) tarafından takip için. Hemen sonra bir cilt kapağı fareler arkasında kaldırdı ve sonraki 12 h, böylece bir PU aşağıdaki gün içinde geliştirilen iskemik bir alan yaratmak için yerinde düzenlenen iki adet manyetik diskler arasında gözükeceksin. Yaralı alanları doku ödemi ve epidermal kaybolması 3 gün sonrası mıknatıs uygulama tarafından gösterdi. İrin kendiliğinden gelişmiş ve iyileşti. Şifa olduğunu, ancak, SCI farelerde daha yavaş karşılaştırıldığında yara bilm tersine, seviyenin oluşturulduğu sırada SCI fare denetlemek için şifa fark yara bilm seviyesinden oluşturulduğu sırada bilim ve denetim SCI fareler arasında görüldü Bu model deri PU geliştirme ve bu yaraların sarılmasına yardımcı olabilir tedavi yaklaşımları test olarak SCI sonra de şifa dinamiklerini incelemek için potansiyel olarak yararlı bir araçtır.

Giriş

Basınç ülserleri (irin) travmatik SCI¹büyük ikincil komplikasyonlar vardır. İrin cilt ve/veya genellikle kemik çikintilari üzerinde iken hasta oturuyor veya¹yatarken vücut ağırlığı konsantre nerede oluşur temel alınan dokular için yerelleştirilmiş yaralanmalar vardır. Cilt, yağ ve kas yerelleştirilmiş iskemi, doku iltihabı, mekanik hasar ve nekroz^2,3gelişimine yol açar bu sabit basınç maruz kalır.

İrin gelişimi basınç ve kayma, yükleme süresi, cilt nem ve sıcaklık, yaralanma uzun ömürlü ve genel cilt hijyen büyüklüğü de dahil olmak üzere çeşitli yerel faktörlerden etkilenir. Genel fiziksel durumu, kemik ve kas dokusu morfoloji ve gücü⁴, hastanın yaşı, hematolojik önlemler, cinsiyet ve medeni durum, eğitim de dahil olmak üzere bile sosyo-ekonomik faktörler gibi bir rol sistemik etken de vardır, ve gelir^4,5.

Önleme ve tedavi irin birikimi SCI hastalarda önemli sorunlar kalır. SCI hastaların irin vakaların, ~ 30-%40 60-%85, büyük olasılıkla zayıf skar dokusu ve koruyucu hissi¹eksikliği nedeniyle re-oluşumu oranında ile geliştirmek. Böylece, irin genellikle SCI hastalar yeniden yatış için açar ve genel olarak sağlık sistemi^5,6,7,8,9 önemli mali yük (%80 daha fazla SCI vs sadece) poz ^{, 10}.

Bizim bilgi en iyi şekilde, orada hiçbir çalışma yapılmıştır uygun hayvan modellerin eksikliği nedeniyle SCI PU iyileşme süreci üzerindeki etkisini araştırmak için kontrollü deneysel ayarlarında. Burada, PU deri bir tekrarlanabilir ve klinik fare modeli kullanılmıştır. Bu model PU başlangıçlı ve sonraki şifa dinamiklerini incelemek için aynı zamanda PU önlemek veya PU bilm bağlamında şifa geliştirmek için potansiyel tedavi yaklaşımları test etmek için kullanılabilir

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Rutgers Üniversitesi Kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmış bir protokol uyarınca tüm işleme hayvan ve cerrahi girişimler yapıldı. Fareler standart diyet ve su ad libitum beslenen edildi.

1. cerrahi ve cerrahi olmayan aletler hazırlanması

1. Bir otoklav içinde cerrahi ve cerrahi olmayan aletleri sterilize.
2. Cerrahi ameliyat masasına % 70 etanol ile temiz ve sıcak bir Isıtma yastığı ile 37 ° c
3. Isıtma yastığını ameliyat masasında yer ve steril cerrahi perdeler ile kapağı.
   Not: Tüm yaşam yordamlar, "No Touch" teknik burada kısırlık korumak için kullanılır.

2. hayvan ve T9-T10 Spinal laminektomi gerçekleştirme hazırlanması

1. Yetişkin (Balb/c) 10-hafta-yaşlı erkek fareler temin etmek. Anestezi %5 isoflurane ile başlayan bir oksijen tüpü kullanarak her hayvan teşvik ve yordamları kalanı için sedasyon korumak için 2-%3 azaltın.
2. Tam anestezi bir kuyruk/pençe indüklenen çimdik duyusuna stimülasyon yanıt alabilme tarafından onaylayın.
3. Saç patolojisi (kafa kuyruk) bir elektrik kesme makinesi ile tıraş ve geri kalan saç kaldırmak için depilatory krem (3 dk) uygulayın. Son olarak, su/ıslak fırçalayın çalışan patolojisi yıkama ve hayvanlar için onların kafes dönmek.
   Not: Bu cilt ve cilt yaralama esnasında kimyasal kirlenme ek tahrişi önlemek gereklidir
4. Ertesi gün, cerrahi işlem sırasında kurumasını gözleri korumak ve sonra Cilt 3 alternatif hazırlıklar betadin fırçalayın ve % 70 etanol ile fırçalayın kornealar oftalmik merhem uygulamak.
5. Neşterle, arkadaki T8-T12 vertebra düzeyinde orta çizgi boyunca bir cilt kesi (~1.0-1.5 cm) gerçekleştirin.
   Not: Vertebra düzeyi T13 omur^11,12' ye karşılık yüzen kaburga konumunu kullanarak omur T13 üzerinden geri sayım tarafından tanımlanır.
6. Cilt altı yağ dokusu paraspinal kas erişin ve sonra onları yavaş yavaş spinöz süreçleri ve lamina her iki tarafta ortaya çıkarmak için incelemek için temizleyin.
   Not: Bu yordam çok dikkatli bir şekilde aşırı kanama veya spinal kord, bu noktada herhangi bir yaralanma önlemek için ne.
7. Bir laminektomi omurilik (T9-T10 omurga) hafifçe spinal lamina microdissecting forseps kullanarak soyulması tarafından ortaya çıkarmak için gerçekleştirin.
   Not: Böylece aşırı omurilik yaralanma oluşturulmasını kolaylaştırmak için maruz laminektomi gerçekleştirin. Kontrol grubunda sadece laminektomi gerçekleştirilir.

3. performans T9-T10 tam Medulla Spinalis Yaralanmalarında

1. Forseps kullanarak, omurga T8 ve Asansör yukarı omurilik eğriliği abartmayı güvenli.
2. İyi makas kullanırken, omurilik sonuna kadar tam transeksiyon sağlamak için vertebral kanalın yere T9 ve T10 omur arasında bölüm.
3. Cerrahi mikroskop altında tam transeksiyon gözlemleyerek sonra Subkutan yag bir parça omurilik cerrahi site kapatma önce ek koruma sağlamak üzere laminektomi site üzerinden uygulanır.
4. Son olarak, yarayı kapatın ve dikiş paravertebral kaslar, yüzeysel fasya, sürekli dikiş kullanarak ve deri dikiş klipleri¹²kullanarak kapatın.
5. Post-SCI, bağırsak hareketi izlemek ertesi gün; Ancak, idrar kesesi tarafından el ile mesane tahliye yönetin.
   Not: Basso fare ölçek (BMS) gün 2 hindlimb fonksiyonel iyileşme sonrası-SCI ilerlemesini izlemek için kullanılan ve sonra haftalık, bkz: ek resim 1^11,12,13.

4. cilt basınç Ülseri tam SCI sonra indüksiyon

1. SCI ameliyattan hemen sonra arkadaki Hayvan betadin ve % 70 alkol ile fırçalayın.
2. Sakrum, çok küçük bir hacim (10 µL) eşit uzaklıkta yer ~0.5-1.0 cm apart, mıknatıs uygulama sitesi etrafında elips 25 G iğne kullanarak %0.125 bupivacaine çözüm yakınındaki dorsal cilt SCI sitenin altındaki bir PU için enjekte.
   Not: SCI site yukarıda bir PU için servikal bölgenin yakınındaki dorsal cilt enjekte.
3. Yavaşça fare arkasındaki deri kat Asansör ve 2 manyetik disk arası (5 × 12 mm çap, 2.4 g, 3800 G Manyetik kuvvet) sandviç (şekil 1). ^{11 , 12}
4. Sonra hemen yerleştirildiği mıknatıs uygulaması, tek kafesleri için dönüş hayvanlar üzerine tam bilinç olana bir Isıtma yastığı (şekil 1) ele geçirdi.
5. 12 h mıknatıs uygulamasının sonra hafifçe isoflurane hayvanla anestezi ve mıknatıslar kaldırın. PU ilk görünümünü kaydetmek için yara siteleri, bir fotoğraf çekmek (gün 0 saat üzerine gelin). Kurutma veya kontaminasyonu önlemek için şeffaf soyunma film (3 M) yarayla kapsar.

5. ameliyat sonrası hayvan bakımı, ötenazi ve Histoloji dokusu toplamalarında

1. Ameliyattan hemen sonra 1 mL % 0,9 serum subkutan hidrasyon için hayvan enjekte.
2. Subkutan buprenorfin-SR (1 mg/kg) hemen analjezi için enjekte et.
3. Subkutan hayvan günlük Meloksikam (1 mg/kg) ve sülfadiyazin (3-7 gün için 50 mg/kg) ve iki kez günlük el ile mesane tahliye enjekte et.
4. Tek kafeslerde hayvanlar koyun ve erişilebilir gıda sağlamak ve ad libitumsu. Fare tam SCI ile onların ön ayakları kullanılarak yürüyün ve gıda ve su herhangi bir sorun olmadan bir yaklaşım.
5. Cerrahi klipleri SCI ameliyat sonrası 7 gün kaldırın.
6. Bilim ve cilt yaralı sonra istediğiniz zaman noktalarda, hayvanlar ötenazi¹⁴travma yönergeler doğrultusunda CO₂ inhalasyon (3-5 dk), tarafından ötenazi.
7. Yaralı deri örnekleri toplamak, 24 h için % 10 formalin düzeltin ve sonra 4 ° C'de % 70 etanol kesit kadar saklayın.
8. Doku işlemek için parafin içinde katıştırmak ve ince bir microtome bölümlerde (5 mikron) oluşturur. Hematoksilen ve Eozin (H & E) doku Morfoloji (şekil 3) görselleştirmek için leke. İmmünhistokimya çalışmaları (şekil 4) için uygun antikorlar Ki67 için kullanma bölümlerine leke (yayılması), CD31 (angiogenez) ve alfa-düz kas aktin (α-SMA) Kumar vd.¹² ' açıklandığı gibi
   Not: Görüntü analiz yazılımı görüntü özellikleri¹²ölçmek için kullanılabilir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Bu iletişim kuralı bir PU ayarı tam bilm kısa bir süre içinde oluşturur ( şekil 1' de gösterildiği gibi), tüm fare ile veya olmadan tam SCI mıknatıslar çok iyi, hangi orijinal konumlarını tam 12 h (rakamlar 1 c, 1 d, 1f, 1 h için kaldı tolere ). Bütün fareler normal doku (şekil 1e, 1 g, 1I) bir köprü ile ayrılmış iki dairesel yarası geliştirdi. İlk yaralama yanıt farelerde SCI (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Bu çalışmada protokolünü irin yara iyileşmesi üzerinde SCI etkisini değerlendirmek için bir roman deneysel modeli açıklar. Cilt irin iki 12 mm çapında disk mıknatıs SCI sayfanın altında veya üstünde ikisinden biri koymak bir dorsal cilt kat 12 h uygulanması ile indüklenen. Veriler SCI Cilt yara farelerde iyileşmesi aşağı yavaşlatır göstermektedir. Önemlisi, bu gözlemler özellikle cilt yaraları SCI innervasyon seviyesinin altında SCI seviyesinden yapılan yaralar olarak yapılmış ve böy...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Magnets	Master Magnetcs, Inc., Castle Rock, CO	CD14C	3800 G Magnetic force
Mice standard diet	PMI Nutrition International, Brentwood, MO		Standard Food Pellet
Isoflurane	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 029405
ImageJ	NIH, Bethesda, MD		Image Analysis Software
BETADINE Surgical Scrub	HENRY SCHEIN Animal Health
Ophthalmic Ointment	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 008897
NAIR-Hair Remover Lotion	Church & Dwight Co., Inc. Princeton, NJ
ELOXIJECT (meloxicam) Injection	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 049755	5 mg/mL, 10 mL
Cefazolin Sodium	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 054846	1 g, 10 mL bottle
Buprenorphine-SR	ZooPharm, Windsor, CO	-	-
0.9% Sodium Chloride Injection USP	BRAUN, Irvine, CA	S8004-5384
10% Neutral Buffered Formalin	VWR, Radnor, PA	16004-130
BALB/C Male Mouse	Charles River Lab., Wilmington, MA	28
Sterile Cotton Tipped Applicator	Puritan, Guilford, ME	SKU#: 25-806
Michel Suture Clips	Fine Science Tools (USA) Inc., Foster City, CA	12040-01
Surgical Suture, U.S.P.	Henry Schein Animal Health	101-2636