העכבר מודל של כיבים לחץ לאחר פגיעה בחוט השדרה

Summary

כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה כדי לגרום כיבים בעור הרלוונטית קלינית לחץ (מוגלה) במודל של עכברים של פגיעה בחוט השדרה (מדע). מודל זה יכול לשמש במחקרים קליניים למסך הרפוי שונים עבור הריפוי מוגלה בחולים SCI.

Abstract

הלחץ כיבים (מוגלה) נפוצים מתישה סיבוכים של פגיעה בחוט השדרה טראומטי (מדע), נוטים להופיע ברקמות הרכות סביב הפטמתיים. עם זאת, מעט ידוע על ההשפעה של מדע בדיוני על העור פצע ריפוי בהקשר של הגדרות ניסויים מבוקרים במודלים חייתיים. במחקר זה, מוצג מודל עכבר פשוטה, לא פולשנית, הדירים הרלוונטית קלינית של מוגלה בהקשר של מדע שלם. עכברים זכרים בוגרים (Balb/c, בן 10 שבועות) היו מגולח, depilated. לאחר אפילציה (24 שעות), עכברים היו נתונים laminectomy ואחריו חיתוך בחוט השדרה מלאה (T9-T10 חוליות). מיד לאחר מכן, קיפול העור בחלק האחורי של העכברים הרים, דחוקה בין שני דיסקים מגנטי שנערך במקום במשך 12 שעות הבא, וכך ליצור אזור איסכמי שהתפתח פו במהלך הימים הבאים. האזורים הפצועים הפגינו בצקת רקמות והעלמות עוריות על-ידי יישום מגנט שלאחר יום 3. מוגלה באופן ספונטני פיתח, נרפא. הריפוי היה, עם זאת, ביחס איטי בעכברים SCI לשליטה עכברים שאינם-SCI כאשר הפצע נוצר מתחת לגובה של הפוליטיקה לעומת זאת, אין הבדל ריפוי נראתה בין עכברים שאינו מדע בדיוני SCI ושליטה כאשר הפצע נוצר מעל מפלס לביוטכנולוגיה המודל הזה הוא כלי שעשוי להיות שימושי כדי ללמוד את הדינמיקה של התפתחות PU העור וריפוי לאחר SCI, כמו גם כדי לבחון גישות טיפוליות שעשויים לעזור לרפא פציעות כאלה.

Introduction

הלחץ כיבים (מוגלה) הם לסיבוכים המשניים של SCI טראומה¹. מוגלה הן פציעות מקומי בעור ו/או כבסיס רקמות המתרחשות בדרך כלל מעל הפטמתיים משקל הגוף איפה מרוכזים כאשר המטופל יושב או שוכב¹. עור, שומן, שריר חשופים ללחץ הזה שמוביל להתפתחות של איסכמיה המותאמות לשפות אחרות, דלקת, פגיעה מכנית ונמק^2,3.

התפתחות מוגלה מושפע במספר גורמים מקומיים, כולל את סדר הגודל של הלחץ, הטיה, טעינת משך, הלחות בעור, טמפרטורה, ופוגעות פגיעה עור כללי היגיינה. ישנם גם גורמים מערכתית כי תפקיד, כגון הגופני הכללי, עצם, מורפולוגיה רקמת שריר, כוח⁴, גיל החולה, אמצעי hematological, מגדר גורמים אפילו הסוציו-אקונומי, כולל מצב משפחתי, השכלה, הכנסה^4,5.

הטיפול של מוגלה ומניעת נותרו אתגרים משמעותיים בחולים SCI. חולים SCI לפתח מוגלה ~ 30-40% של המקרים, עם קצב re-מופע של 60-85%, כנראה עקב רקמת צלקת חלשה וחוסר תחושה מגן¹. לפיכך, מוגלה מובילה לעיתים קרובות אשפוז מחדש של חולים SCI, בסך הכל מהווים נטל כלכלי משמעותי (80% יותר לעומת SCI בלבד) מערכת הבריאות^5,6,-^7,-^8,-^{9 , 10}.

לפי מיטב ידיעתנו, היו מחקרים לא בהגדרות ניסוי מבוקר כדי לחקור את ההשפעה של מדע בדיוני על תהליך הריפוי PU בשל היעדר בדגמים בעלי חיים מסוימים. כאן, מתואר דגם העכבר הרלוונטית קלינית הדירים של פו בעור. מודל זה יכול לשמש כדי ללמוד את הדינמיקה של תחילת PU וריפוי הבאים, כמו גם לבחון גישות טיפוליות אפשריות כדי למנוע פוליאורטן או לשפר את פו ריפוי בהקשר של הפוליטיקה

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

לטיפול בבעלי חיים וכל הניתוחים בוצעו לפי פרוטוקול אושרה על ידי רוטגרס אוניברסיטת אכפת חיה מוסדיים שימוש הוועדה. עכברים הואכלו בתזונה רגילה ומים ad libitum.

1. הכנת וכלי ניתוח כירורגי

1. לחטא את ניתוח וכלי ניתוחי ב החיטוי.
2. לנקות שולחן הניתוחים כירורגית עם 70% אתנול וחם כרית החימום כדי 37 מעלות צלזיוס.
3. הניחו כרית החימום על שולחן הניתוחים, לכסות אותו. עם וילונות כירורגי סטרילי.
   הערה: בכל ההליכים הישרדות, הטכניקה "לא לגעת" משמש כאן כדי לשמור על עקרות.

2. הכנת חיות וביצוע Laminectomy בעמוד השדרה את T9-T10

1. להביא עכברים (Balb/c) זכר בן שבוע-10 למבוגרים. לגרום הרדמה של כל בעל חיים באמצעות התחלה של משאף עם 5% איזופלוריין ולאחר מכן להקטין ל 2-3% כדי לשמור על הרגעה עד לתום ההליכים.
2. לאשר הרדמה מלאה על ידי העלאת אין תגובה גירוי nociception זנב/כפה קמצוץ המושרה.
3. לגלח את השיער מעל dorsum (ראש אל הזנב) קוצץ חשמלי, ולאחר מכן החל את קרם depilatory (3 דקות) כדי להסיר את השיער הנותר. לבסוף, לשטוף את dorsum עם זורמים מים/רטוב לשפשף, ולחזור החיות לכלובים.
   הערה: הדבר נחוץ למנוע גירוי נוסף אל העור ואל זיהום כימי בזמנו של העור ופצעו
4. למחרת, להחיל משחה אופטלמולוגיות קרניות להגן על העיניים מפני ייבוש במהלך ההליך הכירורגי ולאחר מכן, לשפשף את העור עם 3 ההכנות חלופי betadine סקראב ו- 70% אתנול.
5. עם איזמל, לבצע חתך בעור (~1.0-1.5 ס מ) לאורך הקו האמצעי על הגב ברמה של חוליות T8-טי12.
   הערה: הרמה של חוליות מזוהה על ידי חזרה ספירת החוליה מ- T13 באמצעות המיקום של הצלעות צף התואמים ל- T13 חוליה^11,12.
6. נקה את רקמת השומן התת עורית כדי לקבל גישה אל השרירים paraspinal, ואז לנתח אותם לאט כדי לחשוף את תהליכי קוצניים, סחוס בשני הצדדים.
   הערה: לבצע הליך זה בזהירות רבה, כדי למנוע דימום עודף או לכל פגיעה בחוט השדרה, בשלב זה.
7. לבצע laminectomy לחשוף חוט השדרה (T9-T10 חוליות) על ידי בעדינות מתקלפת הנדן בעמוד השדרה באמצעות מלקחיים microdissecting.
   הערה: לבצע את laminectomy כך עודף של חוט השדרה חשוף כדי להקל על היצירה של הפגיעה. בקבוצת הביקורת, מבוצע רק laminectomy.

3. ביצוע של הפגיעה בחוט השדרה מלאה T9-T10

1. באמצעות מלקחיים, אבטח השדרה-T8 ומעלית למעלה כדי שיוריד את עקמומיות בעמוד השדרה.
2. באמצעות מספריים בסדר, סעיף חוט השדרה בין החוליה T9, T10 כל הדרך עד הרצפה של תעלת השדרה, כדי להבטיח חיתוך מלאה.
3. לאחר התבוננות להחיל חיתוך מלאה תחת מיקרוסקופ כירורגי, חתיכת שומן תת עורית מעל האתר laminectomy כדי לספק הגנה נוספת בעמוד השדרה לפני סגירת האתר כירורגית.
4. לבסוף לסגור את הפצע, תפר את השרירים הבין-חולייתיים, fascia שטחית, באמצעות בתפר רצוף, ולאחר מכן סגור את העור באמצעות תפרים קליפים¹².
5. פוסט-SCI, לבחון את תנועת המעיים ביום הבא; עם זאת, ניהול על שלפוחית השתן על ידי פינוי שלפוחית השתן ידנית.
   הערה: גודל העכבר באסו (BMS) יכולים להיות בשימוש כדי לעקוב אחר ההתקדמות של hindlimb שחזור פונקציונלי פוסט-SCI-יום 2, ואז שבועי, ראה משלים איור 1^11,12,13.

4. אינדוקציה של העור פצע לחץ לאחר SCI מלאה

1. מיד לאחר הניתוח SCI, לסבן את הגב של החיה עם betadine ו- 70% אלכוהול.
2. עבור משחק פאזל להלן האתר SCI, להזריק בעור הגבי ליד עצם העצה, נפח קטן מאוד (10 µL) של 0.125% נמשך פתרון באמצעות מחט 25 גרם ב ס ~0.5-1.0 קו מקביל מקומות רחוקים, אליפסה סביב האתר יישום מגנט.
   הערה: עבור משחק פאזל מעל האתר SCI, להזריק בעור הגבי ליד האזור צוואר הרחם.
3. בעדינות הרם קיפול העור בחלק האחורי של העכבר, כריך זה בין 2 דיסקים מגנטי (5 × 12 מ"מ קוטר, 2.4 g, כוח מגנטי 3800 גר') (איור 1). ^{11 , 12}
4. מיד לאחר יישום מגנט, החזרה חיות בכלובים יחיד להציב על גבי כרית החימום עד הכרה מלאה חזרה (איור 1).
5. לאחר 12 שעות של יישום מגנט, בקלות ראש עזים ומתנגד חיה עם איזופלוריין ולהסיר את המגנטים. לקחת תמונה של האתרים הפצע, כדי להקליט את המראה הראשוני של פו (יום 0 זמן הצבע). לכסות את הפצע עם רוטב שקוף סרט (3 מ') כדי למנוע ייבוש או זיהום.

5. לאחר הניתוח טיפול בבעלי חיים, המתת חסד, אוסף רקמה עבור כפפות

1. מיד לאחר הניתוח, להחדיר את החיה 1 מ"ל של תמיסת מלח 0.9% subcutaneously לטיפול בהתייבשות.
2. Subcutaneously להזריק הבופרנורפין-SR (1 מ ג/ק ג) מיד על שיכוך כאבים.
3. מזריקים subcutaneously בעלי חיים meloxicam יומי (1 מ"ג/ק"ג), צפאזולין (50 מ"ג/ק"ג 3-7 ימים), ואת פינוי שלפוחית השתן ידני מדי יום פעמיים.
4. מקום חיות בכלובים יחיד לספק מזון נגיש, מים ad libitum. עכברים עם מדע שלם ניתן ללכת באמצעות forelimbs שלהם, הגישה של מזון ומים ללא קשיים כל.
5. הסר כירורגיים 7 ימים לאחר הניתוח SCI.
6. בנקודות הזמן הרצויים לאחר SCI ופצעו העור, המתת חסד בבעלי חיים על ידי שאיפת₂ CO (3-5 דקות), בהתאם להנחיות AVMA על המתת חסד¹⁴.
7. לאסוף דגימות עור פצוע, לתקן בפורמלין 10% במשך 24 שעות ולאחר מכן לאחסן ב- 70% אתנול ב 4 ° C עד חלוקתה.
8. כדי לעבד רקמות, להטביע פרפין וצור מקטעים דק (5 מיקרומטר) מיקרוטום. כתם ועם hematoxylin אאוזין (H & E) כדי להמחיש את רקמת מורפולוגיה (איור 3). ללימודים אימונוהיסטוכימיה (איור 4), כתם למקטעים באמצעות נוגדנים המתאימים עבור Ki67 (הפצה), CD31 (אנגיוגנזה), ואני אקטין שריר חלק-אלפא (α-SMA) כפי שמתואר קומאר ואח¹²
   הערה: התמונה ניתוח תוכנה ניתן לכמת תכונות התמונה¹².

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

פרוטוקול זה יוצר משחק פאזל בסביבה של הפוליטיקה מלאה בקצרה (כמופיע באיור1), עכברים כל עם או בלי SCI מלאה נסבל את המגנטים. טוב מאוד, אשר נותרו למיקום המקורי שלהם במשך 12 שעות (דמויות 1 ג, 1 ד, 1f, 1 h המלא ). כל העכברים פיתחו שני פצעים עגולים המופרדים באמצעות ג?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

פרוטוקול במחקר זה מתאר מודל ניסיוני הרומן של מוגלה כדי להעריך את ההשפעה של מדע בדיוני על ריפוי הפצע. העור מוגלה היו המושרה באמצעות יישום 12 שעות של שני 12 מ מ, קוטר דיסק מגנטים על קיפול בעור הגבי, להגדיר מעל או מתחת האתר SCI. הנתונים מציגים SCI מאיטה ריפוי הפצע העור בעכברים. חשוב לציין, תצפיות אלה ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Magnets	Master Magnetcs, Inc., Castle Rock, CO	CD14C	3800 G Magnetic force
Mice standard diet	PMI Nutrition International, Brentwood, MO		Standard Food Pellet
Isoflurane	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 029405
ImageJ	NIH, Bethesda, MD		Image Analysis Software
BETADINE Surgical Scrub	HENRY SCHEIN Animal Health
Ophthalmic Ointment	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 008897
NAIR-Hair Remover Lotion	Church & Dwight Co., Inc. Princeton, NJ
ELOXIJECT (meloxicam) Injection	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 049755	5 mg/mL, 10 mL
Cefazolin Sodium	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 054846	1 g, 10 mL bottle
Buprenorphine-SR	ZooPharm, Windsor, CO	-	-
0.9% Sodium Chloride Injection USP	BRAUN, Irvine, CA	S8004-5384
10% Neutral Buffered Formalin	VWR, Radnor, PA	16004-130
BALB/C Male Mouse	Charles River Lab., Wilmington, MA	28
Sterile Cotton Tipped Applicator	Puritan, Guilford, ME	SKU#: 25-806
Michel Suture Clips	Fine Science Tools (USA) Inc., Foster City, CA	12040-01
Surgical Suture, U.S.P.	Henry Schein Animal Health	101-2636