Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يتم استخدام أسلوب أوتوراديوجرافي بشكل روتيني لدراسة ملزمة راديوليجاندس إلى أقسام الأنسجة لتحديد الأدوية النوعية أو الكمية.

Abstract

في المختبر autoradiography يهدف إلى تصور توزيع تشريحية من بروتين فائدة في الأنسجة من الحيوانات التجريبية، فضلا عن البشر. ويستند الأسلوب ملزمة محددة من راديوليجاند إلى هدفها البيولوجية. لذلك، أقسام الأنسجة المجمدة هي المحتضنة مع راديوليجاند الحل والربط إلى الهدف بعد ذلك مترجمة قبل الكشف عن تسوس المشعة، على سبيل المثال، باستخدام فيلم حساس أو فوسفور imaging لوحات. عرض أوتوراديوجرامس الرقمية الناتجة عن القرار المكانية الرائع، الذي يتيح للقياس الكمي والتعريب لربط راديوليجاند في هياكل تشريحية متميزة. وعلاوة على ذلك، يسمح التحديد الكمي لتوصيف الدوائية ليجند تقارب عن طريق الانفصال من الثوابت (كد)، الثوابت تثبيط (كأنا)، فضلا عن كثافة مواقع الربط (بكحد أقصى) في الأنسجة المحددة. وهكذا، الأسلوب يوفر معلومات حول هدف التعريب ويجند الانتقائية. هنا، يتمثل الأسلوب مع الوصف أوتوراديوجرافيك من حمض عالية تقارب γ-هيدروكسيبيوتريك (GHB) مواقع في أنسجة المخ الثدييات، مع التركيز بوجه خاص على اعتبارات منهجية فيما يتعلق بمقايسة الربط الربط معلمات، الاختيار في راديوليجاند وطريقة الكشف.

Introduction

أوتوراديوجرافي الطريقة التي توفر صوراً اضمحلال الإشعاعي. يتم استخدام التقنية بشكل روتيني لدراسة توزيع الأنسجة من البروتين من الفائدة في المختبر يقوم على تفاعل معينة الدوائي بين مجمع راديولابيليد وهدفها. وهذا يوفر معلومات مباشرة حول الانتقائية ليجند للهدف. ويمكن أيضا استخدام أوتوراديوجرافي في المختبر لتحديد الكمية من معلمات الربط الدوائي من راديوليجاندس، مثل ثابت التفكك (كد) وكثافة من مواقع الربط (بكحد أقصى)، وكذلك لتحديد تثبيط الثابت (Ki)1،يغاندس المتنافسة2. بالمقارنة مع الربط راديوليجاند هوموجيناتي التقليدية، قد أوتوراديوجرافي بميزة القدرة على تصور التشريح المكانية وتفاصيل مقتضبة عن أنماط التعبير الإقليمي3. ولذلك طريقة autoradiography بديل ذات صلة إلى إيمونوسيتوتشيميستري، لا سيما في حالة عدم وجود جسم تم التحقق من صحتها. Autoradiography وينفذ بسهولة في مختبر النظائر المشعة قياسية نظراً لتوافر راديوليجاند مناسبة مع خصوصية الدوائية المطلوبة، الوصول إلى كريوستات مبضع إعداد أقسام الأنسجة، وتصوير مناسبة جهاز قادر على تحليل توزيع النشاط الإشعاعي في أقسام الأنسجة الخاصة بكل منها. جدير بالذكر أن معيار تحديد مهم راديوليجاند كمية محدودة من الربط بالمواقع غير المستهدفة. هذا يمكن أن يكون للبروتينات، الأغشية أو مواد مثل البلاستيك أو عوامل أخرى، وهو يشار إليها باسم الربط غير محددة. عادة، غير محددة ملزمة غير ستثربل لكن يمكن أن تكون ستثربل إذا كان ذلك ينطوي على بروتين خارج الهدف محدد. أفضل طريقة للتحقق من صحة ملزمة محددة الحقيقية مقارنة بالانسجة التي تفتقر إلى الهدف، مثلاً، وراثيا هندسة الأنسجة (المغلوب)4.

هنا، يوضح المنهجية مع وصف الموقع عالية تقارب ملزمة لحمض هيدروكسيبيوتريك γ (GHB) في الدماغ الثدييات أوتوراديوجرافيك. فهم التفاعل الدوائي بين GHB وموقعها ملزمة صلة GHB دواء سريرياً مفيدة في علاج الخدار وإدمان الكحول5، ولكن أيضا مكوناً طبيعية من الدماغ الثدييات وترفيهية 6من المخدرات. ووصفت مواقع الربط GHB عالية تقارب أولاً استخدام [ح]3[GHB ملزمة للفئران الدماغ هوموجيناتي7. على مر السنوات، مواصلة الدراسات أوتوراديوجرافي مع [ح]3[GHB والتماثلية [ح]3[قد أظهرت سي إس-382 بكثافة عالية لربط مواقع في مناطق فوريبرين من الفئران8،9،10،9 من الماوس ، خنزير الدماغ11والإنسان القرد12. ومع ذلك، ظلت هوية الجزيئية وأهميتها الفنية الدقيقة من مواقع الربط هذه بعيد المنال.

ووضعت مع نية لزيادة تمييز مواقع الربط، وتيسيرا لدراسات عن دور GHB الفسيولوجية، راديوليجاندس متعددة تتضمن نظائر مختلفة تتمتع بمختلف الانتماءات ([ح]3[GHB، [3 ح] سي إس-382، [ح]3[هوكبكا و [125أنا] بنوف-GHB)14،13،،من1516(استعرض في17) (الشكل 1). تركيبة انتقائية عالية تقارب راديوليجاندس وكثافة أنسجة عالية جداً لربط مواقع قد سمحت لإنتاج صور عالية الجودة باستخدام الفوسفور التصوير تقنية9،11. جنبا إلى جنب مع موجز للنقاط العملية في إعداد تجربة أوتوراديوجرافيك ومثالا لتجسيد التفاصيل، سيركز القسم مناقشة ط) اختيار النويدات المشعة، وثانيا) اختيار شروط المقايسة، والثالث) استخدام الفوسفور لوحات التصوير مقابل فيلم الأشعة السينية. والهدف العام من هذه الورقة تقديم التفاصيل التقنية والمنهجية والعلمية على تقنية أوتوراديوجرافي لإعلام حول توزيع الأنسجة وتحليل الأهداف البروتين الدوائي.

Protocol

وأجرى جميع الحيوانات التعامل مع امتثالا للمبادئ التوجيهية من "الحيوان الدنماركي التجريب المفتشية".

ملاحظة: بروتوكول وصف هنا تغطي إعداد الأنسجة (أيأنسجة المخ الماوس)، في المختبر أوتوراديوجرافيك المقايسة بتفصيل كاف لإعداد الأسلوب في مختبر جديد، والتعرض فوسفور imaging لوحات، وكذلك تحليل دينسيتوميتريك اللاحقة من أوتوراديوجرامس (الشكل 2) بهدف إضفاء الطابع المحلي والتحديد الكمي لربط راديوليجاند في هياكل تشريحية متميزة. لمقارنة النسيجي، يرد بروتوكول لتلطيخ كريسيل البنفسجي. وعلاوة على ذلك، تحديد الربط غير محددة مع يجند متنافسة يندرج في إطار البروتوكول. للحصول على وصف مفصل في كيفية تحديد كد، بكحد أقصى أو كأنا، انظر المنشور السابق4.

1-الأنسجة إعداد كريوسيكتيونينج

  1. Euthanize الماوس بخلع عنق الرحم وتشريح فورا خارج الدماغ باستخدام مقص وملقط. مباشرة المضي قدما إلى الخطوة التالية لتجنب تلف الأنسجة.
  2. الأداة الإضافية-تجميد الأنسجة بغمر في مسحوق الثلج الجاف وغاز CO2 أو إيسوبينتاني. نقل الأنسجة المجمدة مباشرة إلى كريوستات مع درجة حرارة تعيين إلى-20 درجة مئوية. وبدلاً من ذلك، تخزين الأنسجة في-80 درجة مئوية حتى التجهيز.
    ملاحظة: تجنب المتكررة من ذوبان الجليد/تجميد للحد من تلف الأنسجة.
  3. واسمحوا الأنسجة تأقلم إلى-20 درجة مئوية في كريوستات لمدة 20 دقيقة قبل إجراء مزيد من المعالجة لتجنب تمزيق النسيج.
  4. تغطية حامل مناديل مع تضمين المتوسطة خارج كريوستات ومكان العينة الأنسجة المجمدة بسرعة في الاتجاه المرغوب فيه بينما لا يزال السائل المتوسطة التضمين. على سبيل المثال، ضع الدماغ الفأرة رأسياً على المخيخ بغية تحقيق الأقسام الاكليلية روسترال. نقل حامل مناديل مرة أخرى إلى كريوستات وفضح المتوسطة التضمين لدرجات حرارة أدناه-10 درجة مئوية لتصلّب.
    ملاحظة: ينبغي أن تكون مغلفة عينات الأنسجة الهشة في تضمين المتوسطة ضمن قوالب الأنسجة قبل تصاعد.
  5. موقف حامل مناديل في مبضع كريوستات. ضبط اتجاه الأنسجة لتجنب الفروع المائلة.
  6. قطع الأنسجة، بالتوجيه من أطلس ستيريوتاكسيك18 في أقسام من السمك المطلوب (12 ميكرومتر الموصى [ح]3[المسمى يغاندس). بدقة تصويب وتتكشف المقطع مع فرشاة صغيرة الحجم إذا لزم الأمر وذوبان الجليد-جبل المقطع إلى شريحة مجهر. تسلسلياً جمع الأجزاء من منطقة أهمية بالنسبة للنسخ المتماثل التقنية المطلوبة (مثلاً، 4 أقسام كل شريحة).
  7. السماح بالمقاطع في أن أيردري ح 1 قبل مواصلة التعامل مع الشرائح.
    ملاحظة: إضافة المواد المجففة إلى الشريحة مربعات يقلل الرطوبة بناء على مقاطع الأنسجة. بروكوتول يمكن أن يكون مؤقتاً هنا عن طريق تخزين المقاطع الطويلة الأجل في الشريحة مربعات في-80 درجة مئوية.

2. في المختبر أوتوراديوجرافي

تنبيه: النشاط الإشعاعي. ويعمل في أحد مختبرات معتمدة وفقا للوائح المحلية. ارتداء الملابس الواقية. التصرف وفقا تسوس المشعة أو الاستعانة بمصادر خارجية لشركة معتمدة.

  1. ذوبان الجليد الفروع لمدة 30 دقيقة على الأقل في درجة حرارة الغرفة (RT). قم بتسمية الشرائح مع الظروف التجريبية. استخدام قلم رصاص لأنه سوف حمم الشرائح في الإيثانول خلال تلطيخ اللاحقة.
  2. ضع الشرائح أفقياً في علب بلاستيكية.
    ملاحظة: تحديد المواقع الشرائح على منصة مرتفعة داخل علب بلاستيكية يسهل تعاملها.
  3. قبل إينكوباتي المقاطع التي شنت على الشرائح الموجودة في المخزن المؤقت للمقايسة تتكيف المستهدفة في السؤال (ليستخدم بروتوكول GHB، 50 مم خبو4 المخزن المؤقت pH 6.0) بعناية تطبيق وحدة تخزين مناسبة على الشريحة (700 ميليلتر للمقاطع الاكليلية القوارض 3-4).
    ملاحظة: تأكد من أن كل قسم مغطى تماما بالسائل.
    1. وتغطي في علب بلاستيكية بغطاء من أجل تجنب التبخر واحتضان مسبقاً في درجة حرارة ذات الصلة (للبروتوكول GHB إينكوباتي مسبقاً لمدة 30 دقيقة في RT) تحت لطيف المستمر (20 لفة في الدقيقة) تهتز على شاكر لوحة.
    2. لتحديد ربط غير محددة، الملحق العازلة المقايسة مع تركيز المجمع غير موسومة (للبروتوكول GHB، 1 مم GHB) ذات الصلة.
      ملاحظة: قد لا تكون الحضانة قبل اللازمة.
  4. من أجل إيقاف السائل ما قبل الاحتضان من كل شريحة ونقل الشرائح إلى علبة بلاستيكية.
  5. لتجنب الجفاف، فورا احتضان الفروع مع تركيز راديوليجاند في المخزن المؤقت للفحص تحت الشروط المطلوبة ذات الصلة (للبروتوكول GHB، 1 نانومتر [ح]3[هوكبكا ح 1 في RT) التي تغطي الأجزاء تماما مع راديوليجاند الحل (700 ميليلتر للمقاطع الاكليلية القوارض 3-4).
    1. احتضان تحت ظل لطيف المستمر (20 لفة في الدقيقة) تهتز من علب بلاستيكية مع غطاء مغلق.
      ملاحظة: يمكن التحقق من أن تركيز راديوليجاند عن طريق العد قاسمة في عداد التﻷلؤ سائل.
  6. إزالة الحل الحضانة بصب قبالة السائل ونقل الشرائح إلى رف شريحة مجهر. ينتقل فورا إلى الخطوة التالية لتجنب الجفاف القسم.
  7. يغسل الشرائح. لبروتوكول GHB وتغسل بمقايسة المثلج المخزن المؤقت مرتين ل 20 ثانية وشطف ثم مرتين بغمس حامل الشرائح في الصواني مليئة بالماء المقطر المثلج لإزالة الأملاح. ضع الشرائح عمودياً في رفوف للتجفيف على الأقل 1 ح في الرايت أو مجموعة الشرائح لمدة 5 دقائق مع منفاخ الجافة لدرجات الحرارة الباردة.
    ملاحظة: يجب أن يكون الأمثل الغسيل، مثلاً، الغسيل واسعة قد تكون مفيدة لتقليل ملزمة غير محددة.
  8. نقل الشرائح إلى التبعي تحتوي على مسحوق بارافورمالدهيد (PFA) للتثبيت بين عشية وضحاها مع أبخرة منهاج عمل بيجين في الرايت حفاظا على سلامة المجمع يجند المستهدفة.
    تنبيه: منهاج عمل بيجين السامة. بوسيتيونثي التبعي في الدخان هود وتجنب ملامسة الجلد/العين منهاج عمل بيجين.
  9. في اليوم التالي، نقل الشرائح إلى مربع مجففة تحتوي على هلام السليكا ح 3 على RT للقضاء على الرطوبة.

3-التعرض لألواح تصوير الفوسفور والمسح الضوئي

  1. وضع المقاطع في كاسيت لوحة تصوير الإشعاعي محمية مع الأنسجة التي تواجه. للاحقة الكمي لربط راديوليجاند، تشمل عبارة [ح]3[في كل كاسيت. ترتيب المقاطع شكل عشوائي وفضح المقاطع للمقارنة المباشرة في الكاسيت نفسه.
  2. محو الفوسفور التريتيوم تراعي التصوير لوحة مباشرة قبل الاستخدام من أجل إزالة الإشارات المتراكمة من التخزين وإزالة الإشارات الخلفية. ولذلك، تحميل اللوحة في آلة التصوير الفوسفور وأن يعرض عليه مرئية/الأشعة تحت الحمراء الخفيفة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  3. إزالة اللوحة من الفوسفور آلة التصوير ووضعه مباشرة على المقاطع في الكاسيت. تأكد من أن يتم إغلاق الكاسيت تماما. تعرض المقاطع إلى لوحة التصوير الفوسفور لمدة 3 أيام في الرايت محمية من الضوء.
  4. لأن يمحو ضوء إشارة من لوحة التصوير، بعناية فتح الكاسيت في الظلام وفورا نقل لوحة التصوير في مربع تصوير الفوسفور في الظلام أو مكان تصوير الفوسفور في غرفة مظلمة.
    ملاحظة: تأكد من يرمز الترتيب المكاني للشرائح أثناء التعرض بغية تحديد العينات الفردية على الصورة الرقمية بعد تحليل. ولذلك، عرض لوحات التصوير الفوسفور أيضا إحدى زوايا قطع في زاوية متميزة من أجل تحديد الاتجاه الصحيح للوحة على الصورة الرقمية.
  5. تفحص اللوحة في أعلى دقة ممكنة للحصول على صورة رقمية.

4. اختياري: كريسيل تلطيخ البنفسجي من أقسام الأنسجة

  1. إعداد حل كريسيل البنفسجي 1% بخلط 5 غ خلات كريسيل البنفسجي في 500 مل مياه (dH2س) حتى يذوب (حوالي 2 ح). التصفية من خلال ورقة تصفية باستخدام قمع في زجاجة 500 مل جديدة. ضبط الأس الهيدروجيني إلى 3.5-3.8.
  2. تعيين موضع تلطيخ الشريحة تحت غطاء الدخان. إعداد الصواني مع الحلول التالية في علب البولي بروبلين أبيض (باستثناء زيلين نفط):
    ألف 50% درهم ethanol/50%2س
    ب 70% ethanol/30% dH2س
    جيم 100% إيثانول
    د إيثانول 100%
    هاء 100% dH2س
    واو 1% كريسيل البنفسجي
    زاي حمض الخليك 0.07% (إضافة 175 ميليلتر من حامض الخليك إلى 250 مل من dH2س).
    حاء – 100% زيلين نفط في علب مقاومة للمذيبات الخضراء
    أولاً زيلين نفط 100% في علب مقاومة للمذيبات الخضراء
  3. نقل الشرائح إلى غطاء الدخان ووضعها في حامل شريحة.
  4. إذابة الدهون عن طريق زيادة سلسلة متدرجة من الإيثانول في dH2س إلى 100% إيثانول (علبة من أ إلى د) بغمس الشرائح لمدة 1 دقيقة.
  5. ترطيب العينات إلى dH2س عن طريق تنازلي تركيزات إيثانول (علبة من أ إلى د بترتيب عكسي، متبوعاً بدرج ه) بواسطة غمس الشرائح لمدة 1 دقيقة.
  6. تزج العينات في حل كريسيل البنفسجي لمدة 10 دقائق.
  7. شطف العينات في حمض الخليك 0.07% برفع الشرائح صعودا وهبوطاً بلطف ل 4-8 s. يغسل الشرائح بالغمس في dH2س لمدة 1 دقيقة.
  8. يذوي العينات بالانغماس الشرائح لمدة 30 ثانية في ترتيب تصاعدي تركيزات إيثانول (علبة من أ-د).
  9. نقل العينات من خلال علب اثنين من زيلين نفط 100% (علبة حاء وطاء) إخماد في الإيثانول.
  10. ترطيب العينات إلى dH2س عن طريق تنازلي تركيزات إيثانول (علبة من أ إلى د بترتيب عكسي، متبوعاً بدرج ه) بواسطة غمس الشرائح لمدة 1 دقيقة.
  11. إزالة الشرائح من المحلول الملحي مع الملقط. إضافة بضع قطرات من المذيبات العضوية تركيب وسائط كل شريحة وإضافة ساترة 24 × 60 مم في الأعلى لحماية العينات. إزالة فقاعات الهواء بين العينة وساترة بالضغط بلطف على ساترة.
    ملاحظة: الاحتفاظ الشرائح المتبقية في زيلين نفط خلال تصاعد لمنع التجفيف.
  12. الجافة الشرائح بين عشية وضحاها في غطاء دخان في الرايت
  13. الحصول على صورة للعينة مجهر و 1.25 X الهدف.

5-دينسيتوميتريك تحليل الصور الرقمية

  1. قياس الكثافة البصرية النسبي (قضبان) كل المعايرة القياسية من عبارة [ح]3[مع برنامج تحليل صورة.
    1. حدد منطقة متساوية في الحجم لكل نقطة من عبارة [ح]3[باستخدام أداة إنشاء المنطقة من عنصر القائمة تحديد المنطقة. تعيين رقم لكل المنطقة المحددة عن طريق النقر على الرقم تحت عنصر القائمة التسمية.
    2. تصدير قيم التطوير التنظيمي لكل نقطة من المعايرة القياسية بواسطة النقر فوق الملف | ه صدير | تقرير المنطقة 2D. نقل قيم رود إلى جدول بيانات وتطبيع بحجم المساحة المحددة. إجراء الانحدار الخطي للحصول على منحنى قياسي لمزيد من التحليل دينسيتوميتريك.
      ملاحظة: تأكد من أن المناطق المختارة هي المسمى بغية تحديد مطابقة القيم رود والعينات.
  2. إجراء التقدير الكمي أوتوراديوجرامس استخدام الملكية برامج التصوير بتحديد المنطقة التي تهم (ROI) باستخدام أداة إنشاء المنطقة في كل قسم، وقياس المواد المستنفدة للأوزون. حدد المنطقة نفسها في كل قسم عن طريق إنشاء قالب لمنطقة الفائدة التي يتم نسخها وتعديلها يدوياً إلى اختلافات طفيفة في تشريح الدماغ لكل أوتوراديوجرام. تحديد تشريح للعائد على الاستثمار بمقارنة أوتوراديوجرامس مع أطلس الدماغ18. وعند مقارنة العلاجات المتعددة، إجراء تحليل أعمى والعشوائية بغية تجنب الانتقاء المتحيز من رويس.
  3. تصدير قيم رود وأحجام لمناطق مختارة في جدول بواسطة النقر فوق الملف | ه صدير | تقرير المنطقة 2D.
  4. تقسيم قضيب قياس دوروا المحدد بالمنطقة للحصول على الكثافة في منطقة محددة.
  5. قياس قضيب الخلفية اللوحة وتصدير قيم رود المناظرة وحجم المنطقة في جدول بيانات. طرح إشارة خلفية متوسط من كل قيمة قضيب من كل عائدات الاستثمار.
  6. متوسط قضبان replicates التقنية، أي، قسم يعيد استخدام أنسجة من الحيوان نفسه.
  7. استخدام المنحنى القياسي لتحويل قضبان إلى وحدات راديوليجاند ملزمة، أي.، nCi/mg الأنسجة مكافئات (TE).
    ملاحظة: يتم استخدام TE المدة لأنه يتم إنشاء المعايير مع مواد محاكاة الأنسجة.
  8. التعبير عن ملزمة بتحويل لجنة التحقيق الوطنية/mg نمول/mg TE وفقا للنشاط المحدد في راديوليجاند (المعادلة 1).
    figure-protocol-10905(1)
  9. للحصول على قيم محددة ملزمة، طرح ملزمة غير محددة من مجموع ملزمة.
  10. متوسط ربط كل تكرار البيولوجية باستخدام متوسط التقنية يتطابق كل حيوان (التي تم الحصول عليها في الخطوة 5، 6).

النتائج

باستخدام بروتوكول وصف، كان تصور التشريحية توزيع مواقع الربط GHB عالية تقارب مع GHB التناظرية [ح]3[راديولابيليد هوكبكا في الدماغ الماوس، والتي قطعت إلى أقسام الاكليلية، السهمي والأفقية (الرقم 3 ). ولوحظت مستويات عالية من الربط في قرن آمون وقشرة، ملزمة أق...

Discussion

في أغلب الأحيان تتحدد نوعية الإنزيم أوتوراديوجرافيك حساسية راديوليجاند. عاملاً مساهما رئيسيا هو النظائر المشعة المحددة، التي تعطي بتوافر يغاندس المعروفة أو بجدوى تقنيات وضع العلامات المحددة للعائد يغاندس مع النشاط المحدد المناسب (أي، ومقدار النشاط الإشعاعي كل وحدة مول من راديوليج...

Disclosures

الكتاب يعلن لا تضارب في المصالح.

Acknowledgements

وكان دعم العمل مؤسسة Lundbeck (منحة R133-A12270) ومؤسسة نوفو نورديسك (منحة NNF0C0028664). يشكر المؤلفون الدكتور أليس ماريك لتوريد راديوليجاند [ح]3.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Absolute ethanolMerck Millipore107017
Acetic acidSigma-AldrichA6283
BAS-TR2040 Imaging PlateGE Healthcare Life Science2895648120x40 cm - Sensitive to tritium
Cresyl violet acetateSigma-AldrichC5042-10G
DPX (non-aqueous mounting medium for microscopy)Merck Millipore100579
O.C.T. Compound, 12 x 125 mLSakura4583Tissue-Tek
ParaformaldehydeSigma-Aldrich16005-1KG-R
Superfrost Plus slidesVWR631-9483microscope slides
Tissue-Tek Manual Slide Staining SetSakura Finetek Denmark ApS4451
Tritium Standard on GlasAmerican Radiolabeld Chemicals, Inc.ART 0123
Xylene substituteSigma-AldrichA5597

References

  1. Upham, L. V., Englert, D. F. . Handbook of Radioactivity Analysis. , 1063-1127 (2003).
  2. Manuel, I., et al. Neurotransmitter receptor localization: From autoradiography to imaging mass spectrometry. ACS Chemical Neuroscience. 6, 362-373 (2015).
  3. Pavey, G. M., Copolov, D. L., Dean, B. High-resolution phosphor imaging: validation for use with human brain tissue sections to determine the affinity and density of radioligand binding. Journal of Neuroscience Methods. 116, 157-163 (2002).
  4. Davenport, A. P. . Receptor Binding Techniques. 897, (2012).
  5. Busardò, F. P., Kyriakou, C., Napoletano, S., Marinelli, E., Zaami, S. Clinical applications of sodium oxybate (GHB): from narcolepsy to alcohol withdrawal syndrome. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 19, 4654-4663 (2015).
  6. Wong, C. G. T., Gibson, K. M., Snead, O. C. I. From the street to the brain: neurobiology of the recreational drug γ-hydroxybutyric acid. Trends in Pharmacological Sciences. 25, 29-34 (2004).
  7. Benavides, J., et al. High affinity binding site for γ-hydroxybutyric acid in rat brain. Life Sciences. 30, 953-961 (1982).
  8. Hechler, V., Gobaille, S., Maitre, M. Selective distribution pattern of y-hydroxybutyrate receptors in the rat forebrain and midbrain as revealed by quantitative autoradiography. Brain Research. 572, 345-348 (1992).
  9. Klein, A. B., et al. Autoradiographic imaging and quantification of the high-affinity GHB binding sites in rodent brain using 3H-HOCPCA. Neurochemistry International. 100, 138-145 (2016).
  10. Gould, G. G., Mehta, A. K., Frazer, A., Ticku, M. K. Quantitative autoradiographic analysis of the new radioligand [3H](2E)-(5-hydroxy-5,7,8,9-tetrahydro-6H-benzo[α][7]annulen-6-ylidene) ethanoic acid ([3H]NCS-382) at γ-hydroxybutyric acid (GHB) binding sites in rat brain. Brain Research. 979, 51-56 (2003).
  11. Jensen, C. H., et al. Radiosynthesis and evaluation of [11C]3-hydroxycyclopent-1- enecarboxylic acid as potential PET ligand for the high-affinity γ-hydroxybutyric acid binding sites. ACS Chemical Neuroscience. , 22-27 (2017).
  12. Castelli, M. P., Mocci, I., Langlois, X., Gommeren, W., Luyten, W. H. M. L. Quantitative autoradiographic distribution of γ-hydroxybutyric acid binding sites in human and monkey brain. Molecular Brain Research. 78, 91-99 (2000).
  13. Wellendorph, P., et al. Novel radioiodinated γ-hydroxybutyric acid analogues for radiolabeling and photolinking of high-affinity γ-hydroxybutyric acid binding sites. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 335, 458-464 (2010).
  14. Vogensen, S. B., et al. New synthesis and tritium labeling of a selective ligand for studying high-affinity γ-hydroxybutyrate (GHB) binding sites. Journal of Medicinal Chemistry. 56, 8201-8205 (2013).
  15. Mehta, A. K., Muschaweck, N. M., Maeda, D. Y., Coop, A., Ticku, M. K. Binding characteristics of the γ-hydroxybutyric acid receptor antagonist [3H](2E)-(5-hydroxy-5,7,8,9-tetrahydro-6H-benzo[a][7]annulen-6-ylidene) ethanoic acid in the rat brain. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 299, 1148-1153 (2001).
  16. Kaupmann, K., et al. Specific γ-hydroxybutyrate-binding sites but loss of pharmacological effects of γ-hydroxybutyrate in GABAB(1)-deficient mice. Neuroscience. 18, 2722-2730 (2003).
  17. Bay, T., Eghorn, L. F., Klein, A. B., Wellendorph, P. GHB receptor targets in the CNS: Focus on high-affinity binding sites. Biochemical Pharmacology. 87, 220-228 (2014).
  18. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. . The mouse brain in stereotaxic coordinates. , (2008).
  19. Carletti, R., Tacconi, S., Mugnaini, M., Gerrard, P. Receptor distribution studies. Current Opinion in Pharmacology. 35, 94-100 (2017).
  20. Wellendorph, P., et al. Novel cyclic γ-hydroxybutyrate (GHB) analogs with high affinity and stereoselectivity of binding to GHB sites in rat brain. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 315, 346-351 (2005).
  21. Coenen, H. H., et al. Consensus nomenclature rules for radiopharmaceutical chemistry - Setting the record straight. Nuclear Medicine and Biologly. 55, (2017).
  22. DeBlasi, A., O'Reilly, K., Motulsky, H. J. Calculating receptor number from binding experiments using same compound as radioligand and competitor. Trends in Pharmacological Science. 10, 227-229 (1989).
  23. Hulme, E. C. . Receptor-ligand interactions: a practical approach. , (1992).
  24. Holm, P., et al. Plaque deposition dependent decrease in 5-HT2A serotonin receptor in AβPPswe/ PS1dE9 amyloid overexpressing mice. Journal of Alzheimer's Disease. 20, 1201-1213 (2010).
  25. Thomsen, C., Helboe, L. Regional pattern of binding and c-Fos induction by (R)- and (S)-citalopram in rat brain. Neurochemistry. 14, 2411-2414 (2003).
  26. López-Giménez, J. F., Mengod, G., Alacios, J. M., Vilaró, M. T. Selective visualization of rat brain 5-HT2A receptors by autoradiography with [3H]MDL 100 ,907. Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. , 446-454 (1997).
  27. Alexander, G. M., Schwartzman, R. J., Bell, R. D., Yu, J., Renthal, A. Quantitative measurement of local cerebral metabolic rate for glucose utilizing tritiated 2-deoxyglucose. Brain Research. 223, 59-67 (1981).
  28. Kuhar, M. J., Unnerstall, J. R. Quantitative receptor mapping by autoradiography: some current technical problems. Trends in Neurosciences. , 49-53 (1985).
  29. Kuhar, M. J., De Souza, E. B., Unnerstall, J. R. Neurotransmitter receptor mapping by autoradiography and other methods. Annual Review of Neuroscience. , 27-59 (1986).
  30. Chen, H. -. T., Clark, M., Goldman, D. Quantitative Autoradiography of 3H-Paroxetine Binding Sites in Rat Brain. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 27, 209-216 (1992).
  31. Herkenham, M., Pert, C. B. Light microscopic localization of brain opiate receptors: a general autoradiographic method which preserves tissue quality. Journal of Neuroscience. 2, 1129-1149 (1982).
  32. Heimer, L., Záborszky, L. . Neuroanatomical Tract-Tracing Methods 2 - Recent progress. , (1989).
  33. Vessotskie, J. M., Kung, M. P., Chumpradit, S., Kung, H. F. Quantitative autoradiographic studies of dopamine D3receptors in rat cerebellum using [125I]S(-)5-OH-PIPAT. Brain Research. 778, 89-98 (1997).
  34. Klein, A. B., et al. 5-HT2A and mGLU2receptor binding levels are related to differences in impulsive behavior in the roman low- (RLA) and high- (RHA) avoidance rat strains. Neuroscience. , 36-45 (2014).
  35. Johnston, R. F., Pickett, S. C., Barker, D. L. Autoradiography using storage phosphor technology. Electrophoresis. 11, 355-360 (1990).
  36. Ito, T., Suzuki, T., Lim, D. K., Wellman, S. E., Ho, I. K. A novel quantitative receptor autoradiography and in situ hybridization histochemistry technique using storage phosphor screen imaging. Journal of Neuroscience Methods. 59, 265-271 (1995).
  37. Amemiya, Y., Miyahara, J. Imaging plate illuminates many fields. Nature. 336, 89-90 (1988).
  38. Kanekal, S., Sahai, A., Jones, R. E., Brown, D. Storage-phosphor autoradiography: a rapid and highly sensitive method for spatial imaging and quantitation of radioisotopes. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. , 171-178 (1995).
  39. Taylor, C. R., Levenson, R. M. Quantification of immunohistochemistry - issues concerning methods , utility and semiquantitative assessment II. Histopathology. 49, 411-424 (2011).
  40. Uhl, P., Fricker, G., Haberkorn, U., Mier, W. Radionuclides in drug development. Drug Discovery Today. 20, 198-208 (2015).
  41. Schmidt, K. C., Smith, C. B. Resolution, sensitivity and precision with autoradiography and small animal positron emission tomography: Implications for functional brain imaging in animal research. Nuclear Medicine and Biolology. 32, 719-725 (2005).
  42. Piel, M., Vernaleken, I., Rösch, F. Positron emission tomography in CNS drug discovery and drug monitoring. Journal of Medicinal Chemistry. 57, 9232-9258 (2014).
  43. Kristensen, J. L., Herth, M. M. In vivo imaging in drug discovery. Drug Design and Discovery. , 119-135 (2017).
  44. Cunha, L., Szigeti, K., Mathé, D., Metello, L. F. The role of molecular imaging in modern drug development. Drug Discovery Today. 19, 936-948 (2014).
  45. Bailly, C., et al. Comparison of Immuno-PET of CD138 and PET imaging with 64CuCl2and18F-FDG in a preclinical syngeneic model of multiple myeloma. Oncotarget. 9, 9061-9072 (2018).
  46. Sóvágó, J., Makkai, B., Gulyás, B., Hall, H. Autoradiographic mapping of dopamine-D2/D3receptor stimulated [35S]GTPγS binding in the human brain. European Journal of Neuroscience. 22, 65-71 (2005).
  47. Sóvágó, J., Dupuis, D. S., Gulyás, B., Hall, H. An overview on functional receptor autoradiography using [35S]GTPγS. Brain Research Reviews. 38, 149-164 (2001).
  48. Solon, E. G. Use of radioactive compounds and autoradiography to determine drug tissue distribution. Chemical Research in Toxicology. 25, 543-555 (2012).
  49. Donnelly, D. J. Small molecule PET tracers in drug discovery. Seminars in Nuclear Medicine. 47, 454-460 (2017).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

145 GHB 382

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved