JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف هذا البروتوكول طريقة قانونية لفهم الجينات الحرجة التي تتحكم في نشاط العظام في الجسم الحي. يستخدم هذا الأسلوب نموذج الماوس المعدلة وراثيا وبعض التقنيات الكنسي لتحليل النمط الظاهري الهيكل العظمي.

Abstract

نماذج الماوس المعدلة وراثيا قوية لفهم الجينات الحرجة التي تتحكم في التمايز والنشاط العظمي، ولدراسة الآليات والعلاجات الصيدلانية لهشاشة العظام. وقد استخدمت الفئران كاثيبسين K (Ctsk) - كري على نطاق واسع للدراسات الوظيفية من العظام. محول الإشارة والمفعل للنسخ 3 (STAT3) وثيق الصلة في التوازن العظمي ، ولكن دوره في العظام في الجسم الحي لا يزال غير محدد بشكل جيد. لتوفير الأدلة في الجسم الحي أن STAT3 يشارك في التمايز العظام والتمثيل الغذائي العظام, نحن ولدت نموذج الماوس حذف Osteoclast محددة Stat3 (Stat3 fl/fl; Ctsk-Cre)وتحليل النمط الظاهري الهيكل العظمي. المسح المقطعي الدقيق وإعادة الإعمار ثلاثي الأبعاد يعني زيادة كتلة العظام في الفئران بالضربة القاضية المشروطة. تم إجراء تلطيخ H & E ، كالسين و alizarin الأحمر تلطيخ مزدوج ، و تلطيخ حمض مقاوم للطرطرات (TRAP) للكشف عن استقلاب العظام. باختصار، يصف هذا البروتوكول بعض الأساليب والتقنيات الكنسية لتحليل النمط الظاهري الهيكلي ودراسة الجينات الحرجة التي تتحكم في نشاط العظام في الجسم الحي.

Introduction

عظم الهيكل العظمي هو الجهاز الرئيسي الحامل لجسم الإنسان وتحت ضغط من كل من البيئة الداخلية والخارجية أثناء المشي وممارسةالرياضة 1. طوال حياة المرء، تمر العظام باستمرار من خلال التجديد الذاتي، الذي يوازنه العظام والعظام. عملية osteoclasts تطهير العظام القديمة والعظام تشكيل العظام الجديدة يحافظ على التوازن والوظيفة الميكانيكية للنظام الهيكل العظمي2. اضطراب في التوازن قد تحفز أمراض التمثيل الغذائي العظام, مثل هشاشة العظام. هشاشة العظام، التي تسببها النشاط العظمي الزائد، هو السائد عالميا ويسبب خسائر اقتصادية كبيرة للمجتمع2،3،4. وفقا لعدد محدود من الأدوية المتاحة لعلاج هشاشة العظام وخطر الآثار السلبية4، من المهم الكشف عن تفاصيل تكوين وأنشطة العظام.

والعظام المستمدة من النسب أحادية / الضامة الدموية لها نواة متعددة (قد يكون 2-50 نواة) وكبيرة (عادة أكبر من 100 ميكرومتر في القطر)2. على الرغم من أن استكشاف الآليات وفحص الأدوية لاضطرابات العظام قد تحسنت على نطاق واسع عن طريق ثقافة العظام في المختبر، وردود الفعل العضوية المعقدة تجعل في الأدلة الحية لا غنى عنه للعلاج المستهدف. نظرا لأوجه التشابه الجينية والفيزيولوجية المرضية بين الفئران والبشر ، تستخدم نماذج الماوس المعدلة وراثيا بشكل شائع لدراسة الآليات والعلاجات الصيدلانية للأمراض البشرية في الجسم الحي6. نظام Cre-loxP هو تقنية تستخدم على نطاق واسع لتحرير جينات الماوس ومكن الباحثين من التحقيق في وظائف الجينات بطريقة خاصة بالأنسجة / الخلايا5. كاثيبسين K (CSTK) هو بروتياز السيستين التي تفرزها osteoclasts التي يمكن أن تتحلل الكولاجين العظام8. ومن المقبول جيدا أن CTSK يتم التعبير عنها بشكل انتقائي في العظام الناضجة. لذلك ، تعتبر فئران Ctsk-Cre أداة مفيدة للدراسات الوظيفية لأجهزة تقويم العظام وقد تم استخدامها6.

محول الإشارة والمفعل للنسخ (STAT) الأسرة الكلاسيكية وكبيرة للغاية في الحصانة وتطور السرطان والتنمية7،8. من بين سبعة STATs ، STAT3 أفيد أن تكون الأكثر صلة التوازن العظام9،10. وأفادت عدة دراسات في الجسم الحي أن تعطيل محددة من STAT3 في العظام يقلل من تكوين العظام9،10. ومع ذلك، لا تزال الأدلة الصلبة المتعلقة بمشاركة STAT3 في تشكيل العظام واستقلاب العظام في الجسم الحي محدودة. في الآونة الأخيرة، قدمنا في الأدلة في الجسم الحي مع نموذج الماوس حذف Osteoclast محددة Stat3 (Stat3fl/fl; Ctsk-Cre, فيما يلي يسمى Stat3Ctsk) أن STAT3 يشارك في التمايز العظام والتمثيل الغذائي العظام11. في هذه الدراسة، ونحن نصف الأساليب والبروتوكولات التي استخدمناها لتحليل التغيرات في كتلة العظام، وأنسجة العظام، واستقلاب العظام وحفز الفئران Stat3Ctsk من أجل دراسة تأثير حذف STAT3 العظام محددة على التوازن العظام.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

جميع الطرق المتعلقة بالحيوانات الموصوفة هنا وافقت عليها اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوان واستخدامه (IACUC) التابعة لكلية الطب بجامعة جياوتونغ في شنغهاي.

1. تربية الفئران حذف Osteoclast محددة Stat3

ملاحظة: تم الحصول على فئران ستات3fl/fl تجاريا. تم توفير فئران Ctsk-Cre من قبل س. كاتو (جامعة طوكيو، طوكيو، اليابان12). وقد ولدت الفئران وحافظت عليها في ظل ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض في المرفق الحيواني المؤسسي في ظل ظروف موحدة.

  1. إقران فأر ذكر ناضج جنسيا مع فأرين من نفس العمر. بعد 18 يوما، تحقق من الفحوص اليومية للمواليد الجدد. فصل الفئران الإناث الحوامل والاحتفاظ بها وحدها إذا لزم الأمر. تغيير الفئران الذكور بين أقفاص تربية مختلفة إذا الفئران الإناث لم تكن حاملا في غضون 1 شهر من الاقتران.
  2. عبر Stat3فلوريدا / فلوريدا الفئران إلى الفئران Ctsk - كري (F0). قص ذيول ل genotyping والحفاظ على الذكور Stat3fl /+؛ فئران Ctsk-Cre حتى تصبح ناضجة جنسيا ، والتي تبلغ حوالي 6 أسابيع من العمر (F1). استخدم التمهيديات التالية: Stat3 F-TTGACCTGTGCCTACAAAAA; ستات3 R-CCCTAGATTAGGCCAGCACA; Ctsk-cre F-GAACGCACTGATTTCGACCA; (كتسك-كر ر-جكاتاكاكغغتتك)88
  3. عبر 6 أسابيع من العمر Stat3الذكورfl/+; فئران Ctsk-Cre مع فئران ستات3fl/fl الأنثوية. قص ذيول ل genotyping والحفاظ على الذكور Stat3 fl/fl; فئران Ctsk-Cre حتى تصبح ناضجة جنسيا ، والتي تبلغ حوالي 6 أسابيع من العمر (F2).
  4. عبر 6 أسابيع من العمر Stat3 الذكور fl/fl; فئران Ctsk-Cre مع فئران ستات3fl/fl أنثى (F3). قص ذيول ل genotyping واستبدال الفئران تربية القديمة مع الفئران الأصغر سنا في الوقت المناسب (F3 + N).

2. جمع العينات

  1. القتل الرحيم ستة أزواج من الذكور 8 أسابيع من العمر Stat3fl/fl وStat3Ctsk الفئران littermate بشكل منفصل مع اختناق ثاني أكسيد الكربون.
    ملاحظة: معدل تدفق ثاني أكسيد الكربونيزيح 30٪ من حجم القفص في الدقيقة (على سبيل المثال، لمدة 45 سم × 30 سم × 30 سم قفص معدل تدفق CO2 هو 40 لتر/دقيقة).
  2. ضع الفئران في وضعية غير نازعة. خلع المفاصل الورك الثنائية بلطف باليد. استخدم مقص العيون لقطع الجلد عموديا عن الساق البعيدة ثم تشريح الجلد بأكمله من الطرف الخلفي.
  3. قطع الرباط المفصلي لمفصل الورك الأيمن ومفصل الركبة بمقص لفصل الطرف الخلفي. قطع trochanter وتقاطع الشظية ومن ثم تزج الطرف الخلفي في 4٪ paraformaldehyde. احتفظ بالأطراف الخلفية اليمنى للخطوة 3. قطع العظام بشكل مناسب في كلا الطرفين لتزج تماما وإصلاح نخاع العظام مع 4٪ بارافورمالديهايد.
  4. قطع الرباط المفصلي مفصل الورك الأيسر ومفصل الركبة مع مقص، وإزالة بلطف الأنسجة الرخوة، وفصل بعناية الساق وعظم الفخذ. تزج الساق وعظم الفخذ بشكل منفصل في الإيثانول 75٪. الحفاظ على femora للخطوة 4 وtibiae للخطوة 6. تأكد من الحفاظ على trochanter سليمة.

3. إعداد قسم البارافين

  1. إصلاح الطرف الخلفي الأيمن في 4٪ بارافورمالديهايد في 4 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
  2. الشارات: غسل بلطف العينات مع برنامج تلفزيوني 1x لمدة 10 دقيقة 3 مرات. تشارات العينات في EDTA 15٪ (150 ز EDTA في 800 مل من DDH2O و 100 مل من 10x PBS) مع الشارات بالموجات فوق الصوتية لمدة 3 إلى 4 أسابيع حتى يمكن أن تكون عازمة العظام. استبدال مع السوائل الشارات الطازجة كل يومين.
  3. غسل بلطف العينات 3x مع برنامج تلفزيوني 1x ومن ثم تزج بها في الإيثانول 75٪ في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
  4. الجفاف: في اليوم الثاني، تزج عينات بالتسلسل في الإيثانول 95٪، الإيثانول 100٪، والزيلين، كل لمدة 1 ساعة مرتين.
  5. تزج العينات في 1/2 xylene 1/2 البارافين لمدة 30 دقيقة. تزج العينات في البارافين في 65 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
  6. تضمين: حدد خزان تضمين مناسب لتضمينه. ضع الساق بشكل موحد تحتها. ضع عظم الفخذ والساق بزاوية 90 درجة. بعد أن يبرد البارافين ويتماسك تماما ، قم بإزالتها من خزان التضمين. قم بإعادة العينات وتخزينها عند -20 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
  7. قطع 5 ميكرومتر أقسام سميكة باستمرار باستخدام microtome. قطع 20-40 أقسام. نشر المقاطع على 37 درجة مئوية من المياه، والتمسك بها إلى الشرائح المجهر، وخبز في 42 درجة مئوية بين عشية وضحاها.

4. التصوير المقطعي الدقيق والتحليل

  1. مسح femora الأيسر مع الماسح الضوئي المقطعي الدقيق. القرار: 10 ميكرومتر؛ الجهد: 70 كيلو فولت؛ الحالي: 114 ميكروا؛ فليتر: 0.5 ملم آل؛ خطوة الدوران: 0.5 درجة.
  2. إعادة بناء الصور ثلاثية الأبعاد للعظم القشري والعظام الطرية باستخدام برنامج دعم الماسح الضوئي بناء على تعليمات الشركة المصنعة. ROIs هي في مجموع 1 مم عرض العظام trabecular قريبة من لوحة نمو النعزال وفي قسم إجمالي 1 ملم واسعة من العظام القشرية في منتصف femora.
  3. حساب المعلمات الميكروبيكتات الكمية: كثافة المعادن العظام (BMD)، كسر حجم العظام (BV/TV)، سمك trabecular (Tb.Th)،رقم trabecular (Tb.N.)، فصل ترابيكي (Tb.Sp.)، وسماكة العظام القشرية (Ct.Th. ).

5. TRAP تلطيخ

  1. خبز أقسام البارافين في 65 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  2. Dewax: تزج المقاطع في إكسيلين لمدة 10 دقيقة. تنفيذ هذه الخطوة 3x مع xylene الطازجة.
  3. ريهيدرات: تزج المقاطع بالتسلسل في الإيثانول 100٪، 95٪ الإيثانول، 70٪ الإيثانول، وDDH2O، كل لمدة 5 دقائق مرتين.
  4. قم بإعداد محلول التلطيخ باستخدام مجموعة تلطيخ TRAP باتباع تعليمات الشركة المصنعة ودافئة إلى 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: يجب إعداد حل تلطيخ TRAP طازجا قبل كل فحص مباشرة.
  5. أضف محلول تلطيخ 50-100 ميكرولتر لكل عينة واحتضنها في غرفة رطبة 37 درجة مئوية لمدة 20-30 دقيقة. تحقق من حالة تلطيخ العظام تحت المجهر الخفيف كل 5 دقائق حتى يمكن رؤية العظام الحمراء متعددة النوى. إنهاء رد الفعل مع DDH2O.
  6. مضادة في محلول الهيماتوكسيلين لمدة 30 s. خلق لون أزرق مستقر عن طريق الغمر في محلول الأمونيا 1٪ لمدة 1 دقيقة. شطف في مياه الصنبور الجارية ببطء.
  7. جبل المقاطع مع coverlips باستخدام البلسم محايدة وجافة بين عشية وضحاها.
  8. التقاط 3-5 مجالات الاهتمام عن طريق المجهر. تحليل محيط trabecular بواسطة صورة J: قياس طول شريط مقياس (Ls) باستخدام'خط مستقيم'أداة كما L1، ثم قياس طول محيط trabecular باستخدام 'خط مجزأ' أداة كما L2، وطول المادية (Lp)= Ls * L2 / L1). عد عدد الخلايا الإيجابية TRAP مع أكثر من ثلاث نواة.

6. Calcein و alizarin الأحمر المزدوج وضع العلامات

  1. إعداد العينة: حقن Intraperitoneally 20 ملغ / كجم كالسين (1 ملغ / مل في 2٪ NaHCO3 الحل) في اليوم 0، و 25 ملغ / كجم alizarin الأحمر S (AL، 2 ملغم / مل في H2O) في اليوم 4. تضحية الفئران في اليوم السابع فصل بعناية الساق وإصلاح في 4٪ بارافورمالديهايد في 4 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
  2. الجفاف: بعد التثبيت، اغسل الساق بلطف 3x مع برنامج تلفزيوني 1x. تزج بشكل متتابع العينات في الإيثانول 95٪ ، الإيثانول 100 ٪ ، والزيلين لمدة 5 دقائق مرتين على حدة.
  3. تزج العينات في الأسيتون لمدة 12 ساعة، في 1/2 الأسيتون راتنج لمدة 2 ساعة، وفي الراتنج النقي في فرن التجفيف بين عشية وضحاها.
    ملاحظة: تم إعداد الراتنج بواسطة الراتنج المتاح تجاريا (على سبيل المثال، تضمين 812 Resin) وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  4. تضمين: إضافة الراتنج النقي في خزان السيليكا هلام مناسبة تضمين ووضع العينات بلطف لتجنب فقاعات. بلمرة الراتنج في فرن التجفيف في 60 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
  5. قطع العينات إلى أقسام سميكة 5 ميكرومتر باستمرار مع microtome الدوارة. تخزين بقية العينات مع المجففة في درجة حرارة الغرفة.
  6. الالتزام المقاطع مع ملاقط في انخفاض الكحول 75٪. قم بتركيب المقاطع ذات الأغطية باستخدام البلسم المحايد. التقط ملصقات الفلورسينس الحمراء والخضراء باستخدام مجهر مضان.
  7. قياس العرض بين خطين وضع العلامات (Ir.L.Wi) ، ومحيط trabecular واحد المسمى (sL.Pm) ، محيط trabecular مزدوج المسمى (dL.Pm) ، ومحيط trabecular الكلي (Tb.Pm). حساب معدل التجاور المعدني (MAR) ومعدل تكوين العظام (BFR/BS). MAR = Ir.L.Wi/أيام الفاصل الزمني. BFR/BS= (dL.Pm±sL.Pm/2)*MAR/Tb.pm*100٪.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

باستخدام هذا البروتوكول ، تم إنشاء فئران حذف Stat3 محددة لدراسة تأثير حذف STAT3 على تمايز العظام. تم تربية فئران Stat3Ctsk وزميلات القمامة الخاصة بهم (WT) والاحتفاظ بها بعد الكتابة الجينية. تم عزل الضامة نخاع العظم ومثقفة في osteoclasts، وأظهر حذف STAT3 في الفئران Ctsk Stat3 (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

وتستخدم نماذج الماوس المعدلة وراثيا عادة لدراسة آلية والعلاج الصيدلاني للمرض البشري13. وقد استخدمت على نطاق واسع Ctsk-Cre الفئران للدراسات الوظيفية من osteoclasts6. وصفت هذه الدراسة بروتوكولات طرق تحليل النمط الظاهري الهيكلي ودراسة الجينات الحرجة التي تتحكم في نشاط ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

Acknowledgements

نشكر البروفيسور ويغو زو و س. كاتو على الكواشف والفئران وأعضاء مختبر زو على المناقشات المفيدة. كما نشكر مختبر أمراض الفم الرقمية ومركز البحوث للتشوهات القحفية الوجهية في مستشفى الشعب التاسع في شنغهاي على المساعدة. وقد دعم هذا العمل جزئيا بمنح من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين [81570950,81870740,81800949], شنغهاي قمة وهضبة التخصصات، صندوق SHIPM-mu من معهد شنغهاي للطب الدقيق، شنغهاي مستشفى الشعب التاسع، شنغهاي جياو تونغ كلية الطب جامعة [JC201809]، المشروع الحافز لفريق الابتكار رفيع المستوى لكلية الطب في جامعة جياو تونغ شنغهاي ، صندوق البحوث متعددة التخصصات في مستشفى الشعب التاسع في شنغهاي، كلية الطب بجامعة شنغهاي جياوتونغ [JYJC201902]. و ل. ج. هو باحث في برنامج تنمية الشباب المتميز للمواهب الطبية للشباب، وبرنامج شنغهاي "النجوم الصاعدة للمواهب الطبية" لتنمية الشباب، ومشروع "تشن شينغ" من جامعة جياوتونغ في شنغهاي.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
4% Paraformaldehyde solutionSangon biotech Co., Ltd.E672002
AcetoneShanghai Experimental Reagent Co., Ltd.80000360
AlizarinSigma-AldrichA5533
Ammonia solutionShanghai Experimental Reagent Co., Ltd.
CalceinSigma-AldrichC0875
Ctsk-Cre micea gift from S. Kato, University of Tokyo, Tokyo, Japan
DDSAElectron Microscopy Sciences13710
DeCa RapidlyDecalcifierPro-CureDX1100
DMP-30Electron Microscopy Sciences13600
EDTAShanghai Experimental Reagent Co., Ltd.60-00-4
EMBED 812 RESINElectron Microscopy Sciences14900
fluorescence microscopeOlympusIX73
Hematoxylin solutionBeyotime BiotechanologyC0107
Micro-CTScanco Medical AGμCT 80
NaHCO3Shanghai Experimental Reagent Co., Ltd.10018918
Neutral balsamSangon biotech Co., Ltd.E675007
NMAElectron Microscopy Sciences19000
ParaffinSangon biotech Co., Ltd.A601889
rotary microtomeLeicaRM2265
Stat3fl/fl miceGemPharmatech Co., LtdD000527
TRAP staining kitSigma-Aldrich387A
xyleneShanghai Experimental Reagent Co., Ltd.1330-20-7

References

  1. Zaidi, M. Skeletal remodeling in health and disease. Nature Medicine. 13 (7), 791-801 (2007).
  2. Boyle, W. J., Simonet, W. S., Lacey, D. L. Osteoclast differentiation and activation. Nature. 423 (6937), 337-342 (2003).
  3. Cummings, S. R., Melton, L. J. Epidemiology and outcomes of osteoporotic fractures. Lancet. 359 (9319), 1761-1767 (2002).
  4. Black, D. M., Rosen, C. J. Clinical Practice. Postmenopausal Osteoporosis. New England Journal of Medicine. 374 (3), 254-262 (2016).
  5. Kos, C. H. Cre/loxP system for generating tissue-specific knockout mouse models. Nutrition reviews. 62 (6), Pt 1 243-246 (2004).
  6. Elefteriou, F., Yang, X. Genetic mouse models for bone studies-Strengths and limitations. Bone. 49 (6), 1242-1254 (2011).
  7. Hirano, T., Ishihara, K., Hibi, M. Roles of STAT3 in mediating the cell growth, differentiation and survival signals relayed through the IL-6 family of cytokine receptors. Oncogene. 19 (21), 2548-2556 (2000).
  8. Yu, H., Lee, H., Herrmann, A., Buettner, R., Jove, R. Revisiting STAT3 signalling in cancer: new and unexpected biological functions. Nature Reviews Cancer. 14 (11), 736-746 (2014).
  9. Itoh, S., et al. A critical role for interleukin-6 family-mediated Stat3 activation in osteoblast differentiation and bone formation. Bone. 39 (3), 505-512 (2006).
  10. Zhou, H., et al. Osteoblast/osteocyte-specific inactivation of Stat3 decreases load-driven bone formation and accumulates reactive oxygen species. Bone. 49 (3), 404-411 (2011).
  11. Yang, Y., et al. STAT3 controls osteoclast differentiation and bone homeostasis by regulating NFATc1 transcription. Journal of Biological Chemistry. 294 (42), 15395-15407 (2019).
  12. Nakamura, T., et al. Estrogen prevents bone loss via estrogen receptor alpha and induction of Fas ligand in osteoclasts. Cell. 130 (5), 811-823 (2007).
  13. Kim, H., Kim, M., Im, S. K., Fang, S. Mouse Cre-LoxP system: general principles to determine tissue-specific roles of target genes. Laboratory animal research. 34 (4), 147-159 (2018).
  14. Minkin, C. Bone acid phosphatase: tartrate-resistant acid phosphatase as a marker of osteoclast function. Calcified Tissue International. 34 (3), 285-290 (1982).
  15. Vaaraniemi, J., et al. Intracellular machinery for matrix degradation in bone-resorbing osteoclasts. Journal of Bone and Mineral Research. 19 (9), 1432-1440 (2004).
  16. Ljusberg, J., et al. Proteolytic excision of a repressive loop domain in tartrate-resistant acid phosphatase by cathepsin K in osteoclasts. The Journal of Biological Chemistry. 280 (31), 28370-28381 (2005).
  17. Janckila, A. J., Takahashi, K., Sun, S. Z., Yam, L. T. Naphthol-ASBI phosphate as a preferred substrate for tartrate-resistant acid phosphatase isoform 5b. Journal of Bone and Mineral Research. 16 (4), 788-793 (2001).
  18. Janckila, A. J., Li, C. Y., Lam, K. W., Yam, L. T. The cytochemistry of tartrate-resistant acid phosphatase. Technical considerations. American Journal of Clinical Pathology. 70 (1), 45-55 (1978).
  19. Janckila, A. J., Simons, R. M., Yam, L. T. Alternative immunoassay for tartrate-resistant acid phosphatase isoform 5b using the fluorogenic substrate naphthol ASBI-phosphate and heparin. Clinica Chimica Acta: International Journal of Clinical Chemistry. 347 (1-2), 157-167 (2004).
  20. Janckila, A. J., Yam, L. T., Li, C. Y. Immunoalkaline phosphatase cytochemistry. Technical considerations of endogenous phosphatase activity. American Journal of Clinical Pathology. 84 (4), 476-480 (1985).
  21. Solberg, L. B., et al. Increased tartrate-resistant Acid phosphatase expression in osteoblasts and osteocytes in experimental osteoporosis in rats. Calcified Tissue International. 94 (5), 510-521 (2014).
  22. Tambutté, E., et al. Calcein labelling and electrophysiology: insights on coral tissue permeability and calcification. Proceedings. Biological Sciences. 279 (1726), 19-27 (2012).
  23. Han, Y., et al. Lkb1 deletion in periosteal mesenchymal progenitors induces osteogenic tumors through mTORC1 activation. Journal of Clinical Investigation. 130 (5), 1895-1909 (2019).
  24. Dai, Q., et al. mTOR/Raptor signaling is critical for skeletogenesis in mice through the regulation of Runx2 expression. Cell Death and Differentiation. 24 (11), 1886-1899 (2017).
  25. Sun, J., et al. Histone demethylase LSD1 regulates bone mass by controlling WNT7B and BMP2 signaling in osteoblasts. Bone Research. 6, 14(2018).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

161 STAT3

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved