JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

منصة عالية يمكن إصلاح الفئران دون قيود وفضح تماما نقاط الوخز بالإبر على ظهره أثناء التلاعب بالوخز بالإبر. توضح هذه المقالة أساليب تصنيع المنصة العالية ، وتضع نموذجا للفئران من الربو وتقيس التغيرات في وظيفة الجهاز التنفسي باستخدام نظام تصويرplethysmography (WBP) غير الباضع وفي الوقت الحقيقي.

Abstract

منصة عالية يمكن إصلاح الفئران دون قيود وفضح تماما نقاط الوخز بالإبر على ظهره أثناء التلاعب بالوخز بالإبر. توضح هذه المقالة أساليب تصنيع المنصة العالية ، وتضع نموذجا للفئران من الربو وتقيس التغيرات في وظيفة الجهاز التنفسي باستخدام نظام تصويرplethysmography (WBP) غير الباضع وفي الوقت الحقيقي.

Introduction

الربو هو مرض مزمن يتميز بتشذيب القصبات الهوائية ومجرى الهواء فرط الاستجابة1. يتم تشخيص ما يقرب من 339.4 مليون شخص في جميع أنحاء العالم مع الربو2. انتشار الربو يتزايد على الصعيد العالمي، مع 100 مليون حالة جديدة من المتوقع في العقد المقبل3. استنشاق الكورتيكوستيرويدات وطويلة المفعول β2 -ناهضاتلا تتحكم بفعالية في أعراض جميع المرضى4. لذلك ، فإن استخدام العلاجات البديلة مثل الوخز بالإبر لعلاج الربو يتلقى اهتماما متزايدا5. طريقة فعالة لعلاج الربو هو إبرة GV14 (داتشوي)، ثنائي BL12 (فنغمن) والثنائية BL13 (Feishu)6. الوخز بالإبر يقلل بشكل كبير من مستويات الغلوبولين المناعي إفراز A (SIgA) في اللعاب وإفرازات الأنف من المرضى الذين يعانون من الربو التحسسي ويقلل من عدد اليوزينيات الدم المحيطي مع معدل فعال إجمالي قدره 85٪6. الوخز بالإبر في BL13 و ST36 (زوسانلي) في الفئران مع الربو المزمن يقلل من مستوى IL-17 بنسبة 40٪ ويقلل من سمك العضلات الملساء بنسبة 33٪ مقارنة مع مجموعة ovalbumin (OVA)، وبالتالي تخفيف أعراض الالتهاب7،8. ومع ذلك ، فإن آلية علاج الوخز بالإبر للربو ليست واضحة تماما.

النماذج الحيوانية هي أداة هامة لأبحاث الربو9 لأنه يمكن استخدام النموذج الحيواني للقياس المستمر لوظيفة الجهاز التنفسي لتقييم فعالية علاج الربو10. وفي الوقت نفسه، تتطلب دراسات الفيزيولوجيا المرضية للربو عينات اختبار، بما في ذلك عينات من القصبة الهوائية والرئة والحمم القصبي للتحقق من التغيرات في مستويات العوامل الرئيسية11. وتستخدم عادة نماذج الفئران من الربو لتقييم الفيزيولوجيا المرضية الربو لأنها تنتج استجابات مجرى الهواء طويلة الأمد وتظهر استجابات مجرى الهواء الفوري والمتأخر12. ومع ذلك ، بسبب التحفيز التجريبي المتكرر ، غالبا ما تصبح الفئران مزعجة. لذلك ، هناك حاجة إلى طريقة مناسبة لإصلاح الفئران. وتشمل الأساليب الشائعة الاستخدام لتثبيت الفئران التخدير وربط13. على الرغم من أن طريقة التخدير توفر أفضل التعرض للنقاط الفطنة، فإنه قد يؤثر على التوصيل العصبي وتؤثر في نهاية المطاف على النتائج التجريبية14. طريقة الربط لا تحفز نفس الآثار الفسيولوجية مثل التخدير، ولكن الفئران المقيدة سوف تواجه توتر العضلات الهيكل العظمي. أيضا، الإبرة لا يمكن أن تصل بسهولة إلى الموضع المعين15. هنا ، نقدم منصة عالية يمكن استخدامها لإصلاح الفئران دون تقييدها وفضح النقاط الفطنة على الظهر بشكل كامل. يمكن وضع الفئران على منصة عالية أثناء إدارة الوخز بالإبر. المنصة العالية قادرة على استيعاب الجرذ فقط أثناء وقوفه ، وبما أنه يوضع على مسافة معينة من الأرض ، فإن الفئران لن تتحرك بسبب الخوف من المرتفعات16.

توضح هذه المقالة بالتفصيل تصنيع المنصة العالية ، وإنشاء نموذج الفئران من الربو ، وتشغيل الحاجة إلى فأر على المنصة العالية وقياس وظيفة الجهاز التنفسي باستخدام نظام تصوير الدمى الكامل (WBP).

Protocol

تم استعراض جميع التجارب على الحيوانات والموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات التجارب الحيوانية في جامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي (رقم التخليص الأخلاقي PZSHUTCM190308020).

1. تصنيع منصة عالية

  1. تعيين طول وعرض الجهاز الداعم إلى 86 سم × 17 سم (الشكل 1).
  2. إصلاح جهاز الاتصال عموديا إلى الجهاز الداعم. يجب أن يكون طول جهاز التوصيل حوالي 30 سم لمنع الجرذ من الركض إلى السطح العلوي للمنصة العالية وعرضه 14 سم.
  3. إصلاح دواسة أفقية (5 سم × 5 سم) إلى جهاز الاتصال. يجب أن يكون الارتفاع المعلق في أسفل الدواسة الأفقية أكبر من أو يساوي 50 سم.
    ملاحظة: اعتمادا على عدد الفئران التجريبية، يمكن استخدام دواسات أفقية متعددة، مع وضع فأر واحد على كل دواسة.

2. إنشاء نموذج الفئران من الربو

  1. توعية الفئران مع OVA
    1. إعداد حل التوعية في اليوم 0. إعداد كل 1 مل من حل التوعية مع 1 ملغ من OVA و 10 ملغ من هيدروكسيد الألومنيوم، مع المالحة العادية والمذيبات.
    2. حقن Intraperitoneally كل الفئران مع 1 مل من حل التوعية في اليوم 0. رسم حل التوعية مع حقنة مناسبة لاستخدامها في وقت لاحق.
    3. الاستيلاء على الذيل ورفع الفئران، ووضعه على سطح خشن، وسحب بلطف الذيل مرة أخرى. فهم الجلد من كل من الأذنين والرقبة مع الإبهام الأيسر والسبابة في حين عقد بإحكام الجلد الخلفي مع الأصابع الثلاثة المتبقية والنخيل (يجب الحرص على الامتناع عن تطبيق القوة الزائدة التي من شأنها خنق الفئران).
    4. مع اليد اليمنى ، قم بإجراء حقنة داخل الصفاق في الجرذ مع الحقنة المعدة مع 1 مل من محلول التوعية.
  2. تحدي الفئران مع OVA
    1. حدد مربع مع غطاء (الطول والعرض والارتفاع هي 39 سم × 28 سم × 23 سم)، وحفر حفرة صغيرة في الجانب. ربط مربع مختومة، كوب البخاخات والبخاخات ضغط مع أنبوب مطاطي (الشكل التكميلي 1).
      ملاحظة: حجم الجسيمات النمية من البخاخات المضغوطة هو 1-5 ميكرومتر، ومعدل التسلط أكبر من 0.2 مل / دقيقة، والضغط النهائي هو 205 كيلو باسكال.
    2. في اليوم الرابع عشر بعد التوعية ، افتح غطاء الصندوق المختوم محلي الصنع وضع الجرذ في الصندوق (يمكن أن يستوعب الصندوق 5 فئران) ، ثم ضع الصندوق المختوم في خزانة السلامة الحيوية.
    3. إعداد حل التحدي. مزيج تماما 300 ملغ من OVA مع 30 مل من المالحة العادية.
    4. بدوره على البخاخات بالموجات فوق الصوتية وإضافة 30 مل من حل التحدي في كأس البخاخات. ضبط الجرعة من حل التحدي وعدد الفئران وفقا لحجم مربع مختومة محلية الصنع.
    5. كرر التسلط عدة مرات (مرة واحدة في اليوم) أو ضبط الإجراء وفقا لشدة أعراض الربو.

3. علاج الوخز بالإبر

  1. حدد النقاط، بما في ذلك GV14، ثنائي BL12 والثنائية BL13، وفقا لنظرية الطب الصيني التقليدي لعلاج الربو(الشكل التكميلي 2). إدارة الوخز بالإبر اليدوي في اليوم 2 وأداء مرة واحدة كل يومين لما مجموعه 7 جلسة (الشكل 2).
    1. الوخز بالإبر وGV14 تقع بين فقرة عنق الرحم السابعة والفقرة الصدرية الأولى (جوفاء الكتف)، على خط الوسط من الظهر (الشكل 3).
    2. الوخز بالإبر BL13 تقع تحت الفقرة الصدرية الثالثة، على جانبي المساحات الوربية (الحافة السفلى من الكتف).
    3. الوخز بالإبر BL12 تقع تحت الفقرة الصدرية الثانية، على جانبي المساحات الوربية (تحت الكتف، وتحديد الموقف وفقا لBL13).
  2. فهم الفئران ووضعها على منصة عالية.
  3. عقد إبرة الفولاذ المقاوم للصدأ المتاح (0.3 ملم × 13.0 ملم، الشكل التكميلي 3)مقبض مع الإبهام والسبابة من اليد اليمنى، واضغط على الجزء الخلفي من الفئران مع كف اليد اليمنى.
    ملاحظة: يجب أن تكون الإبر القابلة للتصرف للاستخدام لمرة واحدة فقط. لأن الاستخدام المتكرر سيحد من الإبرة ، مما يؤدي إلى زيادة الألم في الفئران.
  4. المس الاكتئاب في منتصف الحافة العليا (GV14) أو الحافة السفلية من الكتف (BL12 و BL13) ، ثم وخز جلد الجرذ بلطف بطرف الإبرة لتحديد نقاط الفطنة.
  5. أدخل الإبرة بسرعة بعد تحديد الموقع المحدد للنقطة حدة وإزالة اليد اليمنى بسرعة.
  6. الملتوية بالتساوي الإبر ما يقرب من 360 درجة بمعدل 60 مرات / دقيقة لمدة 10 - 20 ثانية، والتلاعب بها كل 5 دقائق، ومن ثم سحبها بعد 20 -30 دقيقة (الشكل التكميلي 4).

4. قياس بنه

  1. إعداد الميثاتشولين: ضع 100 ملغ من الميثاتشولين في أنبوب طرد مركزي سعة 5 مل وأضف برنامج تلفزيوني إلى حجم 2 مل (50 ملغم/مل ميثاكولين). ثم، تمييع محلول ميثاكولين 50 ملغم/مل إلى 25 ملغم/مل، 12.5 ملغم/مل، 6.25 ملغم/مل و3.125 ملغم/مل.
  2. فحص الأجهزة
    1. قم بتشغيل مضخم الإشارة (يتم إيقاف تشغيل نظام توزيع الهباء الجوي ونظام إمداد تدفق تحيز القوارض ، ويتم إغلاق موصل التسلط).
    2. تحقق من القنوات: انقر على معايرة، ثم أعد أساس الضبط الخشن إلى 0 وبدل إلى موضع التيار المباشر (DC). ضبط خط الأساس إلى 0 وحقن 5 مل من الغاز مع حقنة. ثم قم بالتبديل إلى موضع التيار المتناوب (AC).
    3. بعد التحقق من القنوات، تأكد من أن قيمة الخطأ أقل من 0.5٪.
  3. تعيين المعلمات
    1. قم بتشغيل نظام توزيع الهباء الجوي ونظام إمداد تدفق تحيز القوارض. ضبط معدل التدفق إلى 4.5 مل وفقا لمستوى السائل على الكرة الزئبق.
    2. انقر فوق إنشاء خيارات الدراسة وحدد دراسة الاستجابة الجرعة، حدد الجرذ من الأنواع وانقر فوق التالي.
    3. حدد قائمة الجرعة البسيطة، قم بتعيين عدد الجرعات إلى 6 وانقر فوق التالي.
    4. حدد المعلمات Penh والمنطقة: تعيين وقت التكيف مع الحيوان إلى 5 دقائق، ووقت التسلط إلى 2 دقيقة، ووقت الاستجابة إلى 3 دقائق، ووقت الانتعاش إلى 2 دقيقة.
    5. إضافة الحلول التالية بالتتابع إلى البخاخات (200 ميكرولتر لكل فأر): ميثاكولين (0 ملغم/مل، 3.125 ملغم/مل، 6.25 ملغم/مل، 12.5 ملغم/مل، 25 ملغم/مل و50 ملغم/مل). ويمكن ملاحظة التغيرات في الوقت الحقيقي في بنه(الشكل 4).
    6. بعد رد فعل جميع الحلول ال 6 بتركيزات مختلفة، انقر فوق ملف ونهاية الجلسة لإكمال التجربة.

النتائج

مع الوخز بالإبر في GV14، ثنائي BL12 والثنائية BL13 نقطة، والفأر يحافظ على موقف عرضة. الجرذ يمكن أن تطور رأسه فقط إلى الخارج وليس من الداخل لأنه يتم حظر اتجاه واحد مع لوحة خشبية (الشكل 5).

ومع زيادة تركيز الميثاكولين، يظهر بنه اتجاها متزايدا ويزداد معدل النمو تدريجيا...

Discussion

تقع نقاط GV14 وBL12 الثنائية ونقاط الفطنة الثنائية BL13 المستخدمة في هذه الدراسة على الظهر ، وبالتالي فإن المنصة العالية مناسبة لإصلاح الفئران. في دراسات أخرى، يجب اختيار طريقة تثبيت كافية وفقا لموقف من نقاط15. بالنسبة للنقاط الفطنة على البطن ، يمكن وضع الجرذ لأسفل في مخروط أسود (عل?...

Disclosures

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 81922076 ، 81973951 ، 81873373) ، مشروع بناء الابتكار التعاوني في شنغهاي (رقم ZYJKFW201811010، ZYJKFW201701005).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.3 mm x 13.0 mm acupuncture needleChina Suzhou Medical Device Factory
Al(OH)3American Thermo77161
Compression nebulizerJiangsu Lude Medical Electronics Co., Ltd.NB-212C
Fine Pointe V2.0American Buxco
Laboratory gas drying unitAmerican Drierite26800
MethacholineAmerican SigmaMKCF6054
OvalbuminAmerican SigmaA5503-25G
Phosphate Buffer solution (1x)GelifesciencesSH30256.01
Seal boxIRIS Corporation of Japan
Whole-body plethysmography respiratory function measurement systemAmerican Buxco

References

  1. Papi, A., Brightling, C., Pedersen, S. E., Reddel, H. K. Asthma. Lancet. 391 (10122), 783-800 (2018).
  2. . Global strategy for asthma management and prevention Available from: https://ginasthma.org/gina-reports/ (2019)
  3. Enilari, O., Sinha, S. The Global Impact of Asthma in Adult Populations. Annals of Global Health. 85 (1), (2019).
  4. . Global strategy for asthma management and prevention Available from: https://ginasthma.org/gina-reports/ (2020)
  5. Zhuang, Y., Xing, J. J., Li, J., Zeng, B. Y., Liang, F. R. History of acupuncture research. International Review of Neurobiology. 111, 1-23 (2013).
  6. Yang, Y. Q., et al. Considerations for use of acupuncture as supplemental therapy for patients with allergic asthma. Clinical Reviews in Allergy & Immunology. 44 (3), 254-261 (2013).
  7. Nurwati, I., et al. Reduction of interleukin-17 level by acupuncture at Feishu (BL13) is strengthened by acupuncture at Zusanli (ST36) in a mouse model of chronic asthma: An experimental study. Medical Acupuncture. 27 (4), 278-282 (2015).
  8. Nurwati, I., et al. Improvement in inflammation and airway remodelling after acupuncture at BL13 and ST36 in a mouse model of chronic asthma. Acupuncture in Medicine. 37 (4), 228-236 (2019).
  9. Reddy, A. T., Lakshmi, S. P., Reddy, R. C. Murine model of allergen induced asthma. Journal of Visualized Experiments. (63), e3771 (2012).
  10. Zhou, D. D., et al. Metallothionein-2 is associated with the amelioration of asthmatic pulmonary function by acupuncture through protein phosphorylation. Biomedicine & Pharmacotherapy. 123, 109785 (2020).
  11. Yin, L. M., et al. Transgelin-2 as a therapeutic target for asthmatic pulmonary resistance. Science Translational Medicine. 10 (427), (2018).
  12. Shin, Y. S., Takeda, K., Gelfand, E. W. Understanding asthma using animal models. Allergy Asthma & Immunology Research. 1 (1), 10-18 (2009).
  13. Cui, K. M., et al. Electro-acupuncture relieves chronic visceral hyperalgesia in rats. Neuroscience Letters. 376 (1), 20-23 (2005).
  14. Tobin, J. R., Martin, L. D., Breslow, M. J., Traystman, R. J. Selective anesthetic inhibition of brain nitric oxide synthase. Anesthesiology. 81 (5), 1264-1269 (1994).
  15. Dimitrov, N., Sivrev, D., Atanasova, D. Method of rat immobilization during experimental acupuncture. Scripta Scientifica Medica. 45, 105-108 (2013).
  16. Aguilar, R., et al. emotional reactivity and fear of heights: a factor analytic map from a large F(2) intercross of Roman rat strains. Brain Research Bulletin. 57 (2), 17-26 (2002).
  17. Lai, X., et al. Proteomic response to acupuncture treatment in spontaneously hypertensive rats. PloS One. 7 (9), 44216 (2012).
  18. Niu, C., et al. A novel uni-acupoint electroacupuncture stimulation method for pain relief. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2011, 209879 (2011).
  19. McFadden, E. R., Luparello, T., Lyons, H. A., Bleecker, E. The mechanism of action of suggestion in the induction of acute asthma attacks. Psychosomatic Medicine. 31 (2), 134-143 (1969).
  20. Savov, J. D., et al. Ozone-induced acute pulmonary injury in inbred mouse strains. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 31 (1), 69-77 (2004).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

162

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved