דיקור במודל עכברוש של אסטמה

Summary

פלטפורמה גבוהה יכולה לתקן חולדות ללא הגבלה ולחשוף לחלוטין את נקודות acupoints על הגב במהלך מניפולציה דיקור סיני. מאמר זה מתאר שיטות לייצור הפלטפורמה הגבוהה, קובע מודל עכברוש של אסטמה ומודד שינויים בתפקוד הנשימה באמצעות מערכת plethysmography (WBP) לא פולשנית ובזמן אמת.

Abstract

פלטפורמה גבוהה יכולה לתקן חולדות ללא הגבלה ולחשוף לחלוטין את נקודות acupoints על הגב במהלך מניפולציה דיקור סיני. מאמר זה מתאר שיטות לייצור הפלטפורמה הגבוהה, קובע מודל עכברוש של אסטמה ומודד שינויים בתפקוד הנשימה באמצעות מערכת plethysmography (WBP) לא פולשנית ובזמן אמת.

Introduction

אסטמה היא מחלה כרונית המאופיינת ברונכוקונסטריאקציה ודרכי הנשימה היפר תגובה¹. כ 339.4 מיליון אנשים ברחבי העולם מאובחנים עם^{אסטמה 2}. השכיחות של אסתמה גוברת ברחבי העולם, עם 100 מיליון מקרים חדשים צפויים בעשור הבא³. קורטיקוסטרואידים בשאיפה β ארוכי טווח₂-אגוניסטים אינם שולטים ביעילות בסימפטומים של כל החולים⁴. לכן, השימוש בטיפולים אלטרנטיביים כגון דיקור סיני לטיפול באסתמה כבר מקבל תשומת לב מוגברת⁵. שיטה יעילה לטיפול באסתמה היא מחט GV14 (Dazhui), דו-צדדי BL12 (פנגמן) ו BL13 דו-צדדי (Feishu)⁶. אקופונקטורה מפחיתה באופן משמעותי את רמות האימונוגלובולין הפרשתי A (SIgA) ברוק ובהפרשות האף של חולים עם אסתמה אלרגית ומפחיתה ספירת אאוזינופילים בדם היקפי עם שיעור אפקטיבי כולל של 85%⁶. דיקור סיני ב- BL13 ו- ST36 (Zusanli) בעכברים עם אסתמה כרונית מקטין את רמת IL-17 ב - 40% ומפחית את עובי השריר החלק ב - 33% בהשוואה לזה של קבוצת ה- ovalbumin (OVA), ובכך מקל על תסמיני דלקת^7,8. עם זאת, המנגנון של טיפול אקופונקטורה לאסטמה אינו ברור לחלוטין.

מודלים של בעלי חיים הם כלי חשוב למחקר^{אסטמה 9} כי המודל החייתי יכול לשמש למדידה רציפה של תפקוד הנשימה כדי להעריך את האפקטיביות של טיפול^{באסתמה 10}. בינתיים, מחקרים של הפתופיזיולוגיה של אסטמה דורשים דגימות בדיקה, כולל דגימות מן קנה הנשימה, ריאות ושטיפת סימפונות כדי לאמת שינויים ברמות של גורמי מפתח¹¹. מודלים עכברוש של אסטמה משמשים בדרך כלל כדי להעריך פתופיזיולוגיה אסטמה כי הם מייצרים תגובות ארוכות טווח בדרכי הנשימה ולהראות תגובות מיידיות בשלב מאוחר בדרכי הנשימה¹². עם זאת, בשל גירוי ניסיוני חוזר ונשנה, החולדות לעתים קרובות להיות עצבני. לכן, יש צורך בשיטה מתאימה לתיקון חולדות. שיטות נפוצות לקיבעון עכברושים כוללות הרדמה ומחייב¹³. למרות ששיטת ההרדמה מספקת חשיפה טובה יותר של נקודות האקופוינט, היא עשויה להשפיע על ההולכה העצבית ובסופו של דבר להשפיע על תוצאות הניסוי¹⁴. שיטת הכריכה אינה מעוררת את אותן השפעות פיזיולוגיות כמו הרדמה, אך חולדות מאופקות יחוו מתח שריר השלד. כמו כן, המחט לא יכולה להגיע בקלות למיקום המיועד¹⁵. כאן, אנו מציגים פלטפורמה גבוהה שניתן להשתמש בה כדי לתקן חולדות מבלי להגביל אותן ולחשוף באופן מלא את נקודות הציון מאחור. החולדות ניתן להציב על פלטפורמה גבוהה במהלך הממשל של דיקור סיני. הפלטפורמה הגבוהה מסוגלת להכיל את החולדה רק בזמן שהיא עומדת, ומכיוון שהיא ממוקמת במרחק מסוים מהקרקע, החולדות לא יזוזו בגלל פחד מגבהים¹⁶.

מאמר זה מתאר בפירוט את הייצור של הפלטפורמה הגבוהה, הקמת מודל חולדה של אסטמה, הפעולה של דימוך חולדה על הפלטפורמה הגבוהה ומדידת תפקוד הנשימה באמצעות מערכת plethysmography לכל הגוף (WBP).

Protocol

כל הניסויים בבעלי חיים נבדקו ואושרו על ידי הוועדה לאתיקה של ניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת שנגחאי לרפואה סינית מסורתית (מספר אישור אתי PZSHUTCM190308020).

1. ייצור הפלטפורמה הגבוהה

1. הגדר את האורך והרוחב של ההתקן התומך ל- 86 ס"מ על 17 ס"מ (איור 1).
2. תקן את ההתקן המחבר אנכית להתקן התומך. אורך המכשיר המחבר צריך להיות כ-30 ס"מ כדי למנוע מהחולדה לרוץ אל המשטח העליון של הפלטפורמה הגבוהה ולרוחב של 14 ס"מ.
3. תקן את הדוושה האופקית (5 ס"מ x 5 ס"מ) להתקן המחבר. הגובה התלוי בתחתית הדוושה האופקית צריך להיות גדול או שווה ל-50 ס"מ.
   הערה: בהתאם למספר החולדות הניסיוניות, ניתן להשתמש בדוושות אופקיות מרובות, כאשר חולדה אחת מונחת על כל דוושה.

2. הקמת מודל חולדה של אסטמה

1. רגישות החולדות עם OVA
   1. הכינו את פתרון הרגישות ביום 0. הכינו כל 1 מ"ל של פתרון הרגישות עם 1 מ"ג של OVA ו 10 מ"ג של אלומיניום הידרוקסיד, עם מלוחים רגילים כמו הממס.
   2. תוך-פרטית להזריק כל חולדה עם 1 מ"ל של פתרון הרגישות ביום 0. צייר את פתרון הרגישות באמצעות מזרק מתאים לשימוש מאוחר יותר.
   3. תפוס את הזנב והרם את החולדה, הניח אותה על משטח מחוספס ומשוך בעדינות את הזנב לאחור. לתפוס את העור של האוזניים והצוואר עם האגודל השמאלי ואת האצבע המורה תוך החזקה הדוקה של העור האחורי עם שלוש האצבעות וכפות הידיים הנותרות (היזהרו מהפעלת כוח עודף שיחונק את החולדה).
   4. ביד ימין, לבצע זריקה תוך-פרטית בחולדה עם המזרק מוכן עם 1 מ"ל של פתרון הרגישות.
2. חולדות מאתגרות עם OVA
   1. בחר תיבה עם מכסה (האורך, הרוחב והגובה הם 39 ס"מ x 28 ס"מ x 23 ס"מ), וקדוח חור קטן בצד. חבר את התיבה האטומה, את הכומתה הערפילית ואת נבולייזר הדחיסה באמצעות צינור גומי(איור משלים 1).
      הערה: גודל החלקיקים הערפילי של nebulizer דחוס הוא 1 - 5 מיקרומטר, קצב הערפול הוא גדול מ 0.2 מ"ל / דקה, ואת הלחץ האולטימטיבי הוא 205 kPa.
   2. ביום ה -14 לאחר הרגישות, לפתוח את המכסה של התיבה אטומה תוצרת בית ומניחים את החולדה בתיבה (התיבה יכולה להכיל 5 חולדות), ולאחר מכן לשים את התיבה אטומה בארון biosafety.
   3. הכינו את פתרון האתגר. ביסודיות לערבב 300 מ ג של OVA עם 30 מ"ל של מלוחים רגילים.
   4. הפעל את nebulizer קולי ולהוסיף 30 מל של פתרון האתגר לתוך nebulizing. להתאים את המינון של פתרון אתגר ואת מספר החולדות על פי נפח של קופסה אטומה תוצרת בית.
   5. חזור על ערפיליות מספר פעמים (פעם ביום) או להתאים את ההליך על פי חומרת הסימפטומים אסטמה.

3. טיפול בדיקור סיני

1. בחר נקודות Acupoints, כולל GV14, BL12 דו-צדדי ו- BL13 דו-צדדי, על פי התיאוריה של הרפואה הסינית המסורתית לטיפול באסתמה (איור משלים 2). נהל דיקור ידני ביום השני ובצע אחת לשנייה במשך 7 מפגשים בסך הכל (איור 2).
   1. דיקור סיני GV14 הממוקם בין חוליית צוואר הרחם השביעית לחוליה הראשונה בבית החזה (חלולה של השכמה), על קו האמצע של הגב (איור 3).
   2. דיקור סיני BL13 הממוקם מתחת לחוליה השלישית בבית החזה, משני צידי החללים הבין-צלעיים (הקצה התחתון של השכם).
   3. אקופונקטורה BL12 הממוקם מתחת לחוליה בית החזה השני, משני צידי החללים הבין צלעיים (מתחת לשכם, מיקום מזוהה על פי BL13).
2. תפסו את החולדות והניחו אותן על הרציף הגבוה.
3. החזק את מחט הנירוסטה החד פעמית (0.3 מ"מ x 13.0 מ"מ, איור משלים 3)עם האגודל והאצבע המורה של יד ימין, ולחץ על גב החולדה בכף יד ימין.
   הערה: מחטים חד פעמיות חייבות להיות חד פעמיות בלבד. כי שימוש חוזר יהיה בוטה המחט, מה שמוביל לכאב מוגבר בחולדות.
4. לגעת בדיכאון באמצע הקצה העליון (GV14) או בקצה התחתון של השכם (BL12 ו BL13), ולאחר מכן בעדינות לדקור את העור של החולדה עם קצה המחט כדי לאתר את נקודות acupoints.
5. הכנס במהירות את המחט לאחר קביעת המיקום הספציפי של acupoint ולהסיר במהירות את יד ימין.
6. עיוות באופן שווה את המחטים כ 360 ° בקצב של 60 פעמים / דקה במשך 10 - 20 s, לתפעל אותם כל 5 דקות, ולאחר מכן למשוך אותם לאחר 20 - 30 דקות (איור משלים 4).

4. מדידת פן

1. הכן מטכולין: מניחים 100 מ"ג של מטכולין לתוך צינור צנטריפוגה 5 מ"ל ומוסיפים PBS לנפח של 2 מ"ל (50 מ"ג / מ"ל מטכולין). לאחר מכן, לדלל את הפתרון 50 מ"ג / מ"ל methacholine ל 25 מ"ג / מ"ל, 12.5 מ"ג / מ"ל, 6.25 מ"ג / מ"ל ו 3.125 מ"ג / מ"ל.
2. בדיקת מכשירים
   1. הפעל את מגבר האות (מערכת חלוקת האירוסול ומערכת אספקת הזרימה של הטיית המכרסמים כבויות כולן ומחבר הערפילית סגור).
   2. בדוק את הערוצים: לחץ על כיול, החזר את תוכנית הבסיס של ההתאמה הגסה ל- 0 ועבור למיקום הזרם הישיר (DC). כוונן את קו הבסיס ל-0 והזרק 5 מ"ל גז במזרק. לאחר מכן, עבור למיקום הנוכחי (AC) לסירוגין.
   3. לאחר בדיקת הערוצים, ודא שערך השגיאה קטן מ- 0.5%.
3. הגדרת פרמטרים
   1. הפעל את מערכת הפצת האירוסול ואת מערכת אספקת הזרימה של הטיית המכרסמים. להתאים את קצב הזרימה ל 4.5 מ"ל על פי רמת הנוזל על כדור הכספית.
   2. לחץ על צור אפשרויות מחקר ובחר מחקר תגובה מינון, בחר עכברוש של מינים ולחץ על הבא.
   3. בחר רשימת מינון פשוט, הגדר את מספר המנות ל- 6 ולחץ על הבא.
   4. בחר את הפרמטרים Penh ו- Area: הגדר את זמן ההסתגלות של בעלי החיים ל- 5 דקות, את זמן הערפילית ל- 2 דקות, את זמן התגובה ל- 3 דקות ואת זמן ההחלמה ל- 2 דקות.
   5. ברצף להוסיף את הפתרונות הבאים nebulizer (200 μL לכל חולדה): methacholine (0 מ"ג / מ"ל, 3.125 מ"ג / מ"ל, 6.25 מ"ג / מ"ל, 12.5 מ"ג / מ"ל, 25 מ"ג / מ"ל ו 50 מ"ג / מ"ל). ניתן לצפות בשינויים בזמן אמת ב-Penh (איור 4).
   6. לאחר שכל 6 הפתרונות עם ריכוזים שונים הגיבו, לחץ על קובץ וסיום הפעלה כדי להשלים את הניסוי.

תוצאות

עם דיקור סיני ב- GV14, BL12 דו-צדדי ונקודות BL13 דו-צדדיות, החולדה שומרת על עמדה מועדת. החולדה יכולה לסובב את ראשה רק מבחוץ ולא מבפנים, כי כיוון אחד חסום בלוח עץ(איור 5).

ככל שריכוז המתכולין גדל, פן מראה מגמה הולכת וגוברת וקצב הצמיחה עולה בהדרגה. בריכוזים של 3.125 מ"ג/מ"ל, 6....

Discussion

GV14, דו-צדדי BL12 ו BL13 acupoints דו צדדי בשימוש במחקר זה ממוקמים על הגב, ולכן הפלטפורמה הגבוהה מתאימה לתיקון חולדות. במחקרים אחרים, יש לבחור שיטת קיבעון נאותה בהתאם למיקום של acupoints¹⁵. עבור acupoints על הבטן, החולדה יכולה להיות ממוקמת כלפי מטה בקונוס שחור (בדומה לשקית מאפה בשימוש על ידי אופים)<...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.3 mm x 13.0 mm acupuncture needle	China Suzhou Medical Device Factory
Al(OH)3	American Thermo	77161
Compression nebulizer	Jiangsu Lude Medical Electronics Co., Ltd.	NB-212C
Fine Pointe V2.0	American Buxco
Laboratory gas drying unit	American Drierite	26800
Methacholine	American Sigma	MKCF6054
Ovalbumin	American Sigma	A5503-25G
Phosphate Buffer solution (1x)	Gelifesciences	SH30256.01
Seal box	IRIS Corporation of Japan
Whole-body plethysmography respiratory function measurement system	American Buxco