Astımın Sıçan Modelinde Akupunktur

Özet

Yüksek bir platform, sıçanları kısıtlama olmadan düzeltebilir ve akupunktur manipülasyonu sırasında arkadaki keskin noktaları tamamen açığa çıkarabilir. Bu makalede, yüksek platformun imalatı için yöntemler açıklanmaktadır, bir sıçan astım modeli oluşturur ve noninvaziv ve gerçek zamanlı tüm vücut pletirmografisi (WBP) sistemi kullanarak solunum fonksiyonundaki değişiklikleri ölçmektedir.

Özet

Yüksek bir platform, sıçanları kısıtlama olmadan düzeltebilir ve akupunktur manipülasyonu sırasında arkadaki keskin noktaları tamamen açığa çıkarabilir. Bu makalede, yüksek platformun imalatı için yöntemler açıklanmaktadır, bir sıçan astım modeli oluşturur ve noninvaziv ve gerçek zamanlı tüm vücut pletirmografisi (WBP) sistemi kullanarak solunum fonksiyonundaki değişiklikleri ölçmektedir.

Giriş

Astım, bronkokonstriksiyon ve hava yolu hiper duyarlılığı ile karakterize kronik bir hastalıktır¹. Dünyada yaklaşık 339,4 milyon kişiye astım tanısı konur². Astım prevalansı küresel olarak artmaktadır, önümüzdeki on yıl içinde 100 milyon yeni vaka bekleniyor³. Solunan kortikosteroidler ve uzun etkili β₂agonistler tüm hastaların semptomlarını etkili bir şekilde kontrol etmez⁴. Bu nedenle, astım tedavisinde akupunktur gibi alternatif tedavilerin kullanımı artmıştır⁵. Astım tedavisinde etkili bir yöntem iğne GV14 (Dazhui), bilateral BL12 (Fengmen) ve bilateral BL13 (Feishu)^6. Akupunktur, alerjik astımlı hastaların tükürük ve burun salgılarındaki salgı immünoglobulin A (SIgA) seviyelerini önemli ölçüde azaltır ve periferik kan eozinofili sayılarını toplam% 85 etkili bir oran ile azaltır⁶. Kronik astımlı farelerde BL13 ve ST36'da (Zusanli) akupunktur IL-17 seviyesini% 40 azaltır ve düz kas kalınlığını ovalbumin (OVA) grubuna kıyasla% 33 azaltır ve böylece iltihap semptomlarını hafifletir^7,8. Ancak astım için akupunktur tedavisinin mekanizması tam olarak net değildir.

Hayvan modelleri astım araştırmaları için önemli bir araçtır⁹ çünkü hayvan modeli astım tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için solunum fonksiyonunun sürekli ölçümü için kullanılabilir¹⁰. Bu arada, astım patofizyolojisi çalışmaları, kilit faktörlerin seviyelerindeki değişiklikleri doğrulamak için trakea, akciğer ve bronkoalveolar lavajdan örnekler de dahil olmak üzere test örnekleri gerektirir¹¹. Astımın sıçan modelleri astım patofizyolojisini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılır, çünkü uzun süreli hava yolu yanıtları üretirler ve acil ve geç fazlı hava yolu yanıtları gösterirler¹². Bununla birlikte, tekrarlanan deneysel stimülasyon nedeniyle, sıçanlar genellikle irritabl hale gelir. Bu nedenle, sıçanları düzeltmek için uygun bir yönteme ihtiyaç vardır. Sıçan fiksasyonu için yaygın olarak kullanılan yöntemler arasında anestezi ve bağlama¹³bulunur. Anestezi yöntemi aküpuyonların daha iyi maruz kalmasını sağlasa da, sinir iletimini etkileyebilir ve sonuçta deneysel sonuçları etkileyebilir¹⁴. Bağlama yöntemi anestezi ile aynı fizyolojik etkilere neden olmaz, ancak kısıtlanmış sıçanlar iskelet kas gerginliği yaşar. Ayrıca, iğne belirlenen konuma kolayca ulaşamaz¹⁵. Burada, sıçanları kısıtlamadan düzeltmek ve arkadaki keskin noktaları tamamen ortaya çıkarmak için kullanılabilecek yüksek bir platform sunuyoruz. Sıçanlar akupunkturun yönetimi sırasında yüksek platforma yerlenebilir. Yüksek platform sıçanı sadece ayaktayken barındırabilir ve yerden belirli bir mesafeye yerleştirildiği için, sıçanlar yükseklik korkusu nedeniyle hareket etmeyecektir¹⁶.

Bu makalede, yüksek platformun imalatı, bir sıçan astım modelinin kurulması, yüksek platformda bir sıçanın ihtiyatı operasyonu ve tüm vücut pletirmografisi (WBP) sistemi kullanılarak solunum fonksiyonunun ölçülması ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Deneyleri Etik Komitesi (Etik boşluk numarası PZSHUTCM190308020) tarafından incelendi ve onaylandı.

1. Yüksek platformun imalatı

1. Destek cihazının uzunluğunu ve genişliğini 86 cm x 17 cm olarak ayarlayın (Şekil 1).
2. Bağlantı cihazını destekleyen cihaza dikey olarak sabitleyin. Bağlantı cihazı, sıçanın yüksek platformun üst yüzeyine koşmasını önlemek için yaklaşık 30 cm uzunluğunda ve 14 cm genişliğe sahip olmalıdır.
3. Yatay pedalı (5 cm x 5 cm) bağlantı cihazına sabitleyin. Yatay pedalın altındaki asma yükseklik 50 cm'den büyük veya eşit olmalıdır.
   NOT: Deneysel sıçanların sayısına bağlı olarak, her pedala bir sıçan yerleştirilmiş birden fazla yatay pedal kullanılabilir.

2. Astımın sıçan modelinin kurulması

1. OVA ile sıçanları duyarlı hale
   1. 0. günde duyarlılık çözümünü hazırlayın. Hassaslaştırma çözeltisinin her 1 mL'sini 1 mg OVA ve 10 mg alüminyum hidroksit ile çözücü olarak normal salin ile hazırlayın.
   2. Intraperitoneally her sıçana 0 gün içinde 1 mL duyarlılık çözeltisi enjekte edin. Hassaslaştırıcı çözeltiyi daha sonra kullanmak için uygun bir şırınna ile çizin.
   3. Kuyruğu tutun ve sıçanı kaldırın, pürüzlü bir yüzeye yerleştirin ve kuyruğu yavaşça geri çekin. Kalan üç parmak ve avuç içi ile sırt derisini sıkıca tutarken sol başparmak ve işaret parmağı ile hem kulakların hem de boynun derisini kavrayın (sıçanı boğacak fazla kuvvet uygulamaktan kaçınmaya dikkat edin).
   4. Sağ elle, duyarlılık çözeltisinin 1 mL'si ile hazırlanan şırınna ile sıçanda intraperitoneal bir enjeksiyon gerçekleştirin.
2. OVA ile zorlu sıçanlar
   1. Kapaklı bir kutu seçin (uzunluk, genişlik ve yükseklik 39 cm x 28 cm x 23 cm'dir) ve yan tarafta küçük bir delik açın. Kapalı kutuyu, nebulizasyon kabını ve sıkıştırma nebülizörünü bir kauçuk tüple bağlayın(Ek Şekil 1).
      NOT: Sıkıştırılmış nebülizörün nebülizör boyutu 1 - 5 μm, nebülizasyon oranı 0,2 mL/dk'dan büyük ve nihai basınç 205 kPa'dır.
   2. Duyarlılıktan sonraki 14. günde, ev yapımı kapalı kutunun kapağını açın ve sıçanı kutuya yerleştirin (kutu 5 sıçanı barındırabilir) ve ardından mühürlü kutuyu bir biyogüvenlik kabinine koyun.
   3. Meydan okuma çözümünü hazırlayın. 300 mg OVA'yı 30 mL normal salinle iyice karıştırın.
   4. Ultrasonik nebülizörü açın ve nebülizör kabına 30 mL meydan okuma çözeltisi ekleyin. Meydan okuma çözeltisinin dozajını ve sıçan sayısını ev yapımı kapalı kutunun hacmine göre ayarlayın.
   5. Nebulizasyonu birkaç kez (günde bir kez) tekrarlayın veya astım semptomlarının şiddetine göre prosedürü ayarlayın.

3. Akupunktur tedavisi

1. Astım tedavisi için geleneksel Çin tıbbı teorisine göre GV14, bilateral BL12 ve bilateral BL13 dahil olmak üzere keskin noktaları seçin(Ek Şekil 2). 2. günde manuel akupunktur uygulayın ve toplam 7 seans boyunca günde bir kez gerçekleştirin (Şekil 2).
   1. Yedinci servikal omur ile ilk torasik omur (kürek kemiğinin oyuk) arasında yer alan GV14'ün arkanın orta hattında akupunktur (Şekil 3).
   2. Üçüncü torasik omurun altında, interkostal boşlukların her iki tarafında (kürek kemiğinin alt kenarı) bulunan BL13'ü akupunkturlayın.
   3. Akupunktur BL12, ikinci torasik omurun altında, interkostal boşlukların her iki tarafında bulunur (kürek kemiğinin altında, BL13'e göre tanımlanan pozisyon).
2. Sıçanları kavrayın ve yüksek platforma yerleştirin.
3. Tek kullanımlık paslanmaz çelik iğneyi (0,3 mm x 13,0 mm, Tamamlayıcı Şekil 3)sağ elin başparmağı ve işaret parmağıyla tutun ve farenin arkasına sağ elin avuç içiyle bastırın.
   NOT: Tek kullanımlık iğneler yalnızca tek kullanımlık olmalıdır. Çünkü tekrarlanan kullanım iğneyi köreltir ve bu da sıçanlarda ağrının artmasına neden olur.
4. Üst kenarın (GV14) ortasındaki veya kürek kemiğinin (BL12 ve BL13) alt kenarındaki depresyona dokunun ve ardından keskin noktaları bulmak için farenin cildini iğne ucuyla hafifçe batırın.
5. Kulakçık belirli konumunu belirledikten sonra iğneyi hızlı bir şekilde yerleştirin ve sağ eli hızla çıkarın.
6. İğneleri 10 - 20 s için 60 kez / dakika oranında yaklaşık 360 ° eşit şekilde büktü, her 5 dakikada bir manipüle etti ve 20 - 30 dakika sonra geri çekti(Ek Şekil 4).

4. Penh ölçümü

1. Metakolin hazırlayın: 5 mL santrifüj tüpüne 100 mg metakolin yerleştirin ve PBS'yi 2 mL (50 mg/mL mehakolin) hacmine ekleyin. Daha sonra, 50 mg/mL metakolin çözeltisini 25 mg/mL, 12,5 mg/mL, 6,25 mg/mL ve 3,125 mg/mL'ye seyreltin.
2. Alet muayenesi
   1. Sinyal amplifikatörünü açın (aerosol dağıtım sistemi ve kemirgen önyargı akış besleme sistemi tamamen kapalıdır ve nebülizasyon konektörü kapalıdır).
   2. Kanalları kontrol edin: Kalibre Et'i tıklatın, kaba ayarlama taban çizgisini 0'a döndürün ve doğru akım (DC) konumuna geçin. Taban çizgisine 0'a ince ayar yapın ve bir şırınna ile 5 mL gaz enjekte edin. Ardından, alternatif akım (AC) konumuna geçin.
   3. Kanalları kontrol ettikten sonra hata değerinin %0,5'ten az olduğundan emin olun.
3. Parametreleri ayarlama
   1. Aerosol dağıtım sistemini ve kemirgen önyargı akış besleme sistemini açın. Cıva topundaki sıvı seviyesine göre akış hızını 4,5 mL olarak ayarlayın.
   2. Çalışma Seçenekleri Oluştur 'u tıklatın ve Doz Yanıt Çalışması'nın öğesini seçin, türlerin Faresi 'ni seçin ve İleri 'yitıklatın.
   3. Basit Doz Listesi'ni seçin, Doz Sayısını 6 olarak ayarlayın ve İleri 'yitıklatın.
   4. Penh ve Area parametrelerini seçin: Hayvan adaptasyon süresini 5 dakikaya, nebülizasyon süresini 2 dakikaya, yanıt süresini 3 dakikaya ve iyileşme süresini 2 dakikaya ayarlayın.
   5. Nebülizöre sırayla aşağıdaki çözümleri ekleyin (sıçan başına 200 μL): mehakolin (0 mg/mL, 3.125 mg/mL, 6.25 mg/mL, 12.5 mg/mL, 25 mg/mL ve 50 mg/mL). Penh'de gerçek zamanlı değişiklikler gözlenebilir (Şekil 4).
   6. Farklı konsantrasyonlara sahip 6 çözümün tümüne tepki verildikten sonra, denemeyi tamamlamak için Dosya ve Oturumu Sonlandır'ı tıklatın.

Sonuçlar

GV14,bilateral BL12 ve bilateral BL13 noktalarında akupunktur ile sıçan eğilimli bir pozisyon korur. Sıçan kafasını sadece dışarıya doğru bükebilir, iç tarafa değil, çünkü bir yön ahşap bir tahta ile engellenir (Şekil 5).

Metakolin konsantrasyonu arttıkça Penh artan bir eğilim gösterir ve büyüme hızı giderek artar. 3.125 mg/mL, 6.25 mg/mL, 12.5 mg/mL, 25 mg/mL ve 50 mg/mL konsantrasyonlarında Penh %18.40 ± %10.70 arttı, %27,55 ± %2...

Tartışmalar

Bu çalışmada kullanılan GV14, bilateral BL12 ve bilateral BL13 acupoints arka tarafta bulunur ve bu nedenle yüksek platform sıçanları sabitlemek için uygundur. Diğer çalışmalarda, acupoints konumuna göre yeterli bir fiksasyon yöntemi seçilmelidir¹⁵. Karın üzerindeki keskin noktalar için, sıçan siyah bir koni içine aşağı doğru yerlenebilir (fırıncılar tarafından kullanılan bir pasta torbasına benzer)¹⁷. Sabitleme için kısıtlama konisine bir...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.3 mm x 13.0 mm acupuncture needle	China Suzhou Medical Device Factory
Al(OH)3	American Thermo	77161
Compression nebulizer	Jiangsu Lude Medical Electronics Co., Ltd.	NB-212C
Fine Pointe V2.0	American Buxco
Laboratory gas drying unit	American Drierite	26800
Methacholine	American Sigma	MKCF6054
Ovalbumin	American Sigma	A5503-25G
Phosphate Buffer solution (1x)	Gelifesciences	SH30256.01
Seal box	IRIS Corporation of Japan
Whole-body plethysmography respiratory function measurement system	American Buxco