JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Erratum Notice
  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Erratum
  • Reprints and Permissions

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. Read More ...

Summary

الكشف عن التفاعلات الممرضة البكتيرية المضيفة على أساس الالتزام phenotypic باستخدام عالية الإنتاجية التصوير الوسم الفلوري جنبا إلى جنب مع أساليب التحليل الإحصائي الآلي تمكن التقييم السريع للتفاعلات البكتيرية المحتملة مع الخلايا المضيفة.

Abstract

تحديد مسببات الأمراض البكتيرية الناشئة أمر بالغ الأهمية لصحة الإنسان وأمنه. يعد الالتزام البكتيري بالخلايا المضيفة خطوة أساسية في العدوى البكتيرية ويشكل سمة مميزة للتهديد المحتمل. لذلك ، يمكن استخدام فحص التزام البكتيريا بالخلايا المضيفة كعنصر من عناصر تقييم التهديد البكتيري. وهناك طريقة قياسية لتعداد الالتزام البكتيري للخلايا المضيفة هو المشاركة في احتضان البكتيريا مع الخلايا المضيفة، وحصاد البكتيريا الملتصقة، ولوحة الخلايا المحصودة على وسائل الإعلام الصلبة، ومن ثم عد وحدات تشكيل مستعمرة الناتجة (CFU). بدلا من ذلك، يمكن تقييم الالتزام البكتيري بالخلايا المضيفة باستخدام النهج القائمة على المجهر المناعي. بيد أن الاستراتيجيات التقليدية لتنفيذ هذه النهج تستغرق وقتا طويلا ولا تتسم بالكفاءة. هنا، يتم وصف طريقة التصوير الآلي المضروبة القائمة على الفلورسينس التي تم تطويرها مؤخرا. عند دمجها مع معالجة الصور عالية الإنتاجية والتحليل الإحصائي ، تمكن الطريقة من التحديد الكمي السريع للبكتيريا التي تلتزم بالخلايا المضيفة. تم اختبار نوعين بكتيريين ، السودوموناس aeruginosa سلبية الغرام والليستيريا monocytogenes إيجابية الغرام والضوابط السلبية المقابلة ، لإثبات البروتوكول. وتبين النتائج أن هذا النهج يعدد بسرعة ودقة البكتيريا الملتصقة ويقلل بشكل كبير من أعباء العمل التجريبية والجداول الزمنية.

Introduction

الالتصاق البكتيري هو عملية حيث ترتبط البكتيريا بالخلايا أو الأسطح الأخرى. النجاح في إنشاء العدوى من قبل مسببات الأمراض البكتيرية يتطلب التصاق الخلايا المضيفة، والاستعمار من الأنسجة، وفي بعض الحالات، غزو الخلايا المضيفة1،2،3. تشكل الأمراض المعدية الناشئة تهديدات رئيسية للصحة العامة، كما يتضح من جائحة COVID-19 الأخيرة4و5و6. والأهم من ذلك، قد لا يمكن تمييز مسببات الأمراض الجديدة أو الناشئة بسهولة باستخدام النهج القائمة على الجينوم، لا سيما في الحالات التي تم فيها تصميم العامل الممرض للتهرب من الكشف أو لا يحتوي على توقيعات جينومية تحدده على أنه مسبب للأمراض. لذلك ، فإن تحديد مسببات الأمراض المحتملة باستخدام الطرق التي تقيم مباشرة السمات المميزة للتسبب في المرض ، مثل الالتزام البكتيري بالخلايا المضيفة ، يمكن أن يلعب دورا حاسما في تحديد مسببات الأمراض.

وقد استخدم الالتزام البكتيري للخلايا المضيفة لتقييم آليات الإمراض البكتيري لعقود1،7. التصوير المجهري8،9 وعدد وحدة تشكيل المستعمرة البكتيرية (CFU)10،11،12،13 عن طريق طلاء ما بعد العدوى هما طريقتان مختبريتان متطورتان لاختبار الالتزام الميكروبي و / أو عدوى الخلايا المضيفة14. بالنظر إلى حجم مقياس ميكرومتر للخلايا البكتيرية ، فإن تعداد الخلايا البكتيرية الملتصقة يتطلب بشكل عام استخدام تقنيات المجهر المتقدمة عالية التكبير ، وكذلك نهج التصوير عالي الدقة ، بما في ذلك المجهر الإلكتروني ، والتنظير المجهري التوسعي (ExM)15،16، والتصوير ثلاثي الأبعاد17 . بدلا من ذلك ، يمكن إجراء تعداد البكتيريا المرتبطة أو المستوعبة داخل الخلايا المضيفة عن طريق طلاء سلسلة التخفيف من البكتيريا المحصودة على أجار صلب وحساب CFUsالناتجة 10،12،13. هذه الطريقة شاقة وتتضمن العديد من الخطوات اليدوية ، والتي تقدم صعوبات في إنشاء إجراء موحد أو آلي مطلوب للتحليلات عالية الإنتاجية18،19. ولذلك، فإن تطوير أساليب جديدة لتقييم مرفق الخلية المضيفة سيعالج القيود الحالية في الحقل.

ويرد وصف إحدى هذه الطرق هنا التي تستخدم المجهر الآلي عالية الإنتاجية، جنبا إلى جنب مع معالجة الصور ذات الإنتاجية العالية والتحليل الإحصائي. لإثبات هذا النهج ، تم إجراء تجارب مع العديد من مسببات الأمراض البكتيرية ، بما في ذلك Pseudomonas aeruginosa، وهو ممرض بكتيري انتهازي سلبي الغرام من البشر والحيوانات والنباتات14،20، والذي غالبا ما يتم العثور عليه لاستعمار الجهاز التنفسي للمرضى الذين يعانون من ضعف وظائف الدفاع المضيف. هذا النهج الأمثل لعملية التصوير المجهرية الموصوفة في الدراسات السابقة14،20. تم تبسيط الكشف عن التصوير من خلال الخلايا المضيفة والبكتيريا ذات العلامات الفلورية لتتبع قربها بسرعة ، مما قلل بشكل كبير من عبء عمل المجهر للحصول على صور عالية الدقة لتمييز البكتيريا. بالإضافة إلى ذلك ، حل التحليل الإحصائي الآلي للصور في عد الخلايا المضيفة والبكتيريا محل التجربة اليدوية للطلاء البكتيري CFU لتقدير نسبة العد البكتيري الملتصق لكل خلية مضيفة. لتأكيد توافق هذه الطريقة ، تم اختبار العديد من السلالات البكتيرية وأنواع الخلايا المضيفة ، مثل الليستيريا أحادية الخلايا، المكورات العنقودية، عصيات cereus ، والالتهاب الرئوي Klebsiella ، وكذلك الخلايا البطانية الوريدية البشرية (HUVECs) ، وتدعم النتائج تنوع وفعالية الطريقة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

1. ثقافة الخلية A549

  1. الحفاظ على خط الخلية A549 في F-12K المتوسطة تكملها 10٪ مصل البقر الجنيني (FBS) واحتضان في 37 درجة مئوية، 5٪ CO2.
  2. تغيير المتوسط كل 3-4 أيام والمرور في التقاء 85٪-95٪.
  3. باختصار، شطف الخلايا مع 1 × الفوسفات العازلة المالحة (PBS، درجة الحموضة 7.4، ما لم يشر إلى خلاف ذلك) وعلاج مع 1 مل من 0.25٪ تريبسين-0.53 mM حمض الإيثيلينديامينتتراستيك (EDTA) حل (غمر طبقة الخلية) لمدة 2 دقيقة في 37 درجة مئوية.
  4. إضافة إضافية 6 مل من متوسط النمو الكامل (F-12K المتوسط + 10٪ FBS) لوقف نشاط بروتيز. ثم، لوحة الخلايا في قارورة زراعة الأنسجة البوليسترين T-75 معقمة بنسبة subcultivation من 1:3-1:8. الحجم النهائي للثقافة هو 12 مل.
  5. البذور ما يقرب من 1 ×10 4 A549 الخلايا (تركيز الخلية: ~ 1 ×10 5 خلايا / مل) على كل بئر من لوحة 96 جيدا قبل يوم واحد من المقايسات الالتزام.

2. نمو البكتيريا وتلطيخ

  1. قم بأداء جميع الأعمال البكتيرية في خزانة السلامة الحيوية، مختبر السلامة البيولوجية المستوى 2.
  2. تلقيح جميع الثقافات البكتيرية، بما في ذلك P. aeruginosa (PAO1)، Escherichia. القولونية، L. monocytogenes، وB. subtilis، الخ، من مخزون الجلسرين المجمدة وتنمو لهم في مرق الصويا Tryptic (TSB، 3 مل) في حاضنة تهتز في 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها الحفاظ عليها في 250 دورة في الدقيقة.
  3. في اليوم التالي، استخدم تخفيف 1:100 للثقافة بين عشية وضحاها لتطعيم ثقافة فرعية ونمت لهم في TSB (1 مل) لمدة 3 ساعة إلى المرحلة الأسية، وقياس OD في 600 نانومتر (OD600) لتأكيد. تأكد من أن OD600 في نطاق 0.4-0.6.
  4. قبل إجراء اختبار الالتزام بالبكتيريا المضيفة ، تقوم مخففات طبقية متسلسلة للتعليق البكتيري على لوحات TSB-agar ، باحتضانها بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية ، ثم إنشاء CFUs البكتيرية من عدد المستعمرات. لP. aeruginosa, OD600 من 1.0 يتوافق مع 2 × 108 خلايا بكتيرية قابلة للحياة / مل, وبالنسبة ل. monocytogenes, OD600 من 1.0 يتوافق مع 9 × 108 خلايا بكتيرية قابلة للحياة / مل.
  5. حصاد الثقافات البكتيرية في مرحلة الأسي عن طريق الطرد المركزي في 13000 × ز لمدة 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT)، ثم غسلها مرة واحدة باستخدام برنامج تلفزيوني 1x (1 مل). Resuspend الكريات البكتيرية في 1 مل من 1x برنامج تلفزيوني وتحديد التركيزات عن طريق قياس OD600 من تعليق البكتيرية. على سبيل المثال، P. aeruginosa مع OD600 من 0.5 يمثل تركيز 1 × 108 الخلايا البكتيرية / مل.
  6. لطخ التعليق البكتيري باستخدام صبغة فلورية خضراء أو حمراء في RT لمدة 30 دقيقة مع دوران لطيف في الظلام. لهذا، إضافة 2 ميكرولتر من 500 أضعاف صباغة تلطيخ الأسهم المركزة في 1 مل من التعليق البكتيري لتخفيف الصبغة 1-أضعاف. لغسل صبغة تلطيخ، الطرد المركزي البكتيريا الملطخة في 13،000 × ز لمدة 2 دقيقة وإعادة إنفاق بيليه في 1 مل من برنامج تلفزيوني 1x لمدة ثلاث مرات.
    ملاحظة: إذا تم استخدام البكتيريا الموسومة بالفلورسينس -(GFP-، RFP-، mCherry-، إلخ) في التجربة، ثم تخطي هذه الخطوة تلطيخ البكتيرية. GFP- الموسومة P. aeruginosa والأحمر الفلورسنت صبغ الملون L. monocytogenes استخدمت في هذا البروتوكول.
  7. جمع الخلايا البكتيرية الملطخة أو البكتيريا GFP الموسومة عن طريق الطرد المركزي في 13،000 × ز لمدة 2 دقيقة. Resuspend في جديدة F-12K المتوسطة (1 مل) وقياس OD600 من كل ثقافة. بعد ذلك تمييع الثقافات إلى التركيزات المطلوبة على أساس تعدد العدوى (MOI) وتركيز الخلية المضيفة. الحجم النهائي المستخدم في هذه التجربة هو 500 ميكرولتر.
    ملاحظة: على سبيل المثال، إذا كان تركيز الخلية المضيفة الذي تم عده باستخدام تلطيخ تريبان الأزرق هو 1 × 105 خلايا / مل، فإن التركيز المطلوب للخلايا البكتيرية في MOI من 100 سيكون 1 × 107 خلايا / مل. تركيز P. aeruginosa في 0.5 OD600 هو 1 × 108/ مل. للحصول على التركيز المطلوب، تمييع ثقافة P. aeruginosa 10 أضعاف، إضافة 50 ميكرولتر من الثقافة resuspended إلى 450 ميكروغرام من F-12K المتوسطة الطازجة.

3. الالتزام البكتيري وتلطيخ الخلايا المضيفة

  1. أولا، غسل أحاديات الخلية A549 المصنف ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1x دافئ. لكل غسل، إضافة 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني 1x إلى كل بئر، ماصة بلطف صعودا وهبوطا ثلاث مرات، والتخلص من برنامج تلفزيوني 1x أو الانتظار لمدة 10 ثانية بعد إضافة ثم فراغ لإزالة 1x PBS. لتحديد حركية الارتباط البكتيري ، قم بتراكب الخلايا مع 100 ميكرولتر من التركيزات المرغوبة للتعليق البكتيري مع MOIs مختلفة (0 و 1 و 10 و 100). تدور أسفل البكتيريا في 200 × ز لمدة 10 دقيقة واحتضان الخلايا A549 المصابة في 37 درجة مئوية، 5٪ CO2 ل1 ساعة إضافية.
    ملاحظة: في هذه التجربة، كان لكل شرط ثلاثي التقنية.
  2. إزالة البكتيريا غير المنضمة عن طريق غسل monolayers خمس مرات مع برنامج تلفزيوني 1x الحارة على النحو المبين أعلاه. إضافة 100 ميكرولتر من 4٪ الفورمالديهايد (في برنامج تلفزيوني 1x) في كل بئر من لوحات 96 بئر لإصلاح الخلايا. دع الأطباق تجلس على الجليد لمدة 15 دقيقة ثم تغسل محلول التثبيت باستخدام برنامج تلفزيوني 1x ثلاث مرات.
  3. وصمة عار النوى، إضافة 50 نانوغرام / مل من 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) واحتضانه لمدة 10 دقيقة في RT. بعد الحضانة، اغسل الآبار ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني 1x. قم بتغطية خلايا A549 المصابة ب 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني 1x لتجنب التجفيف. عملية الخطوة التالية أو تخزين لوحة في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 2 أيام في الظلام.

4. التصوير الآلي المضان ، والمعالجة ، والتحليل

  1. للحفاظ على سلامة البيانات، اختر عشوائيا ويدويا خمسة مواقع لكل بئر لالتقاط الصور عند تكبير 20x. التقط الصور الفلورية لخلايا وبكتيريا A549 تحت قنوات DAPI وGFP على التوالي. استخدام PE-Cy5 قناة للبكتيريا الملطخة صبغة الفلورسنت الحمراء.
  2. للحصول على دقة أفضل، قم بمعالجة جميع الصور لتسطيح الخلفية وتفكيكها. تعيين المعلمات كما قطر 68 ميكرومتر من الكرة المتداول لصقل والسيارات قياس وظيفة انتشار نقطة (PSF) من deconvolution الصورة على أساس الهدف.
  3. لحساب جميع الخلايا والبكتيريا المؤهلة، قم بقياس كثافة الفلورسينس للخلايا والبكتيريا المضيفة وحدد أضعف كثافة مضانة للخلايا والبكتيريا المضيفة كعتبات لعدد الخلايا. عد جميع البكتيريا القريبة من الخلية المضيفة ضمن مسافة 15 ميكرومتر كبكتيريا معتنقة حيث يبلغ قطر الخلية A549 10.59-14.93 ميكرومتر21.
    ملاحظة: يقوم الإعداد الافتراضي في نظام التصوير بحساب الخلايا المضيفة ذات الأقطار التي تتراوح بين 5-100 ميكرومتر والبكتيريا التي تتراوح مساحتها بين 0.2-5 ميكرومتر (العرض والطول).
  4. استنادا إلى نتائج معالجة الصور اليدوية المذكورة أعلاه ، قم بتطبيق معلمات تنعيم الصور ، وفك الانفكاق ، وأحجام الكائنات ، والمسافة ، وكثافة الفلورسينس على بقية الصور الآلية. بعد التحليل الآلي، فكر في القراءات الحرجة، مثل إجمالي عدد الخلايا المضيفة، وأحجام الخلايا وأشكالها، وإجمالي عدد البكتيريا، ومتوسط عدد البكتيريا لكل خلية مضيفة، والذي كان أهم مؤشر، لتحديد الالتزام البكتيري.
  5. تصدير البيانات والتحليل الإحصائي
    1. تصدير النتائج التي تم تحليلها من جميع الصور إلى جدول بيانات (على سبيل المثال، تنسيق xlsx). النظام الآلي يولد مجموعتين من النتائج: 1) متوسط عدد البكتيريا الملتصقة من كل صورة؛ 1) متوسط عدد البكتيريا الملتصقة من كل صورة؛ (2) معدل عدد البكتيريا الملتصقة من كل صورة؛ (2) معدل عدد البكتيريا الملتصقة من كل صورة؛ (2) معدل عدد البكتيريا الملتصق 2) البيانات المفيدة لكل خلية مضيفة واحدة ، مثل العد البكتيري الملتصق على خلية واحدة ، وحجم المضيف ، ومتوسط كثافة الفلورسينس للخلية المضيفة والبكتيريا ، من الصورة المقابلة.
    2. حساب متوسط عدد الانحراف المعياري للأعداد البكتيرية الملتصقة من جميع الصور لتمثيل مستوى الالتزام البكتيري مقارنة بالضوابط السلبية. في هذه الطريقة، كان الإشريكية القولونية وB. subtilis بمثابة ضوابط سلبية في اختبار الالتزام البكتيري إيجابية الغرام والغرام، على التوالي. إجراء ANOVAs ثنائي الاتجاه لاختبار التباين الكبير بين نقاط البيانات عبر العلاج لثلاث تجارب مستقلة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

لتطوير مضان التصوير القائم على فحص الالتزام البكتيري، P. aeruginosa سلالة PAO1 ونظيره السلبية الالتزام E. القولونية استخدمت لاختبار فعالية البروتوكول، كما تم الإبلاغ عن التزام هذه البكتيريا إلى خلايا A54914،20،22. أولا، تم احتضان GFP- المسمى...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

يصف البروتوكول أسلوب تلقائي لتعداد المرفق البكتيري بالخلايا المضيفة. 10- والنهج الموصوف له عدة مزايا جذابة على الأساليب التقليدية. أولا، يمكن هذا النهج من التحديد الكمي الدقيق لعدد الخلايا المسببة للأمراض الميكروبية المرتبطة بالخلايا المضيفة الفردية. الأهم من ذلك، يمكن إجراء هذا القياس ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

جميع المؤلفين ليس لديهم تضارب في المصالح للكشف عنها.

Acknowledgements

ونحن ممتنون للدكتور كايت زلوتكوفسكي من شركة بيوتيك لدعمهم التقني. وقد تم دعم هذا العمل من قبل وزارة الدفاع بموجب رقم العقد W911NF1920013 إلى PdF ووكالة مشاريع البحوث المتقدمة الدفاعية (DARPA) ووزارة الداخلية بموجب العقد رقم 140D6319C0029 إلى PdF. ولا يعكس محتوى المعلومات بالضرورة موقف الحكومة أو سياستها، ولا ينبغي الاستدلال على أي تأييد رسمي.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
10x PBSVWR45001-130
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)Thermo Fisher62248Host cell staining dye
96 well plateCorning3882Half area well, flat clear bottom
A549 cellsATCC CCL 185Mammalian cell line
BactoView Live RedBiotium40101Bacteria staning dye
CentrifugeEppendorf5810R
CFSE cell division trackerBioLegend423801
Cytation 5 BioTekCytation 5 Cell imaging multi-mode reader
E. coliLaboratory stock 
EGM bulletKitLonzaCC-3124HUVEC cell culture medium
EHECNIST collections
F-12k mediumATCC 302004A549 cell culture medium
Fetal bovine serumCorning35-016-CV
HUVECLaboratory stock 
L. monocytogenesNIST collections
OD600 DiluPhotometerIMPLEN
P. aeruginosaDr. Lori Burrows laboratory stock
P. aeruginosa ΔpilADr. Lori Burrows laboratory stock
S. agalactiaeNIST collections
S. aureusBEINR-46543
S. aureus ΔsaeRBEINR-48164
S. rubidaeaNIST collections
Typical soy brothGrowcellsMBPE-4040

References

  1. Pizarro-Cerda, J., Cossart, P. Bacterial adhesion and entry into host cells. Cell. 124, 715-727 (2006).
  2. Kipnis, E., Sawa, T., Wiener-Kronish, J. Targeting mechanisms of Pseudomonas aeruginosa pathogenesis. Médecine et Maladies Infectieuses. 36 (2), 78-91 (2006).
  3. Josse, J., Laurent, F., Diot, A. Staphylococcal adhesion and host cell invasion: Fibronectin-binding and other mechanisms. Frontiers in Microbiology. 8, 2433(2017).
  4. Cabibbo, G., Rizzo, G. E. M., Stornello, C., Craxì, A. SARS-CoV-2 infection in patients with a normal or abnormal liver. Journal of Viral Hepatitis. 28 (1), 4-11 (2021).
  5. Ortiz-Prado, E., et al. Clinical, molecular, and epidemiological characterization of the SARS-CoV-2 virus and the Coronavirus Disease 2019 (COVID-19), a comprehensive literature review. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 98 (1), 115094(2020).
  6. Chang, C. C., Senining, R., Kim, J., Goyal, R. An acute pulmonary coccidioidomycosis coinfection in a patient presenting with multifocal pneumonia with COVID-19. Journal of Investigative Medicine High Impact Case Reports. 8, (2020).
  7. Woo, V., et al. Microbiota inhibit epithelial pathogen adherence by epigenetically regulating C-type lectin expression. Frontiers in Immunology. 10, 928(2019).
  8. Pandey, A., et al. Global reprogramming of host kinase signaling in response to fungal infection. Cell Host Microbe. 21 (5), 637-649 (2017).
  9. Ding, S., et al. Interactions between fungal hyaluronic acid and host CD44 promote internalization by recruiting host autophagy proteins to forming phagosomes. iScience. 24 (3), 102192(2021).
  10. Qin, Q. M., et al. RNAi screen of endoplasmic reticulum-associated host factors reveals a role for IRE1alpha in supporting Brucella replication. PLoS Pathogens. 4 (7), 1000110(2008).
  11. Qin, Q. M., et al. Functional analysis of host factors that mediate the intracellular lifestyle of Cryptococcus neoformans. PLoS Pathogens. 7 (6), 1002078(2011).
  12. Qin, Q. M., et al. A tractable Drosophila cell system enables rapid identification of Acinetobacter baumannii host factors. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 10, 240(2020).
  13. Pandey, A., et al. Activation of host IRE1α-dependent signaling axis contributes the intracellular parasitism of Brucella melitensis. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 8, 103(2018).
  14. Chi, E., Mehl, T., Nunn, D., Lory, S. Interaction of Pseudomonas aeruginosa with A549 pneumocyte cells. Infection and Immunity. 59 (3), 822-828 (1990).
  15. Götz, R., et al. Nanoscale imaging of bacterial infections by sphingolipid expansion microscopy. Nature Communications. 11, 6173(2020).
  16. Lim, Y., et al. Mechanically resolved imaging of bacteria using expansion microscopy. PLOS Biology. 17 (10), 3000268(2019).
  17. Bratton, B. P., Barton, B., Morgenstein, R. M. Three-dimensional Imaging of bacterial cells for accurate cellular representations and precise protein localization. Journal of Visualized Experiments. (152), e60350(2019).
  18. Hoffmann, S., et al. High-throughput quantification of bacterial-cell interactions using virtual colony counts. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 8, 43(2018).
  19. Hazan, R., Que, Y. -A., Maura, D., Rahme, L. G. A method for high throughput determination of viable bacteria cell counts in 96-well plates. BMC Microbiology. 12 (1), 259(2012).
  20. Gellatly, S. L., Hancock, R. E. W. Pseudomonas aeruginosa: new insights into pathogenesis and host defenses. Pathogens and Disease. 67, 159-173 (2013).
  21. Jiang, R. D., Shen, H., Piao, Y. J. The morphometrical analysis on the ultrastructure of A549 cells. Romanian Journal of Morphology and Embryology. 51 (4), 663-667 (2010).
  22. Farinha, M. A., et al. Alteration of the pilin adhesin of Pseudomonas aeruginosa PAO results in normal pilus biogenesis but a loss of adherence to human pneumocyte cells and decreased virulence in mice. Infection and Immunity. 62 (10), 4118-4123 (1994).
  23. Réglier-Poupet, H., Pellegrini, E., Charbit, A., Berche, P. Identification of LpeA, a PsaA-Like membrane protein that promotes cell entry by Listeria monocytogenes. Infection and immunity. 71 (1), 474-482 (2003).
  24. Ortega, F. E., et al. Adhesion to the host cell surface is sufficient to mediate Listeria monocytogenes entry into epithelial cells. Molecular Biology of the Cell. 28 (22), 2945-2957 (2017).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Erratum


Formal Correction: Erratum: Automated, High-Throughput Detection of Bacterial Adherence to Host Cells
Posted by JoVE Editors on 2/08/2022. Citeable Link.

An erratum was issued for: Automated, High-Throughput Detection of Bacterial Adherence to Host Cells. The Authors section was updated.

The Authors section was updated from:

Jing Yang1, Qing-Ming Qin1, Paul de Figueiredo1,2
1Department of Microbial Pathogenesis and Immunology, Texas A&M Health Science Center
2Department of Veterinary Pathobiology, Texas A&M College of Veterinary Medicine

to:

Jing Yang1, Qing-Ming Qin1, Erin Van Schaik1, James E. Samuel1, Paul de Figueiredo1,2
1Department of Microbial Pathogenesis and Immunology, Texas A&M Health Science Center
2Department of Veterinary Pathobiology, Texas A&M College of Veterinary Medicine

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

175

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved