دراسة الاستشعار الميكانيكي للأمعاء الصغيرة الفئران للجسيمات المضيئة

Summary

لدراسة كيفية تعامل الأمعاء الدقيقة مع الجسيمات ذات الأحجام المختلفة ، قمنا بتعديل طريقة راسخة في الجسم الحي لتحديد عبور الأمعاء الدقيقة.

Abstract

حركة الجهاز الهضمي (GI) أمر بالغ الأهمية لعملية الهضم والامتصاص الطبيعية. في الأمعاء الصغيرة ، التي تمتص العناصر الغذائية ، تعمل الحركة على تحسين الهضم والامتصاص. لهذا السبب ، تشمل بعض أنماط الحركة في الأمعاء الدقيقة التجزئة لخلط المحتويات المضيئة والتمعج لدفعها. الخصائص الفيزيائية للمحتويات المضيئة تعدل أنماط حركة الأمعاء الدقيقة. التحفيز الميكانيكي للدوائر الحسية الميكانيكية GI عن طريق عبور محتويات اللمعان وحركية الأمعاء الكامنة تبدأ وتعدل أنماط محركات GI المعقدة. ومع ذلك ، فإن الآليات الحسية الميكانيكية التي تقود هذه العملية لا تزال غير مفهومة بشكل جيد. ويرجع ذلك في المقام الأول إلى نقص الأدوات اللازمة لتشريح كيفية تعامل الأمعاء الدقيقة مع المواد ذات الخصائص الفيزيائية المختلفة. لدراسة كيفية تعامل الأمعاء الدقيقة مع الجسيمات ذات الأحجام المختلفة ، قمنا بتعديل طريقة راسخة في الجسم الحي لتحديد عبور الأمعاء الدقيقة. نحن غافارد الفئران الحية مع السائل الفلورسنت أو حبات الفلورسنت الصغيرة. بعد 30 دقيقة ، نقوم بتشريح الأمعاء لتصوير توزيع محتويات الفلورسنت عبر كامل الجهاز الهضمي. بالإضافة إلى القياسات عالية الدقة للمركز الهندسي ، نستخدم التجليد متغير الحجم والتحليل الطيفي لتحديد كيفية تأثير المواد المختلفة على عبور الأمعاء الدقيقة. لقد استكشفنا كيف تؤثر آلية "لمس الأمعاء" المكتشفة مؤخرا على حركة الأمعاء الدقيقة باستخدام هذا النهج.

Introduction

الجهاز الهضمي البشري (GI) هو نظام عضو طوله عدة أقدام ، يتم تقريبه تقريبا كأنبوب بأبعاد وخصائص فيزيائية مختلفة¹. مع تحرك المحتويات عبر طولها ، تتمثل الوظيفة الأساسية للجهاز الهضمي في امتصاص المواد المهمة للحياة. الأمعاء الدقيقة مسؤولة بشكل خاص عن امتصاص المغذيات. يتم تنظيم عبور الأمعاء الدقيقة بإحكام لتتناسب مع وظائف الهضم والامتصاص ، مما يؤدي إلى أنماط حركية مختلفة. وصف بايليس وستارلينغ "قانون الأمعاء"^{2 في عام} 1899 ، مما يدل على برنامج الدفع الانقباضي في الأمعاء المعروف اليوم باسم المنعكس التمعجي. الجزء القريب من عقود البلعة الغذائية لدفعها إلى الأمام ، والجزء البعيد يرتاح لاستلامها. من الناحية النظرية، يمكن أن يكون هذا النمط وحده كافيا لنقل المواد عن طريق الإجهاض، ولكن أكثر من قرن من الأبحاث رسمت صورة أكثر تعقيدا للنشاط الانقباضي في الجهاز الهضمي. يتم التعرف على ثلاث فترات حركية الأمعاء الدقيقة في البشر: المجمع الحركي المهاجر (MMC) ، وفترة الصيام ، وفترة ما بعد الأكل³. تم الإبلاغ عن نفس الأنماط في الفئران ^4,5. MMC هو نمط محرك دوري محفوظ عبر معظم الثدييات ^6,7. يحتوي MMC على نمط مميز من أربع مراحل يعمل كعلامة سريرية مفيدة في اضطرابات الجهاز الهضمي الوظيفية⁷. والمراحل الأربع، حسب ترتيب حدوثها، هي: (أولا) السكون، و (ثانيا) الانقباضات غير المنتظمة ذات السعة المنخفضة، و (ثالثا) الانقباضات المنتظمة ذات السعة العالية، و (رابعا) فترة الانخفاض في النشاط⁷. يمثل MMC النمط الحركي الرئيسي لفترة الصيام³. MMCs من فترة الصيام مسح محتويات الأمعاء الدقيقة استعدادا للوجبة التالية.

يتم تحسين الأنماط الحركية لفترة ما بعد الأكل للوظائف الهضمية والاستيعابية³. بغض النظر عن تكوين السعرات الحرارية ، يكون العبور الأولي سريعا على طول الأمعاء الدقيقة ، وتنتشر المحتويات على طول الأمعاء ، ثم يتباطأ العبور لاحقا⁸. يتم تحسين الامتصاص عن طريق زيادة مساحة سطح التلامس وإبطائه لزيادة وقت الإقامة. بمجرد أن تكون العناصر الغذائية داخل التجويف ، يتكون النمط السائد من تقلصات غير منسقة قريبة (<2 سم) (تقلصات مجزأة) ، مع عدد قليل من الانقباضات ذات السعة الكبيرة المتراكبة التي تمتد على طول الأمعاء الدقيقة بالكامل (الانقباضات التمعجية)⁹. تخلط تقلصات التجزئة المحتويات داخل اللمعان في مكانها. تدفع الانقباضات التمعجية الكبيرة العرضية المحتويات نحو القولون.

يعتمد توقيت هذا الانتقال مرة أخرى إلى MMCs على حجم الطعام وتكوين السعرات الحرارية¹⁰. وبالتالي ، فإن عينات الأمعاء الدقيقة إشارات مضيئة لتنظيم وقت الانتقال بين فترات الحركة. الإشارات الميكانيكية ، مثل الخواص الفيزيائية للمحتويات المضيئة¹¹ ، وحجم اللمعان ، وتوتر الجدار ، تشرك خلايا المستقبلات الميكانيكية في جدار GI¹²،¹³،14،^15،16. في الواقع ، تؤدي زيادة المكون الصلب للوجبة إلى زيادة في عبور الأمعاء الدقيقة¹⁷. نحن نتوقع أن الخصائص الفيزيائية ، مثل الحالة السائلة أو الصلبة للمحتويات داخل اللمعان ، يجب أن تتفاعل مع مستقبلات ميكانيكية مختلفة بسبب القوى المختلفة التي تولدها على جدار GI¹⁸.

المعيار الذهبي لقياس عبور GI في الجسم الحي في البشر ، كما هو الحال في الفئران ، هو استخدام المقتفيات المشعة التي تقاس بالتصوير الومضاني عند خروجها من المعدة أو عبورها على طول القولون^19,20. في الثدييات ، حلقات الأمعاء الدقيقة بطرق لا يمكن التنبؤ بها مما يجعل من الصعب تصوير الأمعاء الدقيقة في الجسم الحي بشكل موثوق ، ولكن يتم إحراز تقدم²¹. علاوة على ذلك ، هناك حاليا نقص في الأدوات اللازمة لتحديد كيفية تعامل الأمعاء الدقيقة مع الجسيمات ذات الخصائص والأحجام المختلفة. كانت نقطة البداية هنا تقنية قياسية ذهبية توحد دراسة عبور الأمعاء الدقيقة 22^،23،24 ووظيفة الحاجز²². وهو يتألف من الفئران التي تحتوي على مادة فلورسنت ، في انتظار حركية الجهاز الهضمي لنقل المادة ، واستئصال الجهاز الهضمي ، وتقسيمه إلى عدة أقسام من المعدة إلى القولون ، والتقسيم ، وتجانس المحتويات داخل اللمعان لتحديد كمية التألق. لقد أجرينا تحسينين. أولا ، قمنا بتغيير تركيبة محتويات gavaged لتشمل الخرز المجهري الفلورسنت لتحديد كيفية توزيع الأمعاء الدقيقة للجسيمات الفيزيائية. ثانيا، قمنا بتحسين الدقة المكانية عن طريق تصوير الجهاز الهضمي بأكمله من المعدة إلى القولون خارج الجسم الحي واستخدمنا الربط متغير الحجم لتوحيد تحليلنا عبر الحيوانات. نفترض أن هذا يكشف عن رؤى جديدة في توازن الانقباضات الدافعة مقابل الانقباضات المجزأة خلال مرحلة ما بعد الأكل

Protocol

تمت الموافقة على جميع الطرق الموضحة هنا من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC) في Mayo Clinic.

1. الإعداد

1. فئران سريعة تتراوح أعمارها بين 8 و 10 أسابيع لمدة 4 ساعات. تزويد الفئران بإمكانية الوصول إلى الماء.
   ملاحظة: نحن نستخدم الفئران الذكور من النوع البري C57BL/6J لجميع التجارب المعروضة هنا، ولكن يمكن إجراؤها على الفئران من أي سلالة وجنس ونمط وراثي.
2. قم بتبريد 15 مل من الماء المقطر في أنبوب مخروطي سعة 50 مل في ثلاجة 4 درجات مئوية.
3. سخني 15 مل أخرى من الماء المقطر في كوب باستخدام صفيحة ساخنة مع قضيب تحريك مغناطيسي إلى حوالي 80-90 درجة مئوية.
4. قياس 0.5٪ ميثيل سليلوز لمجموع 30 مل (0.15 غرام).
5. أضف ميثيل السليلوز بلطف إلى 15 مل من الماء الساخن حتى لا يتكتل. سيكون محلول ميثيل سليلوز غائما خلال هذه العملية.
6. بمجرد إذابته ، قم بإزالة الكأس من الصفيحة الساخنة وأضف 15 مل من الماء المبرد إلى الكأس الساخن.
7. ضعه في ثلاجة 4 درجات مئوية حتى يصبح المحلول صافيا ، حوالي 15-20 دقيقة.
8. عندما تكون واضحة ، تزن 3 ملغ من الرودامين إيزوثيوسيانات (RITC) - ديكستران لكل 5 مل من محلول ميثيل سليلوز 0.5 ٪ وتخلط للمزج. هذه هي الحالة السائلة في قسم النتائج التمثيلية .
   1. بدلا من ذلك ، تزن 25 ملغ من الميكروسفير البولي إيثيلين الفلورسنت وتخلط مع 200 ميكرولتر من محلول ميثيل سليلوز حتى يتم دمجها جيدا. يتم ضمان الدمج الشامل للميكروسفير بواسطة دوامة قبل gavage. يجب على المجرب تصور التوزيع المتجانس للميكروسفير المعلق في الخليط.
   2. نظرا لأن محلول RITC-dextran حساس للضوء ، قم بتبريد المحلول. تحضير محلول RITC-dextran وخليط microshpere مقدما واستخدامها في غضون 2 أشهر. أعد تعليق خليط المجهر قبل الاستخدام.
      ملاحظة: تستخدم الميكروسفير ذات الأحجام المختلفة لدراسة التعامل المعدي المعوي مع المواد المختلفة. في قسم النتائج التمثيلية ، نوضح نتائج استخدام الميكروسفير الصغير (القطر: 75-90 ميكرومتر) والأكبر (القطر: 180-212 ميكرومتر).

2. غافاج المحتوى داخل اللمعان

1. قم بإعداد الجافاج عن طريق توصيل أنبوب تغذية 18 Ga × 50 مم بحقنة 1 مل ورسم 200 ميكرولتر من محلول RITC أو محلول ميكروسفير.
2. كبح جماح الحيوان الصائم يدويا باستخدام تقنية ضبط النفس بيد واحدة²⁵. ارجع إلى معلومات المؤسسة حول تقنيات تقييد الفئران المناسبة.
3. أدخل أنبوب التغذية بلطف عبر الفم والمريء للفأر حتى يدخل المعدة.
   ملاحظة: تعد خطوة gavage أمرا بالغ الأهمية لنجاح التجربة. يتطلب الأمر أيدي ذات خبرة يمكنها إدخال الأنبوب باستمرار بنفس المسافة تقريبا في كل ماوس. يجب توحيد هذه الخطوة من قبل المجربين الذين ينفذون البروتوكول. يجب على نفس المجرب أن يمسح جميع مجموعات الفئران التي ستتم مقارنتها ببعضها البعض.
4. طرد محتويات المحقنة ببطء إلى المعدة وإزالة الأنبوب بعناية من الماوس.
5. بعد gavage ، أعد الماوس إلى القفص.
6. تخلص من أنبوب غافاج.
7. كرر العملية حسب الحاجة للعدد المطلوب من الحيوانات.

3. تشريح الأمعاء

1. قبل البدء في التشريح ، قم بتشغيل أداة التصوير في الجسم الحي للسماح لها بالوصول إلى درجة الحرارة.
2. التضحية بالماوس بعد 30 دقيقة من الغافاج. استخدم استنشاق ثاني أكسيد الكربون للتضحية بالفأر ، يليه خلع عنق الرحم لضمان القتل الرحيم الناجح.
3. بعد التأكد من القتل الرحيم الناجح ، ضع الفأر في وضع ضعيف على مرحلة تشريح وقم بتثبيت زوائده الأربعة على المسرح للوصول إلى البطن. بلل سطح البطن بنسبة 70٪ من الإيثانول لترطيب شعر البطن.
4. استخدم ملقط التشريح الدقيق لسحب الجلد والحصول على مقص جراحي حاد لإجراء شق عرضي 1 سم فوق فتحة الشرج. لفضح التجويف داخل الصفاق ، استمر في الشق عموديا حتى البطن حتى القفص الصدري.
5. حرك الأعور بلطف إلى اليسار باستخدام ملقط التشريح الدقيق لفضح القولون البعيد.
6. قطع القولون البعيد مع مقص تشريح دقيق فقط بالقرب من المستقيم.
7. قم بفك القولون والأعور والأمعاء الدقيقة بلطف عن طريق السحب ببطء في الاتجاه المعاكس.
   ملاحظة: الحفاظ على الأمعاء المشوهة في جزء واحد مستمر سيخلق أكبر قدر من السهولة للباحث. سوف تتسبب التمزقات والدموع على طول الجزء في أن تكون الخطوات اللاحقة أكثر صعوبة.
8. استخدم مقص التشريح الدقيق لقطع القرب من المعدة.
9. استخدم الملقط لنقل الأمعاء المشوهة إلى ورقة القياس (الشكل 1). ضع المعدة عند 0 مم ورتب الأمعاء على طول المسطرة حتى 200 مم. استخدم مقص التشريح الدقيق للقطع عند 200 مم. كرر هذه العملية لمحاذاة الأمعاء من 0 مم إلى 200 مم على طول المساطر مع البقاء واثقا من أن اتجاه الأمعاء لا يتم الخلط بينه.
   1. كن حذرا لتجنب تمدد الأمعاء أثناء المحاذاة للمساطر.
10. بمجرد ترتيب الأنسجة على المسطرة ، قم بترتيب الأعور بحيث يكون موازيا للنسيج ولكن ليس على اتصال مباشر به (إذا تم العثور على أي تألق داخل تلك المنطقة ، فستكون هناك حاجة إلى تمييز واضح بين الأعور والأمعاء).
11. ضع ورقة القياس مع الأنسجة المشوهة في منطقة مظلمة حتى يمكن الحفاظ على التألق حتى يحين وقت التصوير.

4. التصوير خارج الجسم الحي

1. افتح برنامج التصوير في الجسم الحي وقم بتسجيل الدخول.
2. قم بتهيئة أداة التصوير بحيث تكون جاهزة للحصول على الصورة.
3. اضبط حقلي "الإثارة" و "الانبعاثات" على اللون المقابل المستخدم في الخرزة أو RITC gavage. أحمر (سائل): الإثارة 535 نانومتر / انبعاث 600 نانومتر. الأخضر (الميكروسفيرات): الإثارة 465 نانومتر / الانبعاثات 520 نانومتر.
4. اضبط التعريض الضوئي على "تلقائي".
5. حدد مجال الرؤية.
6. قبل وضع ورقة القياس في الأداة ، تأكد من عدم تحول الأمعاء أثناء النقل.
7. ضع ورقة القياس في الأداة داخل مجال الرؤية.
8. أغلق باب الجهاز بإحكام وحدد لقطة لتصوير مجال الرؤية.
9. احفظ الصور التي تم جمعها على محرك أقراص محمول لتحليلها. احفظ اللقطات الفردية للصور الفلورية والصور الفوتوغرافية. يشير تراكب الصورة الفوتوغرافية والتألق إلى موقع المواد الفلورية في الجهاز الهضمي (الشكل 1).
   ملاحظة: نوصي بحفظ الملفات بتنسيق ملف صورة العلامة (.tif) للمعالجة النهائية.

5. التحليل

1. افتح ملفات الصور الفلورية والصور الفوتوغرافية في برنامج تحرير الصور.
2. اضبط حجم البكسل لكلتا الصورتين بحيث يكون لهما نفس الأبعاد بالضبط (كانت عادتنا هي ضبط كلتا الصورتين على 1280 بكسل بمقدار 850 بكسل [الارتفاع × العرض]).
3. أغلق ملف الصورة. تتضمن الخطوات التالية صورة الفلورسنت فقط.
4. استخدم أداة ممحاة لإزالة الخلفية وجعلها شفافة. قد تكون هناك حاجة إلى ممحاة لإزالة بقع الخلفية المتبقية.
5. إنشاء طبقة جديدة. اجعلها خلفية سوداء بالكامل لإشارة الفلورسنت. يمكن تحقيق ذلك عن طريق اختيار تعبئة سوداء للطبقة وسحب الطبقة للاستلقاء أسفل الطبقة مع صورة الفلورسنت.
6. احفظ صورة الفلورسنت الجديدة ، التي تحتوي فقط على إشارة الفلورسنت على خلفية سوداء ، كملف .tif جديد.
7. افتح صور الفلورسنت والصور الفوتوغرافية الجديدة في ImageJ.
8. حول كل صورة إلى صورة 32 بت عن طريق اختيار نوع الصورة > > 32 بت.
9. قم بإنشاء صورة مدمجة لكليهما عن طريق اختيار > لون الصورة > دمج القنوات. في مربع الحوار الذي يفتح، حدد ملف الصورة الفوتوغرافية للقناة الرمادية وملف الفلورسنت تحت أي قنوات ملونة.
10. قم بإيقاف تشغيل مقياس الصورة المدمجة عن طريق تحديد تحليل > تعيين مقياس > انقر لإزالة المقياس.
11. حدد أداة "المستطيل" في ImageJ.
12. ارسم مستطيلا حول جزء من الأمعاء الصغيرة. انتبه جيدا لعرض منطقة الاهتمام هذه (ROI) ، حيث يجب أن تظل ثابتة بين جميع عائد الاستثمار. القيمة الاسمية ليست ضرورية ، فقط لأنها تبقى متسقة عبر جميع عائد الاستثمار المرسوم على هذه الصورة [نظرا لأن الأمعاء الدقيقة تستحوذ على عدة صفوف ، رسم عائد استثمار فردي فوق كل قسم من الأمعاء الدقيقة في صف مختلف (الشكل 1)]. يوضح الشكل 2 موقع قيمة العرض في شريط أدوات ImageJ.
13. قم بتكرار عائد الاستثمار عن طريق تحديد صورة > تكرار. حدد القناة المقابلة للقناة الملونة فقط.
14. استخدم أداة المستطيل مرة أخرى لرسم عائد استثمار على الصورة الجديدة بالكامل.
15. استرداد ملف تعريف التألق عن طريق تحديد تحليل > ملف تعريف المؤامرة. يرسم الرسم البياني الناتج على المحور y متوسط الكثافة لكل بكسل على طول عائد الاستثمار. تم اختيار هذا في الخطوة 5.12 ليكون طول القسم الذي تم تحليله من الأمعاء الدقيقة
16. افتح قائمة القيم وانسخها إلى برنامج جدول بيانات.
17. كرر الخطوات 5.12-5.16 لكل قسم من الأمعاء الدقيقة على صف مسطرة مختلف. استمر في لصق القيم على نفس ملف جدول البيانات مباشرة أسفل كل مجموعة سابقة من القيم، بحيث تحتوي جميع الصفوف المستمرة في هذا العمود على متوسط قيمة الكثافة لكامل طول الأمعاء الصغيرة.
18. في برنامج جداول البيانات، اضرب كل قيمة كثافة متوسطة في العرض الثابت لمستطيل عائد الاستثمار الذي تم إنشاؤه في الخطوة 5.12. هذا سوف يؤدي إلى قيمة الكثافة الحقيقية على طول الأمعاء الدقيقة في كل نقطة.
    ملاحظة: الحيوانات المختلفة سيكون لها اختلافات طفيفة في طول الأمعاء الدقيقة. لمنع الاختلافات في الطول من التأثير على نتائج تحليل البيانات النهائية ، يجب ربط سلسلة قيم الكثافة في عدد ثابت من الصناديق عبر جميع العينات التجريبية (الشكل 3 ، الشكل 4 ، والشكل 5 عرض النتائج لثلاثة أحجام من الصندوق).
19. اقسم عدد قيم الكثافة على عدد الصناديق المطلوبة. يحدد الحاصل الناتج S عدد قيم الكثافة المضمنة في كل صندوق.
20. حدد سلة المهملات التي ستذهب إليها كل قيمة كثافة خام باستخدام صيغة تقرير إخباري. تضع هذه الخطوة كل قيمة كثافة خام في سلة المهملات. تتم فهرسة كل قيمة كثافة خام زمنيا باستخدام العدد الصحيح N. يحدد حاصل القسمة N/S رقم الحاوية المعين لكل قيمة خام. يجب أن تقوم صيغة التقرير الإخباري بتقريب هذا الحاصل إلى عدد صحيح بدون أرقام عشرية.
21. قم بإنشاء القيمة لكل حاوية باستخدام صيغة averageif. الهدف هو متوسط القيم الخام المعينة لحاوية معينة في الخطوة 5.20. وبالتالي ، يجب أن تكون الوسيطات الموجودة في الصيغة: (1) الصناديق المعينة التي تم إنشاؤها في الخطوة 5.20 ، (2) رقم الحاوية ، (3) قيم الكثافة الخام.
    ملاحظة: التحليل الأول الذي يمكننا إجراؤه على البيانات المثبتة هو تحليل مركزي هندسي ، والذي يحدد كميا إلى أي مدى نلاحظ أعلى كثافة فلورسنت على طول الأمعاء الدقيقة (الشكل 4).
22. تطبيع كل قيمة كثافة على إجمالي كثافة الفلورسنت. بمعنى آخر ، اقسم كل قيمة كثافة على مجموع جميع الكثافات.
23. اضرب كل قيمة تمت تسويتها في رقم المهملات. يعكس المنتج الوزن النسبي لكل صندوق ، مما يساهم في إجمالي كثافة الفلورسنت.
24. تؤدي إضافة جميع القيم التي تم إنشاؤها في الخطوة 5.23 إلى إنتاج رقم الحاوية في مركز إشارة الفلورسنت. قسمة على عدد الصناديق للتعبير عن المركز الهندسي كجزء من الأمعاء الدقيقة التي يسافرها مركز الفلورسنت.
    ملاحظة: لعكس التوزيع المكاني للإشارة، تتمثل الخطوة التالية في توليد طيف القدرة لمجموعة بيانات الكثافة المثبتة (الشكل 5).
25. افتح معالج تحويل فورييه السريع (FFT) في برنامج جداول البيانات. حدد الإدخال كمجموعة بيانات مثبتة والإخراج كمجموعة فارغة من نفس عدد الصفوف مثل المهملات.
26. استخراج مكون القيمة الحقيقية من FFT.
27. ارفع كل قيمة حقيقية ل FFT إلى الطاقة الثانية. ينتج عن ذلك مجموعة بيانات من أطياف الطاقة.
28. حدد النصف الأول من مجموعة بيانات أطياف الطاقة وحركها بحيث تقع أسفل النصف الثاني. هذا له تأثير على توسيط أطياف الطاقة حول تردد المركز عندما يتم رسمه في الخطوة التالية.
29. ارسم أطياف القدرة على المحور y لرسم بياني x-y حيث تكون قيم المحور x هي النطاق من -1 x (عدد الصناديق / 2) إلى (عدد الصناديق / 2) -1. في حالة 1000 صندوق ، ستتراوح قيم المحور من -500 إلى 499.
30. يجب مقارنة أطياف الطاقة لكل على أساس انتشار القمم غير الصفرية وارتفاعات هذه القمم غير الصفرية.

النتائج

نعرض نتائج تمثيلية من الخطوة 3 فصاعدا. ويبين الشكل 1 الأمعاء المسحوقة السليمة، مع وضع قياسات الفلورسنت فوقها. يتم وضع المعدة (الأرجواني) على طول نفس محور الأمعاء الدقيقة (البرتقالي) ، لكننا نفضل تحريك الأعور (الأزرق) إلى الجانب لمنع التداخل مع الأمعاء الغليظة (البرتقالية). كم...

Discussion

تتطلب الجهاز الهضمي ، مثل الأعضاء الأنبوبية الأخرى ، مثل الأوعية الدموية ، أجهزة استشعار ميكانيكية ومؤثرات للحفاظ على التوازن²⁶،^27،28. ومع ذلك ، فإن الجهاز الهضمي فريد من نوعه من حيث أن الخصائص الفيزيائية للمواد التي تجتازه ليست ثابتة عبر ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
C57BL/6J mice	Jackson Laboratory	664	other mice can be used with this protocol
Dissection tools	n/a	n/a
Excel software	Microsoft	n/a	used for spreadsheet analysis
Fluorescent Green Polyethylene Microspheres 1.00g/cc 75-90um - 10g	Cospheric	UVPMS-BG-1.00 75-90um - 10g	"smaller beads" in the manuscript
Fluorescent Green Polyethylene Microspheres 1.00g/cc 180-212um - 10g	Cospheric	UVPMS-BG-1.00 180-212um - 10g	"larger beads" in the manuscript
Gavage needles	Instech	FTP-18-50-50
ImageJ software	n/a	n/a	used to extract fluorescence profile
Laminated ruler paper (prepared in-house)	n/a	n/a
Methyl cellulose (viscosity: 400 cP)	Sigma	M0262
Photoshop software	Adobe	n/a	used for image processing
Rhodamine B isothiocyanate-Dextran	Sigma	r8881-100mg	"liquid" condition in the manuscript
Xenogen IVIS 200	Perkin Elmer	124262	In vivo imaging system