חקר מורין מעיים קטנים מכנוסנס של חלקיקים לומינליים

Summary

כדי לחקור כיצד המעי הדק מטפל בחלקיקים בגדלים שונים, שינינו שיטת in vivo מבוססת כדי לקבוע את המעבר במעי הדק.

Abstract

תנועתיות במערכת העיכול (GI) חיונית לעיכול ולספיגה תקינים. במעי הדק, אשר סופג חומרים מזינים, תנועתיות מייעלת את העיכול והספיגה. מסיבה זו, חלק מדפוסי התנועתיות במעי הדק כוללים סגמנטציה לערבוב של תוכן לומינלי ופריסטלטיקה להנעתם. תכונות פיזיקליות של תוכן לומינלי מווסתות את דפוסי תנועתיות המעי הדק. הגירוי המכני של מעגלים מכנו-חושיים במערכת העיכול על ידי מעבר תוכן לומינלי ותנועתיות מעיים בסיסית יוזמים ומווסתים תבניות מוטוריות מורכבות של GI. עם זאת, המנגנונים המכנו-חושיים המניעים את התהליך הזה עדיין אינם מובנים כהלכה. זה נובע בעיקר ממחסור בכלים לנתח כיצד המעי הדק מטפל בחומרים בעלי תכונות פיזיקליות שונות. כדי לחקור כיצד המעי הדק מטפל בחלקיקים בגדלים שונים, שינינו שיטת in vivo מבוססת כדי לקבוע את המעבר במעי הדק. אנו מגדלים עכברים חיים עם נוזל פלואורסצנטי או חרוזים פלואורסצנטיים זעירים. לאחר 30 דקות, אנו מנתחים את המעיים כדי לדמות את התפלגות התוכן הפלואורסצנטי על פני כל מערכת העיכול. בנוסף למדידות ברזולוציה גבוהה של המרכז הגיאומטרי, אנו משתמשים במדידות בגדלים משתנים ובאנליזה ספקטרלית כדי לקבוע כיצד חומרים שונים משפיעים על מעבר המעי הדק. בחנו כיצד מנגנון "מגע במעיים" שהתגלה לאחרונה משפיע על תנועתיות המעי הדק בגישה זו.

Introduction

מערכת העיכול האנושית (GI) היא מערכת איברים באורך של מספר מטרים, בערך כמו צינור בעל ממדים שונים ותכונות פיזיות¹. כאשר התכולה נעה לאורכה, תפקידה העיקרי של מערכת העיכול הוא לספוג חומרים חיוניים לחיים. המעי הדק אחראי באופן ספציפי לספיגת חומרים מזינים. המעבר במעי הדק מווסת באופן הדוק כדי להתאים לתפקודי העיכול והספיגה, וכתוצאה מכך נוצרים דפוסי תנועתיות שונים. בייליס וסטארלינג תיארו את "חוק המעי"² בשנת 1899, והראו את תוכנית ההנעה ההתכווצותית במעי הידועה כיום כרפלקס פריסטלטי; הקטע הפרוקסימלי לבולוס המזון מתכווץ כדי להניע אותו קדימה, והקטע הדיסטלי נרגע לקבל אותו. בתיאוריה, תבנית זו לבדה יכולה להספיק כדי להעביר חומר באופן תמוה, אך למעלה ממאה שנים של מחקר ציירו תמונה מורכבת יותר של פעילות התכווצות במערכת העיכול. שלוש תקופות תנועתיות של המעי הדק מוכרות בבני אדם: קומפלקס המנועים הנודדים (MMC), תקופת הצום והתקופה שלאחר הלידה³. אותם דפוסים דווחו בעכברים ^4,5. ה-MMC הוא תבנית מוטורית מחזורית הנשמרת ברוב היונקים ^6,7. ל- MMC דפוס אופייני בן ארבעה שלבים המשמש סמן קליני שימושי בהפרעות GI תפקודיות⁷. ארבעת השלבים, לפי סדר ההתרחשות, הם (I) התכווצויות, (II) התכווצויות לא סדירות, משרעת נמוכה, (III) התכווצויות משרעת גבוהה רגילות, ו-(IV) תקופת^{ירידה בפעילות} 7. ה- MMC מסמן את התבנית המוטורית העיקרית של תקופת הצום³. MMCs של תקופת הצום לנקות את התוכן של המעי הדק לקראת הארוחה הבאה.

הדפוסים המוטוריים של התקופה שלאחר הלידה מותאמים לתפקודי העיכול והספיגה³. ללא קשר להרכב הקלורי, המעבר הראשוני מהיר לאורך המעי הדק, התוכן מתפשט לאורך המעי, והמעבר מאט לאחר מכן⁸. הספיגה ממוטבת על ידי הגדלת שטח הפנים במגע והאטתו כדי להאריך את זמן המגורים. ברגע שהחומרים המזינים נמצאים בתוך הלומן, התבנית הדומיננטית מורכבת מהתכווצויות קרובות (<2 ס"מ זו מזו) לא מתואמות (התכווצויות פילוח), עם כמה התכווצויות על גבי משרעת גדולה המשתרעות לכל אורך המעי הדק (התכווצויות פריסטלטיות)⁹. התכווצויות פילוח מערבבות את התכולה התוך-לומינלית במקום. התכווצויות פריסטלטיות גדולות מדי פעם מניעות את התוכן לכיוון המעי הגס.

עיתוי המעבר חזרה ל-MMCs תלוי בנפח המזון ובהרכב הקלורי¹⁰. לפיכך, המעי הדק דוגם רמזים לומינליים כדי לווסת מתי לעבור בין תקופות תנועתיות. רמזים מכניים, כגון תכונות פיזיקליות של תכולה לומינלית¹¹, נפח לומינלי ומתח דופן, מעסיקים תאים מכנורצפטורים בקיר מערכת העיכול 12,13,14,15,16. ואכן, הגדלת המרכיב המוצק בארוחה מובילה לעלייה במעבר המעי הדק¹⁷. אנו משערים כי תכונות פיזיקליות, כגון המצב הנוזלי או המוצק של תוכן תוך-לומינלי, חייבות להעסיק מכנורצפטורים שונים בשל הכוחות השונים שהם מייצרים על קיר מערכת העיכול¹⁸.

תקן הזהב למדידת מעבר in vivo GI בבני אדם, כמו בעכברים, הוא השימוש בעוקבים רדיואקטיביים הנמדדים על ידי scintigraphy כשהם יוצאים מהקיבה או עוברים לאורך המעי הגס ^19,20. ביונקים, לולאות המעי הדק בדרכים בלתי צפויות מה שמקשה על הדמיית in vivo באופן אמין, אך ההתקדמות נעשית²¹. יתר על כן, כיום חסרים כלים לכימות האופן שבו המעי הדק מטפל בחלקיקים בעלי תכונות וגדלים שונים. נקודת המוצא כאן הייתה טכניקה של תקן זהב שמתקננת את המחקר של מעבר מעי דק 22,23,24 ותפקוד מחסום ²². הוא מורכב מגידול עכברים עם חומר פלואורסצנטי, המתנה לתנועתיות של מערכת העיכול כדי להעביר את החומר, כריתת מערכת העיכול, פילוחו למספר חלקים מהקיבה ועד המעי הגס, חתך, והומוגניות של תוכן תוך-לומינלי לכימות פלואורסצנטי. עשינו שני שיפורים. ראשית, שינינו את ההרכב של תכולת ה-gavaged כך שיכלול חרוזים מיקרוסקופיים פלואורסצנטיים כדי לקבוע כיצד המעי הדק מפיץ חלקיקים פיזיים. שנית, שיפרנו את הרזולוציה המרחבית על ידי הדמיה של כל מערכת העיכול מהקיבה ועד המעי הגס, והשתמשנו בבינוי בגודל משתנה כדי לתקנן את הניתוח שלנו בין בעלי חיים. אנו מניחים כי זה חושף תובנות חדשות על האיזון של התכווצויות הנעה לעומת פילוח בשלב שלאחר הלידה.

Protocol

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של מאיו קליניק.

1. התקנה

1. צמו עכברים בני 8 עד 10 שבועות למשך 4 שעות. ספק לעכברים גישה למים.
   הערה: אנו משתמשים בעכברי C57BL/6J זכרים מסוג בר עבור כל הניסויים המוצגים כאן, אך ניתן לבצע אותם על עכברים מכל זן, מין וגנוטיפ.
2. מצננים 15 מ"ל מים מזוקקים בצינור חרוטי של 50 מ"ל במקרר 4°C.
3. מחממים עוד 15 מ"ל של מים מזוקקים בכוס באמצעות צלחת חמה עם מוט ערבוב מגנטי לכ-80-90 מעלות צלזיוס.
4. מדוד 0.5% מתילצלולוז עבור סך של 30 מ"ל (0.15 גרם).
5. הוסיפו בעדינות מתילצלולוז ל-15 מ"ל מים חמים כדי שלא יתגבשו. תמיסת המתיל צלולוז תהיה מעוננת במהלך תהליך זה.
6. לאחר ההמסה, הסר את הכוס מהצלחת החמה והוסף את 15 מ"ל המים הצוננים לכוס החמה.
7. מכניסים למקרר בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד שהתמיסה צלולה, כ-15-20 דקות.
8. כאשר זה ברור, לשקול 3 מ"ג של רודמין איזותיוציאנט (RITC)-דקסטרן לכל 5 מ"ל של 0.5% מתילצלולוז פתרון ולערבב כדי לשלב. זהו מצב הנוזל במקטע תוצאות מייצגות .
   1. לחלופין, שקלו 25 מ"ג של מיקרוספרות פוליאתילן פלואורסצנטיות וערבבו עם 200 מיקרוליטר של תמיסת מתילצלולוז עד לשילוב טוב. שילוב יסודי של מיקרוספרות מובטח על ידי מערבולת לפני גבאג'. על הנסיין לדמיין התפלגות הומוגנית של מיקרוספרות תלויות בתערובת.
   2. מכיוון שתמיסת RITC-dextran רגישה לאור, יש לקרר את התמיסה. הכינו מראש את תמיסת RITC-dextran ואת תערובת המיקרו-שפרה והשתמשו תוך חודשיים. יש להשעות את תערובת המיקרוספרה לפני השימוש.
      הערה: מיקרוספרות בגדלים שונים משמשות לחקר טיפול במערכת העיכול בחומרים שונים. בסעיף תוצאות מייצגות , אנו מדגימים את תוצאות השימוש במיקרוספרות קטנות (קוטר: 75-90 מיקרומטר) וגדולות יותר (קוטר: 180-212 מיקרומטר).

2. מעטפת תוכן אינטרלומינלית

1. הכן את המעטפת על ידי חיבור צינור הזנה של 18 Ga x 50 מ"מ למזרק של 1 מ"ל וציור 200 μL של תמיסת RITC או תמיסת מיקרוספרה.
2. לרסן ידנית את החיה הצום באמצעות טכניקת הריסון ביד אחת²⁵. עיין במידע של המוסד על טכניקות ריסון מורין נכונות.
3. הכנס בעדינות את צינור ההזנה דרך הפה והוושט של העכבר עד שהוא נכנס לקיבה.
   הערה: שלב ה-gavage הוא קריטי לניסוי מוצלח. זה דורש ידיים מנוסות שיכולות להכניס את הצינור באופן עקבי בערך באותו מרחק בכל עכבר. שלב זה צריך להיות סטנדרטי על ידי נסיינים המבצעים את הפרוטוקול. אותו נסיינית צריך לגנות את כל קבוצות העכברים שיושוו זו לזו.
4. לאט לאט לגרש את תוכן המזרק לתוך הבטן בזהירות להסיר את הצינור מן העכבר.
5. לאחר הגבאג', החזירו את העכבר לכלוב.
6. יש להשליך את צינור הגבאג'.
7. חזרו על התהליך לפי הצורך עבור מספר בעלי החיים הרצוי.

3. דיסקציה של המעי

1. לפני תחילת הנתיחות, הפעל את מכשיר ההדמיה in vivo כדי לאפשר לו להגיע לטמפרטורה.
2. להקריב את העכבר 30 דקות לאחר gavage. השתמש בשאיפת פחמן דו חמצני כדי להקריב את העכבר, ואחריו פריקת צוואר הרחם כדי להבטיח המתת חסד מוצלחת.
3. לאחר אישור המתת חסד מוצלחת, הניחו את העכבר במצב שכיבה על במת דיסקציה והצמידו את ארבעת הנספחים שלו על הבמה כדי לקבל גישה לבטן. הרטיבו את פני הבטן ב-70% אתנול כדי להרטיב את שערות הבטן.
4. השתמש מלקחיים מיקרו דיסקציה כדי למשוך את העור לרכוש מספריים כירורגיים חדים לעשות חתך רוחבי 1 ס"מ מעל פי הטבעת. כדי לחשוף את החלל intraperitoneal, להמשיך את החתך אנכית במעלה הבטן עד כלוב הצלעות.
5. הזיזו בעדינות את הצקום שמאלה עם מלקחיים מיקרו-דיסקציה כדי לחשוף את המעי הגס הדיסטלי.
6. חותכים את המעי הגס הדיסטלי עם מספריים מיקרו-דיסקציה רק פרוקסימליים לפי הטבעת.
7. יש לפרום בעדינות את המעי הגס, הצקום והמעי הדק על ידי משיכה איטית בכיוון ההפוך.
   הערה: שמירה על המעיים המנותקים במקטע רציף אחד תיצור את הקלות הרבה ביותר עבור החוקר. קרעים וקרעים לאורך הקטע יגרמו לשלבים הבאים להיות קשים יותר.
8. השתמש מספריים מיקרו-דיסקציה כדי לחתוך פרוקסימלי לקיבה.
9. השתמשו במלקחיים כדי להעביר את המעיים המנותקים לגיליון המדידה (איור 1). מניחים את הבטן על 0 מ"מ ומסדרים את המעיים לאורך הסרגל עד 200 מ"מ. השתמש מספריים מיקרו-דיסקציה כדי לחתוך ב 200 מ"מ. חזור על תהליך זה של יישור המעיים מ 0 מ"מ ל 200 מ"מ לאורך הסרגלים תוך שמירה על ביטחון כי הכיוון של המעיים לא להתבלבל.
   1. היזהרו להימנע ממתיחת המעיים תוך יישור הסרגלים.
10. לאחר שהרקמה מסודרת על הסרגל, סדרו את הצקום כך שיהיה מקביל לרקמה אך לא במגע ישיר איתה (אם נמצא פלואורסצנטי כלשהו באזור זה, אזי יהיה צורך בהבדל ברור בין הצקום למעיים).
11. הניחו את גיליון המדידה עם הרקמה המנותקת באזור חשוך, כך שניתן יהיה לשמר את הפלואורסצנטיות עד שיגיע הזמן לתמונה.

4. הדמיית אקס-ויוו

1. פתח את תוכנת ההדמיה in vivo והיכנס.
2. אתחל את מכשיר ההדמיה כך שיהיה מוכן לרכישת תמונה.
3. הגדר את השדות 'עירור' ו'פליטה' לצבע המתאים המשמש לחרוז או ל- RITC gavage. אדום (נוזלי): עירור 535 ננומטר / פליטה 600 ננומטר. ירוק (מיקרוספרות): עירור 465 ננומטר / פליטה 520 ננומטר.
4. הגדירו את החשיפה ל'אוטומטי'.
5. בחר את שדה הראייה.
6. לפני הכנסת גיליון המדידה למכשיר, ודא שהמעיים לא זזו במהלך ההובלה.
7. מקם את גיליון המדידה במכשיר בתוך שדה הראייה.
8. סגור היטב את דלת המכשיר ובחר Snapshot כדי לצלם את שדה הראייה.
9. שמור את התמונות שנאספו בכונן הבזק לניתוח. שמור צילומים בודדים של תמונות הפלואורסצנט והצילום. שכבת-על של התצלום והפלואורסצנציה מציינת את מיקומו של חומר פלואורסצנטי במערכת העיכול (איור 1).
   הערה: אנו ממליצים לשמור את הקבצים בתבנית Tag Image File (.tif) לעיבוד במורד הזרם.

5. ניתוח

1. פתח את קבצי התמונות הפלואורסצנטיים והתצלומים בתוכנה לעריכת תמונות.
2. התאם את גודל הפיקסלים של שתי התמונות כך שיהיו להן מידות זהות בדיוק (המוסכמה שלנו הייתה להגדיר את שתי התמונות ל- 1280 פיקסלים על 850 פיקסלים [גובה x רוחב]).
3. סגור את קובץ התצלומים. השלבים הבאים כוללים רק את התמונה הפלואורסצנטית.
4. השתמשו בכלי מחק כדי להסיר את הרקע ולהפוך אותו לשקוף. ייתכן שיהיה צורך במחק כדי להסיר טלאים של הרקע הנותר.
5. צרו שכבה חדשה. הפוך אותו לרקע שחור לחלוטין לאות הפלואורסצנטי. ניתן להשיג זאת על ידי בחירת מילוי שחור לשכבה וגרירת השכבה כך שתשכב מתחת לשכבה עם התמונה הפלואורסצנטית.
6. שמור את התמונה הפלואורסצנטית החדשה, המכילה רק את האות הפלואורסצנטי על רקע שחור, כקובץ .tif חדש.
7. פתח את תמונות הפלורסנט החדשות וצלם תמונות ב- ImageJ.
8. הפוך כל תמונה לתמונה של 32 סיביות על-ידי בחירה באפשרות 'תמונה' > Type >- 32 סיביות.
9. צרו תמונה ממוזגת של שניהם באמצעות בחירה באפשרות 'תמונה' > ' צבע' >'מיזוג ערוצים'. בתיבת הדו-שיח שנפתחת, בחרו בקובץ התצלום של הערוץ האפור ובקובץ הפלואורסצנט שמתחת לערוצים הצבעוניים.
10. בטל את קנה המידה של התמונה הממוזגת על-ידי בחירה באפשרות נתח > קבע קנה מידה > לחץ כדי להסיר קנה מידה.
11. בחרו בכלי "מלבן" ב-ImageJ.
12. ציירו מלבן סביב קטע של המעי הדק. שים לב לרוחב של אזור עניין זה (ROI), כפי שהוא צריך להישאר קבוע בין כל ROIs. הערך הנומינלי אינו חיוני, רק שהוא נשמר עקבי בכל ה-ROIs המצוירים בתמונה זו [מאחר שהמעי הדק משתלט על פני מספר שורות, ROIs בודדים יימשכו מעל כל מקטע של המעי הדק בשורה אחרת (איור 1)]. איור 2 מציג את המיקום של ערך הרוחב בסרגל הכלים ImageJ.
13. שכפל את החזר ההשקעה על-ידי בחירה באפשרות תמונה > שכפל. בחרו רק את הערוץ המתאים לערוץ הצבעוני.
14. השתמשו שוב בכלי מלבן כדי לצייר החזר השקעה על התמונה החדשה.
15. אחזר פרופיל של הפלואורסצנציה על-ידי בחירה באפשרות נתח > פרופיל העלילה. הגרף המתקבל מתווה על ציר y את העוצמה הממוצעת עבור כל פיקסל לאורך ההחזר על ההשקעה. זה נבחר בשלב 5.12 להיות אורך החלק המנותח של המעי הדק
16. פתח את רשימת הערכים והעתק אותם לתוכנת גיליון אלקטרוני.
17. חזור על שלבים 5.12-5.16 עבור כל מקטע של המעי הדק בשורה אחרת בסרגל. המשך להדביק את הערכים באותו קובץ גיליון אלקטרוני באופן מיידי תחת כל קבוצת ערכים קודמת, כך שכל השורות הרציפות בעמודה זו יכילו את ערך העוצמה הממוצע לכל אורך המעי הדק.
18. בתוכנת הגיליון האלקטרוני, הכפל כל ערך עוצמה ממוצעת ברוחב הקבוע של מלבן ההחזר על ההשקעה שנוצר בשלב 5.12. זה יניב את ערך העוצמה האמיתי לאורך המעי הדק בכל נקודה.
    הערה: לבעלי חיים שונים יהיו שינויים קלים באורך המעי הדק. כדי למנוע מהבדלי האורך להשפיע על התוצאות של ניתוח נתונים במורד הזרם, יש לאגד את מחרוזת ערכי העוצמה למספר עקבי של פחים בכל דגימות הניסוי (איור 3, איור 4 ואיור 5 מציגים תוצאות עבור שלושה גדלי סלים).
19. חלק את מספר ערכי העוצמה במספר הפחים הרצויים. המנה המתקבלת S קובעת את מספר ערכי העוצמה הכלולים בכל סל.
20. קבע את הסל שאליו יעבור כל ערך עוצמה גולמית באמצעות נוסחת עיגול. שלב זה ממקם כל ערך עוצמה גולמית בפח. כל ערך עוצמה גולמי מאונדקס באופן כרונולוגי עם המספר השלם N. המנה N/S קובעת את מספר הסל המוקצה לכל ערך גולמי. נוסחת העיגול אמורה לעגל מנה זו למספר שלם ללא מספרים עשרוניים.
21. צור את הערך עבור כל סל באמצעות נוסחת averageif. המטרה היא לממוצע את הערכים הגולמיים שהוקצו לסל מסוים בשלב 5.20. לפיכך, הארגומנטים בנוסחה צריכים להיות: (1) סלים מוקצים שנוצרו בשלב 5.20, (2) מספר סל, (3) ערכי עוצמה גולמית.
    הערה: הניתוח הראשון שאנו יכולים לבצע על הנתונים המאוגדים הוא ניתוח מרכז גיאומטרי, אשר מכמת עד כמה אנו רואים את עוצמת הפלואורסצנט הגבוהה ביותר לאורך המעי הדק (איור 4).
22. נרמל כל ערך עוצמה מעל עוצמת הפלואורסצנט הכוללת. במילים אחרות, חלקו כל ערך עוצמה בסכום כל העוצמות.
23. הכפל כל ערך מנורמל במספר הסל. המכפלה משקפת את המשקל היחסי של כל פח, ותורמת לעוצמת הפלואורסצנט הכוללת.
24. חיבור כל הערכים הנוצרים בשלב 5.23 מניב את מספר הסל במרכז האות הפלואורסצנטי. חלקו במספר הפחים כדי לבטא את המרכז הגיאומטרי כשחלק המעי הדק נע על ידי המרכז הפלואורסצנטי.
    הערה: כדי לשקף את ההתפלגות המרחבית של האות, השלב הבא הוא ליצור את ספקטרום ההספק של מערך נתוני העוצמה המשולבת (איור 5).
25. פתח אשף התמרת פורייה מהירה (FFT) בתוכנת הגיליון האלקטרוני. בחר את הקלט כערכת הנתונים המאוגדת ואת הפלט כערכה ריקה של אותו מספר שורות כמו סלים.
26. חלץ את רכיב הערך האמיתי של ה- FFT.
27. העלה כל ערך אמיתי של ה- FFT לכוח השני. זה מניב מערך נתונים של ספקטרום הספק.
28. בחר את המחצית הראשונה של ערכת הנתונים של ספקטרום העוצמה והזז אותה כך שהיא תהיה מתחת למחצית השנייה. יש לכך השפעה של מרכוז ספקטרום ההספק סביב התדר המרכזי כאשר הוא מתווה בשלב הבא.
29. התווה את ספקטרום העוצמה על ציר y של גרף x-y שבו ערכי ציר ה-x הם הטווח שבין -1 x (מספר הסלים/2) ל-(מספר הסלים/2) -1. במקרה של 1000 סלים, ערכי הציר ינועו בין -500 ל-499.
30. יש להשוות את ספקטרום ההספק עבור כל חיה על בסיס התפשטות פסגות שאינן אפס והגבהים של פסגות אלה שאינן אפס.

תוצאות

אנו מציגים תוצאות מייצגות משלב 3 ואילך. איור 1 מראה את המעיים המושתלים השלמים, עם מדידות פלואורסצנטיות מעליהן. הקיבה (סגולה) מונחת לאורך אותו ציר כמו המעי הדק (כתום), אך אנו מעדיפים להזיז את הצקום (כחול) לצד כדי למנוע חפיפה עם המעי הגס (כתום). כפי שמעידים בלוח השמאלי, זה לא תמיד א...

Discussion

מערכת העיכול, כמו איברים צינוריים אחרים, כגון כלי דם, דורשת חיישנים מכניים ואפקטים כדי לשמור על הומאוסטזיס^26,27,28. עם זאת, מערכת העיכול ייחודית בכך שהתכונות הפיזיקליות של החומרים החוצים אותה אינן קבועות לאורך ארוחות. תכולה תוך-גופית בעלת תכ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
C57BL/6J mice	Jackson Laboratory	664	other mice can be used with this protocol
Dissection tools	n/a	n/a
Excel software	Microsoft	n/a	used for spreadsheet analysis
Fluorescent Green Polyethylene Microspheres 1.00g/cc 75-90um - 10g	Cospheric	UVPMS-BG-1.00 75-90um - 10g	"smaller beads" in the manuscript
Fluorescent Green Polyethylene Microspheres 1.00g/cc 180-212um - 10g	Cospheric	UVPMS-BG-1.00 180-212um - 10g	"larger beads" in the manuscript
Gavage needles	Instech	FTP-18-50-50
ImageJ software	n/a	n/a	used to extract fluorescence profile
Laminated ruler paper (prepared in-house)	n/a	n/a
Methyl cellulose (viscosity: 400 cP)	Sigma	M0262
Photoshop software	Adobe	n/a	used for image processing
Rhodamine B isothiocyanate-Dextran	Sigma	r8881-100mg	"liquid" condition in the manuscript
Xenogen IVIS 200	Perkin Elmer	124262	In vivo imaging system