Luminal Partiküllerin Murine İnce Bağırsak Mekanosenizasyonunun İncelenmesi

Özet

İnce bağırsağın farklı boyutlardaki partikülleri nasıl işlediğini incelemek için, ince bağırsak geçişini belirlemek için yerleşik bir in vivo yöntemi değiştirdik.

Özet

Gastrointestinal (GI) motilitesi normal sindirim ve emilim için kritik öneme sahiptir. Besinleri emen ince bağırsakta, hareketlilik sindirim ve emilimi optimize eder. Bu nedenle, ince bağırsaktaki hareketlilik modellerinden bazıları, luminal içeriklerin karıştırılması için segmentasyon ve itici güçleri için peristalsis içerir. Luminal içeriğin fiziksel özellikleri, ince bağırsak hareketliliğinin kalıplarını modüle eder. GI mekanosensoriyel devrelerinin luminal içerikleri ve altta yatan bağırsak hareketliliğini geçirerek mekanik olarak uyarılması, karmaşık GI motor paternlerini başlatır ve modüle eder. Yine de, bu süreci yönlendiren mekanosensoriyel mekanizmalar tam olarak anlaşılamamıştır. Bu öncelikle ince bağırsağın farklı fiziksel özelliklere sahip materyalleri nasıl işlediğini incelemek için gerekli araçların eksikliğinden kaynaklanmaktadır. İnce bağırsağın farklı boyutlardaki partikülleri nasıl işlediğini incelemek için, ince bağırsak geçişini belirlemek için yerleşik bir in vivo yöntemi değiştirdik. Canlı fareleri floresan sıvı veya küçük floresan boncuklarla besliyoruz. 30 dakika sonra, floresan içeriğinin GI yolunun tamamı boyunca dağılımını görüntülemek için bağırsakları diseke ediyoruz. Geometrik merkezin yüksek çözünürlüklü ölçümlerine ek olarak, farklı malzemelerin ince bağırsak geçişini nasıl etkilediğini belirlemek için değişken boyutlu gruplama ve spektral analiz kullanıyoruz. Yakın zamanda keşfedilen bir "bağırsak dokunuşu" mekanizmasının bu yaklaşımı kullanarak ince bağırsak hareketliliğini nasıl etkilediğini araştırdık.

Giriş

İnsan gastrointestinal (GI) sistemi, kabaca farklı boyutlarda ve fiziksel özelliklerde bir tüp olarak yaklaşık olarak yaklaşık olarak çok ayak uzunluğunda bir organ sistemidir¹. İçerikler uzunluğu boyunca hareket ettikçe, GI yolunun birincil işlevi yaşam için kritik olan maddeleri emmektir. İnce bağırsak özellikle besin emiliminden sorumludur. İnce bağırsağın geçişi, sindirim ve emilim fonksiyonlarına uyacak şekilde sıkı bir şekilde düzenlenir ve bu da çeşitli hareketlilik modellerine neden olur. Bayliss ve Starling, 1899'da "bağırsak yasasını"² tanımladılar ve bugün peristaltik refleks olarak bilinen bağırsaktaki kasılma tahrik programını gösterdiler; gıda bolusuna yakın segment onu ileriye doğru itmek için büzülür ve distal segment onu almak için gevşer. Teorik olarak, bu model tek başına materyali oral olarak taşımak için yeterli olabilir, ancak bir yüzyıldan fazla süren araştırmalar, GI kanalındaki kasılma aktivitesinin daha karmaşık bir resmini çizmiştir. İnsanlarda üç ince bağırsak hareketlilik periyodu tanınır: göç eden motor kompleksi (MMC), açlık dönemi ve postprandiyal dönem³. Aynı modeller farelerde^de bildirilmiştir ^4,5. MMC, çoğu memelide korunan döngüsel bir motor modelidir ^6,7. MMC, fonksiyonel GİS bozukluklarında yararlı bir klinik belirteç görevi gören karakteristik dört fazlı bir paterne sahiptir⁷. Dört faz, oluşum sırasına göre, (I) sessizlik, (II) düzensiz, düşük genlikli kasılmalar, (III) düzenli yüksek genlikli kasılmalar ve (IV) azalan aktivitenin rampa aşağı periyodu^7'dir. MMC, oruç dönemi^3'ün ana motor modelini işaretler. Oruç döneminin MMC'leri, bir sonraki öğüne hazırlanırken ince bağırsağın içeriğini temizler.

Postprandiyal dönemin motor paternleri sindirim ve emici fonksiyonlar için optimize edilmiştir³. Kalorik bileşimden bağımsız olarak, ilk transit ince bağırsak boyunca hızlıdır, içerikler bağırsağın uzunluğu boyunca yayılır ve transit daha sonra^8'i yavaşlatır. Emilim, temas yüzeyi alanını artırarak ve ikamet süresini artırmak için yavaşlatarak optimize edilir. Besinler lümenin içine girdikten sonra, baskın patern yakın (<2 cm arayla) koordine edilmemiş kasılmalardan (segmentleme kasılmaları) oluşur ve ince bağırsağın tüm uzunluğunu kapsayan birkaç üst üste binmiş büyük genlikli kasılmalar (peristaltik kasılmalar)⁹. Segmentleme kasılmaları, intraluminal içeriği yerinde karıştırır. Ara sıra büyük peristaltik kasılmalar, içeriği kolona doğru iter.

MMC'lere bu geçişin zamanlaması, gıda hacmine ve kalorik bileşime bağlıdır¹⁰. Böylece, ince bağırsak, hareketlilik dönemleri arasında ne zaman geçiş yapılacağını düzenlemek için luminal ipuçlarını örnekler. Luminal içeriklerin fiziksel özellikleri 11, luminal hacim ve duvar gerilimi gibi mekanik ipuçları, GI duvarı 12,13,14,15,16'daki mekanoreseptör hücreleri devreye sokar. Gerçekten de, bir yemeğin katı bileşeninin arttırılması, ince bağırsak geçişinde bir artışa yol açar¹⁷. İntraluminal içeriğin sıvı veya katı hali gibi fiziksel özelliklerin, GI duvarı^18'de ürettikleri çeşitli kuvvetler nedeniyle farklı mekanoreseptörleri devreye sokması gerektiğini düşünüyoruz.

İnsanlarda in vivo GI transitini ölçmek için altın standart, farelerde olduğu gibi, mideden çıkarken veya kolon^19,20 boyunca geçerken sintigrafi ile ölçülen radyoaktif izleyicilerin kullanılmasıdır. Memelilerde, ince bağırsak öngörülemeyen şekillerde döngü yaparak, ince bağırsağın in vivo olarak güvenilir bir şekilde görüntülenmesini zorlaştırır, ancak ilerleme kaydedilmektedir²¹. Ayrıca, şu anda ince bağırsağın farklı özelliklere ve boyutlara sahip partikülleri nasıl işlediğini ölçmek için araç eksikliği vardır. Buradaki başlangıç noktası, ince bağırsak transiti^22,23,24 ve^{bariyer fonksiyonu 22} çalışmasını standartlaştıran altın standart bir teknikti. Floresan bir malzeme ile farelerin gavaging edilmesi, GI hareketliliğinin malzemeyi taşımasını beklemek, GI kanalını eksize etmek, mideden kolona kadar birkaç bölüme ayırmak, floresan niceliği için intraluminal içeriği bölümlemek ve homojenize etmekten oluşur. İki iyileştirme yaptık. İlk olarak, ince bağırsağın fiziksel parçacıkları nasıl dağıttığını belirlemek için gavaged içeriğinin makyajını floresan mikroskobik boncuklar içerecek şekilde değiştirdik. İkincisi, mideden kolon ex vivo'ya kadar tüm GI yolunu görüntüleyerek uzamsal çözünürlüğü geliştirdik ve analizimizi hayvanlar arasında standartlaştırmak için değişken boyutlu bağlama kullandık. Bunun, postprandiyal faz sırasında itici ve segmentleme kasılmalarının dengesi hakkında yeni bilgiler ortaya koyduğunu varsayıyoruz.

Protokol

Burada açıklanan tüm yöntemler, Mayo Clinic'in Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.

1. Kurulum

1. 8 ila 10 haftalık fareleri 4 saat boyunca hızlı. Farelerin suya erişimini sağlayın.
   NOT: Burada sunulan tüm deneyler için vahşi tip erkek C57BL / 6J fareleri kullanıyoruz, ancak bunlar herhangi bir suş, cinsiyet ve genotipteki fareler üzerinde gerçekleştirilebilir.
2. 15 mL damıtılmış suyu 4 °C'lik bir buzdolabında 50 mL'lik konik bir tüpte soğutun.
3. Yaklaşık 80-90 ° C'ye kadar manyetik karıştırma çubuğuna sahip bir sıcak plaka kullanarak bir beherde 15 mL damıtılmış su daha ısıtın.
4. Toplam 30 mL (0.15 g) için% 0.5 metilselüloz ölçün.
5. Kümelenmemesi için 15 mL sıcak suya yavaşça metilselüloz ekleyin. Metilselüloz çözeltisi bu işlem sırasında bulanık olacaktır.
6. Çözüldükten sonra, beheri sıcak plakadan çıkarın ve 15 mL soğutulmuş suyu sıcak beherin içine ekleyin.
7. Çözelti temizlenene kadar yaklaşık 15-20 dakika 4 ° C'lik bir buzdolabına koyun.
8. Berrak olduğunda, 5 mL% 0.5 metilselüloz çözeltisi başına 3 mg rodamin izotiyosiyanat (RITC)-dekstran tartın ve birleştirmek için karıştırın. Bu, Temsili Sonuçlar bölümündeki sıvı durumdur.
   1. Alternatif olarak, 25 mg floresan polietilen mikrosferi tartın ve iyi bir şekilde birleşene kadar 200 μL metilselüloz çözeltisi ile karıştırın. Mikrosferlerin kapsamlı bir şekilde dahil edilmesi, gavage öncesi vorteks tarafından sağlanır. Deneyci, karışımdaki asılı mikrosferlerin homojen dağılımını görselleştirmelidir .
   2. RITC-dextran çözeltisi ışığa duyarlı olduğundan, çözeltiyi soğutun. RITC-dextran çözeltisini ve mikroshpere karışımını önceden hazırlayın ve 2 ay içinde kullanın. Kullanmadan önce mikrosfer karışımını yeniden askıya alın.
      NOT: Farklı boyuttaki mikrosferler, farklı malzemelerin gastrointestinal kullanımını incelemek için kullanılır. Temsili Sonuçlar bölümünde, küçük (çap: 75-90 μm) ve daha büyük (çap: 180-212 μm) mikrosferlerin kullanılmasının sonuçlarını gösteriyoruz.

2. İntraluminal içerikli gavage

1. 1 mL'lik bir şırıngaya 18 Ga x 50 mm'lik bir besleme tüpü takarak ve 200 μL RITC çözeltisi veya mikrosfer çözeltisi çekerek gavajı hazırlayın.
2. Tek elle kısıtlama tekniğini kullanarak oruç tutan hayvanı manuel olarak kısıtlayın²⁵. Kurumun uygun murin kısıtlama teknikleri hakkındaki bilgilerine bakın.
3. Besleme tüpünü, mideye girene kadar farenin ağzından ve yemek borusundan yavaşça yerleştirin.
   NOT: Gavage adımı, başarılı bir deney için kritik öneme sahiptir. Tüpü her fareye kabaca aynı mesafeye sürekli olarak yerleştirebilen deneyimli eller gerektirir. Bu adımın, protokolü uygulayan deneyciler tarafından standartlaştırılması gerekiyor. Aynı deneyci, birbirleriyle karşılaştırılacak tüm fare kohortlarını gavage etmelidir.
4. Şırınga içeriğini yavaşça mideye atın ve tüpü fareden dikkatlice çıkarın.
5. Gavage'ı takiben, fareyi kafese geri getirin.
6. Gavage tüpünü atın.
7. İstenilen sayıda hayvan için işlemi gerektiği gibi tekrarlayın.

3. Bağırsak diseksiyonu

1. Diseksiyonlara başlamadan önce, sıcaklığa gelmesine izin vermek için in vivo görüntüleme cihazını açın.
2. Gavage'den 30 dakika sonra fareyi feda edin. Fareyi feda etmek için karbondioksit inhalasyonunu kullanın, ardından başarılı ötenazi sağlamak için servikal çıkık izleyin.
3. Başarılı ötenaziyi onayladıktan sonra, fareyi diseksiyon aşamasında sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve karnına erişebilmek için dört uzantısını sahneye sabitleyin. Karın kıllarını ıslatmak için karın yüzeyini% 70 etanol ile ıslatın.
4. Cildi çekmek için mikro diseksiyon forseps kullanın ve anüsün 1 cm yukarısında enine bir kesi yapmak için keskin cerrahi makas elde edin. İntraperitoneal boşluğu açığa çıkarmak için, insizyonu göğüs kafesine kadar karın boyunca dikey olarak devam ettirin.
5. Distal kolonu açığa çıkarmak için çekumu mikro diseksiyon forseps ile yavaşça sola doğru hareket ettirin.
6. Distal kolonu rektuma sadece proksimal mikro diseksiyon makası ile kesin.
7. Kolon, çekum ve ince bağırsağı yavaşça ters yönde çekerek yavaşça çözün.
   NOT: Disseke edilmiş bağırsakların sürekli bir segmentte tutulması, araştırmacı için en fazla kolaylığı yaratacaktır. Segment boyunca yırtılmalar ve yırtılmalar, sonraki adımların daha zor olmasına neden olacaktır.
8. Mideye proksimal kesmek için mikro diseksiyon makası kullanın.
9. Disseke edilmiş bağırsakları ölçüm sayfasına aktarmak için forseps kullanın (Şekil 1). Mideyi 0 mm'ye yerleştirin ve bağırsakları cetvel boyunca 200 mm'ye kadar düzenleyin. 200 mm'de kesmek için mikro diseksiyon makası kullanın. Bağırsakların oryantasyonunun karışmadığından emin olurken, bağırsakları cetveller boyunca 0 mm'den 200 mm'ye hizalama işlemini tekrarlayın.
   1. Cetvellere hizalanırken bağırsakları germekten kaçının.
10. Doku cetvel üzerine yerleştirildikten sonra, çekumu dokuya paralel olacak ancak onunla doğrudan temas etmeyecek şekilde düzenleyin (o bölgede herhangi bir floresan bulunursa, çekum ve bağırsaklar arasında net bir fark ayrımına ihtiyaç duyulacaktır).
11. Ölçüm sayfasını disseke edilmiş doku ile karanlık bir alana yerleştirin, böylece floresan görüntü zamanı gelene kadar korunabilir.

4. Ex vivo görüntüleme

1. İn vivo görüntüleme yazılımını açın ve giriş yapın.
2. Görüntü yakalamaya hazır olması için görüntüleme aygıtını başlatın.
3. 'Uyarılma' ve 'Emisyon' alanlarını boncuk veya RITC gavajı için kullanılan karşılık gelen renge ayarlayın. Kırmızı (sıvı): uyarma 535 nm / emisyon 600 nm. Yeşil (mikrosferler): uyarma 465 nm / emisyon 520 nm.
4. Pozlamayı "Otomatik" olarak ayarlayın.
5. Görüş alanını seçin.
6. Ölçüm sayfasını cihaza yerleştirmeden önce, taşıma sırasında bağırsakların kaymadığından emin olun.
7. Ölçüm sayfasını görüş alanı içindeki cihaza yerleştirin.
8. Cihazın kapısını güvenli bir şekilde kapatın ve görüş alanını fotoğraflamak için Anlık Görüntü'yü seçin.
9. Toplanan resimleri analiz için bir flash sürücüye kaydedin. Floresan ve fotoğraf görüntülerinin ayrı ayrı çekimlerini kaydedin. Fotoğrafın ve floresanın bir bindirmesi, floresan malzemenin GI kanalındaki yerini gösterir (Şekil 1).
   NOT: Dosyaları aşağı akış işleme için Etiket Resim Dosyası (.tif) biçiminde kaydetmenizi öneririz.

5. Analiz

1. Floresan ve fotoğraf görüntü dosyalarını bir resim düzenleme yazılımında açın.
2. Her iki görüntünün piksel boyutunu da aynı boyutlara sahip olacak şekilde ayarlayın (kuralımız her iki görüntüyü de 1280 piksele 850 piksel [yükseklik x genişlik]) ayarlamaktı).
3. Fotoğraf dosyasını kapatın. Aşağıdaki adımlar yalnızca floresan görüntüyü içerir.
4. Arka planı kaldırmak ve şeffaf hale getirmek için bir silgi aracı kullanın. Kalan arka planın yamalarını kaldırmak için bir silgi gerekebilir.
5. Yeni bir katman oluşturun. Floresan sinyalinin tamamen siyah bir arka planını yapın. Bu, katmana siyah bir dolgu seçerek ve katmanı floresan görüntüyle katmanın altına uzanacak şekilde sürükleyerek elde edilebilir.
6. Siyah bir arka plan üzerinde yalnızca floresan sinyalini içeren yeni floresan görüntüsünü yeni bir .tif dosyası olarak kaydedin.
7. Yeni floresan ve fotoğraf görüntülerini ImageJ'de açın.
8. Görüntü > Türü > 32 bit'i seçerek her görüntüyü 32 bit görüntüye dönüştürün.
9. Görüntü > Renk > Kanalları Birleştir'i seçerek her ikisinin de birleştirilmiş görüntüsünü oluşturun. Açılan iletişim kutusunda, gri kanal için fotoğraf dosyasını ve herhangi bir renkli kanalın altındaki floresan dosyayı seçin.
10. Ölçeği Analiz Et > Ayarla > Ölçeği Kaldırmak için Tıklat'ı seçerek birleştirilmiş görüntünün ölçeğini kapatın.
11. ImageJ'de "Dikdörtgen" aracını seçin.
12. İnce bağırsağın bir bölümünün etrafına bir dikdörtgen çizin. Tüm YG'ler arasında sabit kalması gerektiğinden, bu ilgi bölgesinin (YG) genişliğine çok dikkat edin. Nominal değer gerekli değildir, sadece bu görüntüde çizilen tüm YG'ler arasında tutarlı tutulur [ince bağırsak birkaç sırayı devraldığından, ince bağırsağın her bir bölümüne farklı bir satırda ayrı YG'ler çizilecektir (Şekil 1)]. Şekil 2 , ImageJ araç çubuğundaki genişlik değerinin konumunu gösterir.
13. Görüntü > Çoğalt'ı seçerek YG'yi çoğaltın. Yalnızca renkli kanala karşılık gelen kanalı seçin.
14. Tamamen yeni görüntünün üzerine bir yatırım getirisi çizmek için dikdörtgen aracını tekrar kullanın.
15. Analiz > Grafik Profilini seçerek floresan profilini alın. Elde edilen grafik, y ekseninde, YG'nin uzunluğu boyunca her piksel için ortalama yoğunluğu çizer. Bu, 5.12. adımda, ince bağırsağın analiz edilen bölümünün uzunluğu olarak seçildi.
16. Değerler listesini açın ve bunları bir e-tablo yazılımına kopyalayın.
17. İnce bağırsağın her bölümü için 5.12-5.16 arasındaki adımları farklı bir cetvel satırında yineleyin. Değerleri, önceki her bir değer kümesinin hemen altına aynı elektronik tablo dosyasına yapıştırmaya devam edin, böylece bu sütundaki tüm sürekli satırlar ince bağırsağın tüm uzunluğu için ortalama yoğunluk değerini içerir.
18. Elektronik tablo yazılımında, her ortalama yoğunluk değerini, adım 5.12'de oluşturulan yatırım getirisi dikdörtgeninin sabit genişliğiyle çarpın. Bu, her noktada ince bağırsak boyunca gerçek yoğunluk değerini verecektir.
    NOT: Farklı hayvanların ince bağırsak uzunluğu üzerinde hafif varyasyonları olacaktır. Uzunluk farklılıklarının aşağı akış veri analizinin sonucunu etkilemesini önlemek için, yoğunluk değerleri dizesinin tüm deneysel örneklerde tutarlı sayıda bölmeye bağlanması gerekir (Şekil 3, Şekil 4 ve Şekil 5, üç bölme boyutu için sonuçları görüntüler).
19. Yoğunluk değerlerinin sayısını istenen kutu sayısına bölün. Elde edilen S bölümü, her bir bölmeye dahil edilen yoğunluk değerlerinin sayısını belirler.
20. Bir yuvarlama formülü kullanarak her ham yoğunluk değerinin gideceği bölmeyi belirleyin. Bu adım, her ham yoğunluk değerini bir kutuya yerleştirir. Her ham yoğunluk değeri kronolojik olarak N tamsayısı ile indekslenir. N/S bölümü, her ham değere atanan bin sayısını belirler. Yuvarlama formülü bu bölümü ondalık olmayan bir tam sayıya yuvarlamalıdır.
21. Bir averageif formülü kullanarak her bölme için değer oluşturun. Amaç, Adım 5.20'de belirli bir bölmeye atanan ham değerlerin ortalamasını almaktır. Bu nedenle, formüldeki bağımsız değişkenler şöyle olmalıdır: (1) Adım 5.20'de oluşturulan atanmış kutular, (2) bin sayısı, (3) ham yoğunluk değerleri.
    NOT: Bağlanmış veriler üzerinde yapabileceğimiz ilk analiz, ince bağırsak boyunca en yüksek floresan yoğunluğunu ne kadar gözlemlediğimizi ölçen geometrik bir merkez analizidir (Şekil 4).
22. Her yoğunluk değerini toplam floresan yoğunluğu üzerinden normalleştirin. Başka bir deyişle, her yoğunluk değerini tüm yoğunlukların toplamına bölün.
23. Normalleştirilmiş her değeri bin sayısıyla çarpın. Ürün, her bir kutunun nispi ağırlığını yansıtır ve toplam floresan yoğunluğuna katkıda bulunur.
24. Adım 5.23'te üretilen tüm değerlerin eklenmesi, floresan sinyalinin merkezindeki kutu numarasını verir. Geometrik merkezi, floresan merkezi tarafından hareket eden ince bağırsak fraksiyonu olarak ifade etmek için kutu sayısına bölün.
    NOT: Sinyalin uzamsal dağılımını yansıtmak için bir sonraki adım, bağlanmış yoğunluk veri kümesinin güç spektrumunu oluşturmaktır (Şekil 5).
25. Elektronik tablo yazılımında bir Hızlı Fourier Dönüşümü (FFT) sihirbazı açın. Girişi ciltlenmiş veri kümesi olarak ve çıkışı bölmelerle aynı sayıda satırdan oluşan boş bir küme olarak seçin.
26. FFT'nin gerçek değer bileşenini ayıklayın.
27. FFT'nin her gerçek değerini ikinci güce yükseltin. Bu, bir veri kümesi güç spektrumu verir.
28. Güç spektrumu veri kümesinin ilk yarısını seçin ve ikinci yarının altında kalacak şekilde taşıyın. Bu, bir sonraki adımda çizildiğinde güç spektrumlarını merkez frekansın etrafında merkezleme etkisine sahiptir.
29. Güç spektrumlarını, x ekseni değerlerinin -1 x (kutu sayısı/2) ile (kutu sayısı/2) -1 arasında olduğu bir x-y grafiğinin y ekseni üzerinde çizin. 1000 bin durumunda, eksen değerleri -500 ile 499 arasında değişir.
30. Her hayvan için güç spektrumları, sıfır olmayan zirvelerin yayılmasına ve bu sıfır olmayan zirvelerin yüksekliklerine göre karşılaştırılmalıdır.

Sonuçlar

Adım 3'ten itibaren temsili sonuçlar gösteriyoruz. Şekil 1 , floresan ölçümleri üst üste yerleştirilmiş sağlam ekşi bağırsakları göstermektedir. Mide (mor) ince bağırsak (turuncu) ile aynı eksen boyunca serilir, ancak kalın bağırsakla (turuncu) örtüşmeyi önlemek için çekumu (mavi) yana doğru hareket ettirmeyi tercih ederiz. Sol panelde kanıtlandığı gibi, organ büyüklüğü nedeniyle bu her zaman mümkün değildir. Sürekli segmentlerin kapsamını en üst...

Tartışmalar

GI yolu, kan damarları gibi diğer boru şeklindeki organlar gibi, homeostazı korumak için mekanik sensörler ve efektörler gerektirir^26,27,28. Bununla birlikte, GI yolu, onu geçen malzemelerin fiziksel özelliklerinin öğünler arasında sabit olmaması bakımından benzersizdir. Çeşitli fiziksel özelliklerin (katı, sıvı ve gaz) intraluminal içeriği bağırsaktan geçerek GI mekanoreseptörlerine farklı mekanik g...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
C57BL/6J mice	Jackson Laboratory	664	other mice can be used with this protocol
Dissection tools	n/a	n/a
Excel software	Microsoft	n/a	used for spreadsheet analysis
Fluorescent Green Polyethylene Microspheres 1.00g/cc 75-90um - 10g	Cospheric	UVPMS-BG-1.00 75-90um - 10g	"smaller beads" in the manuscript
Fluorescent Green Polyethylene Microspheres 1.00g/cc 180-212um - 10g	Cospheric	UVPMS-BG-1.00 180-212um - 10g	"larger beads" in the manuscript
Gavage needles	Instech	FTP-18-50-50
ImageJ software	n/a	n/a	used to extract fluorescence profile
Laminated ruler paper (prepared in-house)	n/a	n/a
Methyl cellulose (viscosity: 400 cP)	Sigma	M0262
Photoshop software	Adobe	n/a	used for image processing
Rhodamine B isothiocyanate-Dextran	Sigma	r8881-100mg	"liquid" condition in the manuscript
Xenogen IVIS 200	Perkin Elmer	124262	In vivo imaging system