A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
تمثل محللات الصفائح الدموية أداة ناشئة لعلاج أمراض سطح العين. هنا ، نقترح طريقة لإعداد وتوزيع وتخزين وتوصيف محللات الصفائح الدموية التي تم جمعها من المتبرعين بالصفائح الدموية.
يتم علاج أمراض سطح العين المختلفة بقطرات العين المشتقة من الدم. تم إدخال استخدامها في الممارسة السريرية بسبب محتواها من المستقلب وعامل النمو ، مما يعزز تجديد سطح العين. يمكن تحضير قطرات العين القائمة على الدم من مصادر مختلفة (أي التبرع بالدم الكامل أو فصادة الصفائح الدموية) ، وكذلك مع بروتوكولات مختلفة (على سبيل المثال ، التخفيفات المختلفة ودورات التجميد / الذوبان). هذا التباين يعوق توحيد البروتوكولات السريرية ، وبالتالي تقييم فعاليتها السريرية. وقد يسهم تفصيل الإجراءات المنهجية وتبادلها في تحديد مبادئ توجيهية مشتركة. على مدى السنوات الماضية ، تم نشر المنتجات الخيفية كبديل للعلاجات الذاتية لأنها تضمن معايير فعالية أعلى. من بينها ، يتم تحضير قطرات العين الغنية بالبلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP-L) بإجراءات تصنيع بسيطة. في وحدة طب نقل الدم في AUSL-IRCCS di Reggio Emilia ، إيطاليا ، يتم الحصول على PRP-L من التبرع بفصادة الصفائح الدموية. يتم تخفيف هذا المنتج في البداية إلى 0.3 × 10 9 صفائح دموية / مل (بدءا من متوسط تركيز 1 × 10 9 صفائح دموية / مل) في0.9٪ كلوريد الصوديوم. يتم تجميد / إذابة الصفائح الدموية المخففة ، وبالتالي يتم طردها بالطرد المركزي لإزالة الحطام. ينقسم الحجم النهائي إلى 1.45 مل من القسمة ويخزن عند -80 درجة مئوية. قبل صرفها للمرضى ، يتم اختبار قطرات العين للعقم. يمكن للمرضى تخزين محللات الصفائح الدموية في -15 درجة مئوية لمدة تصل إلى 1 شهر. يتم تقييم تكوين عامل النمو أيضا من القسمة المختارة عشوائيا ، ويتم الإبلاغ عن القيم المتوسطة هنا.
تستخدم المنتجات المشتقة من الدم على نطاق واسع في العناية بالجروح1 ، وجراحة الوجه والفكين والعظام ، ولعلاج أمراض سطح العين المختلفة2 مثل مرض جفاف العين (DED) 3. في DED ، يضعف توازن الفيلم المسيل للدموع نتيجة للأداء غير الطبيعي للعوامل المختلفة المشاركة في إنتاج المسيل للدموع وسلامة سطح العين 4,5.
تتميز DED بعدم التجانس في الأسباب والشدة6،7،8 وقد تكون نتيجة لعوامل مختلفة مثل الشيخوخة أو الجنس9 أو العدسات اللاصقة أو الأدوية الموضعية أو الجهازية 10 أو الحالات الموجودة مسبقا مثل متلازمة سجوجرن10. على الرغم من وجود أعراض خفيفة ، تؤثر دائرة التنمية الاقتصادية على ملايين الأشخاص في جميع أنحاء العالم ، مما يؤثر على نوعية حياتهم والنظام الصحي أيضا6.
تم الإبلاغ عن العديد من العلاجات لهذا المرض ، ولكن لا يوجد حتى الآن توافق في الآراء حول الحل الأكثر فعالية12. حتى الآن ، الدموع الاصطناعية هي الخط الأول من العلاج الذي يهدف إلى استعادة التركيب المائي للفيلم المسيل للدموع ، وإن كانت هذه البدائل لا تحتوي على المواد المذابة النشطة بيولوجيا الرئيسية للدموع الطبيعية 6,11. تعتبر المنتجات القائمة على الصفائح الدموية بديلا صالحا12,13 للدموع الاصطناعية ، على الرغم من أن فعاليتها السريرية وتوصيات الاستخدام وطرق التحضير لا تزال موضع نقاش3.
تشترك المنتجات القائمة على الدم مع الدموع في تركيبة مماثلة من حيث المستقلبات14 والبروتينات والدهون والفيتامينات والأيونات وعوامل النمو (GFs) والمركبات المضادة للأكسدة 11 والأسمولية (300 mOsm / L)11. من خلال النشاط التآزري لمكوناتها ، فإنها تعزز تجديد ظهارة القرنية ، وتمنع إطلاق السيتوكينات الالتهابية ، وتزيد من عدد الخلايا الكأسية والتعبير عن الميوسين في الملتحمة 2,3.
حتى الآن ، تم توثيق عدم التجانس في المنتجات القائمة على الدم العينية في الأدبيات. يمكن تصنيف هذه المنتجات وفقا لأصل المتبرعين بالدم ، أي ذاتي أو خيفي ، وكذلك مصدر الدم ، أي الدم المحيطي أو دم الحبل السري أو المصل أو الصفائح الدموية.
على الرغم من أن المنتجات الذاتية كانت الأكثر انتشارا3 ، إلا أن المنتجات الخيفية أصبحت الآن الخيار المفضل ، لأنها تضمن معايير فعالية وسلامة أعلى 15 ، إلى جانب انخفاض كبير في التكاليف16,17. أثبتت الدراسات السابقة ، في الواقع ، أن المنتجات القائمة على الدم التي تم الحصول عليها من المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية و / أو الجهازية قد تظهر جودة ووظائف متغيرة6،16،17. على الرغم من حقيقة أن قطرات العين القائمة على المصل هي الأكثر انتشارا ، إلا أن المنتجات القائمة على الصفائح الدموية أصبحت مؤخرا مؤكدة كبديل صالح ، حيث يمكن تحضيرها بسهولة مع الحفاظ على مستويات كبيرة من الفعالية 3,11. يمكن تقسيم المنتجات القائمة على الصفائح الدموية المتاحة حاليا إلى بلازما غنية بالصفائح الدموية (PRP) ، ومحللة بلازما غنية بالصفائح الدموية (PRP-L) ، وبلازما غنية بعوامل النمو (PRGF)3.
من بينها ، يتمتع PRP-L بميزة كونه منتجا مجمدا طويل العمر. يمكن تحضير PRP-L من الفصادة أو المعاطف أو حتى من الصفائح الدموية منتهية الصلاحية (PLTs)18,19 ، مما يقلل من هدرها. يمكن تخزين القسمة لعدة أشهر في مراكز نقل الدم عند -80 درجة مئوية أو حتى في منازل المرضى عند -15 درجة مئوية لفترات أقصر.
PRP-L غني للغاية في GFs ، والتي ثبت أنها تحفز تجديد سطح العين12،20،21. ومع ذلك ، لا يوجد سوى عدد قليل من الدراسات السريرية المبلغ عنها في هذا المجال ، وكلها تستخدم مصادر ذاتية 3,22. لا يزال PRP-L بحاجة إلى مزيد من التحقق والتوصيف قبل أن يتم استخدامه بشكل روتيني لعلاج أمراض سطح العين ، حيث لا توجد إرشادات موحدة لإعداده وتوزيعه وتخزينه3.
هنا ، يتم مشاركة بروتوكول مفصل لإنتاج PRP-L المستخدم في وحدة طب نقل الدم في AUSL-IRCCS di Reggio Emilia ، إيطاليا ، والاستغناء عن المرضى الذين يعانون من DED. نهدف إلى مساعدة المجتمع العلمي على تطوير طرق قياسية للتحضير ، والتي قد تزيد من التجانس والاتساق في الدراسات والأساليب السريرية في جميع أنحاء العالم.
تم جمع PRP-L المستخدم للتقييم الكمي لعوامل النمو ضمن دراسة أوسع حول توصيف منتجات PRP لأغراض التجديد ، والتي أجريت في AUSL-IRCCS di Reggio Emilia ووافقت عليها لجنة أخلاقيات المنطقة Vasta Emilia Nord في 10 يناير 2019 (رقم البروتوكول 2019/0003319). أعطى المانحون موافقتهم المستنيرة وفقا لإعلان هلسنكي. لم تكن الموافقة الأخلاقية ضرورية لجمع البيانات المجمعة والمجهولة لاستبيان مؤشر أمراض سطح العين (OSDI) ، والذي يستخدمه الأطباء بشكل روتيني لمراقبة أعراض متلازمة العين الجافة. يوضح الشكل 1 أ مخططا للبروتوكول المتبع ، بينما توضح الصور في الشكل 1 ب الخطوات الرئيسية للإجراء.
1. مجموعة البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP)
2. إعداد محللة البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP-L)
3. الاستغناء عن PRP-L
يكمن الأساس المنطقي لاستخدام قطرات العين المشتقة من المصل (وهو المنتج القائم على الدم الأكثر استخداما لعلاج أمراض سطح العين) في محتواها من GFs ، والتي يتم اشتقاقها بالكامل تقريبا من الصفائح الدموية المتداولة. يحتوي PRP على عدد أكبر بكثير من الصفائح الدموية (وبالتالي ، من GFs المشتقة من الصفائح...
في السنوات الأخيرة ، زاد الاستخدام السريري للمنتجات القائمة على الصفائح الدموية لأمراض سطح العين ، ولكن انتشارها يعوقه الافتقار إلى المتانة العلمية. ويعزى ذلك أساسا إلى عدم التجانس الواسع في مصادر المانحين وبروتوكولات الإعداد، التي غالبا ما لا يتم الكشف عنها بالكامل أو لا تصمم خصيصا للغ...
يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.
يود المؤلفون أن يشكروا "Casa del Dono di Reggio Emilia" على توفير مركزات الصفائح الدموية المشتقة من المانحين.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Equipments | |||
CompoSeal Mobilea II | Fresenius Kabi, Germany | bag sealer | |
HeraSafe hood | Heraeus Instruments, Germany | Class II biohazard hood | |
MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System | Haemonetics, Italy | automated plasma and multicomponent collection equipment for donating platelet, red cell, plasma, or combination blood components | |
Platelet shaker, PF396i | Helmer, USA | Platelet shaker | |
Raycell X-ray Blood Irradiator | MDS Nordion, Canada | X-ray Blood Irradiator | |
ROTIXA 50RS | Hettich Zentrifugen, Germany | High speed entrifuge | |
Sysmex XS-1000i | Sysmex Europe GMBH, Germany | haemocytometer for platelet count | |
Warm bath, WB-M15 | Falc Instruments, Italy | Warm bath | |
Materials | |||
ACD-A anticoagulant solution A | Fenwal Inc., USA | DIN 00788139 | anticoagulant solution for platelet apheresis (1000 ml) |
BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials | BD Biosciences, USA | BD 442020 | Sterility assay |
BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials | BD Biosciences, USA | 442020 | At least 2 vials for sterility assay |
BD Luer Lok Syringe | BD Plastipack, USA | 300865 | At least 4 sterile syringes (50 ml) |
Bio-Plex Human Cancer Panel 1 | BioRad Laboratories, USA | 171AC500M | Standard panel for PDGF isoforms assessment |
Bio-Plex Human Cancer Panel 2 | BioRad Laboratories, USA | 171AC600M | Standard panel for EGF assessment |
Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader | BioRad Laboratories, USA | Magpix | This instrument allows multiple immunoassays using functionalized magnetic beads. |
Bio-Plex Pro TGF-b Assay | BioRad Laboratories, USA | 10024984 | Set and standards for TGFb isoforms assessment |
BioRet | ARIES s.r.l., Italy | A2DH0020 | At least 4 piercing spike for blood bags |
Blood collection tube | BD Vacutainer, USA | 367835 | 1 tube, necessary to perform platelet counts |
Eye drops kit. COL Medical Device for the application and preservation of eye drops from haemocomponents | Biomed Device s.r.l., Italy | COLC50 | Eye drops kit. At least 2 kits for each PRP unit collected |
Human Cancer PDGF-AB/BB Set 1x96well | BioRad Laboratories, USA | 171BC511 | Set for PDGF isoforms assessment |
Human Cancer2 EGF Set 1x96well | BioRad Laboratories, USA | 171BC603M | Set for EGF assessment |
NaCl 0.9% sterile solution | Baxter S.p.A., Italy | B05BB01 | 1000 ml |
OSDI Questionnaire | Allergan Inc., USA | OSDI | Ocular Surface Disease Index Questionnaire |
Piercing spike | BioRet ARIES s.r.l., Italy | BS051004 | Spike |
Platelet Additive Solution A+ T-PAS+ | TERUMO BCT Inc., Italy | 40842 | preservative solution for platelet concentrates (1000 ml) |
Software Excel | Microsoft, USA | Excel | Data analysis software |
Teruflex Transfer bag 1000 ml | TERUMO BCT Inc., Italy | BB*T100BM | 1 for PRP dilution |
Teruflex Transfer bag 300 ml | TERUMO BCT Inc., Italy | BB*030CM | At least 6 for each PRP unit collected |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved