تعقيم إشعاع جاما بجرعة منخفضة لترقيع القصبة الهوائية منزوع الخلايا

Summary

الحصول على التعقيم ضروري لزراعة أنسجة القصبة الهوائية. هنا ، نقدم بروتوكول تعقيم باستخدام جرعة منخفضة من أشعة جاما التي تتحملها الأعضاء بالكامل.

Abstract

أحد الجوانب الرئيسية في ضمان تطور عملية الزرع بشكل صحيح هو عقم الوسط. يتضمن زرع القصبة الهوائية منزوع الخلايا زرع عضو كان في الأصل على اتصال بالبيئة ، وبالتالي لم يكن عقيما منذ البداية. في حين أن بروتوكول إزالة الخلايا (من خلال عرض المنظفات [2٪ كبريتات دوديسيل الصوديوم] ، والتحريك المستمر ، والصدمات التناضحية) يتم إجراؤه بما يتماشى مع التدابير المعقمة ، فإنه لا يوفر التعقيم. لذلك ، فإن أحد التحديات الرئيسية هو ضمان العقم قبل زرع الجسم الحي . على الرغم من وجود بروتوكولات تعقيم بأشعة غاما للمواد غير العضوية ، لا توجد مثل هذه التدابير للمواد العضوية. بالإضافة إلى ذلك ، لا يمكن تطبيق البروتوكولات المعمول بها للمواد غير العضوية على المواد العضوية ، لأن جرعة الإشعاع المحددة (25 كيلو جراي) ستدمر الغرسة تماما. تدرس هذه الورقة تأثير جرعة الإشعاع المتصاعدة في القصبة الهوائية للأرانب منزوعة الخلايا. حافظنا على نطاق الجرعة (kGy) واختبرنا الجرعات المتصاعدة حتى العثور على الحد الأدنى من الجرعة التي يتم عندها التعقيم. بعد تحديد الجرعة ، درسنا آثارها على العضو ، نسيجيا وميكانيكيا حيويا. قررنا أنه في حين أن 0.5 كيلو جراي لم تحقق العقم ، فإن جرعات كل من 1 كيلو جراي و 2 كيلو جراي ، مع 1 كيلو جراي ، وبالتالي ، فهي الحد الأدنى للجرعة اللازمة لتحقيق التعقيم. أظهرت الدراسات المجهرية عدم وجود تغييرات ذات صلة مقارنة بالأعضاء غير المعقمة. لم يتم تغيير الخصائص الميكانيكية الحيوية المحورية على الإطلاق ، ولم يلاحظ سوى انخفاض طفيف في القوة لكل وحدة طول يمكن للعضو تحملها شعاعيا. لذلك يمكننا أن نستنتج أن 1 kGy يحقق التعقيم الكامل للقصبة الهوائية للأرانب decellarized مع الحد الأدنى من الآثار ، إن وجدت ، على العضو.

Introduction

تعقيم الغرسة هو شرط أساسي لصلاحيتها. في الواقع ، الأطراف الاصطناعية التي أثبتت نجاحها هي تلك المزروعة في المناطق المعقمة (الأوعية الدموية والقلب والعظام وما إلى ذلك) ¹. القصبة الهوائية لها سطحان: سطح ملامس للبيئة الخارجية ، وبالتالي فهو غير معقم ، وسطح باتجاه المنصف ، وهو معقم. لذلك ، من لحظة استخراج القصبة الهوائية ، فهي ليست عضوا معقما. على الرغم من أن عملية إزالة الخلايا اللاحقة تتم في ظروف معقمة قصوى ، إلا أنها ليست خطوة تعقيم². ينطوي زرع المواد الغريبة في حد ذاته على خطر الإصابة بالعدوى بسبب البيئة المكروية البكتيرية التي تنتجها³وخطر يصل إلى 0.014٪ لانتقال المرض من المتبرع إلى المتلقي ، حتى ل

Protocol

تم الالتزام بالتوجيه الأوروبي 20170/63 / EU لرعاية واستخدام المختبر وتمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات بجامعة فالنسيا (القانون 86/609 / EEC و 214/1997 والقانون 2018 / VSC / PEA / 0122 Type 2 لحكومة فالنسيا ، إسبانيا).

1. إزالة الخلايا من القصبة الهوائية

ملاحظة: تم الإبلاغ عن طريقة إزالة الخلايا في مكان آخر²⁰.

1. القتل الرحيم ذكر الأرانب البيضاء النيوزيلندية البالغة (Oryctolagus cuniculus) التي تزن 3.5-4.1 كجم مع 133 ملغم / كغم من الصوديوم البنتوباربيتال ، باستخدام حقن 200 ملغ / مل من خلال الوريد المحيطي للأذن.
2. مع ضمان الظروف

النتائج

إزالة الخلوية
يظهر تلطيخ DAPI عدم وجود الحمض النووي ، ولم يتم الكشف عن قيم الحمض النووي أعلى من 50 نانوغرام في أي من القصبة الهوائية عن طريق الرحلان الكهربائي ، مع كون جميع الشظايا أصغر من 200 bp²⁰.

الثقافة الميكروبية
أظهرت قطعتان من القطع الثمان?...

Discussion

هناك العديد من استراتيجيات التعقيم الموجودة. CO₂فوق الحرج يخترق الأنسجة بالكامل ، ويحمض الوسط ويفكك طبقة الفوسفوليبيد الخلوية المزدوجة مع التخلص البسيط عن طريق إزالة الضغط من الغرسة⁸،^14،25. كما تم استخدام الأشعة فوق البنفسجية ، وتم ن?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
6-0 nylon monofilament suture	Monosoft. Covidien; Mansfield, MA, USA	SN-5698G
Amphotericin B 5%	Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA USA	15290018
Bioanalyzer	Agilent, Santa Clara, CA, USA	G2939BA
Buprenorphine	Buprex. Reckitt Benckiser Healthcare; Hull, Reino Unido	N02AE01
Compression desktop UTM	Microtest, Madrid, Spain	EM1/10/FR
Cryostate	Leyca CM3059, Leyca Biosystems, Wetzlar, Alemania	CM3059
DAPI (4',6-diamino-2-phenylindole)	DAPI. Sigma-Aldrich, Missouri, USA	D9542
Dimethyl sulfoxide (DMSO)	Sigma-Aldrich; MO, USA	D2650
DMEM	Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA, USA	11965084
DNA extraction kit	DNeasy extraction kit Quiagen, Hilden, Germany	4368814
Enrofloxacin, 2.5%	Boehringer Ingelheim, Ingelheim am Rhein, Germany	0035-0002
Fetal bovine serum (FBS)	GE Healthcare Hyclone; Madrid, Spain	SH20898.03IR
Fluorescence microscope	Leyca DM2500 (Leica, Wetzlar, Germany)	DM2500??
Freezing Container	Mr Frosty. Thermo Fisher; Madrid, Spain	5100-0001
Isofluorane	Isoflo; Proyma Ganadera; Ciudad Real, Spain	8.43603E+12
Ketamin	Imalgene. Merial; Toulouse, Francia	BOE127823
Linear accelerator	"True Beam". Varian, Palo Alto, California, USA	H191001
Magnetic stirrer	Orbital Shaker PSU-10i. Biosan; Riga, Letonia	BS-010144-AAN
Meloxicam 5 mg/ml	Boehringer Ingelheim, Ingelheim am Rhein, Germany	6283-MV
OCT (Optimal Cutting Temperature Compound)	Fischer Scientific, Madrid, Spain	12678646
Penicillin-streptomycin 5%	Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA USA	15140122
Pentobarbital sodium	Dolethal. Vetoquinol; Madrid, España	3.60587E+12
Phosphate buffered saline (PBS)	Sigma-Aldrich; MO, USA	P2272
Propofol	Propofol Lipuro. B. Braun Melsungen AG; Melsungen, Alemania	G 151030
Proteinase K	Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, Massachussetts, USA	S3020
PVC hollow tubes	Cristallo Extra; FITT, Sandrigo, Italy	hhdddyyZ
PVC stent	ArgyleTM Medtronic; Istanbul, Turkey	019 5305 1
R software, Version 3.5.3 R Core	R Foundation for Statistical Computing	R 3.5.3
Sodium dodecyl sulfate (SDS)	Sigma-Aldrich; MO, USA	8,17,034
Spectrophotometer	Nanodrop, Life Technologies; Isogen Life Science. Utrech, Netherlands	ND-ONEC-W
Spreadsheet	Microsoft Excel for Mac, Version 16.23, Redmond, WA, USA	2864993241
Traction Universal Testing Machine	Testing Machines, Veenendaal, Netherlands	84-01
UTM Software	TestWorks 4, MTS Systems Corporation, Eden Prairie, MN, USA	100-093-627 F
VECTASHIELD Mounting Medium	Vector Labs, Burlingame; CA; USA	H-1000-10
Xylacine	Xilagesic. Calier; Barcelona, España	20102-003