Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
L’obtention de la stérilisation est essentielle pour la greffe de tissu trachéal. Nous présentons ici un protocole de stérilisation utilisant une irradiation gamma à faible dose qui est entièrement tolérée par les organes.
L’un des principaux aspects clés pour assurer l’évolution correcte d’une greffe est la stérilité du milieu. La transplantation trachéale décellularisée consiste à implanter un organe qui était à l’origine en contact avec l’environnement, n’étant donc pas stérile dès le départ. Bien que le protocole de décellularisation (par exposition au détergent [dodécylsulfate de sodium à 2%), agitation continue et chocs osmotiques) soit effectué conformément aux mesures aseptiques, il ne permet pas la stérilisation. Par conséquent, l’un des principaux défis est d’assurer la stérilité avant l’implantation in vivo . Bien qu’il existe des protocoles établis de stérilisation par rayonnement gamma pour les matières inorganiques, il n’existe pas de telles mesures pour les matières organiques. De plus, les protocoles en place pour les matières inorganiques ne peuvent pas être appliqués aux matières organiques, car la dose de rayonnement établie (25 kGy) détruirait complètement l’implant. Cet article étudie l’effet d’une dose de rayonnement accrue dans une trachée de lapin décellularisée. Nous avons maintenu la plage de doses (kGy) et testé les doses croissantes jusqu’à ce que nous trouvions la dose minimale à laquelle la stérilisation est réalisée. Après avoir déterminé la dose, nous en avons étudié les effets sur l’organe, à la fois histologiquement et biomécaniquement. Nous avons déterminé que même si 0,5 kGy n’atteignait pas la stérilité, des doses de 1 kGy et de 2 kGy l’étaient, 1 kGy étant donc la dose minimale nécessaire pour obtenir la stérilisation. Les études microscopiques n’ont montré aucun changement pertinent par rapport aux organes non stérilisés. Les caractéristiques biomécaniques axiales n’ont pas été modifiées du tout, et seule une légère réduction de la force par unité de longueur que l’organe peut tolérer radialement a été observée. Nous pouvons donc conclure que 1 kGy permet une stérilisation complète de la trachée de lapin décellularisée avec des effets minimes, voire nuls, sur l’organe.
La stérilisation d’un implant est une condition de base pour sa viabilité; En fait, les prothèses qui ont fait leurs preuves sont celles implantées dans des zones stériles (vaisseaux sanguins, cœur, os, etc.) 1. La trachée a deux surfaces : une surface en contact avec le milieu extérieur, qui n’est donc pas stérile, et une surface vers le médiastin, qui est stérile. Par conséquent, à partir du moment où la trachée est extraite, ce n’est pas un organe stérile. Bien que le processus de décellularisation ultérieur soit effectué dans des conditions stériles maximales, il ne s’agit pas d’une étape de stérilisation2. L’implant....
La directive européenne 20170/63/UE pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire a été respectée et le protocole d’étude a été approuvé par le Comité d’éthique de l’Université de Valence (loi 86/609/CEE et 214/1997 et Code 2018/VSC/PEA/0122 Type 2 du gouvernement de Valence, Espagne).
1. Décellularisation trachéale
NOTE: La méthode de décellularisation a été signalée ailleurs20.
Décellularisation
La coloration DAPI montre l’absence d’ADN, et aucune valeur d’ADN supérieure à 50 ng n’a été détectée dans aucune des trachées par électrophorèse, tous les fragments étant inférieurs à 200 bp20.
Culture microbienne
Deux des huit pièces soumises à 0,5 kGy ont montré un changement de couleur en moins de 1 semaine. Aucune des pièces irradiées à 1 kGy et 2 kGy n’a montré de changement de.......
Il existe plusieurs stratégies de stérilisation. LeCO2supercritique pénètre complètement dans les tissus, acidifiant le milieu et déconstruisant la bicouche phospholipide cellulaire par simple élimination par dépressurisation de l’implant 8,14,25. Le rayonnement ultraviolet a également été utilisé et son efficacité dans la trachée de rongeurs a été publiée, bien qu’il n’y ait que quelques rappor.......
Aucun des auteurs n’a de conflit d’intérêts.
Cet article a été soutenu par la subvention 2018 de la Société espagnole de chirurgie thoracique à l’étude multicentrique nationale [numéro 180101 attribué à Néstor J.Martínez-Hernández] et PI16-01315 [décerné à Manuel Mata-Roig] par l’Instituto de Salud Carlos III. CIBERER est financé par le VI Plan national de R&D&I 2018-2011, Iniciativa Ingenio 2010, le Programme de consolidation, les Actions CIBER et l’Instituto de Salud Carlos III, avec l’aide du Fonds européen de développement régional.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
6-0 nylon monofilament suture | Monosoft. Covidien; Mansfield, MA, USA | SN-5698G | |
Amphotericin B 5% | Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA USA | 15290018 | |
Bioanalyzer | Agilent, Santa Clara, CA, USA | G2939BA | |
Buprenorphine | Buprex. Reckitt Benckiser Healthcare; Hull, Reino Unido | N02AE01 | |
Compression desktop UTM | Microtest, Madrid, Spain | EM1/10/FR | |
Cryostate | Leyca CM3059, Leyca Biosystems, Wetzlar, Alemania | CM3059 | |
DAPI (4',6-diamino-2-phenylindole) | DAPI. Sigma-Aldrich, Missouri, USA | D9542 | |
Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich; MO, USA | D2650 | |
DMEM | Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA, USA | 11965084 | |
DNA extraction kit | DNeasy extraction kit Quiagen, Hilden, Germany | 4368814 | |
Enrofloxacin, 2.5% | Boehringer Ingelheim, Ingelheim am Rhein, Germany | 0035-0002 | |
Fetal bovine serum (FBS) | GE Healthcare Hyclone; Madrid, Spain | SH20898.03IR | |
Fluorescence microscope | Leyca DM2500 (Leica, Wetzlar, Germany) | DM2500?? | |
Freezing Container | Mr Frosty. Thermo Fisher; Madrid, Spain | 5100-0001 | |
Isofluorane | Isoflo; Proyma Ganadera; Ciudad Real, Spain | 8.43603E+12 | |
Ketamin | Imalgene. Merial; Toulouse, Francia | BOE127823 | |
Linear accelerator | "True Beam". Varian, Palo Alto, California, USA | H191001 | |
Magnetic stirrer | Orbital Shaker PSU-10i. Biosan; Riga, Letonia | BS-010144-AAN | |
Meloxicam 5 mg/ml | Boehringer Ingelheim, Ingelheim am Rhein, Germany | 6283-MV | |
OCT (Optimal Cutting Temperature Compound) | Fischer Scientific, Madrid, Spain | 12678646 | |
Penicillin-streptomycin 5% | Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA USA | 15140122 | |
Pentobarbital sodium | Dolethal. Vetoquinol; Madrid, España | 3.60587E+12 | |
Phosphate buffered saline (PBS) | Sigma-Aldrich; MO, USA | P2272 | |
Propofol | Propofol Lipuro. B. Braun Melsungen AG; Melsungen, Alemania | G 151030 | |
Proteinase K | Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, Massachussetts, USA | S3020 | |
PVC hollow tubes | Cristallo Extra; FITT, Sandrigo, Italy | hhdddyyZ | |
PVC stent | ArgyleTM Medtronic; Istanbul, Turkey | 019 5305 1 | |
R software, Version 3.5.3 R Core | R Foundation for Statistical Computing | R 3.5.3 | |
Sodium dodecyl sulfate (SDS) | Sigma-Aldrich; MO, USA | 8,17,034 | |
Spectrophotometer | Nanodrop, Life Technologies; Isogen Life Science. Utrech, Netherlands | ND-ONEC-W | |
Spreadsheet | Microsoft Excel for Mac, Version 16.23, Redmond, WA, USA | 2864993241 | |
Traction Universal Testing Machine | Testing Machines, Veenendaal, Netherlands | 84-01 | |
UTM Software | TestWorks 4, MTS Systems Corporation, Eden Prairie, MN, USA | 100-093-627 F | |
VECTASHIELD Mounting Medium | Vector Labs, Burlingame; CA; USA | H-1000-10 | |
Xylacine | Xilagesic. Calier; Barcelona, España | 20102-003 |
Demande d’autorisation pour utiliser le texte ou les figures de cet article JoVE
Demande d’autorisationExplorer plus d’articles
This article has been published
Video Coming Soon