A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

دفعت زيادة المؤشرات الحيوية الجزيئية التي سيتم اختبارها لإدارة رعاية سرطان الرئة ذو الخلايا غير الحرشفية غير الصغيرة (NS-NSCLC) إلى تطوير طرق سريعة وموثوقة للكشف الجزيئي. نحن نصف سير عمل لتقييم التغيير الجينومي لمرضى NS-NSCLC باستخدام نهج تسلسل الجيل التالي فائق السرعة (NGS).

Abstract

زاد عدد التعديلات الجزيئية التي سيتم اختبارها للعلاج الموجه لمرضى سرطان الرئة ذو الخلايا غير الحرشفية غير الصغيرة (NS-NSCLC) بشكل كبير في السنوات القليلة الماضية. يعد اكتشاف التشوهات الجزيئية إلزاميا للرعاية المثلى لمرضى NS-NSCLC المتقدمين أو النقيلي ، مما يسمح بإدارة العلاجات المستهدفة مع تحسين البقاء على قيد الحياة بشكل عام. ومع ذلك ، فإن هذه الأورام تطور آليات مقاومة يمكن استهدافها باستخدام علاجات جديدة. يمكن لبعض التغيرات الجزيئية أيضا تعديل استجابة العلاج. يجب إجراء التوصيف الجزيئي ل NS-NSCLC في وقت قصير (TAT) ، في أقل من 10 أيام عمل ، على النحو الموصى به في المبادئ التوجيهية الدولية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن أصل خزعات الأنسجة للتحليل الجينومي متنوع ، ويتناقص حجمها باستمرار مع تطوير طرق وبروتوكولات أقل توغلا. وبالتالي ، يواجه أخصائيو علم الأمراض تحديا لأداء تقنيات جزيئية فعالة مع الحفاظ على استراتيجية تشخيص فعالة وسريعة. هنا ، نصف سير عمل تسلسل الجيل التالي (NGS) فائق السرعة القائم على amplicon المستخدم في الممارسة الروتينية اليومية عند التشخيص لمرضى NS-NSCLC. لقد أظهرنا أن هذا النظام قادر على تحديد الأهداف الجزيئية الحالية المستخدمة في الطب الدقيق في علم الأورام الصدري في TAT مناسب.

Introduction

على مدى العقد الماضي ، أدى تطوير العلاجات المستهدفة والمناعية إلى زيادة كبيرة في البقاء على قيد الحياة بشكل عام (OS) لسرطان الرئة ذو الخلايا غير الحرشفية غير الصغيرة (NS-NSCLC) 1,2. في هذا الصدد ، زاد عدد الجينات الإلزامية والأهداف الجزيئية التي يجب تحليلها عند معالجة NS-NSCLC خلال السنوات القليلة الماضية 3,4.

توصي الإرشادات الدولية الحالية باختبار EGFR و ALK و ROS1 و BRAF و NTRK و RET و MET عند تشخيص NS-NSCLC5 المتقدم. علاوة على ذلك ، نظر....

Protocol

تمت الموافقة على جميع الإجراءات من قبل لجنة الأخلاقيات المحلية (لجنة أخلاقيات البحوث البشرية ، المركز الاستشفائي الجامعي في نيس ، Tumorothèque BB-0033-00025). تم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المرضى لاستخدام العينات والبيانات التي تم إنشاؤها. تم الحصول على جميع العينات من المرضى الذين تم تشخيص إصابتهم ب NS-NSCLC في LPCE (نيس ، فرنسا) بين 20 سبتمبر و 31 يناير 2022 كجزء من الرعاية الطبية.

1. تحضير عينات الحمض النووي والحمض النووي الريبي FFPE باستخدام أداة تنقية آلية (API) (وقت المعالجة: 5 ساعات و 15 دقيقة)

  1. قم بتشغيل التخطيط على الأداة.
    1. قم بتشغيل الجهاز وتسجيل الدخول باستخدام اسم المستخدم وكلمة المرور (

النتائج

باستخدام الإجراء المقدم هنا ، الموضح بالتفصيل في منشوراتنا الأخيرة21 ، قمنا بتطوير سير عمل مثالي لتقييم التغيير الجزيئي كاختبار منعكس في الممارسة السريرية التي يتم إجراؤها بشكل روتيني للتشخيص في المرضى الذين يعانون من NS-NSCLC باستخدام نهج تسلسل الجيل التالي القائم على amplicon فائ.......

Discussion

يعد تطوير نهج NGS فائق السرعة القائم على amplicon كاختبار منعكس لتقييم التغيير الجزيئي عند تشخيص أي مرحلة NS-NSLC خيارا مثاليا للكشف عن جميع المؤشرات الحيوية الموصى بها والناشئة في NS-NSCLC5،22،23. في حين أن الطرق المتسلسلة (IHC ، PCR ، FISH) تركز فقط على جينا.......

Disclosures

يشارك كريستوف بونتو في أنشطة المتحدثين المدفوعة ويتلقى مزايا من Thermo Fisher Scientific. يشارك بول هوفمان في أنشطة المتحدث المدفوعة ويتلقى مزايا وتمويلا من Thermo Fisher Scientific.

Acknowledgements

نشكر Thermo Fisher Scientific لمنحنا إمكانية استخدام أجهزتهم وموادهم.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
96 well hard shell plate clearThermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)4483354
Adhesive PCR Plate FoilThermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)AB0626
AutoLys M tube Thermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)A38738FFPE sample processing tubes
Genexus Barcodes 1-32 HDThermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)A40261
Genexus GX5 Chip and Genexus CouplerThermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)A40269
Genexus Pipette TipsThermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)A40266
Genexus Purification InstrumentThermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)A48148Automated purification instrument (API)
Genexus Sequencing KitThermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)A40271
Genexus Templating Strips 3-GX5 and 4Thermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)A40263
Genexus Integrated SequencerThermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)A45727
Ion Torrent  Genexus FFPE DNA/RNA Purification Combo KitThermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)A45539
Oncomine  Precision Assay GX (OPA) Panel (included Strips 1 and 2-HD)Thermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, USA)A46291

References

  1. Howlader, N., et al. The effect of advances in lung-cancer treatment on population mortality. New England Journal of Medicine. 383 (7), 640-649 (2020).
  2. Melosky, B., et al. The rapidly....

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

Amplicon NS NSCLC TAT

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved