A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Summary

يمكن أن تستفيد المقايسات المختبرية من القيمة النذير من التصوير المقطعي متعدد الوسائط القائم على التصوير المقطعي للتماسك البصري الطولي (OCT) للتنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD). يتم تصوير عيون المتبرعين البشريين مع AMD وبدونه باستخدام OCT ، واللون ، وتنظير العين بالليزر لمسح انعكاس الأشعة تحت الحمراء القريبة ، والتألق الذاتي عند طولين موجيين للإثارة قبل تقسيم الأنسجة.

Abstract

يمكن أن يضيف تسلسل التقدم للتنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD) المستفاد من التصوير المقطعي متعدد الوسائط (MMI) القائم على التماسك البصري (OCT) قيمة تنبؤية إلى النتائج المختبرية. في هذا العمل ، تم تطبيق OCT و MMI خارج الجسم الحي على عيون المتبرعين البشريين قبل تقسيم أنسجة الشبكية. تم استرداد العيون من متبرعين بيض غير مصابين بالسكري تتراوح أعمارهم بين ≥80 عاما ، مع وقت الموت حتى الحفظ (DtoP) ≤6 ساعة. تم انتشال الكرات الأرضية في الموقع ، وتم تسجيلها باستخدام تريفين 18 مم لتسهيل إزالة القرنية ، وغمرها في 4٪ بارافورمالدهيد مخزن. تم الحصول على صور قاع العين الملونة بعد إزالة الجزء الأمامي باستخدام نطاق تشريح وكاميرا SLR باستخدام إضاءة عبر و epi وفلاش عند ثلاثة تكبيرات. تم وضع الكرات الأرضية في مخزن مؤقت داخل غرفة مصممة خصيصا مع عدسة ديوبتر 60. تم تصويرها بالمجال الطيفي OCT (مكعب بقعة 30 درجة ، تباعد 30 ميكرومتر ، متوسط = 25) ، انعكاس قريب من الأشعة تحت الحمراء ، 488 نانومتر ذاتي التألق ، و 787 نانومتر تألق ذاتي. أظهرت عيون AMD تغيرا في ظهارة الشبكية الصبغية (RPE) ، مع رواسب drusen أو drusenoid تحت الشبكية (SDDs) ، مع أو بدون الأوعية الدموية الجديدة ، ودون دليل على وجود أسباب أخرى. بين يونيو 2016 وسبتمبر 2017 ، تم استرداد 94 عينا يمنى و 90 عينا يسرى (DtoP: 3.9 ± 1.0 ساعة). من بين 184 عينا ، كان 40.2٪ مصابين ب AMD ، بما في ذلك المتوسط المبكر (22.8٪) ، والضموري (7.6٪) ، والأوعية الدموية الحديثة (9.8٪) AMD ، و 39.7٪ لديهم بقع غير ملحوظة. تم تحديد Drusen و SDDs والبؤر شديدة الانعكاس والضمور والندوب الوعائية الليفية باستخدام OCT. تضمنت القطع الأثرية عتامة الأنسجة ، والانفصال (العصوي ، والشبكية ، و RPE ، والمشيمية) ، والتغيير الكيسي النقري ، و RPE المتموج ، والأضرار الميكانيكية. لتوجيه المقطع بالتبريد ، تم استخدام مجلدات OCT للعثور على معالم النقرة ورأس العصب البصري وأمراض محددة. تم تسجيل مجلدات ex vivo مع مجلدات في الجسم الحي عن طريق تحديد الوظيفة المرجعية لتتبع العين. تعتمد الرؤية خارج الجسم الحي لعلم الأمراض الذي يظهر في الجسم الحي على جودة الحفظ. في غضون 16 شهرا ، تم استرداد 75 عينا من المتبرعين ب DtoP السريع في جميع مراحل AMD وتنظيمها باستخدام طرق MMI السريرية.

Introduction

خمسة عشر عاما من إدارة التنكس البقعي المرتبط بالعمر الوعائي الجديد (AMD) مع العلاج المضاد ل VEGF تحت إشراف التصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) قد قدمت رؤى جديدة حول تسلسل التقدم والبنية الدقيقة لهذا السبب السائد لفقدان البصر. الاعتراف الرئيسي هو أن AMD هو مرض ثلاثي الأبعاد يشمل شبكية العين الحسية العصبية ، وظهارة صبغة الشبكية (RPE) ، والمشيمية. نتيجة لتصوير OCT لمرضى التجربة وعيون زملائهم من مرضى العيادة المعالجين ، تم التعرف الآن على ميزات علم الأمراض التي تتجاوز تلك التي شوهدت من خلال التصوير الفوتوغرافي الملون لقاع العين ، وهو معيار سريري لعقود. وتشمل هذه الأوعية الدموية داخل الشبكية (النوع 3 الأوعية الدموية الحديثةالبقعية 1 ، الانتشار الوع....

Protocol

وافق مجلس المراجعة المؤسسية في جامعة ألاباما في برمنغهام على الدراسات المختبرية ، التي التزمت بالممارسات المختبرية الجيدة ومستوى السلامة الأحيائية 2/2+. تتوافق جميع بنوك العيون الأمريكية مع قانون الهدايا التشريحية الموحد لعام 2006 وإدارة الغذاء والدواء الأمريكية. تتوافق معظم بنوك العيون الأمريكية ، بما في ذلك Advance Sight Network ، مع المعايير الطبية لجمعية بنك العيون الأمريكية.

يسرد جدول المواد اللوازم والمعدات. توفر المادة التكميلية 1 نظرة عامة على التشريح ، والتصوير الفوتوغرافي الملون لقاع العين ، و MMI القائم على OCT. توفر المادة التكميلية 2 تفاصيل MMI المستندة إلى OCT.

النتائج

يوضح الجدول 1 أنه خلال الفترة 2016-2017 ، تم استرداد 184 عينا من 94 متبرعا أبيض غير مصاب بالسكري >80 عاما. كان متوسط وقت الموت إلى الحفظ 3.9 ساعة (النطاق: 2.0-6.4 ساعة). من بين 184 عينا تمت مراجعتها ، كان لدى 75 (40.2٪) بعض AMD. تم تحديد الفئات التالية: غير ملحوظ (39.7٪) ، مشكوك فيه (11.4٪) ، AMD المبكر المتوسط (22.8٪.......

Discussion

باستخدام نهج الفحص القائم على السكان خلال فترة 16 شهرا في حقبة ما قبل COVID ، كان من الممكن شراء 75 عينا من المتبرعين المصابين ب AMD. تم استردادها جميعا باستخدام DtoP قصير وتم تنظيمها باستخدام MMI المرتبط ب OCT. معيار العمر (>80 سنة) خارج النطاق العمري النموذجي لاستعادة الأنسجة المخصصة للقرنية القابلة ل.......

Disclosures

تتلقى C.A.C. دعما بحثيا من شركة هايدلبرغ للهندسة وتقدم استشارات ل Apellis و Astellas و Boehringer Ingelheim و Character Bioscience و Osanni. يتلقى TA دعما بحثيا من Novartis ويقدم استشارات لشركة Roche و Novartis و Bayer و Nidek و Apellis. K.B.F. هو مستشار لشركة Genentech و Zeiss و Heidelberg Engineering و Allergan و Bayer و Novartis.

Acknowledgements

نشكر شركة هايدلبرغ الهندسية على الأجهزة وتصميم حامل العين الأصلي ، وريتشارد إف سبايد دكتوراه في الطب لمقدمة التصوير متعدد الوسائط القائم على OCT ، وكريستوفر جيركين MD لتسهيل الوصول إلى أجهزة التصوير السريري ، وديفيد فيشر للشكل 1. تم دعم استعادة عيون المتبرعين البشريين للبحث من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة (NIH) R01EY06019 (C.A.C.) ، P30 EY003039 (Pittler) ، R01EY015520 (Smith) ، R01EY027948 (C.A.C. ، T.A.) R01EY030192 (Li) و R01EY031209 (Stambolian) و U54EY032442 (Spraggins) و IZKF Würzburg (N-304 ، TA) ، ومؤسسة EyeSight في ألاباما ، والمؤسسة الدولية لأبحاث الشبكية (C.A.C.) ، ومبادرة أرنولد ومابل بيكمان لأبحاث البقعة الصفراء (C.A.C.....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Beakers, 250 mLFisher# 02-540K
Bottles, 1 L, Pyrex Fisher# 10-462-719storage for preservative
Bunsen burner or heat sourceEisco# 17-12-818To melt wax
Camera, digitalNikon D7200D7200
Computer and storageAppleiMac Pro; 14 TB external hard driveImage storage
Container, insulatedFisher# 02-591-45For wet ice
Containers, 2 per donor, 40 mLFisherSameco Bio-Tite  40 mL # 13-711-86For preservative
Crucible, quartz 30 mLFisher# 08-072DHold globe for photography
Cylinder, graduate, 250 mLFisher# 08-549G
Disinfectant cleaning supplies  https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html
Eye holder with lens and mounting bracketcontact J. Messingerjeffreymessinger@uabmc.educustom modification of Heidelberg Engineering original design
Face Protection MasksFisher# 19-910-667
Forceps, Harmon FixRoboz # RS-8247
Forceps, Micro AdsonRoboz # RS-5232
Forceps, TissueRoboz# RS-5172
Glass petri dish, KimaxFisher# 23064
Gloves Diamond GripFisher# MF-300
Gowns GenProFisher# 19-166-116
Image editing softwareAdobePhotoshop 2021, Creative Suite
KimWipesFisher# 06-666
Lamps, 3 goosenecksSchott Imaging# A20800
Microscope, stereoNikonSMZ 1000for dissection
Microscope, stereoOlympus SZX9color fundus photography
Paraformaldehyde, 20% EMS# 15713-Sfor preservative; dilute for storage
pH meterFisher # 01-913-806
Phosphate buffer, Sorenson’s, 0.2 M pH 7.2 EMS# 11600-10
Ring flashB & H Photo VideoSigma EM-140 DG 
Ruby bead, 1 mm diameterMeller Optics# MRB10MD
Safety Glasses 3MFisher# 19-070-940
Scanning laser ophthalmoscopeHeidelberg EngineeringHRA2
Scissors, curved springRoboz# RS-5681
Sharps containerFisher# 1482763
Shutter cord, remoteNikonMC-DC2
Spectral Domain OCT deviceHeidelberg EngineeringSpectralis HRA&OCThttps://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf
Stainless steel ball bearing, 25.4 mm diameterMcMaster-Carr# 9529K31
Tissue marking dye, blackCancer Diagnostics Inc# 0727-1
Tissue slicer bladesThomas Scientific# 6767C18
Trephine, 18-mm diameterStratis Healthcare# 6718L
TV monitor (HDMI) and cord for digital cameraB&H Photo VideoBH # COHD18G6PROBfor live viewing and remote camera display features
Wax, pink dentalEMS # 72670
Wooden applicatorsPuritan# 807-12

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

We use cookies to enhance your experience on our website.

By continuing to use our website or clicking “Continue”, you are agreeing to accept our cookies.

Learn More