A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
يمكن أن تستفيد المقايسات المختبرية من القيمة النذير من التصوير المقطعي متعدد الوسائط القائم على التصوير المقطعي للتماسك البصري الطولي (OCT) للتنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD). يتم تصوير عيون المتبرعين البشريين مع AMD وبدونه باستخدام OCT ، واللون ، وتنظير العين بالليزر لمسح انعكاس الأشعة تحت الحمراء القريبة ، والتألق الذاتي عند طولين موجيين للإثارة قبل تقسيم الأنسجة.
يمكن أن يضيف تسلسل التقدم للتنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD) المستفاد من التصوير المقطعي متعدد الوسائط (MMI) القائم على التماسك البصري (OCT) قيمة تنبؤية إلى النتائج المختبرية. في هذا العمل ، تم تطبيق OCT و MMI خارج الجسم الحي على عيون المتبرعين البشريين قبل تقسيم أنسجة الشبكية. تم استرداد العيون من متبرعين بيض غير مصابين بالسكري تتراوح أعمارهم بين ≥80 عاما ، مع وقت الموت حتى الحفظ (DtoP) ≤6 ساعة. تم انتشال الكرات الأرضية في الموقع ، وتم تسجيلها باستخدام تريفين 18 مم لتسهيل إزالة القرنية ، وغمرها في 4٪ بارافورمالدهيد مخزن. تم الحصول على صور قاع العين الملونة بعد إزالة الجزء الأمامي باستخدام نطاق تشريح وكاميرا SLR باستخدام إضاءة عبر و epi وفلاش عند ثلاثة تكبيرات. تم وضع الكرات الأرضية في مخزن مؤقت داخل غرفة مصممة خصيصا مع عدسة ديوبتر 60. تم تصويرها بالمجال الطيفي OCT (مكعب بقعة 30 درجة ، تباعد 30 ميكرومتر ، متوسط = 25) ، انعكاس قريب من الأشعة تحت الحمراء ، 488 نانومتر ذاتي التألق ، و 787 نانومتر تألق ذاتي. أظهرت عيون AMD تغيرا في ظهارة الشبكية الصبغية (RPE) ، مع رواسب drusen أو drusenoid تحت الشبكية (SDDs) ، مع أو بدون الأوعية الدموية الجديدة ، ودون دليل على وجود أسباب أخرى. بين يونيو 2016 وسبتمبر 2017 ، تم استرداد 94 عينا يمنى و 90 عينا يسرى (DtoP: 3.9 ± 1.0 ساعة). من بين 184 عينا ، كان 40.2٪ مصابين ب AMD ، بما في ذلك المتوسط المبكر (22.8٪) ، والضموري (7.6٪) ، والأوعية الدموية الحديثة (9.8٪) AMD ، و 39.7٪ لديهم بقع غير ملحوظة. تم تحديد Drusen و SDDs والبؤر شديدة الانعكاس والضمور والندوب الوعائية الليفية باستخدام OCT. تضمنت القطع الأثرية عتامة الأنسجة ، والانفصال (العصوي ، والشبكية ، و RPE ، والمشيمية) ، والتغيير الكيسي النقري ، و RPE المتموج ، والأضرار الميكانيكية. لتوجيه المقطع بالتبريد ، تم استخدام مجلدات OCT للعثور على معالم النقرة ورأس العصب البصري وأمراض محددة. تم تسجيل مجلدات ex vivo مع مجلدات في الجسم الحي عن طريق تحديد الوظيفة المرجعية لتتبع العين. تعتمد الرؤية خارج الجسم الحي لعلم الأمراض الذي يظهر في الجسم الحي على جودة الحفظ. في غضون 16 شهرا ، تم استرداد 75 عينا من المتبرعين ب DtoP السريع في جميع مراحل AMD وتنظيمها باستخدام طرق MMI السريرية.
خمسة عشر عاما من إدارة التنكس البقعي المرتبط بالعمر الوعائي الجديد (AMD) مع العلاج المضاد ل VEGF تحت إشراف التصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) قد قدمت رؤى جديدة حول تسلسل التقدم والبنية الدقيقة لهذا السبب السائد لفقدان البصر. الاعتراف الرئيسي هو أن AMD هو مرض ثلاثي الأبعاد يشمل شبكية العين الحسية العصبية ، وظهارة صبغة الشبكية (RPE) ، والمشيمية. نتيجة لتصوير OCT لمرضى التجربة وعيون زملائهم من مرضى العيادة المعالجين ، تم التعرف الآن على ميزات علم الأمراض التي تتجاوز تلك التي شوهدت من خلال التصوير الفوتوغرافي الملون لقاع العين ، وهو معيار سريري لعقود. وتشمل هذه الأوعية الدموية داخل الشبكية (النوع 3 الأوعية الدموية الحديثةالبقعية 1 ، الانتشار الوع....
وافق مجلس المراجعة المؤسسية في جامعة ألاباما في برمنغهام على الدراسات المختبرية ، التي التزمت بالممارسات المختبرية الجيدة ومستوى السلامة الأحيائية 2/2+. تتوافق جميع بنوك العيون الأمريكية مع قانون الهدايا التشريحية الموحد لعام 2006 وإدارة الغذاء والدواء الأمريكية. تتوافق معظم بنوك العيون الأمريكية ، بما في ذلك Advance Sight Network ، مع المعايير الطبية لجمعية بنك العيون الأمريكية.
يسرد جدول المواد اللوازم والمعدات. توفر المادة التكميلية 1 نظرة عامة على التشريح ، والتصوير الفوتوغرافي الملون لقاع العين ، و MMI القائم على OCT. توفر المادة التكميلية 2 تفاصيل MMI المستندة إلى OCT.
يوضح الجدول 1 أنه خلال الفترة 2016-2017 ، تم استرداد 184 عينا من 94 متبرعا أبيض غير مصاب بالسكري >80 عاما. كان متوسط وقت الموت إلى الحفظ 3.9 ساعة (النطاق: 2.0-6.4 ساعة). من بين 184 عينا تمت مراجعتها ، كان لدى 75 (40.2٪) بعض AMD. تم تحديد الفئات التالية: غير ملحوظ (39.7٪) ، مشكوك فيه (11.4٪) ، AMD المبكر المتوسط (22.8٪.......
باستخدام نهج الفحص القائم على السكان خلال فترة 16 شهرا في حقبة ما قبل COVID ، كان من الممكن شراء 75 عينا من المتبرعين المصابين ب AMD. تم استردادها جميعا باستخدام DtoP قصير وتم تنظيمها باستخدام MMI المرتبط ب OCT. معيار العمر (>80 سنة) خارج النطاق العمري النموذجي لاستعادة الأنسجة المخصصة للقرنية القابلة ل.......
تتلقى C.A.C. دعما بحثيا من شركة هايدلبرغ للهندسة وتقدم استشارات ل Apellis و Astellas و Boehringer Ingelheim و Character Bioscience و Osanni. يتلقى TA دعما بحثيا من Novartis ويقدم استشارات لشركة Roche و Novartis و Bayer و Nidek و Apellis. K.B.F. هو مستشار لشركة Genentech و Zeiss و Heidelberg Engineering و Allergan و Bayer و Novartis.
نشكر شركة هايدلبرغ الهندسية على الأجهزة وتصميم حامل العين الأصلي ، وريتشارد إف سبايد دكتوراه في الطب لمقدمة التصوير متعدد الوسائط القائم على OCT ، وكريستوفر جيركين MD لتسهيل الوصول إلى أجهزة التصوير السريري ، وديفيد فيشر للشكل 1. تم دعم استعادة عيون المتبرعين البشريين للبحث من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة (NIH) R01EY06019 (C.A.C.) ، P30 EY003039 (Pittler) ، R01EY015520 (Smith) ، R01EY027948 (C.A.C. ، T.A.) R01EY030192 (Li) و R01EY031209 (Stambolian) و U54EY032442 (Spraggins) و IZKF Würzburg (N-304 ، TA) ، ومؤسسة EyeSight في ألاباما ، والمؤسسة الدولية لأبحاث الشبكية (C.A.C.) ، ومبادرة أرنولد ومابل بيكمان لأبحاث البقعة الصفراء (C.A.C.....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Beakers, 250 mL | Fisher | # 02-540K | |
Bottles, 1 L, Pyrex | Fisher | # 10-462-719 | storage for preservative |
Bunsen burner or heat source | Eisco | # 17-12-818 | To melt wax |
Camera, digital | Nikon D7200 | D7200 | |
Computer and storage | Apple | iMac Pro; 14 TB external hard drive | Image storage |
Container, insulated | Fisher | # 02-591-45 | For wet ice |
Containers, 2 per donor, 40 mL | Fisher | Sameco Bio-Tite 40 mL # 13-711-86 | For preservative |
Crucible, quartz 30 mL | Fisher | # 08-072D | Hold globe for photography |
Cylinder, graduate, 250 mL | Fisher | # 08-549G | |
Disinfectant cleaning supplies | https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html | ||
Eye holder with lens and mounting bracket | contact J. Messinger | jeffreymessinger@uabmc.edu | custom modification of Heidelberg Engineering original design |
Face Protection Masks | Fisher | # 19-910-667 | |
Forceps, Harmon Fix | Roboz | # RS-8247 | |
Forceps, Micro Adson | Roboz | # RS-5232 | |
Forceps, Tissue | Roboz | # RS-5172 | |
Glass petri dish, Kimax | Fisher | # 23064 | |
Gloves Diamond Grip | Fisher | # MF-300 | |
Gowns GenPro | Fisher | # 19-166-116 | |
Image editing software | Adobe | Photoshop 2021, Creative Suite | |
KimWipes | Fisher | # 06-666 | |
Lamps, 3 goosenecks | Schott Imaging | # A20800 | |
Microscope, stereo | Nikon | SMZ 1000 | for dissection |
Microscope, stereo | Olympus | SZX9 | color fundus photography |
Paraformaldehyde, 20% | EMS | # 15713-S | for preservative; dilute for storage |
pH meter | Fisher | # 01-913-806 | |
Phosphate buffer, Sorenson’s, 0.2 M pH 7.2 | EMS | # 11600-10 | |
Ring flash | B & H Photo Video | Sigma EM-140 DG | |
Ruby bead, 1 mm diameter | Meller Optics | # MRB10MD | |
Safety Glasses 3M | Fisher | # 19-070-940 | |
Scanning laser ophthalmoscope | Heidelberg Engineering | HRA2 | |
Scissors, curved spring | Roboz | # RS-5681 | |
Sharps container | Fisher | # 1482763 | |
Shutter cord, remote | Nikon | MC-DC2 | |
Spectral Domain OCT device | Heidelberg Engineering | Spectralis HRA&OCT | https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf |
Stainless steel ball bearing, 25.4 mm diameter | McMaster-Carr | # 9529K31 | |
Tissue marking dye, black | Cancer Diagnostics Inc | # 0727-1 | |
Tissue slicer blades | Thomas Scientific | # 6767C18 | |
Trephine, 18-mm diameter | Stratis Healthcare | # 6718L | |
TV monitor (HDMI) and cord for digital camera | B&H Photo Video | BH # COHD18G6PROB | for live viewing and remote camera display features |
Wax, pink dental | EMS | # 72670 | |
Wooden applicators | Puritan | # 807-12 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ISSN 1940-087X
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved
We use cookies to enhance your experience on our website.
By continuing to use our website or clicking “Continue”, you are agreeing to accept our cookies.