Ex Vivo Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonu Araştırmaları için İnsan Donör Gözlerinin OCT Tabanlı Multimodal Görüntülemesi

Özet

Laboratuvar tahlilleri, yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) uzunlamasına optik koherens tomografi (OCT) tabanlı multimodal görüntülemesinden prognostik değerden yararlanabilir. AMD'li ve AMD'siz insan donör gözleri, doku kesitlemeden önce OCT, renk, yakın kızılötesi yansıma taramalı lazer oftalmoskopi ve otofloresan kullanılarak iki uyarma dalga boyunda görüntülenir.

Özet

Optik koherens tomografi (OCT) tabanlı multimodal (MMI) klinik görüntülemeden öğrenilen yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) için bir progresyon sekansı, laboratuvar bulgularına prognostik değer katabilir. Bu çalışmada retina dokusu kesitleme öncesinde insan donör gözlerine ex vivo OCT ve MMI uygulandı. Gözler, ≥80 yaşlarındaki diyabetik olmayan beyaz donörlerden kurtarıldı ve ölümden korunmaya kadar geçen süre (DtoP) ≤6 saatti. Küreler yerinde geri kazanıldı, korneanın çıkarılmasını kolaylaştırmak için 18 mm'lik bir trefin ile puanlandı ve tamponlanmış% 4 paraformaldehit içine daldırıldı. Renkli fundus görüntüleri, ön segment çıkarıldıktan sonra diseksiyon kapsamı ve üç büyütmede trans, epi- ve flaş aydınlatması kullanan bir SLR kamera ile elde edildi. Küreler, 60 diyoptri lense sahip özel tasarlanmış bir oda içindeki bir tampona yerleştirildi. Spektral etki alanı OCT (30° makula küpü, 30 μm aralık, ortalama = 25), yakın kızılötesi yansıma, 488 nm otofloresan ve 787 nm otofloresan ile görüntülendi. AMD gözleri, retinal pigment epitelinde (RPE), drusen veya subretinal drusenoid birikintileri (SDD'ler), neovaskülarizasyon olsun veya olmasın ve başka nedenlere dair kanıt olmadan bir değişiklik gösterdi. Haziran 2016 ile Eylül 2017 arasında 94 sağ göz ve 90 sol göz iyileşti (DtoP: 3.9 ± 1.0 saat). 184 gözün %40.2'sinde erken intermediate (%22.8), atrofik (%7.6) ve neovasküler (%9.8) AMD dahil olmak üzere AMD vardı ve %39.7'sinde dikkat çekici olmayan makulalar vardı. Drusen, SDD'ler, hiper-reflektif odaklar, atrofi ve fibrovasküler skarlar OCT kullanılarak tanımlandı. artefaktlar arasında doku opaklaşması, dekolmanları (basiller, retinal, RPE, koroidal), foveal kistik değişiklik, dalgalı bir RPE ve mekanik hasar vardı. Kriyo-kesitlemeyi yönlendirmek için, fovea ve optik sinir başı yer işaretlerini ve spesifik patolojileri bulmak için OCT hacimleri kullanıldı. Ex vivo hacimler, göz izleme için referans fonksiyonu seçilerek in vivo hacimlere kaydedildi. İn vivo görülen patolojinin ex vivo görünürlüğü koruma kalitesine bağlıdır. 16 ay içinde, AMD'nin tüm aşamalarında 75 hızlı DtoP donör gözü iyileşti ve klinik MMI yöntemleri kullanılarak evrelendirildi.

Giriş

Optik koherens tomografi (OKT) rehberliğinde anti-VEGF tedavisi ile neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) on beş yıldır yönetilmesi, görme kaybının bu yaygın nedeninin progresyon sekansı ve mikromimarisi hakkında yeni bilgiler sunmuştur. Önemli bir tanıma, AMD'nin nörosensoriyel retina, retinal pigment epiteli (RPE) ve koroidi içeren üç boyutlu bir hastalık olmasıdır. Deneme hastalarının ve tedavi edilen klinik hastaların diğer gözlerinin OCT görüntülemesinin bir sonucu olarak, onlarca yıldır klinik bir standart olan renkli fundus fotoğrafçılığı tarafından görülenlerin ötesinde patolojinin özellikleri artık tanınmaktadır. Bunlar arasında intraretinal ne....

Protokol

Birmingham'daki Alabama Üniversitesi'ndeki kurumsal inceleme kurulu, İyi Laboratuvar Uygulamaları ve Biyogüvenlik Seviyesi 2/2+'ya bağlı kalan laboratuvar çalışmalarını onayladı. Tüm ABD göz bankaları 2006 Tekdüzen Anatomik Hediyeler Yasası ve ABD Gıda ve İlaç İdaresi'ne uygundur. Advancing Sight Network de dahil olmak üzere çoğu ABD göz bankası, Amerika Göz Bankası Birliği'nin tıbbi standartlarına uygundur.

Malzeme Tablosu malzemeleri ve ekipmanları listeler. Ek Materyal 1, diseksiyon, renkli fundus fotoğrafçılığı ve OCT tabanlı MMI'ye genel bir bakış sağlar. Ek Materyal 2, OCT tabanlı MMI....

Tartışmalar

COVID öncesi dönemde 16 aylık bir dönemde popülasyona dayalı bir tarama yaklaşımı kullanılarak, AMD ile 75 donör gözü temin etmek mümkün olmuştur. Hepsi kısa bir DtoP ile kurtarıldı ve OCT-anchored MMI kullanılarak sahnelendi. Yaş kriteri (>80 yaş), nakledilebilir kornealara yönelik doku geri kazanımları için tipik yaş aralığının dışındadır. İlerlemiş yaşa rağmen, kriterlerimiz AMD'nin tüm aşamalarında gözlerle sonuçlandı. Birçok RPE fenotipi tüm AMD aşamalarında ortaktır.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Beakers, 250 mL	Fisher	# 02-540K
Bottles, 1 L, Pyrex	Fisher	# 10-462-719	storage for preservative
Bunsen burner or heat source	Eisco	# 17-12-818	To melt wax
Camera, digital	Nikon D7200	D7200
Computer and storage	Apple	iMac Pro; 14 TB external hard drive	Image storage
Container, insulated	Fisher	# 02-591-45	For wet ice
Containers, 2 per donor, 40 mL	Fisher	Sameco Bio-Tite  40 mL # 13-711-86	For preservative
Crucible, quartz 30 mL	Fisher	# 08-072D	Hold globe for photography
Cylinder, graduate, 250 mL	Fisher	# 08-549G
Disinfectant cleaning supplies			https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html
Eye holder with lens and mounting bracket	contact J. Messinger	jeffreymessinger@uabmc.edu	custom modification of Heidelberg Engineering original design
Face Protection Masks	Fisher	# 19-910-667
Forceps, Harmon Fix	Roboz	# RS-8247
Forceps, Micro Adson	Roboz	# RS-5232
Forceps, Tissue	Roboz	# RS-5172
Glass petri dish, Kimax	Fisher	# 23064
Gloves Diamond Grip	Fisher	# MF-300
Gowns GenPro	Fisher	# 19-166-116
Image editing software	Adobe	Photoshop 2021, Creative Suite
KimWipes	Fisher	# 06-666
Lamps, 3 goosenecks	Schott Imaging	# A20800
Microscope, stereo	Nikon	SMZ 1000	for dissection
Microscope, stereo	Olympus	SZX9	color fundus photography
Paraformaldehyde, 20%	EMS	# 15713-S	for preservative; dilute for storage
pH meter	Fisher	# 01-913-806
Phosphate buffer, Sorenson’s, 0.2 M pH 7.2	EMS	# 11600-10
Ring flash	B & H Photo Video	Sigma EM-140 DG
Ruby bead, 1 mm diameter	Meller Optics	# MRB10MD
Safety Glasses 3M	Fisher	# 19-070-940
Scanning laser ophthalmoscope	Heidelberg Engineering	HRA2
Scissors, curved spring	Roboz	# RS-5681
Sharps container	Fisher	# 1482763
Shutter cord, remote	Nikon	MC-DC2
Spectral Domain OCT device	Heidelberg Engineering	Spectralis HRA&OCT	https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf
Stainless steel ball bearing, 25.4 mm diameter	McMaster-Carr	# 9529K31
Tissue marking dye, black	Cancer Diagnostics Inc	# 0727-1
Tissue slicer blades	Thomas Scientific	# 6767C18
Trephine, 18-mm diameter	Stratis Healthcare	# 6718L
TV monitor (HDMI) and cord for digital camera	B&H Photo Video	BH # COHD18G6PROB	for live viewing and remote camera display features
Wax, pink dental	EMS	# 72670
Wooden applicators	Puritan	# 807-12