A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

בדיקות מעבדה יכולות למנף את הערך הפרוגנוסטי מההדמיה הרב-מודאלית מבוססת טומוגרפיית קוהרנטיות אופטית אורכית (OCT) של ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD). עיניים מתורם אנושי עם ובלי AMD מצולמות באמצעות OCT, צבע, סריקת השתקפות אינפרא אדום קרוב לייזר, אופטלמוסקופיה, ו autofluorescence בשני אורכי גל עירור לפני חתך רקמות.

Abstract

רצף התקדמות לניוון מקולרי תלוי גיל (AMD) שנלמד מהדמיה קלינית מבוססת טומוגרפיה אופטית קוהרנטית (OCT) רב-מודאלית (MMI) עשוי להוסיף ערך פרוגנוסטי לממצאי המעבדה. בעבודה זו, ex vivo OCT ו- MMI יושמו על עיני תורם אנושי לפני חתך רקמת הרשתית. העיניים נמצאו מתורמים לבנים שאינם סוכרתיים בני ≥80, עם זמן מוות לשימור (DtoP) של ≤6 שעות. הגלובוסים נמצאו באתר, קיבלו טרפין בקוטר 18 מ"מ כדי להקל על הסרת הקרנית, וטובלים בפרפורמלדהיד חוצץ 4%. תמונות פונדוס צבעוניות נרכשו לאחר הסרת סגמנט קדמי עם היקף ניתוח ומצלמת SLR באמצעות תאורת טרנס, אפי ומבזק בשלוש הגדלות. הגלובוסים הונחו בחיץ בתוך תא שעוצב במיוחד עם עדשת דיופטר 60. הם צולמו עם תחום ספקטרלי OCT (קוביית מקולה של 30°, מרווח של 30 מיקרומטר, ממוצע = 25), החזר אינפרא אדום קרוב, אוטופלואורסצנטיות של 488 ננומטר ואוטופלואורסצנטיות של 787 ננומטר. עיני AMD הראו שינוי באפיתל פיגמנט הרשתית (RPE), עם משקעי דרוסן או דרוסנואידים תת-רשתית (SDD), עם או בלי ניאו-וסקולריזציה, וללא עדות לסיבות אחרות. בין יוני 2016 לספטמבר 2017 נמצאו 94 עיניים ימניות ו-90 עיניים שמאליות (DtoP: 3.9 ±-1.0 שעות). מתוך 184 העיניים, ל-40.2% היה AMD, כולל AMD בשלב הביניים המוקדם (22.8%), אטרופי (7.6%) וניאו-וסקולרי (9.8%), ול-39.7% היו מקולות ללא ייחוד. דרוסן, SDDs, מוקדים היפר-רפלקטיביים, ניוון וצלקות פיברו-וסקולריות זוהו באמצעות OCT. הממצאים כללו opacification רקמות, ניתוקים (bacillary, retinal, RPE, choroidal), שינוי ציסטי foveal, RPE גלי, ונזק מכני. כדי להנחות את חתך ההקפאה, נעשה שימוש בנפחי OCT כדי למצוא את הגומה המרכזית ואת ציוני הדרך של ראש עצב הראייה ופתולוגיות ספציפיות. אמצעי האחסון של ex vivo נרשמו באמצעי האחסון in vivo על-ידי בחירת פונקציית הייחוס למעקב אחר העיניים. הנראות ex vivo של הפתולוגיה הנראית in vivo תלויה באיכות השימור. בתוך 16 חודשים, 75 עיניים מהירות של תורם DtoP בכל שלבי AMD התאוששו ובויימו בשיטות MMI קליניות.

Introduction

חמש עשרה שנים של ניהול ניוון מקולרי הקשור לגיל ניאו-וסקולרי (AMD) עם טיפול אנטי-VEGF בהנחיית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT) הציעו תובנות חדשות לגבי רצף ההתקדמות והמיקרו-ארכיטקטורה של גורם שכיח זה לאובדן ראייה. הכרה מרכזית היא כי AMD היא מחלה תלת ממדית המערבת את הרשתית הנוירו-חושית, אפיתל פיגמנט הרשתית (RPE) וכורואיד. כתוצאה מהדמיית OCT של מטופלי ניסוי ועיניים עמיתות של מטופלי מרפאה מטופלים, תכונות הפתולוגיה מעבר לאלה הנראות על ידי צילום פונדוס צבע, תקן קליני במשך עשרות שנים, מוכרות כיום. אלה כוללים neovascularization intraretinal (סוג 3 מקולריזציה neovascularization1, לשעבר התפשטות אנגיומטית), משקעי drusenoid subretinal (SDDs, המכונה גם pseudo....

Protocol

ועדת הביקורת המוסדית באוניברסיטת אלבמה בברמינגהם אישרה את מחקרי המעבדה, אשר דבקו בנוהלי מעבדה טובים וברמת בטיחות ביולוגית 2/2+. כל בנקי העיניים בארה"ב עומדים בחוק המתנות האנטומיות האחיד משנת 2006 ובמנהל המזון והתרופות האמריקאי. רוב בנקי העיניים בארה"ב, כולל Advancing Sight Network, עומדים בסטנדרטים הרפואיים של איגוד בנק העיניים של אמריקה.

טבלת החומרים מפרטת את האספקה והציוד. חומר משלים 1 מספק סקירה כללית של הדיסקציה, צילום פונדוס צבע ו- MMI מבוסס OCT. חומר משלים 2 מספק פרטים על MMI מבוסס OCT.

1. קריטריונים לאיסוף רקמות

  1. כדי למקסם את התשו....

תוצאות

טבלה 1 מראה כי בשנים 2017-2016 החלימו 184 עיניים מ-94 תורמים לבנים שאינם סוכרתיים >80 שנים. זמן המוות הממוצע לשימור היה 3.9 שעות (טווח: 2.0-6.4 שעות). מתוך 184 העיניים שנסקרו, ל-75 (40.2%) היה AMD מסוים. זוהו הקטגוריות הבאות: לא ראוי לציון (39.7%), מפוקפק (11.4%), AMD בינוני מוקדם (22.8%), אטרופי (7.6%), ניאו-וסקולרי (9.8%), א.......

Discussion

באמצעות גישת סינון מבוססת אוכלוסייה במהלך תקופה של 16 חודשים בעידן שלפני הקורונה, ניתן היה לרכוש 75 עיניים מתורם עם AMD. כולם שוחזרו עם DtoP קצר ובויימו באמצעות MMI מעוגן OCT. קריטריון הגיל (>80 שנים) נמצא מחוץ לטווח הגילאים האופייני לשחזור רקמות המיועדות לקרניות הניתנות להשתלה. למרות הגיל המתקדם, הק.......

Disclosures

C.A.C. מקבלת תמיכה מחקרית מהיידלברג הנדסה ומייעצת ל-Apellis, Astellas, Boehringer Ingelheim, Character Bioscience ו-Osanni. ת.א. מקבלת תמיכה מחקרית מנוברטיס ומייעצת לרוש, נוברטיס, באייר, נידק ואפליס. ק.ב.פ. היא יועצת לג'ננטק, Zeiss, היידלברג הנדסה, אלרגן, באייר ונוברטיס.

Acknowledgements

אנו מודים להיידלברג הנדסה על המכשור והעיצוב של מחזיק העין המקורי, ריצ'רד פ. ספייד MD על המבוא לדימות רב-מודאלי מבוסס OCT, כריסטופר גירקין MD על הקלת הגישה להתקני הדמיה קליניים, ודייוויד פישר על איור 1. ההתאוששות של עיני התורם האנושי למחקר נתמכה על ידי מענקי המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) R01EY06019 (C.A.C.), P30 EY003039 (Pittler), R01EY015520 (Smith), R01EY027948 (C.A.C., T.A.) R01EY030192 (Li), R01EY031209 (Stambolian) ו-U54EY032442 (Spraggins), IZKF Würzburg (N-304, T.A.), קרן EyeSight של אלבמה, הקרן הבינלאומית לחקר הרשתית (C.A.C.), יוזמת ארנולד ומייבל בקמן למחקר מקולרי (C.A.C.), ומחקר למניעת עיוורון AMD Catalyst (Schey).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Beakers, 250 mLFisher# 02-540K
Bottles, 1 L, Pyrex Fisher# 10-462-719storage for preservative
Bunsen burner or heat sourceEisco# 17-12-818To melt wax
Camera, digitalNikon D7200D7200
Computer and storageAppleiMac Pro; 14 TB external hard driveImage storage
Container, insulatedFisher# 02-591-45For wet ice
Containers, 2 per donor, 40 mLFisherSameco Bio-Tite  40 mL # 13-711-86For preservative
Crucible, quartz 30 mLFisher# 08-072DHold globe for photography
Cylinder, graduate, 250 mLFisher# 08-549G
Disinfectant cleaning supplies  https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html
Eye holder with lens and mounting bracketcontact J. Messingerjeffreymessinger@uabmc.educustom modification of Heidelberg Engineering original design
Face Protection MasksFisher# 19-910-667
Forceps, Harmon FixRoboz # RS-8247
Forceps, Micro AdsonRoboz # RS-5232
Forceps, TissueRoboz# RS-5172
Glass petri dish, KimaxFisher# 23064
Gloves Diamond GripFisher# MF-300
Gowns GenProFisher# 19-166-116
Image editing softwareAdobePhotoshop 2021, Creative Suite
KimWipesFisher# 06-666
Lamps, 3 goosenecksSchott Imaging# A20800
Microscope, stereoNikonSMZ 1000for dissection
Microscope, stereoOlympus SZX9color fundus photography
Paraformaldehyde, 20% EMS# 15713-Sfor preservative; dilute for storage
pH meterFisher # 01-913-806
Phosphate buffer, Sorenson’s, 0.2 M pH 7.2 EMS# 11600-10
Ring flashB & H Photo VideoSigma EM-140 DG 
Ruby bead, 1 mm diameterMeller Optics# MRB10MD
Safety Glasses 3MFisher# 19-070-940
Scanning laser ophthalmoscopeHeidelberg EngineeringHRA2
Scissors, curved springRoboz# RS-5681
Sharps containerFisher# 1482763
Shutter cord, remoteNikonMC-DC2
Spectral Domain OCT deviceHeidelberg EngineeringSpectralis HRA&OCThttps://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf
Stainless steel ball bearing, 25.4 mm diameterMcMaster-Carr# 9529K31
Tissue marking dye, blackCancer Diagnostics Inc# 0727-1
Tissue slicer bladesThomas Scientific# 6767C18
Trephine, 18-mm diameterStratis Healthcare# 6718L
TV monitor (HDMI) and cord for digital cameraB&H Photo VideoBH # COHD18G6PROBfor live viewing and remote camera display features
Wax, pink dentalEMS # 72670
Wooden applicatorsPuritan# 807-12

References

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

195

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved