نموذج زراعة قلب الفئران غير المتجانسة لحديثي الولادة لدراسة الانتقال البطاني إلى اللحمة المتوسطة

Summary

يقدم هذا العمل نموذجا حيوانيا للتليف الناجم عن الانتقال البطاني إلى اللحمة المتوسطة ، كما يظهر في عيوب القلب الخلقية مثل تضيق الأبهر الحرج أو متلازمة القلب الأيسر الناقص التنسج ، مما يسمح بإجراء تقييم مفصل للأنسجة النسيجية ، وتحديد مسارات الإشارات التنظيمية ، واختبار خيارات العلاج.

Abstract

الداء الليفي الشغفي (EFE) ، الذي يحدده تراكم الأنسجة تحت الشغاف ، له تأثيرات كبيرة على تطور البطين الأيسر (LV) ويمنع المرضى الذين يعانون من تضيق الأبهر الحرج الخلقي ومتلازمة القلب الأيسر الناقص التنسج (HLHS) من الإصلاح الجراحي التشريحي الشافي للبطينين. الاستئصال الجراحي هو الخيار العلاجي الوحيد المتاح حاليا ، ولكن غالبا ما يتكرر EFE ، وأحيانا مع نمط نمو أكثر تسلل إلى عضلة القلب المجاورة.

لفهم الآليات الأساسية ل EFE بشكل أفضل واستكشاف الاستراتيجيات العلاجية ، تم تطوير نموذج حيواني مناسب للاختبار قبل السريري. يأخذ النموذج الحيواني في الاعتبار أن EFE هو مرض يصيب القلب غير الناضج ويرتبط باضطرابات التدفق ، كما تدعمه الملاحظات السريرية. وبالتالي ، فإن زرع القلب غير المتجانس لقلوب المتبرعين بالفئران حديثي الولادة هو الأساس لهذا النموذج.

يتم زرع قلب فأر حديث الولادة في بطن فأر مراهق وتوصيله بالشريان الأورطي تحت الكلوي للمتلقي والوريد الأجوف السفلي. في حين أن تروية الشرايين التاجية تحافظ على صلاحية قلب المتبرع ، فإن ركود التدفق داخل LV يحفز نمو EFE في القلب غير الناضج للغاية. الآلية الأساسية لتشكيل EFE هي انتقال الخلايا البطانية الشغاف إلى خلايا اللحمة المتوسطة (EndMT) ، وهي آلية موصوفة جيدا للتطور الجنيني المبكر للصمامات والحاجز ولكن أيضا السبب الرئيسي للتليف في قصور القلب. يمكن ملاحظة تكوين EFE مجهريا في غضون أيام بعد الزرع. يستخدم تخطيط صدى القلب عبر البطن لمراقبة صلاحية الكسب غير المشروع ، والانقباض ، وسالكية المفاغرة. بعد القتل الرحيم ، يتم حصاد أنسجة EFE ، وتظهر نفس الخصائص النسيجية المرضية مثل أنسجة EFE البشرية من مرضى HLHS.

يسمح هذا النموذج في الجسم الحي بدراسة آليات تطور EFE في القلب واختبار خيارات العلاج لمنع تكوين الأنسجة المرضية هذا ويوفر الفرصة لإجراء فحص أكثر عمومية للتليف الناجم عن EndMT.

Introduction

داء ليفي الشغاف (EFE) ، الذي يحدده تراكم الكولاجين والألياف المرنة في الأنسجة تحت الشغاف ، يظهر على شكل شغاف سميك لؤلؤي أو معتم. يخضع EFE للنمو الأكثر نشاطا خلال فترة الجنين والطفولة المبكرة¹. في دراسة تشريح الجثة ، ارتبطت 70٪ من حالات متلازمة القلب الأيسر الناقص التنسج (HLHS) بوجود EFE².

الخلايا التي تعبر عن علامات الخلايا الليفية هي مجموعة الخلايا الرئيسية في EFE ، ولكن هذه الخلايا تعبر أيضا بشكل متزامن عن علامات بطانة الشغاف ، وهو مؤشر على أصل خلايا EFE هذه. أثبتت مجموعتنا سابقا أن الآلية الأساسية لتشكيل EFE تتضمن تغييرا ظاهريا للخلايا البطانية الشغاف إلى الخلايا الليفية من خلال الانتقال ال....

Protocol

تم إجراء جميع الإجراءات الحيوانية وفقا للمجلس القومي للبحوث. 2011. دليل لرعاية واستخدام المختبر: الطبعة الثامنة. تمت مراجعة بروتوكولات والموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام في مستشفى بوسطن للأطفال.

قبل الجراحة ، يتم تعقيم جميع الأدوات الجراحية بالبخار ، ويتم تحضير المخزن المؤقت Krebs-Henseleit المعدل ، بتركيز نهائي يبلغ 22 مليمول / لتر KCl ، كمحلول لشلل القلب (الجدول 1). يتم تعقيم المحلول بالفلتر وتخزينه عند 4 درجات مئوية طوال الليل. مطلوب مجهر جراحي (12.5x) لإجراء عملية زرع قلب الفئران حديثي الولادة غير المتجانسة.

1. التحضير والتخدير

1. استخدم ذكور / إناث....

النتائج

جدوى الكسب غير المشروع والضرب
في هذا العمل ، تم تقييم صلاحية الكسب غير المشروع بصريا بعد إزالة جميع المشابك ، وسمح بوقت تقريبي للتروية من 10-15 دقيقة مع بطن مفتوح لمراقبة الكسب غير المشروع. تم استخدام نفس نظام التسجيل للتحقق بشكل موضوعي من جدوى الكسب غير المشروع للتقييم البصري في ?.......

Discussion

يخلق هذا النموذج الحيواني للزرع غير المتجانس لقلب فأر متبرع حديث الولادة في بطن المتلقي إمكانية دراسة التليف المشتق من EndMT من خلال تقييم الأنسجة النسيجي المفصل ، وتحديد مسارات الإشارات التنظيمية ، وخيارات علاج الاختبار. نظرا لأن EndMT هي الآلية الأساسية للأمراض الليفية للقلب ، فإن هذا النم?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Advanced Ventilator System For Rodents, SAR-1000	CWE, Inc.	12-03100	small animal ventilator
aSMA	Sigma	A2547	Antibody for Immunohistochemistry
Axio observer Z1	Carl Zeiss		inverted microscope
Betadine Solution	Avrio Health L.P.	367618150092
CD31	Invitrogen	MA1-80069	Antibody for Immunohistochemistry
DAPI	Invitrogen	D1306	Antibody for Immunohistochemistry
DemeLON Nylon black 10-0	DemeTECH	NL76100065F0P	10-0 Nylon suture
ETFE IV Catheter, 18G x 2	TERUMO SURFLO	SR-OX1851CA	intubation cannula
Micro Clip 8mm	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-6471	microvascular clamps
Nylon black monofilament 11-0	SURGICAL SPECIALTIES CORP	AA0130	11-0 Nylon
O.C.T. Compound	Tissue-Tek	4583	Embedding medium for frozen tissue specimen
p-SMAD2/3	Invitrogen	PA5-110155	Antibody for Immunohistochemistry
Rodent, Tilting WorkStand	Hallowell EMC.	000A3467	oblique shelf for intubation
Silk Sutures, Non-absorbable, 7-0	Braintree Scientific	NC9201231	Silk suture
Slug/Snail	Abcam	ab180714	Antibody for Immunohistochemistry
Undyed Coated Vicryl 5-0 P-3 18"	Ethicon	J493G	5-0 Vicryl
Undyed Coated Vicryl 6-0 P-3 18"	Ethicon	J492G	6-0 Vicryl
VE-Cadherin	Abcam	ab231227	Antibody for Immunohistochemistry
Zeiss OPMI 6-SFR	Zeiss		Surgical microscope
Zen, Blue Edition, 3.6	Zen		inverted microscope software