Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В этой работе представлена животная модель фиброза, индуцированного эндотелиально-мезенхимальным переходом, наблюдаемого при врожденных пороках сердца, таких как критический аортальный стеноз или синдром гипоплазии левых отделов сердца, что позволяет провести детальную гистологическую оценку тканей, идентифицировать регуляторные сигнальные пути и протестировать варианты лечения.

Аннотация

Эндокардиальный фиброэластоз (ЭФЭ), определяемый накоплением субэндокардиальной ткани, оказывает значительное влияние на развитие левого желудочка (ЛЖ) и не позволяет пациентам с врожденным критическим аортальным стенозом и синдромом гипоплазии левых отделов сердца (СГЛОС) проводить анатомическую бивентрикулярную хирургическую операцию. Хирургическая резекция в настоящее время является единственным доступным терапевтическим вариантом, но ЭФЭ часто рецидивирует, иногда с еще более инфильтративным характером роста в соседний миокард.

Для лучшего понимания механизмов, лежащих в основе ЭФЭ, и изучения терапевтических стратегий, была разработана модель на животных, пригодная для доклинических испытаний. Животная модель учитывает, что ЭФЭ является заболеванием незрелого сердца и связано с нарушениями кровотока, что подтверждается клиническими наблюдениями. Таким образом, гетеротопическая трансплантация сердца неонатальных донорских сердец крыс является основой для данной модели.

Неонатальное сердце крысы трансплантируется в брюшную полость крысы-подростка и соединяется с инфраренальной аортой реципиента и нижней полой веной. В то время как перфузия коронарных артерий сохраняет жизнеспособность донорского сердца, застой потока в ЛЖ индуцирует рост EFE в очень незрелом сердце. Основным механизмом образования ЭФЭ является переход эндотелиальных клеток эндокарда в мезенхимальные клетки (EndMT), что является хорошо описанным механизмом раннего эмбрионального развития клапанов и перегородок, а также ведущей причиной фиброза при сердечной недостаточности. Образование ЭФЭ можно макроскопически наблюдать в течение нескольких дней после трансплантации. Трансабдоминальная эхокардиография используется для контроля жизнеспособности, сократительной способности и проходимости анастомозов трансплантата. После эвтаназии забор ткани EFE, которая демонстрирует те же гистопатологические характеристики, что и ткань EFE человека у пациентов с HLHS.

Эта модель in vivo позволяет изучать механизмы развития ЭФЭ в сердце и тестировать варианты лечения для предотвращения этого патологического тканевого образования, а также дает возможность для более обобщенного исследования фиброза, индуцированного EndMT.

Введение

Эндокардиальный фиброэластоз (ЭФЭ), определяемый накоплением коллагеновых и эластических волокон в субэндокардиальной ткани, проявляется в виде перламутрового или непрозрачного утолщенного эндокарда; ЭФЭ наиболее активно развивается во внутриутробном периоде и в раннем младенчестве1. В аутопсийном исследовании 70% случаев с синдромом гипоплазии левых отделов сердца (СГЛОС) были связаны с наличием EFE2.

Клетки, экспрессирующие маркеры фибробластов, являются основной клеточной популяцией в EFE, но эти клетки также одновременно экспрессируют эндотелиальные маркеры эндокарда, что является признако....

протокол

Все процедуры на животных проводились в соответствии с Национальным исследовательским советом. 2011. Руководство по уходу и использованию лабораторных животных: восьмое издание. Протоколы содержания животных были рассмотрены и одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию в Бостонской детской больнице.

Перед операцией все хирургические инструменты проходят автоклавирование паром, а модифицированный буфер Кребса-Хенселейта с конечной концентрацией 22 ммоль/л KCl готовят в виде кардиоплегического раствора (табл. 1). Раствор стерилизуют фильтром и хранят при температуре 4 °С в течение ночи. Хирургический микроско....

Результаты

Жизнеспособность привоя и биение
В данной работе проводилась визуальная оценка жизнеспособности трансплантата после снятия всех зажимов, а при открытой брюшной полости для наблюдения за трансплантатом допускалось приблизительное время реперфузии 10-15 мин. Та же система оц?.......

Обсуждение

Эта животная модель гетеротопической трансплантации сердца новорожденного донора крысы в брюшную полость реципиента создает возможность изучать фиброз, полученный из EndMT, путем детальной гистологической оценки тканей, определения регуляторных сигнальных путей и тестирования вариа?.......

Раскрытие информации

Никакой.

Благодарности

Это исследование финансировалось Дополнительными предприятиями - Фондом исследований одного желудочка (SVRF) и Фондом расширения одного желудочка (для И.Ф.), а также стипендией Мариетты Блау от OeAD-GmbH из средств, предоставленных Федеральным министерством образования, науки и исследований Австрии BMBWFC (G.G.).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Advanced Ventilator System For Rodents, SAR-1000CWE, Inc.12-03100small animal ventilator
aSMASigmaA2547Antibody for Immunohistochemistry
Axio observer Z1 Carl Zeissinverted microscope
Betadine SolutionAvrio Health L.P.367618150092
CD31InvitrogenMA1-80069Antibody for Immunohistochemistry
DAPIInvitrogenD1306Antibody for Immunohistochemistry
DemeLON Nylon black 10-0DemeTECHNL76100065F0P10-0 Nylon suture
ETFE IV Catheter, 18G x 2TERUMO SURFLOSR-OX1851CAintubation cannula
Micro Clip 8mmRoboz Surgical Instrument Co.RS-6471microvascular clamps
Nylon black monofilament 11-0SURGICAL SPECIALTIES CORPAA013011-0 Nylon
O.C.T. CompoundTissue-Tek4583Embedding medium for frozen tissue specimen
p-SMAD2/3InvitrogenPA5-110155Antibody for Immunohistochemistry
Rodent, Tilting WorkStandHallowell EMC.000A3467oblique shelf for intubation
Silk Sutures, Non-absorbable, 7-0Braintree ScientificNC9201231Silk suture
Slug/SnailAbcamab180714Antibody for Immunohistochemistry
Undyed Coated Vicryl 5-0 P-3 18"EthiconJ493G5-0 Vicryl
Undyed Coated Vicryl 6-0 P-3 18"EthiconJ492G6-0 Vicryl
VE-CadherinAbcamab231227Antibody for Immunohistochemistry
Zeiss OPMI 6-SFRZeissSurgical microscope
Zen, Blue Edition, 3.6Zen inverted microscope software

Ссылки

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

EFEHLHSEFEEndMT

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены