مقايسة الجلطة الوريدية في نموذج فأر للسرطان

Summary

تهدف هذه المقالة إلى تقديم طريقة محسنة لتقييم تجلط الدم الوريدي في نموذج سرطان الفأر ، باستخدام مقاطع الأوعية الدموية لتحقيق الربط الوريدي. يقلل التحسين من التباين في القياسات المتعلقة بالتخثر ويعزز الصلة بالتخثر الوريدي المرتبط بسرطان الإنسان.

Abstract

تسلط ورقة المنهجية هذه الضوء على الفروق الجراحية الدقيقة لنموذج القوارض للتخثر الوريدي ، وتحديدا في سياق تجلط الدم المرتبط بالسرطان (CAT). يعد التخثر الوريدي العميق من المضاعفات الشائعة لدى الناجين من السرطان ويمكن أن يكون قاتلا. عادة ما تتضمن نماذج التخثر الوريدي الحالي للفأر انسدادا ميكانيكيا كاملا أو جزئيا للوريد الأجوف السفلي (IVC) باستخدام خياطة. يؤدي هذا الإجراء إلى ركود كلي أو جزئي للدم وتلف البطانة ، مما يؤدي إلى تكوين الخثار. النماذج الحالية لها قيود مثل التباين العالي في أوزان الجلطات ، ومعدل الوفيات الكبير ، ومنحنى التعلم المطول. يقدم هذا التقرير التحسينات الجراحية باستخدام مشابك الأوعية الدموية لمعالجة بعض هذه القيود. باستخدام نموذج فأر xenograft لسرطان القولون الجيني ، استخدمنا مقاطع الأوعية الدموية المخصصة لربط الوريد الأجوف تحت الكلوي. تسمح هذه المشابك بمساحة شفاه متبقية مماثلة لخياطة البولي بروبلين 5-0 بعد ربط IVC. الفئران مع طريقة خياطة بمثابة الضوابط. أدت طريقة مشبك الأوعية الدموية إلى انسداد وعائي جزئي ثابت قابل للتكرار وأوزان جلطة أكبر مع تباين أقل من طريقة الخياطة. كان من المتوقع زيادة أوزان الجلطات ، وكتلة الجلطة الأكبر ، والجلطة في مساحة سطح اللمعان IVC بسبب ارتفاع ضغط مقاطع الأوعية الدموية مقارنة بخياطة البولي بروبلين 6-0. تم التحقق من صحة هذا النهج عن طريق التصوير بالموجات فوق الصوتية على نطاق رمادي ، والذي كشف عن كتلة جلطة أكبر باستمرار في الوريد الأجوف تحت الكلوي مع مقاطع الأوعية الدموية مقارنة بطريقة خياطة. تم إثبات هذه الملاحظات بشكل أكبر من خلال تلطيخ التألق المناعي. تقدم هذه الدراسة طريقة محسنة لتوليد نموذج تجلط وريدي في الفئران ، والذي يمكن استخدامه لتعميق الفهم الميكانيكي ل CAT وفي الأبحاث الانتقالية مثل اكتشاف الأدوية.

Introduction

الجلطات الدموية الوريدية المرتبطة بالسرطان (VTE)
خطر الجلطات الدموية الوريدية (VTE) أعلى من 4 إلى 7 مرات في الناجين من السرطان مقارنة بعامة السكان¹،^2،3. تثبت هذه الحالة أنها قاتلة في واحد من كل سبعة مرضى مصابين بالسرطان. يختلف معدل الإصابة ب VTE اعتمادا على نوع السرطان وعبء الورم ويكون أعلى بين مرضى سرطان البنكرياس والمعدة⁴.

الانصمام الخثاري الوريدي المرتبط بالسرطان في مرضى السرطان له أهمية تنبؤية. يرتبط بالبقاء على قيد الحياة بشكل عام غير موات في السنة الأولى بعد تشخيص السرطان ، حتى بعد ضبط العمر والعرق ....

Protocol

في هذه الدراسة ، تم استخدام 16 أنثى فأر C57Bl6 / J ، من 8 إلى 12 أسبوعا في العمر ، ووزن جسم من 20 إلى 25 جم. تم إيواء الفئران في ظل ظروف قياسية وتم إطعامها بالطعام والماء الإعلاني. أجريت هذه الدراسة بموافقة اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام (IACUC) في جامعة بوسطن. تم تنفيذ الإجراءات المفتوحة الموصوفة هنا في حالة معقمة.

1. نموذج Xenograft

1. زراعة الخلايا
   1. قبل الزرع تحت الجلد غير المتجانس ، تنمو خلايا MC-38 كطبقة أحادية إلى التقاء 80٪.
   2. بعد التربسين وإعادة التعليق في 10٪ من الوسائط المحتوية على FBS ، خلايا الطرد المركزي عند 277 × جم ، 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. ثم أعد تعليق الخلايا في ....

النتائج

تم حقن مجموعة من إناث الفئران C57Bl6 / J ، من عمر 8-12 أسبوعا ، بخلايا MC-38 في المرحلة اللوغاريتمية لنمو الخلايا. نمت الطعوم الخارجية بسرعة بين الأسبوعين الثالث والرابع بعد الحقن¹⁸. بمجرد أن وصلت الأورام إلى متوسط حجم 400 مم³ ، تم اختيار الفئران بشكل عشوائي إلى المجموعات الضابطة وا.......

Discussion

في نموذج سرطان القولون xenograft syngenetic ، نلاحظ ارتفاع تجلط الدم وتعبيرات علامات التخثر في المجموعة التجريبية مقارنة بالمجموعة الضابطة. الأهم من ذلك ، كان التباين في جميع هذه المعلمات أقل في المجموعة التجريبية مقارنة بالمجموعة الضابطة. تضمن التعديل إدخال مشبك وعائي مع ملف ضغط محدد عند نقطة ال?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Buprenorphine 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05
C57BL/6J mice	The Jackson Lab	IMSR_JAX:000664
Caliper	VWR International, Radnor, PA	12777-830
CD31	Abcam	Ab9498
Cell Counter	MOXIE	MXZ000
Clamp	Fine Science Tools	13002-10
Clips ASSI.B2V Single Clamp, General Purpose,	Accurate Surgical & Scientific Instruments	PR 2 144.50 289.00
Dumont #5SF Forceps	Fine Science Tools	11252-00
Fibrin	Millipore	MABS2155-100UG
Fine Scissors - Large Loops	Fine Science Tools	14040-10
Forceps	Fine Science Tools	11002-12
Hill Hemostat	Fine Science Tools	13111-12
Isoflurane, USP	Covetrus	NDC 11695-6777-2
MC-38 cell	Sigma Aldrich	SCC172
Microscope	Nikon Eclipse Inverted Microscope	TE2000
Scissors	Fine Science Tools	14079-10
Suture- Vicryl	AD-Surgical	#L-G330R24
Suture-Nylon 2-0	Ethilon	664H
Suture-Prolene 5-0	Ethicon	8661G
Suture-Prolene 6-0	Ethicon	PDP127
VEV03100	VisualSonics	FujiFilm
Vitrogel Matrigel Matrix	The Well Bioscience	VHM01