Essai de thrombose veineuse dans un modèle murin de cancer

Résumé

Cet article vise à présenter une méthode optimisée pour évaluer la thrombose veineuse dans un modèle de cancer de souris, en utilisant des clips vasculaires pour réaliser une ligature veineuse. L’optimisation minimise la variabilité des mesures liées à la thrombose et améliore la pertinence pour la thrombose veineuse associée au cancer humain.

Résumé

Cet article méthodologique met en évidence les nuances chirurgicales d’un modèle de thrombose veineuse chez le rongeur, en particulier dans le contexte de la thrombose associée au cancer (CAT). La thrombose veineuse profonde est une complication fréquente chez les survivants du cancer et peut être potentiellement mortelle. Les modèles actuels de thrombose veineuse murine impliquent généralement une occlusion mécanique complète ou partielle de la veine cave inférieure (IVC) à l’aide d’une suture. Cette procédure induit une stase totale ou partielle du sang et des lésions endothéliales, déclenchant une thrombogenèse. Les modèles actuels présentent des limites telles qu’une plus grande variabilité du poids des caillots, un taux de mortalité important et une courbe d’apprentissage prolongée. Ce rapport présente des améliorations chirurgicales à l’aide de clips vasculaires pour remédier à certaines de ces limitations. À l’aide d’un modèle murin de xénogreffe de cancer du côlon syngénique, nous avons utilisé des clips vasculaires personnalisés pour ligaturer la veine cave infrarouge. Ces clips permettent un espace résiduel des lèvres similaire à celui d’une suture en polypropylène 5-0 après une ligature IVC. Des souris avec la méthode de suture ont servi de témoins. La méthode du clip vasculaire a permis d’obtenir une occlusion vasculaire partielle reproductible et cohérente et un poids de caillot plus important avec moins de variabilité que la méthode de suture. On s’attendait à ce que le poids du caillot soit plus important, la plus grande masse du caillot et la plus grande surface luminale de l’IVC en raison du profil de pression plus élevé des clips vasculaires par rapport à une suture en polypropylène 6-0. L’approche a été validée par échographie en niveaux de gris, qui a révélé une masse de caillot systématiquement plus importante dans la veine cave infrarouge avec des clips vasculaires par rapport à la méthode de suture. Ces observations ont été corroborées par la coloration par immunofluorescence. Cette étude propose une méthode améliorée pour générer un modèle de thrombose veineuse chez la souris, qui peut être utilisé pour approfondir la compréhension mécanistique de la tomodensitométrie et dans la recherche translationnelle telle que la découverte de médicaments.

Introduction

Thromboembolie veineuse associée au cancer (TEV)
Le risque de thromboembolie veineuse (TEV) est 4 à 7 fois plus élevé chez les survivants du cancer que dans la population générale ^1,2,3. Cette affection s’avère mortelle chez un patient sur sept atteint d’un cancer. L’incidence de la TEV varie en fonction du type de cancer et de la charge tumorale et est la plus élevée chez les patients atteints de cancers du pancréas et de l’estomac⁴.

La TEV associée au cancer chez les patients cancéreux a une significati....

Protocole

Pour cette étude, 16 souris femelles C57Bl6/J, âgées de 8 à 12 semaines et pesant entre 20 et 25 g, ont été utilisées. Les souris ont été logées dans des conditions standard et ont été nourries avec de la nourriture et de l’eau ad libitum. Cette étude a été réalisée avec l’approbation de l’Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) de l’Université de Boston. Les procédures ouvertes décrites ici ont été entreprises dans un état stérile.

1. Modèle de xénogreffe

1. Culture cellulaire
   1. Avant l’implantation sous-cutanée hétérotopique, faire croître les cellules MC-38 en monocouche jusqu’à ce qu’ell....

Discussion

Dans un modèle de cancer du côlon par xénogreffe syngénique, nous observons une thrombogénicité et des expressions plus élevées des marqueurs de coagulation dans le groupe expérimental par rapport au groupe témoin. Il est important de noter que la variance de tous ces paramètres était plus faible dans le groupe expérimental que dans le groupe témoin. La modification a consisté à introduire un clip vasculaire avec un profil de pression spécifique au point de confluence de l’IVC et de la veine rénale ga.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Buprenorphine 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05
C57BL/6J mice	The Jackson Lab	IMSR_JAX:000664
Caliper	VWR International, Radnor, PA	12777-830
CD31	Abcam	Ab9498
Cell Counter	MOXIE	MXZ000
Clamp	Fine Science Tools	13002-10
Clips ASSI.B2V Single Clamp, General Purpose,	Accurate Surgical & Scientific Instruments	PR 2 144.50 289.00
Dumont #5SF Forceps	Fine Science Tools	11252-00
Fibrin	Millipore	MABS2155-100UG
Fine Scissors - Large Loops	Fine Science Tools	14040-10
Forceps	Fine Science Tools	11002-12
Hill Hemostat	Fine Science Tools	13111-12
Isoflurane, USP	Covetrus	NDC 11695-6777-2
MC-38 cell	Sigma Aldrich	SCC172
Microscope	Nikon Eclipse Inverted Microscope	TE2000
Scissors	Fine Science Tools	14079-10
Suture- Vicryl	AD-Surgical	#L-G330R24
Suture-Nylon 2-0	Ethilon	664H
Suture-Prolene 5-0	Ethicon	8661G
Suture-Prolene 6-0	Ethicon	PDP127
VEV03100	VisualSonics	FujiFilm
Vitrogel Matrigel Matrix	The Well Bioscience	VHM01