Bir Fare Kanser Modelinde Venöz Tromboz Testi

Özet

Bu makale, venöz ligasyon elde etmek için vasküler klipsler kullanarak bir fare kanseri modelinde venöz trombozu değerlendirmek için optimize edilmiş bir yöntem sunmayı amaçlamaktadır. Optimizasyon, trombozla ilişkili ölçümlerdeki değişkenliği en aza indirir ve insan kanseriyle ilişkili venöz trombozla alaka düzeyini artırır.

Özet

Bu metodoloji makalesi, özellikle kanserle ilişkili tromboz (CAT) bağlamında, bir kemirgen venöz tromboz modelinin cerrahi nüanslarını vurgulamaktadır. Derin ven trombozu, kanserden kurtulanlarda sık görülen bir komplikasyondur ve potansiyel olarak ölümcül olabilir. Mevcut murin venöz tromboz modelleri tipik olarak bir sütür kullanılarak inferior vena kavanın (IVC) tam veya kısmi mekanik oklüzyonunu içerir. Bu prosedür, trombogenezi tetikleyen kan ve endotel hasarının tam veya kısmi durgunluğunu indükler. Mevcut modellerin pıhtı ağırlıklarında daha yüksek değişkenlik, önemli mortalite oranı ve uzamış öğrenme eğrisi gibi sınırlamaları vardır. Bu rapor, bu sınırlamaların bazılarını ele almak için vasküler klipsleri kullanan cerrahi iyileştirmeleri tanıtmaktadır. Sinjeneik kolon kanseri ksenogreft fare modeli kullanarak, infrarenal vena kavayı bağlamak için özelleştirilmiş vasküler klipsler kullandık. Bu klipsler, IVC ligasyonlarından sonra 5-0 polipropilen sütüre benzer şekilde rezidüel dudak boşluğuna izin verir. Sütür yöntemi ile fareler kontrol görevi gördü. Vasküler klips yöntemi, sütür yöntemine göre daha az değişkenlik ile tutarlı bir tekrarlanabilir parsiyel damar tıkanıklığı ve daha büyük pıhtı ağırlıkları ile sonuçlandı. Daha büyük pıhtı ağırlıkları, daha büyük pıhtı kütlesi ve IVC luminal yüzey alanına pıhtı, 6-0 polipropilen sütüre kıyasla vasküler kliplerin daha yüksek basınç profili nedeniyle bekleniyordu. Yaklaşım, sütür yöntemine kıyasla vasküler klipsli infrarenal vena kavada sürekli olarak daha fazla pıhtı kitlesi ortaya çıkaran gri skala ultrasonografi ile doğrulandı. Bu gözlemler, immünofloresan boyama ile daha da doğrulandı. Bu çalışma, farelerde bir venöz tromboz modeli oluşturmak için geliştirilmiş bir yöntem sunmaktadır ve bu, CAT'in mekanik anlayışını derinleştirmek için ve ilaç keşfi gibi translasyonel araştırmalarda kullanılabilir.

Giriş

Kanserle ilişkili venöz tromboembolizm (VTE)
Venöz tromboembolizm (VTE) riski, kanserden kurtulanlarda genel popülasyona göre 4 ila 7 kat daha yüksektir ^1,2,3. Bu durum kanserli yedi hastadan birinde ölümcüldür. VTE insidansı, kanserin türüne ve tümör yüküne bağlı olarak değişir ve pankreas ve mide kanserli hastalar arasında en yüksektir⁴.

Kanser hastalarında kanserle ilişkili VTE'nin prognostik önemi vardır. Kanser teşhisinden sonraki ilk yılda, yaş, ırk ve altta yatan kanserin evresine göre ayarlandıktan sonra bile, olumsuz genel sağkalım ile ilişkilidir⁵. Bu bulgular, kanserle ilişkili VTE'nin incelenmesinin önemini ve bir hayvan modeli kullanarak mekanizmasını araştırma ihtiyacını vurgulamaktadır. Bu alanın translasyonel önemi, kanser hastalarında VTE'nin tromboprofilaksi ve antitrombotik tedavi ile önlenebilir ve tedavi edilebilir olması gerçeğiyle daha da vurgulanmaktadır⁶.

Kanser ve venöz trombozun hayvan modelleri
Kanser modelleri, geleneksel olarak farelerde kanser hücrelerinin enjeksiyonunu gerektiren ksenogreftler olarak adlandırılır. Kanser hücrelerinin orijini gibi bir bölgeye enjeksiyonu ortotopik model olarak adlandırılırken, farklı bir bölgede (kanat üzerinde deri altı düzlemi) heterotopik model olarak bilinir. Kanser hücrelerinin köken türü, onları HT-29 hücre hattı (insan kolon kanseri) gibi allojenik bir model olarak ^{belirler7,8,9}. Aksine, sinjeneik modeller, RenCa ve MC-38 hücre hatları ^3,10 dahil olmak üzere murin kanseri hücre hatlarını kullanır.

Literatürde kemirgenlerde arteriyel, venöz ve kapiller tromboz modelleri tanımlanmıştır. Venöz tromboz, inferior vena kavada (IVC) mekanik yaralanma (kılavuz tel) veya tam IVC ligasyonu, kimyasal (Ferrik klorür) veya elektrolitik yaralanma ile indüklenir. Ferrik klorür kaynaklı tromboz veya IVC ligasyonu, tam oklüzyon modellerini temsil eder. Sonuncusu, damarlarda kan ve enflamatuar infiltratların durgunluğuna neden olur^11,12,13. Tam ligasyon modeli, farelerin %95 ila %100'ünde yüksek oranda tromboz oluşumu ile sonuçlanır. Parsiyel IVC ligasyon modeli, lateral iliolumbar dalların kesilmesini içerebilir ve IVC^12'nin distal hedef noktalarına sütür ligasyonları uygulanarak venöz dönüş ortadan kaldırılır. Bazen, venöz dönüşü kısmen kesmek için bir boşluk tutucu kullanılır. Bununla birlikte, mevcut parsiyel oklüzyon modelinde trombüs ağırlığı tutarsızdır, bu da pıhtı ağırlıklarında ve yüksekliklerinde yüksek değişkenliğe neden olur^12,14.

Bu büyük damar mekanik modellerinin her ikisinin de (kısmi ve komple) sınırlamaları vardır. İlk olarak, IVC ligasyonu (staz modeli) sıklıkla hipotansiyona neden olur. Kan, vertebral damarlardan şant edilir. Deneyimli ellerde olmasına rağmen, bu modelde ölüm oranı %5-%30 arasında değişmekte olup, öğrenme eğrisi sırasında daha yüksek oran beklenmektedir. Daha da önemlisi, tam oklüzyon modeli, bir trombüsün tipik olarak tıkayıcı olmadığı insanlarda derin ven trombozunu (DVT) yeniden üretmez. Tam oklüzyonun hemoreolojik faktörleri ve farmakodinamik parametreleri değiştirmesi ve lokal bölgedeki bileşiklerin biyoyararlanımını değiştirmesi muhtemeldir. Bu sınırlamalar nedeniyle, tam oklüzyon modelleri, terapötik amaçlar ve ilaç keşifleri için yeni kimyasal bileşiklerin test edilmesi için uygun olmayabilir¹².

Endotel hasarı ile azalmış akışa sahip klinik olarak anlamlı bir venöz tromboz murin modeli sağlamak için, DVT'nin endotel bozulması olmadığında kan akışının kısıtlanmasıyla tetiklendiği bir venöz tromboz modelinin tanıtıldığına dikkat edilmelidir. Model, taramalı elektron mikroskobu¹⁵ ile doğrulandı. Klinik olarak anlamlı bir tromboz modeli, ilaç keşiflerini mümkün kılan neredeyse tam trombozlu bir modeldir. Mevcut parsiyel oklüzyon modellerinde pıhtı oluşumu tutarsızdır, bu da pıhtı ağırlığı ve boylarında yüksek değişkenliğe neden olur^12,16. Ayrıca, pıhtı ağırlığı geleneksel yöntemlerle değişkendir ve çalışma başına daha fazla fare gerektirir¹².

Önceki kanserle ilişkili tromboz modelleri kolon, pankreas ve akciğer kanserine odaklandı ve hepsi tam oklüzyon modelleriydi^17,18,19. Bu makale, daha düşük değişkenlik ve fare mortalitesi ile pıhtılar sağlamak için kısmi oklüzyon trombozu modelini değiştirmektedir (Şekil 1). Önceki çalışmalar, immün sistemi baskılanmış timik fareler arka planında allojenik kanser hücre dizilerini kullandı 19,20,21. Bu makale, C57Bl6/J farelerde immünkompetan farelerin kullanımına ve trombogeneze karşı immün bileşenlerin incelenmesine izin veren bir MC-38 hücre sinjeneik ksenogrefti kullanmaktadır.

Protokol

Bu çalışma için, 8-12 haftalık ve 20 ila 25 g vücut ağırlığına sahip 16 dişi C57Bl6 / J faresi kullanıldı. Fareler standart koşullar altında barındırıldı ve yem ve su ad libitum ile beslendi. Bu çalışma Boston Üniversitesi'nde Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nin (IACUC) onayı ile gerçekleştirilmiştir. Burada açıklanan açık prosedürler steril bir durumda gerçekleştirilmiştir.

1. Ksenogreft modeli

1. Hücre kültürü
   1. Heterotopik deri altı implantasyonundan önce, MC-38 hücrelerini tek tabaka olarak% 80 birleşmeye kadar büyütün.
   2. %10 FBS içeren ortamda tripsinizasyon ve yeniden süspansiyonun ardından, hücreleri 277 x g'da, 4 °C'de 5 dakika santrifüjleyin. Ardından, serumsuz ortamdaki hücreleri 1 x 10⁴ MC-38 hücre / μL serumsuz ortam konsantrasyonuna yeniden süspanse edin.
      1. Tripsinizasyon için, MC-38 hücrelerini istenen bir birleşmeye ulaşana kadar (genellikle yaklaşık% 70 -% 80) kültürleyin ve ardından kültür ortamını Petri kabından aspire edin.
      2. 1 mL tripsin-EDTA çözeltisi ekleyin ve ayrılmaya izin vermek için hücreleri tripsin ile 37 ° C'de 1 dakika inkübe edin. Eşit şekilde ayrılmasını sağlamak için Petri kabına hafifçe vurun veya sallayın.
      3. Aktiviteyi nötralize etmek ve daha fazla hücre ayrışmasını önlemek için serum veya tripsin inhibitörü içeren bir kültür ortamı ekleyin. Ayrılmış hücreleri nötralize tripsin çözeltisi ile birlikte toplayın.
      4. Yeniden süspansiyon için, hücreler tripsinizasyon yoluyla ayrıldıktan sonra, onları transplantasyon veya daha ileri deneyler için hazırlayın. Hücreleri peletlemek için toplanan hücre süspansiyonunu 277 x g'da santrifüjleyin.
      5. Süpernatanı (hücre peletinin üzerindeki sıvı) dikkatlice çıkarın. Transplantasyon veya deney için istenen hücre konsantrasyonunu elde etmek için hücre peletine 9 mL kültür ortamı, tampon veya çözelti ekleyin.
      6. Yukarı ve aşağı pipetleyerek veya bir kültür şişesi çalkalayıcı kullanarak hücreleri nazikçe yeniden süspanse edin. Hücrelere zarar verebilecek güçlü pipetlemeden kaçının.
         NOT: Kullanılan varyanta veya hücre hattına bağlı olarak, implantasyondan sonra oldukça agresif fare hücresi büyümesini ve yayılmasını yavaşlatmak için hücreler 1:1 oranında çözünmüş bazal membran matrisi ve serumsuz ortamda yeniden süspanse edilebilir. Tüm hücre kültürü adımları, özel olarak ayrılmış bir hücre kültüründe tam bir aseptik başlıkta gerçekleştirilmeli ve düzenli olarak mikoplazma için test edilmelidir.
   3. Hücreleri, sağlanan manuel protokole göre otomatik bir hücre sayacı ile sayın.
2. Hücre implantasyonu
   1. Deney grubuna rastgele sekiz fare ve kontrol grubuna sekiz fare atayın. Kontrol grubunda, MC38 ksenogreftli fareler kullanın ve polipropilen 5-0 sütür ile IVC ligasyonu gerçekleştirin. Deney grubunda, MC38 ksenogreftli fareler kullanın ve özelleştirilmiş bir vasküler klips ile IVC ligasyonu yapın.
   2. Fareyi sol yanal yaslanacak şekilde yerleştirin ve sağ tarafı ön ayaklar ile arka ayaklar arasında tıraş edin. Bölgeyi enjeksiyona aseptik olarak hazırlamak için dorsal bel bölgesi boyunca alkol ve iyot uygulayın.
   3. 200 μL besiyerinde hazırlanan 2 x 10⁶ MC-38 hücrelerini yanlara, hayvanın en distal kaburgası ile pelvik eminensi arasında, 27G'lik bir iğne kullanarak hayvanı baskın olmayan elde nazikçe tutarken enjekte edin.
   4. Enjeksiyondan sonra hayvanları dikkatlice inceleyin ve kafese geri koyun. Hayvanlar aşağıdakiler açısından denetlenmelidir; 1. Farelerin davranışlarındaki, aktivite seviyelerindeki ve genel hareketliliğindeki değişiklikler. Herhangi bir önemli değişiklik, rahatsızlığa veya sağlık sorunlarına işaret edebilir. 2. Kürk kalitesi, tımar alışkanlıkları ve gözle görülür herhangi bir sıkıntı veya anormallik belirtisi dahil olmak üzere farelerin genel fiziksel durumu 3. Gıda tüketimine ve su alımına geri dönün 4. Aktivite düzeylerindeki, duruşlarındaki veya kafes arkadaşlarıyla etkileşimlerindeki herhangi bir değişiklik. Uyuşukluk veya artan saldırganlık sıkıntı belirtileri olabilir.

2. Tümör büyümesinin takibi

1. Hayvanları 3-4 hafta boyunca tümör büyüme eğilimleri için iki haftada bir izleyin. Tümörleri bir kumpas ile ölçün ve tümör boyutlarını kaydedin.
   1. Tümörleri en uzun eksenleri (L) ve uzun eksene dik eksenleri (W) boyunca ölçün. L x (W²) = V denklemini kullanarak tümör hacmini (V) hesaplayın. Tümör boyutu her boyutta 20 mm'yi aşarsa ve/veya tümörde ülserasyon kanıtı varsa, deneyin bitiminden önce hayvanlara ötenazi yapın.
2. Tümör hacmi 400^mm3'e ulaştığında, fareleri IVC ligasyonu için kullanmayı planlayın.

3. Anestezi ve hazırlık

1. Fareyi bir izofluran odasında uyuşturun ve analjezik deri altına enjekte edin: Hayvanı kuyruğun tabanından tutun. Hayvanı baskın olmayan elin dorsum yüzeyinde tutun.
2. Hayvanı% 3 -% 4 izofluran ile doldurulmuş sürekli anestezik indüksiyon odasına aktarın. Ayak parmağı kıstırma refleksi olmadan yeterli genel anesteziyi onaylayın. % 1 -% 3 izofluran idame dozu kullanın. Her iki göze de veteriner merhemi sürün.
3. Buprenorfin ile deri altı enjeksiyonu (ağrıyı hafifletmek için opioid): 0,03 mg/mL konsantrasyonunu elde etmek için buprenorfin stoğunu %0,9 sodyum klorür (NaCl) içinde 0,3 mg/mL konsantrasyonda çözün.
4. Ameliyattan önce 0.05-0.1 mg/kg 0.03 mg/mL buprenorfin dozu ile birlikte 500 μL steril %0.9 NaCl deri altına enjekte edilir. 20 g farede 2 μg veya 66 μL 0.03 mg/mL buprenorfin gereklidir.
5. Cilt hazırlığı: Tamamen uyuşturulmuş fareyi ısıtma battaniyesinin üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Ön karın bölgesini% 0.5 klorheksidin tentürü, 2x ile dezenfekte edin. İşlem sırasında ısıtma battaniyesinin sıcaklığını sık sık kontrol edin ve sıcaklığın düşmediğinden emin olun.

4. IVC ligasyonu

1. Orta hat laparotomi
   1. Karın derisini ksifoidal çıkıntıdan mesaneye kadar ince makasla kesin. Atravmatik forseps ile peritonu cilt insizyonu boyunca yarıya kadar sıkıştırın. Kesi ve üstteki bağırsaklar arasında yeterli boşluk olduğundan emin olun (Şekil 2A).
   2. Peritonu avasküler linea alba ile birlikte uzunlamasına bir şekilde açın.
2. Bağırsakların sağ karın tarafına dışlanması
   1. Bağırsakları ıslak pamuk uçlarıyla çekin. Bağırsakları tamamen nemli steril bir gazlı bezle örtün. Kapalı bağırsakların mezenterik damarlarda aşırı çekiş olmadan traksiyonsuz bir yönde olduğundan emin olun.
3. Sol renal venin IVC'ye birleşmesi de dahil olmak üzere IVC ve dalların tam maruziyeti (Şekil 2B).
   1. 200-300 μL normal salin damlatın. Üreterlerin, IVC'nin, Aortun ve renal venlerin seyrini keşfedin (Şekil 2).
4. İnfra-renal IVC ve sol renal ven birleşme noktasında avasküler düzlem.
   1. Polipropilen 6-0 sütürü avasküler düzlemden 2x-3x nazikçe kaudalden sefalad'a kapalı uçlu atravmatik forseps hareketleriyle geçirin.
   2. Herhangi bir minimum sızıntının, pamuk uçlu bir tamponad ile sağlanan hafif basınçla kontrol edildiğinden emin olun. 6-0 polipropilen sütürü kaudalden kraniyal kandial hareketlere hafif hareketlerle geçirerek sağlanan düzlemi genişletin.
5. Gonadal ve lomber dalların koterizasyonu (Şekil 2D)
   1. En fazla 4 posterior veya lomber dal mevcut olabilir. Spinal iskemi ve topallamanın olası komplikasyonlarını önlemek için, mevcut protokolde lomber dalları sağlam bırakın.
   2. Bilateral uterin horn arteriyel beslemesi ve hipogastrik damarlar dahil olmak üzere 2 ila 3 yan dalın mevcut olup olmadığını kontrol edin. İki taraflı olarak mevcut ilk dalların tutarlı bir şekilde bozulmasını sağlayın. Sol renal ven ve IVC'nin (infra-renal IVC) birleştiği yerin hemen distalinde bilateral dalları koterize edin. Rahim boynuzunun venöz drenaj damarlarının bozulmadığından emin olun.
      NOT: Yan dal koterizasyonu tercih edilir çünkü bu yöntem pürüzsüz ve kesintisiz bir yüzey sağlayarak kontrolsüz kanama olasılığını azaltır. Ayrıca koterizasyon, 10-0 sütürlü sütür ligasyonundan daha hızlı ve daha uygulanabilirdir. Bu nedenle, hayvanlar daha kısa ve daha güvenli bir prosedüre maruz kalacaktır.
6. Herhangi bir sızıntı veya kasıtsız koterizasyon olmadığından emin olmak için üreterlerin seyrini ve damar sistemini iki kez kontrol edin (Şekil 2C).
7. Deney grubunda vasküler klipslerle IVC ligasyonu
   1. Damar klipslerini atravmatik forseps ile 2-0 naylon sütür genişliğinde özelleştirin. Deney grubundaki özelleştirilmiş vasküler klipsleri infrarenal IVC çevresine çevresel olarak uygulayın.
   2. Damar klipslerini dikişin üzerine uygulayın. Primer sütür pasajı, iki ila üç titiz kaudal-kraniyal hareketle yeterli bir avasküler düzlem sağlar (Şekil 2E-F).
   3. Ayrıca vasküler klipsleri hazırlanan düzlemden geçirin. Düzlemi sol renal venin birleştiği yerde hazırlayın ve IVC, sorunsuz bir klip geçişine izin verecek kadar geniştir (Şekil 2E).
   4. Özelleştirilmiş vasküler klipsi, hazırlanan düzlem boyunca IVC kursuna dik olarak yatay olarak yerleştirin. Yeterli boşluk kalmasını sağlamak için vasküler klipsleri 5-0 polipropilen sütürün üzerine yerleştirin (Şekil 2G).
   5. Vasküler klips bölgesinde herhangi bir damar hasarını veya kanamayı önlemek için yukarıdaki adımların nazikçe yapıldığından emin olun. Potansiyel sızıntı için cerrahi alanı gözlemleyin. Sızma ihtimaline karşı pamuk ucuyla cerrahi alana hafif bir baskı uygulayın.
8. Kontrol grubunda dikişli IVC Ligasyonu
   1. 6-0 polipropilen sütür ile sütür ligasyonu. Hazırlanan düzlemde 5-0 ipek sütür üzerine intrarenal IVC çevresine cerrahi kare düğüm sütür yapın.
   2. Dikiş tamamlandıktan sonra, yeterli kalıntı alanı sağlamak için ipek dikişi nazikçe çıkarın.
9. Deri altına 200 μL normal salin enjeksiyonu yapın.
   NOT: Klemp uygulaması ile parsiyel IVC oklüzyonu için karşılaştırılabilir bir teknik sağlamak için, vasküler klips mevcut çalışmada dudaklar arasında boşluk sağlayacak şekilde özelleştirilmiştir. Vasküler klips daha sonra sol renal ven ve IVC'nin birleştiği yerde hazırlanan avasküler düzleme yerleştirilir.
10. Laparotomiyi sürekli çalışan 4-0 vicryl sütür ile kapatın.

5. İndeks cerrahisi sonrası takip

1. Hayvanı ameliyattan sonra 1 saat boyunca veya denge ve düzeltme kabiliyeti geri gelene kadar sürekli olarak izleyin, tamamen iyileşene kadar izole edilmiş temiz bir kafeste ne olursa olsun.
2. Hayvanı 2 gün boyunca günlük olarak izleyin. Hayvan sıkıntılı görünüyorsa, 2 gün boyunca günde iki kez izleyin. Protokol başına postoperatif analjezi ve sıvıları uygulayın.
   1. 0,03 mg/mL konsantrasyona ulaşmak için buprenorfin stoğunu %0,9 sodyum klorür (NaCl) içinde 0,3 mg/mL konsantrasyonda çözün.
   2. İndeks ameliyatını takip eden ilk 48 saat boyunca her 8 ila 12 saatte bir 500 μL steril% 0.9 NaCl ile birlikte 0.05-0.1 mg / kg 0.03 mg / mL buprenorfin dozunu deri altına enjekte edin. 20 g'lık bir farede, 2 μg veya 66 μL 0.03 mg/mL buprenorfin gereklidir.

6. Ötenazi ve pıhtı içeren IVC'nin toplanması

1. Fareyi bir izofluran odasında uyuşturun, hayvanı kuyruğun tabanından tutun ve hayvanı elinizin dorsum yüzeyinde tutun.
2. Hayvanı% 3 -% 4 izofluran ile doldurulmuş sürekli anestezik indüksiyon odasına aktarın. Hayvanı sırtüstü pozisyona getirin.
3. Tarif edildiği gibi ksifoidden mesaneye kadar uzun bir orta hat laparotomi yapın.
4. Bağırsağı karnın sağ tarafına dışlayın ve klemplenmiş IVC'yi infra-renal IVC derecesine kadar iliak bifurkasyonun distalinde toplayın (Şekil 2G).
5. Pıhtı ve tümör hasadını takiben, hayvanı servikal çıkıkla ötenazi yapın.

7. İstatistiksel analiz

1. İstatistiksel analizi, ortalama, medyan ve standart sapma (SD) veya ortalamanın (SEM), 25. veya 75. yüzdebirlik dilimin standart hatası veya minimum ve maksimum değerler dahil olmak üzere tüm değer aralığı olarak uygun şekilde sunun. Uygun şekilde bir Öğrenci t-testi ve F-testi gerçekleştirin. İstatistiksel anlamlılığı p <0.05 düzeyinde değerlendirin.

Sonuçlar

8-12 haftalık bir grup dişi C57Bl6/J faresine, hücre büyümesinin logaritmik fazında MC-38 hücreleri enjekte edildi. Ksenogreftler, enjeksiyondan sonraki üçüncü ve dördüncü haftalar arasında hızla büyüdü¹⁸. Tümörler ortalama 400^mm3 hacme ulaştığında, fareler kontrol ve deney gruplarına randomize edildi. Kontrol grubuna sütür ile IVC ligasyonu uygulanırken, deney farelerine vasküler klips uygulaması ile IVC ligasyonu uygulandı. Kontrol ve deney gruplarında...

Tartışmalar

Sinjeneik ksenogreft kolon kanseri modelinde, deney grubunda kontrol grubuna göre daha yüksek trombojenite ve pıhtılaşma belirteçlerinin ekspresyonlarını gözlemledik. Önemli olarak, tüm bu parametrelerdeki varyans, deney grubunda kontrol grubuna göre daha düşüktü. Modifikasyon, IVC ve sol renal venin birleşme noktasında spesifik bir basınç profiline sahip bir vasküler klipsin yerleştirilmesini içeriyordu. Klips, 5-0 polipropilen sütür olan bir ara parçanın üzerine yerleştirildi. Bu modifikasy...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Buprenorphine 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05
C57BL/6J mice	The Jackson Lab	IMSR_JAX:000664
Caliper	VWR International, Radnor, PA	12777-830
CD31	Abcam	Ab9498
Cell Counter	MOXIE	MXZ000
Clamp	Fine Science Tools	13002-10
Clips ASSI.B2V Single Clamp, General Purpose,	Accurate Surgical & Scientific Instruments	PR 2 144.50 289.00
Dumont #5SF Forceps	Fine Science Tools	11252-00
Fibrin	Millipore	MABS2155-100UG
Fine Scissors - Large Loops	Fine Science Tools	14040-10
Forceps	Fine Science Tools	11002-12
Hill Hemostat	Fine Science Tools	13111-12
Isoflurane, USP	Covetrus	NDC 11695-6777-2
MC-38 cell	Sigma Aldrich	SCC172
Microscope	Nikon Eclipse Inverted Microscope	TE2000
Scissors	Fine Science Tools	14079-10
Suture- Vicryl	AD-Surgical	#L-G330R24
Suture-Nylon 2-0	Ethilon	664H
Suture-Prolene 5-0	Ethicon	8661G
Suture-Prolene 6-0	Ethicon	PDP127
VEV03100	VisualSonics	FujiFilm
Vitrogel Matrigel Matrix	The Well Bioscience	VHM01