암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

요약

이 논문은 정맥 결찰을 달성하기 위해 혈관 클립을 사용하여 마우스 암 모델에서 정맥 혈전증을 평가하기 위한 최적화된 방법을 제시하는 것을 목표로 합니다. 최적화는 혈전증 관련 측정의 변동성을 최소화하고 인간 암 관련 정맥 혈전증과의 관련성을 향상시킵니다.

초록

이 방법론 논문은 특히 암 관련 혈전증(CAT)의 맥락에서 정맥 혈전증의 설치류 모델의 외과적 뉘앙스를 강조합니다. 심부 정맥 혈전증은 암 생존자에게 흔한 합병증이며 잠재적으로 치명적일 수 있습니다. 현재의 쥐 정맥 혈전증 모델은 일반적으로 봉합사를 사용하여 하대정맥(IVC)의 전체 또는 부분적인 기계적 폐색을 포함합니다. 이 시술은 혈액의 전체 또는 부분 정체와 내피 손상을 유도하여 혈전 형성을 유발합니다. 현재 모델은 혈전 중량의 높은 변동성, 상당한 사망률, 학습 곡선 연장과 같은 한계가 있습니다. 이 보고서에서는 이러한 한계 중 일부를 해결하기 위해 혈관 클립을 사용한 수술 개선법을 소개합니다. 합성 대장암 이종이식 마우스 모델을 사용하여 맞춤형 혈관 클립을 사용하여 대정맥을 결찰했습니다. 이 클립은 IVC 결찰 후 5-0 폴리프로필렌 봉합사와 유사한 잔류 립 공간을 허용합니다. 봉합사 방법을 사용한 마우스가 대조군으로 사용되었습니다. 혈관 클립법은 봉합사법보다 가변성이 적고 일관되게 재현 가능한 부분 혈관 폐색과 더 큰 응고 무게를 가져왔습니다. 더 큰 응고 중량, 더 큰 응고 질량 및 IVC 내강 표면적에 대한 응고는 6-0 폴리프로필렌 봉합사에 비해 혈관 클립의 더 높은 압력 프로파일로 인해 예상되었습니다. 이 접근법은 그레이 스케일 초음파에 의해 검증되었으며, 봉합 방법에 비해 혈관 클립이 있는 대정맥에서 일관되게 더 큰 혈전 덩어리를 보여주었습니다. 이러한 관찰은 면역형광 염색으로 더욱 입증되었습니다. 이 연구는 생쥐에서 정맥 혈전증 모델을 생성하는 개선된 방법을 제공하며, 이는 CAT의 기계론적 이해와 약물 발견과 같은 중개 연구에 사용할 수 있습니다.

서문

암 관련 정맥 혈전 색전증(VTE)
정맥혈전색전증(VTE) 위험은 암 생존자가 일반 인구에 비해 4-7배 더 높습니다 ^1,2,3. 이 질환은 암 환자 7명 중 1명에게 치명적이다. VTE의 발생률은 암의 종류와 종양 부담에 따라 다르며, 췌장암과 위암 환자에서 가장 높다⁴.

암 환자에서 암 관련 VTE는 예후적으로 중요합니다. 암 진단 후 첫 해에는 연령, 인종, 기저암의 병기를 조정한 후에도 전체 생존율이 좋지 않은 것으로 나타났다⁵. 이러한 발견은 암과 관련된 VTE를 검사하는 것의 중요성과 동물 모델을 사용하여 그 메커니즘을 조사해야 할 필요성을 강조합니다. 이 영역의 중개적 관련성은 암 환자에서 VTE가 혈전예방과 항혈전제 요법으로 예방되고 치료될 수 있다는 사실에 의해 더욱 강조된다⁶.

암 및 정맥 혈전증의 동물 모델
암 ....

프로토콜

이 연구를 위해 생후 8-12주, 체중 20-25g의 암컷 C57Bl6/J 마우스 16마리를 사용했습니다. 쥐는 표준 조건 하에서 수용되었고 차우와 물을 adlibitum으로 먹였습니다. 이 연구는 보스턴 대학의 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받아 수행되었습니다. 여기에 설명된 개방 절차는 무균 상태에서 수행되었습니다.

1. 이종이식 모델

1. 세포 배양
   1. 이종 피하 이식 전에 MC-38 세포를 단층으로 80% 밀도까지 성장시킵니다.
   2. 트립신화 및 10% FBS 함유 배지의 재현탁 후, 277 x g, 4°C에서 5분 동안 세포를 원심분리합니다. 그런 다음 무혈청 배지의 세포를 1 x 10⁴ MC-38 cells/μL 무혈청 배지의 농도로 재현탁시킵니다.
      1. 트립신화의 경우 MC-38 세포가 원하는 합류점(보통 약 70%-80%)에 도달할 때까지 배양한 다음 페트리 접시에서 배양 배지를 흡인합니다.
      2. 트립신-EDTA 용액 1mL를 추가하고 트립신으로 세포를 37°C에서 1분 동안 배양하여 분리를 허용합니다. 페트리 접시를 부....

토론

합성 이종이식 대장암 모델에서는 대조군에 비해 실험군에서 더 높은 혈전성 및 응고 마커 발현을 관찰했습니다. 중요한 것은 이러한 모든 매개변수의 분산이 대조군에 비해 실험군에서 더 낮았다는 것입니다. 수정에는 IVC와 왼쪽 신장 정맥의 합류 지점에 특정 압력 프로파일이 있는 혈관 클립을 도입하는 것이 포함되었습니다. 클립은 5-0 폴리프로필렌 봉합사인 스페이서 위에 놓였습니다. 이 변.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Buprenorphine 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05
C57BL/6J mice	The Jackson Lab	IMSR_JAX:000664
Caliper	VWR International, Radnor, PA	12777-830
CD31	Abcam	Ab9498
Cell Counter	MOXIE	MXZ000
Clamp	Fine Science Tools	13002-10
Clips ASSI.B2V Single Clamp, General Purpose,	Accurate Surgical & Scientific Instruments	PR 2 144.50 289.00
Dumont #5SF Forceps	Fine Science Tools	11252-00
Fibrin	Millipore	MABS2155-100UG
Fine Scissors - Large Loops	Fine Science Tools	14040-10
Forceps	Fine Science Tools	11002-12
Hill Hemostat	Fine Science Tools	13111-12
Isoflurane, USP	Covetrus	NDC 11695-6777-2
MC-38 cell	Sigma Aldrich	SCC172
Microscope	Nikon Eclipse Inverted Microscope	TE2000
Scissors	Fine Science Tools	14079-10
Suture- Vicryl	AD-Surgical	#L-G330R24
Suture-Nylon 2-0	Ethilon	664H
Suture-Prolene 5-0	Ethicon	8661G
Suture-Prolene 6-0	Ethicon	PDP127
VEV03100	VisualSonics	FujiFilm
Vitrogel Matrigel Matrix	The Well Bioscience	VHM01