A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
تقدم هذه المقالة تطبيق طريقة الكشف منخفضة التردد على أساس تسلسل سانجر في سرطان الغدد الليمفاوية الوعائية. توفير أساس لتطبيق هذه الطريقة على الأمراض الأخرى.
عند مراقبة الحد الأدنى المتبقي من المرض (MRD) بعد علاج الورم ، هناك متطلبات أعلى للحد الأدنى للكشف مقارنة بالكشف عن طفرات مقاومة الأدوية وطفرات الخلايا السرطانية المنتشرة أثناء العلاج. يحتوي تسلسل سانجر التقليدي على اكتشاف طفرة من النوع البري بنسبة 5٪ -20٪ ، لذلك لا يمكن أن يلبي حد اكتشافه المتطلبات المقابلة. تشمل تقنيات الحجب من النوع البري التي تم الإبلاغ عنها للتغلب على هذا تضخيم إزاحة المانع (BDA) ، والحمض النووي المقفل غير القابل للتمديد (LNA) ، والمجسات الخاصة بالنقاط الساخنة (HSSP) ، وما إلى ذلك. تستخدم هذه التقنيات تسلسلات قليلة النوكليوتيدات المحددة لمنع النوع البري أو التعرف على النوع البري ثم دمج هذا مع طرق أخرى لمنع تضخيم النوع البري وتضخيم التضخيم الطافر ، مما يؤدي إلى خصائص مثل الحساسية العالية والمرونة والراحة. يستخدم هذا البروتوكول BDA ، وهو تفاعل البوليميراز المتسلسل من النوع البري جنبا إلى جنب مع تسلسل سانجر ، لتحسين الكشف عن الطفرات الجسدية منخفضة التردد RHOA G17V ، ويمكن أن تصل حساسية الكشف إلى 0.5٪ ، والتي يمكن أن توفر أساسا لمراقبة MRD لسرطان الغدد الليمفاوية للخلايا التائية الوعائية.
الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) هو عدد قليل من الخلايا السرطانية التي لا تزال موجودة في الجسم بعد العلاج. نظرا لقلة عددهم ، فإنها لا تؤدي إلى أي علامات أو أعراض جسدية. غالبا ما لا يتم اكتشافها بالطرق التقليدية ، مثل التصور المجهري و / أو تتبع بروتينات المصل غير الطبيعية في الدم. تشير نتيجة اختبار MRD الإيجابية إلى وجود خلايا مريضة متبقية. النتيجة السلبية تعني أن الخلايا المريضة المتبقية غائبة. علاج ما بعد السرطان ، يمكن أن تصبح الخلايا السرطانية المتبقية في الجسم نشطة وتبدأ في التكاثر ، مما يتسبب في انتكاسة المرض. يشير اكتشاف MRD إلى أن العلاج لم يكن فعالا تماما أو أن العلاج لم يكن مكتملا. قد يكون السبب الآخر ....
تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة مراجعة الأخلاقيات الطبية في مستشفى يونغتشو المركزي (رقم الموافقة: 2024022601). وقدم المشاركون موافقتهم المستنيرة.
1. تصميم التمهيدي
قارن تسلسل عينة الاختبار بالتسلسل المرجعي للحصول على حالة طفرة عينة الاختبار. يمكن لتقنية WBT-PCR القائمة على BDA اكتشاف طفرة RHOA G17V المعروفة وغيرها من الطفرات منخفضة التردد في فترة التضخيم لبادئات المنبع والمصب. انظر الشكل 1. كما تم تحليل جينين إضافيين ، وهما .......
يقدم WTB-PCR المستند إلى تقنية BDA ، الموصوف في هذه المقالة ، برايمر غير متطابق مكمل للنوع الطافر عند تصميم الأوائل التقليدية للتنافس مع النوع البري ، وقمع النوع البري ، وتضخيم المنتج الطافر. بعد ذلك ، تم تسلسل منتجات WTB-PCR لتحليل الطفرة. فائدة WTB-PCR / Sanger هي بساطته وحساسيته العا?.......
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
تم الانتهاء من هذا البحث بدعم مالي من شركة Kindstar Global Corporation وبمساعدة قادة مختبر البيولوجيا الجزيئية والزملاء ذوي الصلة. شكرا للشركة والقادة والزملاء المعنيين على دعمهم ومساعدتهم. تستخدم هذه المقالة فقط للبحث العلمي ولا تشكل أي نشاط تجاري.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Automatic DNA extractor | 9001301 | Qiagen | |
DNA nucleic acid detector | Q32854 | Thermo fisher | |
PCR amplification kit | P4600 | merck | |
PCR instrument | C1000 Touch | Biorad | |
proteinase K solution | D3001-2-A | zymo research | |
proteinase K storage buffer | D3001-2-C | zymo research | |
Sequencing amplification enzyme kit | P7670-FIN | Qiagen |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved