A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
توفر هذه الدراسة بروتوكولا مفصلا للحفظ بالتبريد الفعال للخلايا الظهارية الصبغية الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية.
الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية (RPE) المشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) هي مصادر خلايا متفوقة للعلاج باستبدال الخلايا لدى الأفراد المصابين بأمراض تنكسية في شبكية العين. ومع ذلك ، فإن الدراسات حول البنوك المستقرة والآمنة لهذه الخلايا العلاجية نادرة. تعد قابلية بقاء الخلايا المتغيرة للغاية والاسترداد الوظيفي لخلايا RPE بعد الحفظ بالتبريد من أكثر المشكلات شيوعا. في البروتوكول الحالي ، كنا نهدف إلى تحقيق أفضل معدل لاستعادة الخلايا بعد الذوبان عن طريق اختيار مرحلة الخلية المثلى للتجميد بناء على الظروف التجريبية الأصلية. تم تجميد الخلايا في المرحلة الأسية المحددة باستخدام مقايسة وضع العلامات 5-ethynyl-2′-deoxyuridine ، مما أدى إلى تحسين صلاحية الخلية ومعدل الشفاء بعد الذوبان. تم الحصول على خلايا مستقرة ووظيفية بعد فترة وجيزة من ذوبان الجليد ، مستقلة عن عملية تمايز طويلة. تسمح الطرق الموضحة هنا بحفظ وذوبان خلايا RPE المشتقة من hESC بشكل بسيط وفعال وغير مكلف. على الرغم من أن هذا البروتوكول يركز على خلايا RPE ، يمكن تطبيق استراتيجية التجميد هذه على العديد من الأنواع الأخرى من الخلايا المتمايزة.
ظهارة الشبكية الصبغية (RPE) هي طبقة أحادية مصطبغة من الخلايا اللازمة للحفاظ على الوظيفة المناسبة للشبكية1. يرتبط الخلل الوظيفي RPE والوفاة ارتباطا وثيقا بالعديد من الأمراض التنكسية للشبكية ، بما في ذلك التنكس البقعي المرتبط بالعمر والتهاب الشبكية الصباغي ومرض Stargardt 2,3. العلاج ببدائل RPE هو واحد من أكثر أنظمة العلاج الواعدة لهذه الأمراض4،5،6،7. يعد الإمداد المستقر بخلايا RPE المانحة أمرا حيويا للعلاج بالخلايا. تعد خلايا RPE المشتقة من الخلايا الجذعية الجني....
1. تفكك الخلية
هنا ، تم تمرير خلايا RPE المشتقة من hESC في P1D35 وبذرها بكثافة 105 / سم2. في غضون أسبوع من البذر ، فقدت التشكل السداسي المميز والتصبغ خلال مرحلة التأخر (حوالي 2 أيام). أعادت خلايا RPE تدريجيا اعتماد التشكل السداسي في المرحلة الأسية (حوالي 5 أيام ، الشكل 1 أ) ودخلت مرحلة التبا?.......
في هذه الدراسة ، تم وصف بروتوكول تجميد ذوبان ناجح لخلايا RPE المشتقة من hESC للبحث والاحتياجات السريرية. على عكس خط خلايا RPE الخالد ، ARPE-19 ، فإن خلايا RPE ذات النمط الظاهري الظهاري المميز المناسب والوظيفة ، مثل الخلايا الجذعية المشتقة من RPE ، أكثر حساسية للحفظ بالتبريد. بقي أقل من 32٪ من الخلايا في.......
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
تم تمويل هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81970816) إلى مي جيانغ. المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82201223) إلى Xinyue Zhu ؛ وخطة عمل الابتكار العلمي والتكنولوجي للجنة شنغهاي للعلوم والتكنولوجيا (2014090067000) إلى Haiyun Liu.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
40 μm Cell strainer | Corning | 431750 | |
Click-iT EdU Cell Proliferation Kit for Imaging, Alexa Fluor 488 Dye | Thermo Fisher Scientific | C10337 | |
Cryo freezing container | Nalgene | 5100-0001 | |
CryoStor CS10 | Biolife Solutions | 07930 | cryopreservation medium #1 |
DPBS, no calcium, no magnesium | Thermo Fisher Scientific | 14190144 | |
Genxin | Selcell | YB050050 | cryopreservation medium #2 |
Human embryonic stem cells | provided by Wicell, USA | H9 cell line | |
Matrigel, hESC-Qualified Matrix | Corning | 354277 | basement membrane matrix |
ThawSTAR CFT2 Automated Cell Thawing System | BioLife Solutions | AST-601 | |
Trypan Blue solution 0.4% | Sigma | T8154 | |
TryPLE Select | Thermo Fisher Scientific | 12563029 | cell dissociation reagent |
XVIVO-10 medium | Lonza | BEBP04-743Q | RPE culture medium |
Y-27632 | Selleck | S1049 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved